全 文 ：作者简介:陈妤，女，研究方向:药物分析，E － mail:chen2351@ 126． com
HPLC法同时测定华山参中山莨菪碱、东莨菪碱、阿托品的含量
陈 妤1，2，闫晓楠1，2，杨晓宏3
(1．天津中新药业研究中心，天津 300457;2．天津市中药质量控制重点实验室，天津 300457;
3．天津中新药业集团股份有限公司，天津 300193)
摘要:目的 建立高效液相色谱法同时测定华山参中山莨菪碱、东莨菪碱、阿托品的含量。方法 色谱柱:Agi-
lent Zorbax SB － Aq C18(4． 6 mm ×250 mm，5 μm);流动相:乙腈 －50 mmol·L
－1磷酸二氢钾(含 0． 08%三乙胺，用磷酸
调 pH至 6. 0)(15∶85);检测波长:210 nm;柱温:30 ℃;流速:1. 0 mL·min －1。结果 山莨菪碱在 0. 058 8 ～2. 949 1 μg
线性范围内呈良好的线性关系(r = 0. 999 9)，平均回收率为 100. 03%(n = 6)，ＲSD为 0. 13%;东莨菪碱在 0. 145 7 ～
7. 284 1 μg线性范围内呈良好的线性关系(r = 0. 999 9) ，平均回收率为 100. 77%(n = 6) ，ＲSD为 0. 97%;阿托品在
0. 161 7 ～ 8. 084 4 μg线性范围内呈良好的线性关系(r = 0. 999 9)，平均回收率为 99. 20%(n = 6) ，ＲSD 为 0. 80%。
结论 方法稳定、可靠，可作为华山参的质量控制方法。
关键词:华山参;山莨菪碱;东莨菪碱;阿托品;高效液相色谱法
中图分类号:Ｒ927． 2 文献标识码:A 文章编号:2095 －5375(2015)0 －0209 －004
Determination of anisodamine，scopolamine and atropine in Huashanshen by HPLC
CHEN Yu1，2，YAN Xiao-nan1，2，YANG Xiao-hong3
(1． Tianjin Zhongxin Pharmaceutical Ｒ＆D Center，Tianjin 300457，China;2. Tianjin Traditional
Chinese Medicine Quality Control Key Laboratory，Tianjin 300457，China;3. Tianjin
Zhongxin Pharmaceutical Group Co. ，Ltd. ，Tianjin 300193，China)
Abstract:Objective To establish an HPLC method to determine anisodamine，scopolamine and atropine in Huashan-
shen. Methods Anisodamine，scopolamine and atropine were assayed on an Agilent Zorbax SB － Aq C18(4. 6 mm × 250
mm，5 μm)column;The mobile phase composed of acetonitrile － 50 mmol·L －1 potassium dihydrogen phosphate (contai-
ning 0. 08% triethylamine，adjust pH to 6. 0 with phosphatic acid)(15∶85)at a flow rate of 1. 0 mL·min －1;The determi-
nation wavelength was 210 nm． Ｒesults The calibration curves were linear in the range of 0. 058 8 ～ 2. 949 1 μg(r =
0. 999 9)for anisodamine，0. 145 7 ～ 7. 284 1 μg(r = 0. 999 9)for scopolamine and 0. 161 7 ～ 8. 084 4 μg(r = 0. 999 9)for
atropine，respectively． The average recoveries (n = 6)of anisodamine，scopolamine and atropine were 100. 03%(ＲSD =
0. 13%)，100. 77%(ＲSD = 0. 97%)and 99. 20%(ＲSD = 0. 80%)，respectively． Conclusion The method was simple
and reliable，accurate，repeatable and can be used for the quality control of Huashanshen．
Key words:Huashanshen;Anisodamine;Scopolamine;Atropine;HPLC
华山参为茄科泡囊草属植物漏斗泡囊草(Phys-
ochlaina infundibularis Kuang)的干燥根，具温肺祛
痰，平喘止咳的功效，用于寒痰喘咳，惊悸失眠，为
《中国药典》2010 年版所收载。华山参的主要成分
有阿托品、东莨菪碱、山莨菪碱等托烷生物碱，东莨
菪内酯、华山参苷和东莨菪苷等香豆素类化合物，以
及氨基酸、多糖等多种成分［1，2］。《中国药典》2010
年版采用紫外 －可见分光光度法测定华山参中总生
物碱的含量，规定华山参药材中含总生物碱以莨菪
碱计算，不得少于 0. 2%，该方法操作复杂，准确性
和重现性差［3］。同时，《中国药典》2010 年版采用
HPLC 法测定其中东莨菪内酯含量，但该成分在很
多植物中均含有，专属性不足。本研究建立了同时
测定华山参中山莨菪碱、东莨菪碱和阿托品含量的
HPLC法，结果准确，重复性好，快速简便，可作为华
山参药材更加有效的质量控制方法。
·902·药学研究·Journal of Pharmaceutical Ｒesearch 2015 Vol． 34，No． 4
DOI:10.13506/j.cnki.jpr.2015.04.008
1 仪器与试药
Agilent 1200 高效液相色谱仪(美国安捷伦公
司);Waters 2695 高效液相色谱仪(美国沃特世公
司)。氢溴酸山莨菪碱对照品(批号:100051 －
201105) ，氢溴酸东莨菪碱对照品(批号:100049 －
201009)和硫酸阿托品对照品(批号:100040 －
200510)均购自中国药品生物制品检定所;华山参
由天津中新药业集团有限公司第六中药厂提供，经
检验符合《中国药典》2010 年版(一部)“华山参”项
下的相关规定;乙腈、甲醇为色谱纯，水为纯化水，其
他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件 色谱柱:Agilent Zorbax SB － Aq C18
(4. 6 mm ×250 mm，5 μm);流动相:乙腈 －50 mmol·L －1
磷酸二氢钾(含 0. 08%三乙胺，磷酸调 pH 至 6. 0)
(15∶85) ;检测波长:210 nm;柱温:30 ℃;流速:1. 0
mL·min －1，理论塔板数按东莨菪碱峰计算应不低
于 10 000。
2. 2 对照品和供试品的配制
2. 2. 1 对照品溶液的制备 分别取氢溴酸山莨菪
碱、氢溴酸东莨菪碱和硫酸阿托品对照品适量，精密
称定，加甲醇制成每 1 mL 含氢溴酸山莨菪碱 30
μg、氢溴酸东莨菪碱 30 μg、硫酸阿托品 60 μg 的混
合溶液，即得。
2. 2. 2 供试品溶液的制备 取华山参药材细粉 1
g，精密称定，置具塞瓶中，精密加入 60%甲醇 25
mL;密塞;超声处理 30 min，放冷，微孔滤膜(0. 45
μm)滤过，即得。
2. 3 测定方法 精密吸取上述供试品溶液与对照
品溶液 10 μL，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，
按外标法以峰面积计算样品的含量。根据分子式计
算，氢溴酸山莨菪碱折算成山莨菪碱系数为 0. 790 6，
氢溴酸东莨菪碱折算成东莨菪碱系数为 0. 789 4，硫
酸阿托品折算成阿托品系数为 0. 855 1(见图 1、2)。
2. 4 方法学考察
2. 4. 1 标准曲线的制备 精密称取氢溴酸山莨菪
碱对照品适量，精密称定，配制成 5. 88、11. 82、
23. 63、59. 10、88. 49、294. 91 μg·mL －1的对照品溶
液。精密称取氢溴酸东莨菪碱对照品适量，精密称
定，配 制 成 14. 57、29. 14、58. 27、145. 73、218. 54、
728. 41 μg·mL －1的对照品溶液。精密称取硫酸阿托
品碱对照品适量，精密称定，配制成 16. 17、32. 34、
64. 67、161. 71、242. 53、808. 44 μg·mL －1的对照品溶
液。分别取上述对照品 10 μL注入高效液相色谱仪，
以进样量为横坐标，相应的峰面积为纵坐标，绘制标
准曲线，并以最小二乘法计算得氢溴酸山莨菪碱、氢
溴酸东莨菪碱、硫酸阿托品的标准曲线分别为:
Y = 1 350. 015 4X + 1. 768 9(r = 0. 999 9);
Y = 992. 680 4X + 11. 288 3(r = 0. 999 9) ;
Y = 1 212. 888 3X + 16. 145 1(r = 0. 999 9)。
结果显示，氢溴酸山莨菪碱对照品在 0. 058 8 ～
2. 949 1 μg、氢溴酸东莨菪碱对照品在 0. 145 7 ～
7. 284 1 μg、硫酸阿托品对照品在 0. 161 7 ～ 8. 084 4
μg的范围内与峰面积呈良好的线性关系。
2. 4. 2 仪器精密度试验 取供试品溶液，按以上色
谱条件于同一日内重复进样 6 次，测定峰面积，结果
氢溴酸山莨菪碱、氢溴酸东莨菪碱、硫酸阿托品的
ＲSD(n = 6)分别为 0. 56%、0. 48%、0. 41%。
2. 4. 3 样品溶液的稳定性试验 取供试品溶液，按
以上色谱条件每隔 1 h进样 1 针，测定峰面积，结果
在 12 h内测定，供试品溶液氢溴酸山莨菪碱峰面积
ＲSD 为 0. 64%，氢溴酸东莨菪碱峰面积 ＲSD 为
0. 38%，硫酸阿托品峰面积 ＲSD为 0. 57%。结果表
明，供试品溶液在 12 h内基本无变化，稳定性良好。
图 1 混合对照品色谱图
1．氢溴酸山莨菪碱;2．氢溴酸东莨菪碱;3．硫酸阿托品
图 2 华山参样品色谱图
2. 4. 4 重复性试验 精密称取同一批号样品 6 份，
制备供试品溶液，测定峰面积并计算山莨菪碱、东莨
菪碱、阿托品含量，结果山莨菪碱平均含量为 2. 81
mg·g －1，ＲSD 为 0. 49%(n = 6)。东莨菪碱平均含
·012· 药学研究·Journal of Pharmaceutical Ｒesearch 2015 Vol． 34，No． 4
量为 1. 20 mg·g －1，ＲSD为 0. 32%(n = 6)。阿托品
平均含量为 4. 43 mg·g －1，ＲSD为 0. 63%(n = 6)。
2. 4. 5 加样回收率试验 精密称取已知含量样品
6 份，每份 0. 5 g，精密加入氢溴酸山莨菪碱、氢溴酸
东莨菪碱、硫酸阿托品对照品适量，制备供试品溶
液，测定峰面积并计算含量，结果表明山莨菪碱回收
率的平均值为 100. 03%，ＲSD为 0. 13%。东莨菪碱
回收率的平均值为 100. 77%，ＲSD为 0. 97%。阿托
品回收率的平均值为 99. 20%，ＲSD 为 0. 80%。表
明本方法回收率较好，方法可行，结果见表 1 ～ 3。
表 1 山莨菪碱加样回收试验测定结果
取样量
(g)
实测含量
(mg)
对照品
量(mg)
样品含
量(mg)
回收率
(%)
平均回收
率(%)
ＲSD
(%)
0． 500 1 2． 817 0 1． 410 5 1． 405 3 100． 09
0． 500 6 2． 816 7 1． 410 5 1． 406 7 99． 97
0． 500 2 2． 819 0 1． 410 5 1． 405 6 100． 21
0． 500 4 2． 815 0 1． 410 5 1． 406 1 99． 88
0． 500 1 2． 817 7 1． 410 5 1． 405 3 100． 14
0． 500 3 2． 814 9 1． 410 5 1． 405 8 99． 90
100． 03 0． 13
表 2 东莨菪碱加样回收试验测定结果
取样量
(g)
实测含量
(mg)
对照品
量(mg)
样品含
量(mg)
回收率
(%)
平均回收
率(%)
ＲSD
(%)
0． 500 1 1． 206 0 0． 601 5 0． 600 1 100． 73
0． 500 6 1． 211 0 0． 601 5 0． 600 7 101． 46
0． 500 2 1． 200 1 0． 601 5 0． 600 2 99． 73
0． 500 4 1． 206 6 0． 601 5 0． 600 5 100． 77
0． 500 1 1． 215 0 0． 601 5 0． 600 1 102． 22
0． 500 3 1． 200 1 0． 601 5 0． 600 4 99． 71
100． 77 0． 97
表 3 阿托品加样回收试验测定结果
称样量
(g)
实测含量
(mg)
对照品
量(mg)
样品含
量(mg)
回收率
(%)
平均回收
率(%)
ＲSD
(%)
0． 500 1 4． 432 1 2． 228 8 2． 215 4 99． 46
0． 500 6 4． 405 5 2． 228 8 2． 217 7 98． 16
0． 500 2 4． 431 9 2． 228 8 2． 215 9 99． 43
0． 500 4 4． 407 2 2． 228 8 2． 216 8 98． 28
0． 500 1 4． 445 1 2． 228 8 2． 215 4 100． 04
0． 500 3 4． 441 8 2． 228 8 2． 216 3 99． 85
99． 20 0． 80
2. 4. 6 样品含量测定 取华山参药材，按“2. 2. 2”
项下操作，测定山莨菪碱、东莨菪碱和阿托品的含
量，并计算分离度和理论塔板数，结果见表 4。
表 4 华山参样品含量测定结果
编号 成分名称含量(mg·g － 1)平均含量(mg·g － 1)分离度 理论塔板数
1 山莨菪碱
2． 80
2． 82
2． 81 1． 63 17 625
2 东莨菪碱
1． 20
1． 21
1． 20 5． 11 16 415
3 阿托品
4． 45
4． 41
4． 43 3． 80 189 811
3 讨论
3． 1 分别选择色谱柱 Diamonsil C18(4. 6 mm × 250
mm，5 μm)、Hypersil C18(4. 6 mm ×250 mm，5 μm)、
Agilent Zorbax SB － Aq C18(4. 6 mm × 250 mm，5
μm) ，根据样品分离效果、理论塔板数等柱效参数，
综合考虑山莨菪碱、东莨菪碱和阿托品的测定要求
及分离效果，选择 Agilent Zorbax SB － Aq C18(4. 6
mm ×250 mm，5 μm)作为色谱柱。
3． 2 试验中参考比较了 3 种流动相体系:①周军
等［4］对华山参滴丸中 3 种生物碱的测定方法，采用
乙腈 －醋酸盐体系，结果样品中 3 种生物碱的分离
较好，但此流动相体系存在基线漂移的问题，而且梯
度洗脱过于复杂;②康辉等［5］的研究中，采用甲醇
－磷酸水体系，虽然山莨菪碱的分离较好，但对于东
莨菪碱的分离较差，而且阿托品峰严重拖尾;③本文
参考《中国药典》［6］中硫酸阿托品的含量测定方法，
选择乙腈 －磷酸二氢钾体系，在此体系中不加入离
子对试剂，减少对色谱柱的损害，加入适量三乙胺，
调整峰形，并用磷酸调至 pH 为 6. 0，结果表明色谱
图中山莨菪碱、东莨菪碱、阿托品与杂质峰分离效果
最佳，峰型最好。
3． 3 参考文献［4 ～ 7］报道中，山莨菪碱、东莨菪碱和
阿托品的检测波长为 210 nm;采用二极管阵列检测
器对山莨菪碱、东莨菪碱和阿托品进行光谱扫描，结
果表明 3 种生物碱的最大吸收也均在 196 nm。考
虑到末端吸收的干扰，本文借鉴参考文献选取 210
nm作为检测波长，该波长下各色谱峰响应良好，而
且没有杂峰干扰。
3． 4 根据参考文献［7］考察了前处理中提取方法
(超声、回流)、提取溶剂(甲醇、30%甲醇、60%甲
醇、水)、提取体积(10、25、50 mL)、提取时间(20、
30、40 min) ，对华山参中山莨菪碱、东莨菪碱、阿托
品提取情况的影响，结果显示使用超声提取的方法，
精密加入 60%甲醇 25 mL，超声处理 30 min，可以将
华山参中山莨菪碱、东莨菪碱和阿托品提取完全。
通过方法学考察建立了高效液相色谱法测定华
山参中山莨菪碱、东莨菪碱、阿托品含量的方法。本
方法简便易行，结果准确，重复性好，可作为华山参
药材质量控制的方法。
参考文献:
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济源职业技术学院学报，2005，4(2):8 － 10．
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［3］ 国家药典委员会．中华人民共和国药典 2010 年版(一
部)［S］．北京:中国医药科技出版社，2010:692．
(下转第 214 页)
·112·药学研究·Journal of Pharmaceutical Ｒesearch 2015 Vol． 34，No． 4
表 2 供试品溶液侧定结果
测定次数 峰面积 At
1 125． 64
2 123． 56
3 124． 16
4 123． 23
5 126． 89
均值 124． 70
ＲSD(%) 1． 10
供试品溶液重复测定产生的不确定度为:urel
(A2)= 槡ＲSD / n = 0． 004 92
高校液相色谱仪引入的相对标准不确定度为:
urel(A)=检定证书给出的不确定度 /K = 0． 49% /3
= 0． 001 63 (K = 3)
供试品峰面积引起的相对标准不确定度:urel
(At)= urel
2(A)+ urel
2(A2槡 )= 0． 005 18
u(At)= urel(At)× At = 0． 645 95
3． 3． 4 合成标准不确定度 供试品溶液的峰面积、
对照溶液的峰面积、对照溶液稀释体积等的不确定
度相互独立，故将上述数据合成，得合成相对标准不
确定度 u (X)为:
u(X)= c2(At)u2(At)+ c2(As)u2(As)+ c2(Vs)u2(Vs槡 )
=
(0．021%)2 ×0．645 952 +(－0．000 6%)2 ×1．611 87槡 2
+(－ 0． 002 7)% 2 × 0． 185槡 2 = 0． 001 74%
表 3 相对标准不确定度一览表
不确定度分量 不确定度来源 分布 类型 相对标准不确定度
urel(At)
HPLC进样重复性 正态 A 0． 005 18
HPLC仪器的不确定度 正态 B 0． 001 63
urel(As)
HPLC进样重复性 正态 A 0． 003 45
HPLC仪器的不确定度 正态 B 0． 001 63
urel(Vs)
玻璃量器的校准 矩形 B 0． 001 75
实验室温度 矩形 B 0． 000 61
3． 4 扩展不确定度 计算得盐酸左氧氟沙星注射
液中有关物质的含量的测定结果 X = 0． 27%，测量
结果的合成标准不确定度 u(X)= 0． 001 74%。按
惯例，若取包含因子 K = 2(95%的置信区间)，得测
量结果的扩展不确定度:
U = K × u(X)= 0． 004%
3． 5 测量结果的表示 供试品盐酸左氧氟沙星注
射液中有关物质的含量可表示为:X = 0． 27% ±
0． 004%，K = 2(95%的置信区间)。
4 讨论
灵敏系数反映了该输入量标准不确定度对输出
量不确定度贡献的灵敏程度，而且标准不确定度只
有乘以该灵敏系数才能构成一个不确定度分量，即
和输出量有相同的单位，因此在不确定度评定过程
中灵敏系数不能被忽视。
参考文献:
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