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复方颠茄口服溶液中硫酸阿托品含量测定及质量标准研究
张磊，白青山，王亮
(临沂市药品检验所，临沂 276000)
摘要 目的:建立复方颠茄口服溶液的质量控制标准。方法:利用反相高效液相色谱法对制剂中硫酸阿托品、东莨菪碱及山
莨菪碱进行定性鉴别;采用反相高效液相色谱法测定硫酸阿托品的含量。色谱条件:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以
乙腈 －磷酸盐缓冲液(pH 2. 8) (10∶ 90)为流动相;检测波长为 210 nm;流速为 1. 0 mL·min －1;进样量为 20 $L;柱温为 30 ℃。
结果:样品溶液色谱图中显示与对照品溶液色谱图中相同的硫酸阿托品、东莨菪碱及山莨菪碱色谱峰，且分离度良好，硫酸阿
托品在 15. 29 ～ 152. 9 $g·mL －1范围内呈良好线性关系(r = 0. 9996) ;平均回收率(n = 6)为 100. 2%，ＲSD为 1. 7%。结论:该
方法准确、可靠、专属性强，为建立复方颠茄口服溶液质量标准提供依据。
关键词:复方颠茄口服溶液;硫酸阿托品;东莨菪碱;山莨菪碱;高效液相色谱法
中图分类号: 文献标识码: 文章编号:0254 － 1793(2013)08 － 1407 － 04
Content determination and quality control of
compound belladonna oral solution
ZHANG Lei，BAI Qing － shan，WANG Liang
(Linyi Institute for Drug Control，Linyi 276000)
Abstract Objective:To establish a quality standard for compound belladonna oral solution． Method:ＲP － HPLC
method was adopted for the Atropine Sulfate，Scopolamine and Anisodamine identification ，and the content of Atro-
pine Sulfate was also determined． The analyses were performed on a CAPCELL PAK C18 column(4. 6 mm !150 mm，
5 $m)with the mobile phase consisted of acetonitrile － phosphate buffer(pH 2. 8) (10∶ 90)at a flow rate of 1. 0 mL
·min －1 ． The detection wavelength was 210 nm，the temperature of column was 30 ℃，and the volume of injection
was 20 $L． Ｒesults:The chromatogram of the sample solution showed three peaks which were similar to the refer-
ence solution． The linear range of atropine sulfate was in the range of 15. 29 － 152. 9 $g·mL －1(r = 0. 9996) ，the
average recovery(n = 6)was 100. 2% and the ＲSD was 1. 7% ． Conclusion:The method is accurate，reliable and
specific，which can be used for the quality control of compound belladonna oral solution．
Key words:compound belladonna oral solution;atropine sulfate;scopolamine;anisodamine;ＲP － HPLC method
复方颠茄口服溶液是由颠茄酊、橙皮酊和羟苯
乙酯溶液混合制成的医院制剂。临床用于缓解胃痉
挛引起的疼痛、恶心、呕吐等。主要成分为硫酸阿托
品、东莨菪碱和山莨菪碱等托烷类生物碱，其中硫酸
阿托品为其主要成分。对于颠茄浸膏、颠茄流浸膏、
颠茄草、颠茄合剂、颠茄浸膏片以及颠茄片的含量测
定方法报道较多，多采用分光光度法［2 － 3］、液相色谱
法［4 － 10］以及区带毛管电泳法［11］。但是，尚未见到
对于颠茄口服溶液含量测定和定性鉴别的文章报
道。复方颠茄口服溶液的主要成分为硫酸阿托品，
阿托品作为一种毒性很强的成分，在临床应用当中
应该严格控制。该制剂在临床使用过程当中，医生
也仅仅依靠颠茄浸膏中硫酸阿托品的含量进行推算
该制剂中硫酸阿托品的含量，来确定给药剂量，缺乏
准确的定量依据。
中国药典 2010 年版一部仅收载颠茄草、颠茄
酊、颠茄浸膏、颠茄流浸膏和颠茄片的质量控制方
法［1］。对于该制剂，国家药品标准中尚没有质量控
制方法，各省药监局收录的医院制剂药品标准中仍
没有含量测定的项目，且该制剂的检验标准仍不完
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善。本文对制剂中主要成分硫酸阿托品进行含量
测定，并对制剂中共存的东莨菪碱及山莨菪碱进
行鉴别，对该制剂的检验标准进行完善，为该制剂
的质量控制提供分析方法。此外，本研究采用高
效液相色谱方法对制剂中 3 种成分进行鉴别，较
之以往文献报道采用薄层色谱法［8］鉴别具有较高
的灵敏度。
1 仪器和试药
Agilent 1200 液相色谱仪，包括自动脱气机、四
元泵、自动进样系统、紫外检测器、柱温箱、1200 化
学工作站，Mettler XS205 电子分析天平。CAPCELL
PAK C18色谱柱(4. 6 mm !150 mm，5 $m，Col NO．
AKAB04912;Col NO． AKAB04913) ;Inertsil ODS SP
色谱柱(4. 6 mm !150 mm，5 $m) ;SunFire C18色谱柱
(4. 6 mm !150 mm，5 $m)。
复方颠茄口服溶液(临沂市人民医院制剂室提
供，批号:20120822;20120726;20120914) ;对照品硫
酸阿托品(批号 100040 － 201011)、氢溴酸东莨菪碱
(批号 100049 － 200308)、氢溴酸山莨菪碱(批号
100051 － 201105)购自中国食品药品检定研究院;色
谱纯乙腈，高纯水，其他试剂均为分析纯。
2 方法
2. 1 色谱条件及系统适用性试验 CAPCELL PAK
C18色谱柱(150 mm !4. 6 mm，5 $m) ，流动相:乙
腈 －磷酸盐缓冲液(取 6. 8 g 磷酸二氢钾溶于 1000
mL 水中，加入三乙胺 10 mL，用磷酸调节 pH 至
2. 8) (10 ∶ 90) ，检测波长:210 nm，流速:1. 0 mL·
min －1，进样量:20 $L，柱温:30 ℃。精密量取混合对
照品溶液 20 $L，注入液相色谱仪，理论板数按硫酸
阿托品峰计应不低于 4000，氢溴酸东莨菪碱峰与氢
溴酸山莨菪碱峰之间的分离度应符合要求。
2. 2 溶液制备
2. 2. 1 供试品溶液 精密量取本品 100 mL置蒸发
皿中，水浴上蒸干，加氨试液约 15 mL，用乙酸乙酯
提取 5 次(每次约 15 mL) ，合并乙酸乙酯提取液，蒸
干，残渣加流动相溶解并转移至 25 mL量瓶中，用流
动相稀释至刻度，摇匀，即得。
2. 2. 2 对照品储备液 精密称取硫酸阿托品对照
品约 15 mg，置 100 mL 量瓶中，加流动相溶解并稀
释至刻度，摇匀，即得。
2. 2. 3 混合对照品溶液 取氢溴酸东莨菪碱对照
品、氢溴酸山莨菪碱对照品和硫酸阿托品对照品适
量，加流动相分别制成每 1 mL各含氢溴酸东莨菪碱
与氢溴酸山莨菪碱 0. 005 mg，含硫酸阿托品 0. 05
mg的溶液，即得。
2. 3 方法学考察
2. 3. 1 线性关系考察 精密量取对照品储备液
1. 0、2. 0、3. 0、5. 0 mL，分别置于 10 mL量瓶中，加流
动相稀释至刻度，摇匀，与对照品储备液一起，作为
线性考察系列溶液，用 0. 45 $m微孔滤膜过滤后，注
入液相色谱仪，按“2. 1”项下色谱条件测定。以峰
面积积分值(Y)为纵坐标，对照品溶液浓度(X，$g·
mL －1)为横坐标，制备标准曲线，得回归方程:
Y = 24. 70X － 18. 08 r = 0. 9996
表明硫酸阿托品在 15. 29 ～ 152. 9 $g·mL －1范围内
呈良好线性关系。
2. 3. 2 稳定性考察 取本品，按“2. 2. 1”项下方法
制备供试品溶液，按上述色谱条件分别在 0、2、6、
12、24 h进样，记录色谱图。结果硫酸阿托品峰面
积 ＲSD =1. 3%，表明样品在 24 h内稳定性良好。
2. 3. 3 精密度考察 取同一供试品溶液，连续进样
6 次，测定硫酸阿托品峰面积。结果:ＲSD = 0. 5%，
表明仪器精密度良好。
2. 3. 4 重复性考察 按“2. 2. 1”项下方法平行制
备 6 份供试品溶液，分别进样。结果:ＲSD = 1. 0%，
表明方法的重复性良好。
2. 3. 5 加样回收率试验 精密量取已测知含量的
样品 50 mL，置于蒸发皿中，分别精密加入 5 mL 硫
酸阿托品对照品溶液(浓度为 0. 1348 mg·mL －1) ，
按“2. 2. 1”项下方法制备供试品溶液，精密吸取 20
$L，注入液相色谱仪，计算加样回收率。结果，其平
均回收率为:100. 2%，ＲSD = 1. 7%。说明该方法可
行。加样回收率试验结果见表 1。
2. 3. 6 检测限和定量限 精密吸取硫酸阿托品对
照品溶液适量，加流动相逐步稀释至色谱图中硫酸
阿托品峰高分别为噪音的 3 倍和 10 倍，测得硫酸阿
托品的检测限和定量限分别为 3 $g·mL －1和 10
$g·mL －1。
2. 3. 7 专属性考察 分别取混合对照品溶液、供试
品溶液和空白辅料同法制备的阴性对照溶液，注入
液相色谱仪。在建立的色谱条件下，氢溴酸东莨菪
碱、氢溴酸山莨菪碱和硫酸阿托品之间的分离度良
好，且与其他杂质峰之间达到完全分离。表明该方
法专属性良好，见图 1。
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表 1 加样回收率试验结果 (n = 6 )
Tab 1 Ｒesults of recovery test
样品号
(No．)
样品含量
(original amount)/mg
加入量
(added amount)/mg
测得量
(found amount)/mg
回收率
(recovery)/%
平均回收率
(average recovery)/%
ＲSD /%
1 0. 7253 0. 6740 1. 3863 98. 1
2 0. 7253 0. 6740 1. 3883 98. 4
3 0. 7253 0. 6740 1. 4120 101. 9
4 0. 7253 0. 6740 1. 4135 102． 1
5 0. 7253 0. 6740 1. 3992 100. 0
6 0. 7253 0. 6740 1. 4037 100. 7
100. 2 1. 7
图 1 阴性溶液(A)、混合对照品溶液(B)及样品溶液(C)的液相色谱图
Fig 1 HPLC chromatograms of negative solution(A) ，reference substances(B)and sample solution
1．东莨菪碱(scopolamine) 2．山莨菪碱(anisodamine) 3．阿托品(atropine)
2. 3. 8 耐用性考察 本课题改变流动相比例、柱
温、流速、色谱柱品牌型号等试验条件，根据氢溴酸
东莨菪碱峰与氢溴酸山莨菪碱峰之间的分离度，以
及硫酸阿托品峰的理论板数进行考察试验条件的耐
用性。结果见表 2。经试验，以上变动均能通过本
试验系统适用性试验的要求。表明该方法耐用性
良好。
2. 3. 9 光谱纯度考察 采用高效液相色谱仪自
带的 DAD 检测器光谱学纯度检测功能，分别对 3
种成分色谱峰的光谱学纯度进行检测。结果表
明:3 种成分的光谱学纯度值均大于仪器给出的
阈值。
2. 4 定性鉴别 按“2. 2”项下方法分别制备供
试品溶液及混合对照品溶液，按色谱条件进液
相测试。结果:供试品溶液与混合对照品溶液
的色谱图中显示保留时间相同的 3 个色谱峰，
见图 1。采用 DAD 检测器分别查看 3 个色谱峰
的紫外吸收光谱图，供试品溶液与混合对照品
溶液保留时间相应的色谱峰均具有相同的紫外
吸收特征。
2. 5 样品含量测定 按“2. 2. 1”方法制备供试品
溶液，按色谱条件进液相，记录色谱图，求得样品中
硫酸阿托品含量如表 3
表 2 耐用性考察结果
Tab 2 Ｒesults of durability test
考察条件
(experimental conditions)
分离度
(resolution)
理论板数
(number of
theoretical
plate)
乙腈 －磷酸盐
(acetonitrile － phosphate
buffer)
7∶ 93 2. 81 5661
10∶ 90 2. 59 7673
13∶ 87 1. 82 7690
柱温 /℃
(column temperature)
30 2. 59 7673
40 2. 51 9451
室温(room temperature) 2. 57 7503
流速(flow rate)
/mL·min － 1
0. 8 2. 74 8191
1. 0 2. 59 7673
1. 2 2. 51 7247
色谱柱(columns) CAPCELL PAK C18
(4. 6 mm !150 mm，5 $m，
Col NO． AKAB04912)
2. 59 7673
CAPCELL PAK C18
(4. 6 mm !150 mm，5 $m，
Col NO． AKAB04913)
2. 59 7864
Inertsil ODS SP
(4. 6 mm !150 mm，5 $m)
2. 69 7901
SunFire C18
(4. 6 mm !150 mm，5 $m)
2. 48 8024
注:当改变表中某一色谱条件时，其他色谱条件均与“2. 1”项下色谱条件相同。
Note:When the chromatographic condition in the table was changed ，the others
were the same with 2. 1 items．
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表 3 样品测定结果(n =2)
Tab 3 Determination results of samples
批号
(Lot No．)
含量
(content)/mg·mL －1
1 20120822 0. 0146
2 20120726 0. 0145
3 20120914 0. 0146
3 讨论
3. 1 流动相的选择 本课题分别考察了乙腈 －磷
酸盐缓冲液在不同比例时的色谱图，结果表明，当乙
腈比例大于 13 %时，氢溴酸东莨菪碱与氢溴酸山莨
菪碱两色谱峰分离度达不到要求。当乙腈比例小于
7 %时，硫酸阿托品峰流出时间太长，且峰形较宽，
积分不准确。本课题选择乙腈 －磷酸盐缓冲液比例
为 10∶ 90，此时，各色谱峰之间的分离度较好，且基
线平稳峰形较好，积分准确。
3. 2 提取溶剂的选择 本课题比较了氯仿和乙酸
乙酯 2 种有机溶剂作为提取溶剂。2 种溶剂均能达
到充分提取的效果。但是，氯仿在提取的过程中，较
容易产生乳化现象，且氯仿毒性较强。因此，选择乙
酸乙酯作为提取溶剂。
3. 3 检测波长的选择 由于硫酸阿托品分子结构
中没有共轭结构，无明显的紫外吸收，为了便于紫外
检测器检测，本课题参考中国药典一部［1］中对颠茄
浸膏的含量测定，选择在 210 nm近紫外波长处进行
检测。
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(本文于 2012 年 9 月 18 日收到)
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