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紫外分光光度法测定八角枫中水杨苷的含量



全 文 :黑龙江农业科学2016(5):114~116
Heilongjiang Agricultural Sciences
紫外分光光度法测定八角枫中水杨苷的含量
斯佳丽1,翟科峰1,2,3,徐佳佳1,胡梦雪1,张振馨1,马海洋1,王青遥2
(1.宿州学院 特色种植业苗种生产工程技术研究中心,安徽 宿州234000;2.宿州学院 生物与
食品工程学院,安徽 宿州234000;3.宿州学院 药物生物技术研究所,安徽 宿州234000)
摘要:为建立紫外分光光度法测定八角枫中水杨苷的含量,以水为溶剂,回流提取八角枫中水杨苷,采用香草
醛-高氯酸法显色,紫外分光光度法扫描,确定最大吸收波长,通过精密度试验,稳定性试验,加样回收试验建
立水杨苷含量的测定方法。水杨苷的紫外扫描的结果表明:水杨苷的最大吸收波长为281nm,水杨苷标准液
浓度在34.40~172.10μg·mL-
1时浓度与吸光度呈现良好的线性关系,线性回归方程为Y=0.0063 X-
0.0107,r=0.999 3,加样回收率为100.29%。该方法操作简便、准确、快速,可用于八角枫中水杨苷的定量
检测。
关键词:八角枫;水杨苷;紫外分光光度法;含量测定
中图分类号:S567.1 文献标识码:A 文章编号:1002-2767(2016)05-0114-03 DOI:10.11942/j.issn1002-2767.2016.05.0114
  八角枫(Alangium Chinese(Lour.)Harms)
属八角枫科八角枫属植物,别名华瓜木,枢木等,
收稿日期:2016-03-13
基金项目:安徽省自然科学基金资助项目(1608085QH185);
安徽省教育厅自然科学研究重点资助项目(KJ2015A220);
安徽省高校省级优秀青年人才支持计划重点资助项目(gxyq
ZD2016348);宿州学院博士启动基金资助项目(2015jb12);
安徽省大学生创新创业计划资助项目(201510379120);宿州
区域发展协同创新中心开放课题资助项目(2015SZXTZXK-
FYB03,2015SZXTXSKF03)
第一作者简介:斯佳丽(1995-),女,安徽省望江县人,在读学
士,从事中药效应物质基础与作用机理研究。E-mail:sijiali
@126.com。
通讯作者:翟科峰(1981-),男,安徽省无为县人,博士,讲师,
从事中药效应物质基础与作用机理研究。E-mail:kefengzhai
@163.com。
主要分布于珠江流域及长江流域各省区均,东南
亚及非洲东部,且资源丰富[1]。八角枫的根有祛
风,通络,散瘀,镇痛,并有麻醉及松弛肌肉作用,
主治风湿疼痛,麻木瘫痪,心力衰竭,劳伤腰痛,跌
打损伤的疗效[2]。八角枫含有糖及其苷类、氨基
酸、酚类和鞣质、皂苷、甾体、三萜、强心苷、蒽醌及
其苷类、生物碱、有机酸等生物活性成分[1-2]。研
究显示以水杨苷为代表的苷类成分为八角枫主要
活性成分[3]。水杨苷类化合物具有解热、镇痛的
功效,且在人体类的毒副作用小于其它氨酚类和
吡唑酮类解热镇痛药而受到极大的关注,同时也
广泛用于食品、美容等领域[4],因此,国内外的需
求量也越来越大。
Screening and Isolation of High Neutral Protease Yielding Strains
and Study on the Best Fermentation Performance
LU Zhen1,CHEN Fu-jia1,LI En-zhong1,LIU Jia-yang1,LU Zi-zhou1,ZHANG Jian-she2,GAO Sheng-qin2
(1.Biological Engineering Department of Huanghuai University,Zhumadian,Henan 463000;
2.Henan Yupo Limited Company,Zhumadian,Henan 463900)
Abstract:In order to extract the strains with high yield neutral protease from high temperature Daqu,enzyme
production conditions were studied and authenticated.8Jiangxiang bacterial strains were isolated from the high
temperature Daqu before,and the strain GX03with high-yield of neutral protease was isolated from the 8Jian-
gxiang bacterial strains.It was identified as Bacillus amyloliquefaciens through the physiological and biochem-
ical characteristics and molecular identification.The optimal condition for the fermentation were as folows:
moisture content 35%,the strain inoculation amount 11%,NaNO3as nitrogen source,the initial pH 5.5,fer-
mentation time for 6days.Under this conditon,the neutral protease was 567.30U·g-1.
Keywords:microorganism;sauce bacterium;neutral protease;enzyme activity
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5期   斯佳丽等:紫外分光光度法测定八角枫中水杨苷的含量
  目前天然水杨苷类化合物的提取主要来自于
柳杨科植物,很少有从八角枫中提取。有关学者
建立薄层色谱法、分光光度法、高效液相色谱
法[5-6]等方法测定柳杨科植物中水杨苷的含量,但
是针对八角枫中水杨苷含量测定方法目前仅有高
效液相色谱法[7-8]。高效液相色谱法虽然精密度、
准确性、重现性较好,但仪器价格昂贵,所需试剂
要求较高,与紫外分光光度法相比操作相对繁琐、
对操作者要求也较高。因此,本试验采用紫外分
光光度法对其含量进行进一步测定,该法具有操
作简便、快速、重现性好,仪器价格较低,普适性较
强等特点,可为八角枫中水杨苷成分的开发和利
用奠定了重要基础。
1 材料与方法
1.1 材料
试验仪器有 UV-3600紫外可见分光光度
计(日本岛津公司)、SHBⅢ循环水式多用真空
泵(郑州长城科工贸有限公司)、FA2004电子天
平(上海精密科学仪器有限公司)、HH-S恒温水
浴锅(江苏国盛实验仪器厂)、80-2型电动离心
机(金城国盛实验仪器厂);供试材料为八角枫(购
自安徽省亳州市药材市场),水杨苷对照品
S0625-5GD-(-)-Salicin(美国Sigma公司);供试
试剂为香草醛、高氯酸、冰乙酸、甲醇等,均为分
析纯。
1.2 方法
1.2.1 水杨苷对照品的制备 精密称取水杨苷
标准品17.1205mg置10mL量瓶中,用50%甲
醇定容,制成浓度为1.71205mg·mL-1的母液。
准确移取1mL母液置25mL量瓶中,用50%甲
醇定容,配制成浓度为68.482μg·mL-
1的水杨苷
标准液。
1.2.2 八角枫样品制备 取一定量八角枫药材,
精密称定,按1∶20料液比,加水回流1.5h,离心,
将滤液置50mL量瓶中,蒸馏水定容,即得供
试品。
1.2.3 吸收波长的确定 参照文献[6]方法,取
水杨苷标准液(68.482μg·mL-
1)0.5mL于试管
中,加5%的香草醛冰乙酸溶液0.2mL,加入高
氯酸 0.8 mL,摇匀,放在 60 ℃ 水浴中加热
15min,取出后立即用冰浴冷却,加入5mL冰乙
酸稀释,以不加水杨苷标准品作为空白对照组,作
紫外扫描,确定最大吸收波长。紫外扫描结果表
明水杨苷在281nm处有最大吸收峰(见图1)。
图1 水杨苷紫外特征吸收图
Fig.1 UV characteristic absorption of salicin
2 结果与分析
2.1 标准曲线的制备
从水杨苷母液中分别移取0.2、0.4、0.6、
0.8、1.0mL置10mL量瓶中,用50%甲醇定容,
配制成系列浓度,按照“1.2.2”的方法显色,测定
其吸光度。以吸光度与其浓度进行线性回归,回
归方程为Y=0.0063 X-0.0107,r=0.9993。水
杨苷浓度在34.241~171.205μg·mL-
1时呈良好
的线性关系。
2.2 精密度试验
准确移取浓度为171.205μg·mL-
1的水杨苷
标准液,按“1.2.2”方法下显色,连续测定5次,计
算浓度的RSD为0.10%。
2.3 稳定性试验
精密移取浓度为171.205μg·mL-
1水杨苷标
准液,按照“1.2.2”方法显色,分别在0、1、2、3、
4h时测定吸光度,计算浓度的RSD为1.80%。
2.4 重复性试验
称取1g同一批八角枫药材5份,精密称定。
按“1.2.2”项制备样品,按“1.2.3”项方法显色,测
定吸光度,计算含量的RSD为1.63%。
2.5 加样回收率考察[9]
精确称取5份已测定含量的八角枫药材各
1g,分别加入浓度1712.05μg·mL-
1的标准品
1mL,按“1.2.2”制备样品,按“1.2.3”方法显色,
测定吸光度,结果见表1,水杨苷的回收率为
100.29%,RSD为0.85%。
2.6 三批药材测定
精密称取三批的八角枫样品1g,按“1.2.2”制
备样品,按“1.2.3”方法显色,测定吸光度,代入标
准曲线,计算样品的含量,结果水杨苷的含量分别
4.725 9,4.761 5,4.639 2mg·g-1(RSD=1.34%)。
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     黑 龙 江 农 业 科 学 5期
表1 加样回收试验
Table 1 Recovery experiments of adding sample
样品/g
Sample
样品含量/μg
Content of sample
加入量/μg
Amount
测得值/μg
Measured value
回收率/%
Recovery rate
平均回收率/%
Mean recovery rate
RSD/%
1.0492  5074.77  1712.05  6808.7302  101.28
1.0127  4898.23  1712.05  6628.5714  101.07
1.0515  5085.9  1712.05  6786.5079  99.33  100.29  0.85
1.0527  5091.7  1712.05  6799.2063  99.73
1.0856  5250.83  1712.05  6963.4921  100.04
3 结论与讨论
本试验采用紫外分光光度法对三批八角枫药
材中水杨苷进行测定,测得水杨苷平均含量约为
4.7mg·g-1。该方法快速简单,灵敏高、准确可
靠,可以作为八角枫中水杨苷含量测定的方法。
香草醛-高氯酸显色方法目前已广泛用于苷
类的检测,香草醛—高氯酸法能与苷类化合物反
应形成特征的红色。其显色原理是高氯酸将苷元
的酚羟基氧化为羧基,增加1个双键结构,再经双
键位移,双分子缩合等反应生成共轭双键系统,又
在酸的作用下形成阳碳离子盐而显色。显色时要
注意显色时间、温度、冰水浴等条件,5%香草醛—
冰乙酸试剂需现配现用。显色后作最大吸收波长
紫外扫描时发现最大吸收波长与有关报道的最大
吸收波长有出入,根据实际情况最终选定紫外图
谱显示的最大吸收波长作为本试验的条件。试验
过程中也对八角枫提取液进行显色扫描,发现图
谱中已存在的253nm处最大吸收峰的峰太宽,
将281nm处水杨苷吸收峰覆盖了,对试验造成
了一定影响,因此不能用紫外分光光度对八角枫
提取液直接进行测定。
参考文献:
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Determination of Salicin fromAlangiaceae by
Ultraviolet Spectrophotometry
SI Jia-li 1,ZHAI Ke-feng1,2,3,XU Jia-jia1,HU Meng-xue1,ZHANG Zhen-xin1,MA Hai-yang1,
WANG Qing-yao2
(1.Engineering Research Center of Special Farm Seed Production,Suzhou University,
Suzhou,Anhui 234000;2.School of Biological and Food Engineering,Suzhou University,
Suzhou,Anhui 234000;3.Institute of Pharmaceutical Biotechnology,Suzhou University,
Suzhou,Anhui 234000)
Abstract:A ultraviolet spectrophotometry was established to measure the concentration of salicin fromAlangi-
aceae.The water extract of Alangiaceae developed by Vanilin-perchloric acid method was used to make ultra-
violet scan for the largest ultraviolet absorption wavelength.Then,the content determination method for salicin
was established through the accuracy,stability,and recovery test.The maximum absorption wavelength of sali-
cin was at 281nm.The linear range of the salicin concentration was from 34.40μg·mL-
1 to 172.10μg·mL-

and the regressive equation was Y=0.006 3 X-0.010 7,r=0.999 3.The average recovery of the method was
100.29%.The method was simple,fast and accurate,which could be applied to control the quality of salicin
fromAlangiaceae.
Keywords:Alangiaceae;salicin;ultraviolet spectrophotometry;determination
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