全 文 ：书收稿日期:2015-12-16
作者简介:肇鑫宇(1990-)，女(汉族)，黑龙江哈尔滨人，硕士研究生，E-mail 1056568810@ qq. com;* 通讯作者:赵
春杰(1960-)，男(汉族)，吉林农安人，教授，博士，博士生导师，主要从事中西药物质量控制技术的研究工作，
Tel． 024-23986299，E-mail zcjjljj@ sina. com。
文章编号:1006-2858(2016)11-0861-09 DOI:10． 14066 / j． cnki． cn21-1349 /r． 2016． 11． 005
京大戟醋制前后 UPLC指纹图谱及
含量测定的比较
肇鑫宇1，金希儒2，陈雁飞1，王 淼1，赵春杰1*
(1. 沈阳药科大学 药学院，辽宁 沈阳 110016;2. 本溪市高级中学，辽宁 本溪 117099)
摘要:目的 建立京大戟、醋大戟的超高效液相色谱指纹图谱，并同时测定其中胡萝卜苷和大戟二
烯醇的含量。方法 采用 UPLC-DAD 法，Kromat Universil XB C8 色谱柱(150 mm × 2. 1 mm，
1. 8 μm)，检测波长:203 nm，柱温:30 ℃，以乙腈-水为流动相进行二元梯度洗脱，流速为 0. 2 mL·min －1。
建立京大戟、醋大戟指纹图谱，采用国家药典委员会颁布的“中药色谱指纹图谱相似度评价系统软
件”(2009)对来源全国 10 个产地的京大戟、醋大戟进行分析评价，并对其中 2 个色谱峰进行指认
及含量测定。结果 10 批京大戟指纹图谱中标定了 23 个共有色谱峰，相似度值为 0. 910 ～ 0. 993。
10 批醋大戟指纹图谱中标定了 18 个共有色谱峰，相似度值为 0. 900 ～ 0. 987。胡萝卜苷和大戟二
烯醇质量浓度分别在 6. 8 ～ 68. 0 mg·L －1和 5. 8 ～ 58. 0 mg·L －1内与峰面积呈良好的线性关系，平
均回收率分别为 98. 2% 和 98. 4%。结论 该法所建立的指纹图谱可为京大戟石油醚部位的质量评
价和京大戟醋制减毒研究提供一定参考。
关键词:京大戟;醋大戟;指纹图谱;含量测定
中图分类号:Ｒ 917 文献标志码:A
京大戟为大戟科植物大戟 Euphorbia pekin-
ensis Ｒupr. 的干燥根，性味苦且有毒，具有较强的
泻下、抗炎及利尿作用，现代临床主要用其治疗重
度水肿、胸腹部积水、肝硬化腹水、结核性胸膜炎、
百日咳、晚期血吸虫病腹水等症。京大戟主要含
有二萜、三萜、黄酮类、甾醇类、生物碱、有机酸及
鞣质等成分，其中三萜类成分是京大戟的主要活
性成分之一，具有抗炎、抗肿瘤、抗病毒、抗白血病
等生理活性，但是大多数的三萜类成分具有细胞
毒活性并对皮肤、黏膜具有刺激致炎的作用［1 － 6］。
由于京大戟生品毒性较大，故通常采用醋制法降
低京大戟的毒性，但有关醋制降低京大戟毒性作
用的物质基础和作用机制尚缺乏明确的揭示［2］。
研究结果显示，京大戟的细胞毒性部位为石油醚、
乙酸乙酯部位，关于其乙酸乙酯的部位研究较广
泛［7］，因而，本文作者针对京大戟的石油醚部位
展开研究，采用 UPLC － DAD 法建立京大戟、醋
大戟的指纹图谱，通过比较京大戟醋制前后的指
纹图谱变化，为京大戟的质量评价及醋制的减毒
机理研究提供参考。《中华人民共和国药典》
(2015 年版)中将大戟二烯醇作为京大戟的指标
性成分，研究证实大戟二烯醇有降压、抗肿瘤和镇
痛作用［1，8 － 9］，但同时也存在一定的毒性［10］。据
报道胡萝卜苷也是京大戟的化学成分之一［9］，具
有一定的抗氧化、降血糖作用，并具有免疫调节活
性。文献中多只测定京大戟中大戟二烯醇的含
量，未见对其中胡萝卜苷的含量测定进行报道。
本文作者用 UPLC － DAD 法建立京大戟和醋大
戟的指纹图谱，并同时测定胡萝卜苷和大戟二烯
醇的含量，为京大戟药材的质量控制提供了科学
的依据。胡萝卜苷和大戟二烯醇的化学结构式见
图 1。
1 仪器与材料
SIL-30AC 超高效液相色谱仪、SPD-M20A 二
极管阵列检测器、LC-Solution 色谱工作站(日本
Shimadzu公司)，ＲE-52A 旋转蒸发器(上海亚荣
生化仪器厂)，HH-2 数显恒温水浴锅(浙江省嘉
兴市俊思仪器设备厂)，电热恒温干燥箱(天津市
实验仪器厂)，SHZ-D(Ⅲ)循环水式真空泵(巩义
第 33 卷第 11 期
2 0 1 6 年 11 月
沈 阳 药 科 大 学 学 报
Journal of Shenyang Pharmaceutical University
Vol. 33 No. 11
Nov． 2016 p. 861
市予华仪器有限责任公司)，XS205 型电子分析
天平(瑞士 Mettler Toledo 公司)，KQ3200E 超声
波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。
Fig． 1 Chemical structure formula of daucosterol(a)and euphadienol(b)
图 1 胡萝卜苷(a)大戟二烯醇(b)的化学结构式
胡萝卜苷对照品(批号:100445-200601，质量
分数为 30. 9%，中国食品药品检定研究院)，大戟
二烯醇对照品(批号:111866-201302，质量分数为
97. 2%，中国食品药品检定研究院)，乙腈(色谱
纯，美国 Fisher公司)，水(纯净水，杭州娃哈哈集
团)，甲醇(色谱纯，美国 Fisher 公司)，石油醚(分
析纯，天津市富宇精细化工有限公司)。
实验中所用的 10 批京大戟药材均购自于河
北安国中药材市场，经沈阳药科大学贾景明教授
鉴定为大戟科植物大戟 Euphorbia pekinensis
Ｒupr. 的干燥根切制饮片。药材来源及批次见
表 1。醋大戟分别为 10 批京大戟的自制醋制品，
均按照《中华人民共和国药典》(2015 年版)京大
戟项下炮制方法进行规范炮制。
Table 1 Origin and batch of E. pekinensis
表 1 京大戟来源及批次
Sample No. Origin Batch No. Sample No. Origin Batch No.
S1 Jiangsu 20140217 S6 Guangxi 20141123
S2 Anhui 20141119 S7 Hubei 20140205
S3 Shanxi 20140311 S8 Yunnan 20140918
S4 Hebei 20141022 S9 Henan 20140811
S5 Sichuan 20141009 S10 Shandong 20141205
2 方法与结果
2. 1 色谱条件
色谱柱:Kromat Universil XB C8 色谱柱
(150 mm × 2. 1 mm，1. 8 μm)，流动相:乙腈
(A)-水(B)，梯度洗脱(φ):0 ～ 11 min，50% ～
62%A;11 ～ 17 min，62% ～ 72% A;17 ～ 30 min，
72% ～ 83% A;30 ～ 35 min，83% ～ 93% A;35 ～
65 min，93% A，检 测 波 长:203 nm，流 速:
0. 2 mL·min －1，柱温:30 ℃，进样量:5 μL。
2. 2 溶液的制备
2. 2. 1 对照品溶液
取胡萝卜苷和大戟二烯醇对照品适量，精密称
定。用甲醇溶解并定量稀释制成胡萝卜苷和大戟
二烯醇质量浓度分别为 0. 34 g·L －1和 0. 29 g·L －1
的混合对照储备液，4 ℃冷藏备用。精密量取上
述混合对照储备液 1 mL，置于 10 mL 量瓶中，加
甲醇定容至刻度，摇匀，即得胡萝卜苷和大戟二烯
醇质量浓度分别为 34 mg·L －1和 29 mg·L －1的对
照品溶液。
2. 2. 2 供试品溶液
分别取京大戟和醋大戟粗粉约 4 g，精密称
定，置索氏提取器中，精密加入石油醚 100 mL，水
浴提取 2 h，蒸干，残渣加甲醇溶解并定量转移至
10 mL 量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤
液，即得。
2. 3 方法学考察
2. 3. 1 专属性
分别取空白溶剂(甲醇)、“2. 2. 2”条京大戟
供试品溶液和醋大戟供试品溶液，按“2. 1”条下
色谱条件，进样分析，理论板数以大戟二烯醇峰计
268 沈 阳 药 科 大 学 学 报 第 33 卷
不低于 5 000，各共有峰与相邻色谱峰之间分离度
良好。结果显示，空白溶剂对供试溶液的测定不
存在干扰，专属性良好。
2. 3. 2 精密度
取 S1 批京大戟和醋大戟样品，按“2. 2. 2”条
方法制备供试品溶液，照“2. 1”条色谱条件各连续
进样 6次，进行分析，测得京大戟和醋大戟各共有
峰相对保留时间的 ＲSD 均 ＜ 1. 5%，各共有峰相对
峰面积的 ＲSD 均 ＜3%，符合指纹图谱技术要求。
2. 3. 3 重复性
取 S1 批京大戟和醋大戟样品各 6 份，按
“2. 2. 2”条方法制备供试品溶液，按“2. 1”条色谱
条件进样分析。测得京大戟和醋大戟各共有峰相
对保留时间的 ＲSD 均 ＜ 1. 5%，各共有峰相对峰
面积的 ＲSD 均 ＜ 3%，符合指纹图谱技术要求。
2. 3. 4 稳定性
取 S1 批京大戟和醋大戟样品，按“2. 2. 2”条
方法制备供试品溶液，照“2. 1”条色谱条件，分别
于 0、2、4、8、12、24 h 进样分析，各共有峰相对保
留时间的 ＲSD 均 ＜ 1. 5%，相对峰面积的 ＲSD 均
＜ 3%，供试品溶液在 24 h 内稳定，符合指纹图谱
技术要求。
2. 4 指纹图谱的建立及相似度分析
取 10 批京大戟和醋大戟样品，分别按
“2. 2. 2”条方法制备供试品溶液，按“2. 1”条色谱
条件进行分析，记录色谱图，将所得谱图导入国家
药典委员会“中药色谱指纹图谱相似度评价系
统”(2009)进行处理分析。设定样品 S1 为参照
图谱，采用中位数法，选取“时间窗宽度”为
0. 2 min，经多点校正对色谱峰自动匹配，并生成
对照图谱，及 10 批京大戟饮片的共有模式色谱
图(见图 2)和 10 批醋大戟饮片的共有模式色谱
图(见图 3)。由软件可以计算出样品图谱与对照
图谱的相似度数据，10 批京大戟饮片的相似度为
0. 910 ～ 0. 993，结果见表 2，10 批醋大戟饮片的相
似度为 0. 900 ～ 0. 987，结果见表 3。
S1—Jiangsu;S2—Anhui;S3—Shanxi;S4—Hebei;S5—Sichuan;S6—Guangxi;S7—Hubei;S8—Yunnan;S9—Henan;
S10—Shandong
Fig． 2 Overlay fingerprint chromatogram of 10 batches E. pekinensis
图 2 10 批京大戟指纹图谱叠加图
Table 2 Similarity assay of ten batches of E. pekinensis
表 2 京大戟相似度评价结果
Sample No. Similarity Sample No. Similarity
1 0. 991 6 0. 910
2 0. 993 7 0. 969
3 0. 991 8 0. 973
4 0. 990 9 0. 989
5 0. 990 10 0. 990
Table 3 Similarity assay of ten batches of E. pekinensis
stir-baked with vinegar
表 3 醋大戟相似度评价结果
Sample No. Similarity Sample No. Similarity
1 0. 984 6 0. 900
2 0. 984 7 0. 953
3 0. 987 8 0. 976
4 0. 981 9 0. 983
5 0. 985 10 0. 981
368第 11 期 肇鑫宇等:京大戟醋制前后 UPLC 指纹图谱及含量测定的比较
S1—Jiangsu;S2—Anhui;S3—Shanxi;S4—Hebei;S5—Sichuan;S6—Guangxi;S7—Hubei;S8—Yunnan;S9—Henan;S10—
Shandong
Fig． 3 Overlay fingerprint chromatograms of 10 batches E. pekinensis stir-baked with vinegar
图 3 10 批醋大戟指纹图谱叠加图
2. 5 共有指纹峰的标定及部分色谱峰的指认
京大戟供试色谱图中 18 号峰为大戟二烯醇
峰(醋大戟 15 号峰)，与其他色谱峰基本达到基
线分离、且峰面积稳定，故定为内参比峰，以各色
谱峰保留时间与内参比峰的保留时间比值作为各
色谱峰的相对保留时间，计算 10 批京大戟和 10
批醋大戟指纹图谱中各色谱峰的相对保留时间。
标定京大戟共有指纹峰为 23 个，醋大戟共有指纹
峰为 18 个，并指认出 2 个色谱峰，分别为胡萝卜
苷(京大戟 14 号峰，醋大戟 11 号峰)，大戟二烯
醇(京大戟 18 号峰，醋大戟 15 号峰)，供试溶液、
对照溶液和空白溶剂色谱图见图 4。京大戟各共
有指纹峰的相对保留时间，见表 4，醋大戟各共有
指纹峰的相对保留时间，见表 5。
468 沈 阳 药 科 大 学 学 报 第 33 卷
1—23(in A)-The cmmon peaks of E． pekinensis;1—18(in B)-The common peaks of E． pekinensis stir-baked with vinegar;
14(11)—Daucosterol;18(15)—Euphadienol
Fig． 4 Chromatogram of E. pekinensis(A)，Chromatogram of E. pekinensis stir-baked with vinegar(B)，reference sub-
stances(C)and solvent(D)
图 4 京大戟供试溶液(A)、醋大戟供试溶液(B)、对照溶液(C)和空白溶剂(D)色谱图
Table 4 Ｒelative retention time of mutual peaks of 10 batches of E. pekinensis
表 4 10 批京大戟样品色谱峰相对保留时间考察结果
Peak No.
Batch No.
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
ＲSD /%
1 0. 130 0. 131 0. 131 0. 130 0. 130 0. 131 0. 133 0. 130 0. 130 0. 130 0. 74
2 0. 172 0. 172 0. 173 0. 172 0. 172 0. 171 0. 176 0. 171 0. 171 0. 173 0. 82
3 0. 271 0. 272 0. 272 0. 270 0. 271 0. 276 0. 274 0. 268 0. 270 0. 272 0. 76
4 0. 280 0. 280 0. 280 0. 278 0. 279 0. 283 0. 283 0. 280 0. 278 0. 281 0. 63
5 0. 328 0. 329 0. 329 0. 327 0. 327 0. 330 0. 332 0. 325 0. 326 0. 330 0. 59
6 0. 363 0. 364 0. 364 0. 362 0. 362 0. 365 0. 366 0. 360 0. 362 0. 364 0. 50
7 0. 455 0. 456 0. 457 0. 454 0. 455 0. 457 0. 460 0. 451 0. 453 0. 457 0. 54
8 0. 468 0. 469 0. 470 0. 467 0. 467 0. 469 0. 472 0. 461 0. 467 0. 470 0. 64
9 0. 506 0. 507 0. 508 0. 504 0. 505 0. 505 0. 510 0. 498 0. 504 0. 507 0. 64
10 0. 542 0. 542 0. 544 0. 540 0. 541 0. 542 0. 546 0. 536 0. 540 0. 543 0. 50
11 0. 631 0. 632 0. 633 0. 629 0. 630 0. 632 0. 635 0. 624 0. 629 0. 633 0. 4〗
12 0. 643 0. 643 0. 645 0. 640 0. 641 0. 646 0. 647 0. 637 0. 640 0. 644 0. 45
13 0. 739 0. 740 0. 740 0. 736 0. 738 0. 745 0. 745 0. 736 0. 735 0. 741 0. 46
14 0. 750 0. 751 0. 751 0. 747 0. 749 0. 753 0. 755 0. 746 0. 746 0. 751 0. 40
15 0. 778 0. 779 0. 779 0. 775 0. 777 0. 786 0. 784 0. 777 0. 774 0. 780 0. 45
16 0. 936 0. 896 0. 937 0. 936 0. 936 0. 937 0. 938 0. 935 0. 935 0. 936 1. 37
17 0. 957 0. 958 0. 958 0. 957 0. 957 0. 959 0. 959 0. 957 0. 957 0. 958 0. 08
18 1. 000 1. 000 1. 000 1. 000 1. 000 1. 000 1. 000 1. 000 1. 000 1. 000 0. 00
19 1. 083 1. 081 1. 081 1. 085 1. 085 1. 087 1. 105 1. 087 1. 084 1. 083 0. 63
20 1. 108 1. 106 1. 107 1. 111 1. 111 1. 136 1. 127 1. 113 1. 110 1. 109 0. 88
21 1. 131 1. 130 1. 131 1. 133 1. 133 1. 159 1. 150 1. 137 1. 133 1. 156 1. 00
22 1. 155 1. 155 1. 155 1. 158 1. 157 1. 180 1. 172 1. 160 1. 158 1. 179 0. 87
23 1. 246 1. 246 1. 245 1. 227 1. 248 1. 263 1. 246 1. 228 1. 227 1. 247 0. 93
568第 11 期 肇鑫宇等:京大戟醋制前后 UPLC 指纹图谱及含量测定的比较
Table 5 Ｒelative retention time of mutual peaks of 10 batches of E. pekinensis stir-baked with vinegar
表 5 10 批醋大戟样品色谱峰相对保留时间考察结果
Peak No.
Batch No.
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
ＲSD /%
1 0. 282 0. 282 0. 283 0. 283 0. 281 0. 282 0. 281 0. 279 0. 280 0. 279 0. 63
2 0. 332 0. 333 0. 333 0. 334 0. 331 0. 332 0. 330 0. 328 0. 329 0. 328 0. 64
3 0. 367 0. 367 0. 367 0. 368 0. 365 0. 367 0. 365 0. 363 0. 364 0. 363 0. 49
4 0. 460 0. 461 0. 461 0. 462 0. 459 0. 461 0. 458 0. 455 0. 457 0. 455 0. 54
5 0. 472 0. 473 0. 473 0. 474 0. 471 0. 473 0. 470 0. 468 0. 469 0. 467 0. 48
6 0. 508 0. 510 0. 510 0. 512 0. 508 0. 506 0. 508 0. 506 0. 508 0. 504 0. 47
7 0. 545 0. 546 0. 545 0. 547 0. 545 0. 546 0. 543 0. 541 0. 543 0. 540 0. 40
8 0. 634 0. 635 0. 634 0. 635 0. 634 0. 635 0. 632 0. 630 0. 632 0. 629 0. 34
9 0. 645 0. 646 0. 646 0. 650 0. 643 0. 642 0. 644 0. 643 0. 644 0. 640 0. 40
10 0. 744 0. 746 0. 746 0. 746 0. 745 0. 745 0. 742 0. 739 0. 742 0. 739 0. 37
11 0. 754 0. 756 0. 755 0. 756 0. 755 0. 755 0. 752 0. 750 0. 752 0. 750 0. 31
12 0. 783 0. 786 0. 785 0. 788 0. 782 0. 782 0. 782 0. 780 0. 781 0. 777 0. 39
13 0. 938 0. 938 0. 939 0. 939 0. 939 0. 938 0. 937 0. 936 0. 936 0. 936 0. 11
14 0. 958 0. 959 0. 959 0. 959 0. 959 0. 958 0. 958 0. 958 0. 958 0. 958 0. 06
15 1. 000 1. 000 1. 000 1. 000 1. 000 1. 000 1. 000 1. 000 1. 000 1. 000 0. 00
16 1. 128 1. 129 1. 129 1. 129 1. 129 1. 129 1. 131 1. 131 1. 131 1. 130 0. 08
17 1. 152 1. 153 1. 152 1. 152 1. 153 1. 153 1. 154 1. 155 1. 155 1. 154 0. 11
18 1. 239 1. 242 1. 239 1. 237 1. 240 1. 242 1. 243 1. 245 1. 247 1. 246 0. 27
2. 6 京大戟、醋大戟样品聚类分析比较
采用 SPSS19. 0 软件，对 10 批京大戟样品和
10 批醋大戟样品的 UPLC 指纹图谱分别进行聚
类分析，以共有峰的峰面积为数据源，经标准化处
理，用 Ward连接法聚类，样品距离度采用欧氏距
离法(Euclidean)，得样品聚类分析树状图。聚类
分析图反映了各样品的相似程度，样品间的分类
距离值越小则差异越小，当分类距离为 3 ～ 8 时，
10 批京大戟样品被分 3 类，分类结果见表 8，京大
戟和醋大戟的分类结果完全一致。
Fig． 5 Cluster analysis dendrogram of E. pekinensis(A)and E. pekinensis stir-baked with vinegar(B)
图 5 京大戟样品聚类分析树状图(A)、醋大戟样品聚类分析树状图(B)
Table 6 Cluster analysis of E． pekinensis(A)and E． pe-
kinensis stir-baked with vinegar(B)
表 6 京大戟(A)、醋大戟(B)样品聚类分析结果
Category No.(A) Category No. (B)
1 S1，S2，S3，S4，
S7，S9，S10
1 S1，S2，S3，S4，
S7，S9，S10
2 S5，S8 2 S5，S8
3 S6 3 S6
2. 7 指认峰的含量测定
2. 7. 1 色谱条件
同“2. 1”条下色谱条件。
2. 7. 2 溶液的制备
同“2. 2”条下溶液的制备。
2. 7. 3 系统适用性试验
取供试品溶液、对照溶液、空白溶剂，按
“2. 7. 1”条的色谱条件进样分析，理论塔板数按
668 沈 阳 药 科 大 学 学 报 第 33 卷
大戟二烯醇计算不低于 10 000，2 种成分与相邻
峰之间分离度均大于 1. 5，对称因子为 0. 95 ～
1. 05。色谱图见图 4。
2. 7. 4 标准曲线的绘制
依次精密吸取“2. 2. 1”条的混合对照储备液
0. 1、0. 2、0. 4、0. 6、0. 8、1. 0 mL，分别置于 5 mL
量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，制成系列质量
浓度的混合标准溶液。按“2. 7. 1”条的色谱条件
进样分析，测定峰面积。以各混合标准溶液的质
量浓度(ρ)为横坐标，色谱峰面积(A)为纵坐标绘
制标准曲线，得胡萝卜苷和大戟二烯醇的线性回
归方程分别为 A = 1. 13 × 104ρ + 1. 15 × 103(r =
0. 999 9，n = 6)和 A = 2. 30 × 104ρ － 6. 68 × 103
(r = 0. 999 9，n = 6);结果表明，胡萝卜苷和大戟
二烯醇质量浓度分别在 6. 8 ～ 68. 0 mg·L －1和 5. 8
～ 58. 0 mg·L －1内与峰面积呈良好的线性关系。
2. 7. 5 精密度试验
取“2. 2. 1”条的对照品溶液，在“2. 7. 1”条色
谱条件下，重复进样 6 次。结果胡萝卜苷和大戟
二烯醇峰面积的 ＲSD 分别为 1. 0% 和 1. 3%，表
明仪器精密度良好。
2. 7. 6 重复性试验
取 S1 批京大戟和醋大戟样品，按“2. 2. 2”条
方法平行制备供试品溶液各 6 份，按“2. 7. 1”条
下色谱条件进样分析。计算胡萝卜苷和大戟二烯
醇的含量，结果京大戟和醋大戟中胡萝卜苷含量
的 ＲSD 分别为 1. 1% 和 1. 3%，大戟二烯醇含量
的 ＲSD 分别为 1. 4% 和 1. 0%，表明方法重复性
良好。
2. 7. 7 稳定性试验
取 S1 批京大戟和醋大戟，按“2. 2. 2”条方法
制备供试溶液，室温放置。分别于 0、2、4、8、12、
24 h 按“2. 7. 1”条色谱条件进样分析。结果京大
戟和醋大戟中胡萝卜苷峰面积的 ＲSD 分别为
1. 2% 和 1. 3%，大戟二烯醇峰面积的 ＲSD 分别
为 1. 3% 和 1. 1%，表明供试溶液室温放置 24 h
内稳定。
2. 7. 8 加样回收率试验
取已知含量 S1 批京大戟 9 份，每份约 4. 0 g，
精密称定，分别精密加入混合对照储备液适量，按
“2. 2. 2”条供试品方法制备，所得残渣加甲醇溶
解并定容至 25 mL 量瓶中。按“2. 2. 2”条方法制
备供试溶液，在“2. 7. 1”条色谱条件下进样分析，
计算回收率，结果胡萝卜苷和大戟二烯醇的平均
回收率分别为 98. 2% 和 98. 4%，ＲSD 分别为
1. 1% 和 1. 0%(n = 9)，表明该方法回收率良好。
结果见表 7。
Table 7 Ｒesults of recovery of daucosterol and euphadienol(n =9)
表 7 胡萝卜苷和大戟二烯醇回收率试验结果(n =9)
Component moriginal /mg madded /mg mfound /mg Ｒecovery /% 珋x ＲSD /%
Daucosterol 0． 338 3 0． 272 0 0． 601 6 96． 8 98． 2 1． 1
0． 337 5 0． 272 0 0． 600 3 96． 6
0． 338 1 0． 272 0 0． 605 5 98． 3
0． 339 1 0． 340 0 0． 670 4 97． 4
0． 339 2 0． 340 0 0． 673 2 98． 2
0． 337 9 0． 340 0 0． 675 9 99． 4
0． 338 9 0． 408 0 0． 740 2 98． 4
0． 338 6 0． 408 0 0． 743 5 99． 2
0． 338 7 0． 408 0 0． 744 7 99． 5
Euphadienol 0． 291 9 0． 232 0 0． 5194 98． 1 98． 4 1． 0
0． 291 3 0． 232 0 0． 518 2 97． 8
0． 291 8 0． 232 0 0． 525 5 100． 7
0． 292 6 0． 290 0 0． 575 4 97． 5
0． 292 7 0． 290 0 0． 576 9 98． 0
0． 291 6 0． 290 0 0． 576 0 98． 1
0． 292 4 0． 348 0 0． 632 6 97． 8
0． 292 2 0． 348 0 0． 638 3 99． 4
0． 292 3 0． 348 0 0． 635 2 98． 5
768第 11 期 肇鑫宇等:京大戟醋制前后 UPLC 指纹图谱及含量测定的比较
2. 7. 9 样品含量测定
取 10 批样品，按“2. 2. 2”条方法制备供试溶
液，在“2. 7. 1”条色谱条件下进样分析，记录色谱
峰面积，采用外标法以峰面积计计算胡萝卜苷和
大戟二烯醇的含量质量分数，结果见表 8。
Table 8 Content of daucosterol and euphadienol in E. pekinensis(A)and E. pekinensis stir-baked with vinegar(B)
(w /%，n =3)
表 8 京大戟中胡萝卜苷和大戟二烯醇的含量测定结果
Sample No.
Daucosterol
A B
Euphadienol
A B
S1 8. 45 × 10 －3 6. 26 × 10 －3 7. 29 × 10 －3 2. 03 × 10 －3
S2 8. 44 × 10 －3 6. 64 × 10 －3 7. 14 × 10 －3 1. 99 × 10 －3
S3 8. 22 × 10 －3 6. 28 × 10 －3 7. 24 × 10 －3 2. 05 × 10 －3
S4 8. 32 × 10 －3 6. 30 × 10 －3 7. 40 × 10 －3 2. 02 × 10 －3
S5 9. 40 × 10 －3 8. 46 × 10 －3 1. 02 × 10 －2 2. 10 × 10 －3
S6 6. 46 × 10 －3 5. 15 × 10 －3 8. 08 × 10 －3 2. 28 × 10 －3
S7 7. 66 × 10 －3 5. 30 × 10 －3 7. 25 × 10 －3 2. 10 × 10 －3
S8 1. 24 × 10 －2 7. 63 × 10 －3 9. 03 × 10 －3 2. 82 × 10 －3
S9 8. 35 × 10 －3 6. 35 × 10 －3 7. 31 × 10 －3 2. 38 × 10 －3
S10 8. 42 × 10 －3 5. 20 × 10 －3 7. 17 × 10 －3 2. 02 × 10 －3
3 讨论
a.《中华人民共和国药典》(2015 年版)大戟
二烯醇的含量测定项下采用 C8 柱，文献中也曾应
用过 C18柱进行分离
［11］，本试验中，作者对同一厂
家的 C18柱和 C8 柱进行考察，结果证明 C8 柱对
京大戟石油醚部位的分离效果较好，这可能与京
大戟石油醚提取成分的极性较小有关。本文作者
分别考察了甲醇-水、乙腈-水、乙腈-水(体积分数
为 0. 3% 的磷酸溶液)二元梯度洗脱程序，结果
显示，以甲醇为有机相的流动相系统中，基线漂移
严重，末端吸收较强，乙腈为有机相的流动相系统
基线平稳，分离效果较好，加入磷酸对峰形影响不
大，且对色谱柱有一定程度损伤，故选用乙腈-水
为流动相。由于胡萝卜苷和大戟二烯醇均具有共
轭结构，在紫外下有较强吸收，故本试验中，作者
采用 DAD 检测器在波长 200 ～ 400 nm 内扫描，
结果显示，胡萝卜苷和大戟二烯醇的最大吸收波
长为 203 nm，故本实验中，作者选择 203 nm 进行
测定。
b. 对各批京大戟样品的相似度评价结果显
示，10 批京大戟药材相似度及其相应的 10 批醋
大戟药材相似度结果均大于 0. 9，按照《中药材指
纹图谱的技术要求》，相似度大于 0. 9 表明其品
种一致;因此，10 批京大戟样品的品种基本一致。
聚类分析结果表明 S6 批(广西)京大戟样品单独
归类、S5 批(四川)和 S8 批(云南)京大戟样品单
独归类，其他产地样品归为一类，说明广西、四川、
云南三个产地的京大戟样品各成分含量与其他产
地样品存在一定地差异，这可能与样品的生长环
境及采收加工条件等因素相关。
c. 含量测定结果显示，京大戟中胡萝卜苷和
大戟二烯醇的含量均有所降低，大戟二烯醇含量
降低尤为明显，分析原因可能是由于在醋制过程
中经历酸性高温的环境后，引发了氧化、水解或重
排等反应，导致含量改变和结构转化。通过对 10
批京大戟、醋大戟指纹图谱的比较，发现京大戟经
醋制后大部分成分的含量均有一定程度的降低，
共有峰数量也有一定程度的减少，表明京大戟醋
制减毒可能与毒性成分含量降低有关，为京大戟
醋制减毒的作用机理研究提供了一定的依据。
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UPLC fingerprint and content determination of
Euphoria pekinensis and its stir-baked sample with
vinegar
ZHAO Xin-yu1，JIN Xi-ru2，CHEN Yan-fei1，WANG Miao1，ZHAO Chun-jie1*
(1． School of Pharmacy，Shenyang Pharmaceutical University，Shenyang 110016，China;2． Senior Middle
School of Benxi，Bexi 117099，China)
Abstract:Objective To establish the UPLC fingerprint of E． pekinensis and E． pekinensis stir-baked with
vinegar，and to simultaneously determinate the content of daucosterol and euphadienol． Methods The
separation was performed on a Kromat Universil XB C8 column(150 mm × 2. 1 mm，1. 8 μm)with
acetonitrile-water as the mobile phase by gradient elution at the flow rate of 0. 2 mL·min －1 ． The detection
wavelength was 203 nm and the column temperature was 30 ℃ ． The UPLC fingerprint of E． pekinensis and
E． pekinensis stir-baked with vinegar were set up and the quality was evaluated by similarity assay．
Furthermore，two of the peaks were identified and the content was determined． Ｒesults The fingerprint
chromatogram of E． pekinensis had 23 common peaks，and the similarity between 10 batches of E． pekinensis
was about 0. 910 to 0. 993． The fingerprint chromatogram of E． pekinensis stir-baked with vinegar had 18
common peaks，and the similarity between 10 batches of E． pekinensis stir-baked with vinegar was about
0. 900 to 0. 987． The linear range of daucosterol and euphadienol were 6. 8 － 68. 0 mg·L －1 and 5. 8 －
58. 0 mg·L －1，respectively． The average recovery of daucosterol and euphadienol was 98. 2% and 98. 4%，
respectively． Conclusions The established UPLC fingerprint of E． pekinensis and E． pekinensis stir-baked
with vinegar is specific and simple，and it can be used for the quality evaluation of E． pekinensis and E．
pekinensis stir-baked with vinegar combining with the content determination．
Key words:E． pekinensis;E． pekinensis stir-baked with vinegar;fingerprint;content determination
968第 11 期 肇鑫宇等:京大戟醋制前后 UPLC 指纹图谱及含量测定的比较