全 文 ：RP-HPLC法测定京大戟中大戟二烯醇的含量＊
麻风华 1 ,姜文红 1 ,哈丽丽 2 ,刘静 2 ,马双成3 ,肖新月3 ,戴忠3 ,张清波 1
(1.黑龙江省食品药品检验检测所 ,哈尔滨 150001;2.黑龙江省中医药大学 , 哈尔滨 150040;
3.中国药品生物制品检定所 ,北京 100050)
摘要　目的:对京大戟中大戟二烯醇进行含量测定。方法:采用反相高效液相色谱法 ,使用 AgilentZORBAXEclipseXDB-C8
(150 mm×4.6 mm, 5μm)色谱柱 , 流动相为乙腈 -水(92∶8), 流速 1.0 mL· min-1 , 检测波长 210nm, 柱温 25 ℃。结果:大戟
二烯醇进样量在 1.388 ～ 10.41μg范围内有良好的线性关系(r=0.9999),平均回收率(n=6)为 97.1%(RSD=1.7%)。结
论:本方法能够准确测定京大戟中大戟二烯醇的含量。
关键词:京大戟;大戟二烯醇;反相高效液相色谱;含量测定
中图分类号:R917 文献标识码:A 文章编号:0254-1793(2010)12-2290-03
RP-HPLCdeterminationofeupholinRadixEuphorbiaePekinensis＊
MAFeng-hua1 , JIANGWen-hong1 , HALi-li2 , LIUJing2 ,
MAShuang-cheng3 , XIAOXin-yue3 , DAIZhong3 , ZHANGQing-bo1
(1.HeilongjiangProvincialInstituteforFoodandDrugControl, Harbin150001, China;
2.HeilongjiangUniversityofTraditionalChineseMedicine, Harbin150040, China;
3.NationalInstitutefortheControlofPharmaceuticalandBiologicalProducts, Beijing100050, China)
Abstract　Objective:TodevelopanHPLCmethodforthedeterminationofeupholcontentinRadixEuphorbiae
Pekinensis.Methods:ThechromatographicprocedurewascariedoutonaZORBAXEclipseXDB-C8(150 mm×
4.6 mm, 5 μm)column.Themobilephasewasacetonitrile-water(92∶8)ataflowof1.0 mL· min-1 andthede-
tectionwavelengthwas210 nm.Thetemperatureofcolumnwas25 ℃.Results:Thelinearrangeofeupholwas
1.388 -10.41 μg(r=0.9999), andtheaveragerecovery(n=6)was97.1% withRSDof1.7%.Conclusion:
Thismethodisaccurate, reliableandsensitivefordeterminationofeupholinRadixEuphorbiaePekinensis.
Keywords:RadixEuphorbiaePekinensis;euphol;RP-HPLC;assay
　　京大戟为大戟科植物大戟(Euphorbiapekinensis
Rupr.)的干燥根 ,我国除新疆 、西藏外 ,其他各省区
均有分布 ,用于水肿胀满 、胸腹积水 、痰饮积聚 、气逆
喘咳 、二便不利[ 1] , 现代研究表明其具有泻下 、镇
痛 [ 2]和抗炎的作用 [ 3] 。京大戟所含大戟二烯醇 [ 4]
能显著地抑制小鼠皮肤致癌作用 ,可能是泻下的主
要成分 [ 5] 。
中国药典中京大戟药材缺少含量测定项 ,对其
定量分析的研究亦无文献报道 。本文从京大戟中分
离出主要成分大戟二烯醇作为指标性成分 ,建立了
高效液相色谱法测定大戟二烯醇的含量 ,为增加中
国药典中京大戟含量测定项进行了研究 。
1　仪器 、样品与试剂
岛津 LC-2010A型高效液相色谱系统。样品
购自安徽亳州 ,经黑龙江省药品检验所何丽老师鉴
定为京大戟 。大戟二烯醇(euphol)为自制 ,系从京
大戟中分离得到 ,并经 1H-NMR、13 C-NMR和 UV
等光谱法鉴定其结构;按本方法色谱条件 ,归一化法
测得纯度为 99.2%。乙腈为色谱纯 ,水为纯化水 。
2　色谱条件
采用 AgilentZORBAXEclipseXDB-C8 (150
mm×4.6 mm, 5 μm)色谱柱 ,流动相为乙腈 -水(92
—2290— 药物分析杂志 ChinJPharmAnal2010, 30(12)
＊ “十一·五 ”国家科技支撑计划重点项目(No.09XLB3005)
第一作者　Tel:15945991699;E-mail:dc 95@yahoo.com.cn
DOI :10.16155/j.0254-1793.2010.12.020
∶8),流速 1.0 mL· min-1 ,检测波长 210 nm,柱温
25 ℃。在上述色谱条件下 ,大戟二烯醇与相邻峰达
到基线分离 ,分离度分别为 1.88和 2.92,理论板数
达到 8000以上。
3　溶液制备
3.1　对照品溶液　取大戟二烯醇对照品 6.94 mg,
精密称定 ,置于 10 mL量瓶中 ,加甲醇溶解并稀释至
刻度 ,摇匀 ,即得 。
3.2　供试品溶液　取京大戟适量 ,研成粉末(过 4
号筛),混合均匀 。取粉末 1.0 g,精密称定 ,置具塞
锥形瓶中 ,精密加入乙醇 50 mL,密塞 ,称定重量 ,超
声(功率 200 W,频率 40 kHz)处理 30 min,放冷 ,再
称定重量 ,用乙醇补足减失的重量 ,摇匀 ,滤过 。精
密量取续滤液 10 mL,蒸干 ,残渣加甲醇溶解并定容
至 5 mL,以 0.45 μm微孔滤膜过滤 ,取续滤液 ,即
得 。
4　方法学考察
4.1　线性关系考察　分别取按 “3.1”项下方法制
备的对照品溶液 2, 4, 6, 8, 10, 15 μL,注入液相色谱
仪 ,结果表明大戟二烯醇的进样量(X, μg)在 1.388
～ 10.41 μg范围内 ,与峰面积(Y)呈现良好的线性
关系。回归方程为:
Y=1.40 ×106X+8.60×103　r=0.9999
4.2　检测限　精密称取大戟二烯醇的对照品适量 ,
以甲醇配成 0.01 mg· mL-1的对照品溶液 ,用甲醇
逐级稀释 ,进样 10 μL,按 S/N=3计算大戟二烯醇
的检测限为 1 μg·mL-1。
4.3　精密度试验　精密量取按 “3.1”项下方法制
备的对照品溶液 8 μL,连续进样 6次 ,测定峰面积 ,
计算大戟二烯醇峰面积的 RSD(n=6)为 1.5%。
4.4　重复性试验　取京大戟粉末 6份 ,每份 1.0 g,
分别按 “ 3.2”项下方法制备供试品溶液 , 进样 10
μL。结果大戟二烯醇含量的平均值 (n=6)为
1.04%, RSD为 1.0%。
4.5　加样回收率试验　取已测知大戟二烯醇含量
(1.04%)的京大戟粉末 6份 ,每份 0.5 g,分别加入
含大戟醇 4.984 mg的对照品溶液 ,按 “3.2”项下方
法制得加样溶液 ,进样 10 μL,计算回收率。结果大
戟二烯醇平均回收率 (n=6)为 97.1%, RSD为
1.7%。
4.6　稳定性试验　精密量取供试品溶液 10 μL,分
别于 0, 2, 4, 6, 12, 16, 24 h进样测定 ,计算大戟二烯
醇峰面积的 RSD(n=7)为 0.8%。
5　含量测定
取京大戟粉末(过 4号筛)2份 ,每份 1.0 g,精
密称定 ,分别按 “3.2”项下方法制备供试品溶液;按
“3.1”项下方法制备对照品溶液。分别取上述供试
品溶液 10 μL与对照品溶液 8 μL,注入高效液相色
谱仪 ,记录色谱图(图 1),按外标法以峰面积计算含
量。结果 3批样品中大戟二烯醇的含量结果见表
1。
图 1　对照品(A)及 1号样品(B)色谱图
Fig1　Chromatogramsofreferencesubstance(A)andsampleNo.1(B)
1.大戟二烯醇(euphol)
表 1　样品测定结果(n=2)
Tab1　Theresultsofsamples
样品号
(sampleNo.)
含量
(content)/%
相对偏差
(relativedeviation)/%
1 1.04 0.4
2 0.68 1.3
3 0.95 0.6
6　讨论
6.1　供试品溶液制备方法的确定　本文比较了提
取溶剂石油醚 、乙酸乙酯 、乙醇 ,发现乙醇的提取率
明显高于其他 2种溶剂 ,故选择乙醇作为提取溶剂;
通过比较乙醇室温冷浸 12 h、回流及超声提取各
0.5 h,发现冷浸法提取效率最低 ,超声的提取率略
高于回流的提取率 ,且相对杂峰较少 ,易于获得满意
的分离。通过正交试验 ,考察了超声提取的次数(1
次 、 2次 、3次 )和时间(20min、 30min、 40min),统
—2291—药物分析杂志 ChinJPharmAnal2010, 30(12)
计结果表明超声时间为显著性因素 ,而超声次数的
显著性不大 ,故确定超声 1次 ,超声时间为 30 min。
6.2　测定波长的选择　紫外光谱图显示大戟二烯
醇在 194 nm附近处有最大吸收 ,但鉴于 194 nm为
紫外末端吸收 ,易引进溶剂的干扰 ,故选定 210 nm
为测定波长 。
6.3　色谱柱 、流动相及柱温选择 　考察了 Phe-
nomenexGeminiC18 110A(250 mm×4.6 mm, 5 μm)
色谱柱 、AgilentZORBAXEclipseXDB-C18(250 mm
×4.6 mm, 5 μm)色谱柱 、AgilentZORBAXEclipse
XDB-C8(150 mm×4.6 mm, 5 μm)色谱柱及甲醇 、
甲醇 -水 、乙腈 -水按不同比例混合的流动相 ,发现
在 AgilentZORBAXEclipseXDB-C8(150 mm×4.6
mm, 5 μm)、乙腈 -水(92∶8)色谱系统中能达到很
好的基线分离 。对不同柱温进行考察 ,结果在 20,
25 , 30 ℃柱温下均可达到基线分离 ,分离度在 1.5
以上 ,为避免室温变化引起保留时间的改变 ,本文选
择柱温为 25 ℃。对照品和样品的分离色谱图见图
1。
6.4　小结　本测定方法可以准确 、灵敏地测定京大
戟中大戟醇的含量 ,且达到基线分离 ,重复性及回收
率较好 ,结果可靠 ,为京大戟质量标准的建立提供了
依据 。
参考文献
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用研究进展).ChinaPharm(中国药房), 2007, 18(24):1904
(本文于 2009年 11月 10日收到)
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—2292— 药物分析杂志 ChinJPharmAnal2010, 30(12)