全 文 ：Traditional Chinese Drug Research ＆ Clinical Pharmacology，2015 May，Vol． 26 No． 3
收稿日期：2014-12-07
作者简介：张乐林，男，硕士，助理研究员，研究方向：中药炮制。Email： zhanglelin_01@163.com。通讯作者：孙立立，研究员，研究方向：中
药新药与中药炮制原理研究。Email：xingerx@163.com。
基金项目：国家中医药管理局中医药行业科研专项（200807039）；2012年版山东省中药饮片炮制规范项目。
京大戟（Euphorbia pekinesis Radix.），又名大戟、
龙虎草、九头狮子草、将军草等[1]，为大戟科植物大
戟（Euphorbia pekinesis Rupr.）的干燥根，秋、冬二季
采挖，洗净，晒干[2]。我国除新疆、西藏外，其他各
省区均有分布，主产于江苏南京、扬州、邳州等
地[3]，具有泄水逐饮、消肿散结的功效。临床用于水
肿胀满、胸腹积水、痰饮积聚、气逆喘咳、二便不
利，现代研究表明其具有泻下、镇痛和抗炎的作用[4]。
京大戟与甘遂均为同科同属植物，功效与临床主
治相差无几，2010年版中国药典甘遂项下收载有大
戟二烯醇的薄层鉴别与含量测定项，而京大戟仅收载
化学鉴别项，实验过程[5-7]及查阅文献[8-9]发现，大戟
二烯醇为京大戟中特征组分，且成分含量较高，故考
虑可作为京大戟的特征性成分对药材加以鉴别。临床
泻下经方十枣汤即以芫花、甘遂、京大戟等分入药，
大枣煮水服用，原方用于治疗悬饮证，现代医家经多
方验证，将其用于治疗各种水饮停聚胸腹属邪实之
证，其中以结核性渗出性胸膜炎、肝硬化水肿、肾性
水肿等应用最为广泛，方中各药侧重各有所长，京大
戟主用于疏泄脏腑之水湿[10]。查阅药典可知，方中芫
花、甘遂均有较完善的含量测定质控标准，而京大戟
却未提及，故建立京大戟中特征成分的含量测定也显
得尤为重要。本实验旨在建立京大戟中大戟二烯醇的
高效液相色谱含量测定方法，以期为进一步规范京大
戟的质量标准提供依据。
1 材料
1.1 仪器 Warters 2695型高效液相色谱仪（Warters
HPLC法测定京大戟中大戟二烯醇的含量
张乐林，葛秀允，孙立立（山东省中医药研究院，山东 济南 250014）
摘要：目的 建立京大戟中大戟二烯醇的含量测定方法。方法 采用高效液相色谱法，使用汉邦BenetnachC8
（4.6mm×150mm，5μm）色谱柱，流动相为乙腈-0.2%磷酸（83∶17），流速为1mL·min-1，柱温30℃，检测
波长为203nm。结果 大戟二烯醇进样量在0.47～2.85μg范围内呈良好的线性关系（r=0.9999），平均加样回
收率为99.96%（n=6），RSD为0.97%。结论 该方法能够准确测定京大戟中大戟二烯醇的含量。
关键词：京大戟；大戟二烯醇；高效液相色谱法；含量测定
中图分类号：R284.1文献标志码：A 文章编号：1003-9783（2015）03-0384-03
doi：10.3969/j.issn.1003-9783.2015.03.027
HPLC Determination of Euphol in Radix Euphorbia Pekinesis
ZHANG Lelin，GE Xiuyun，SUN Lili（Shandong Academy of Chinese Medicine，Jina 250014 Shandong，China）
Abstract：Objective To establish a method for determining the content of euphol in Radix Euphorbia Pekinesis
Methods The HPLC-ELSD system consisted of Benetnach C8column（4.6 mm×150 mm，5μm） with the mobile
phase consisting of acetonitrile-0.2 % phosphoric acid（83∶17）. The flow rate was 1.0 mL·min-1 nd the olumn
temperature was set at 30℃. The detection wavelength was 203 nm.Results Euphol showed good linear relationship
between sample size and peak area in the range of 0.47～2.85μg. The average recovery of euphol was 99.96 %（n=6），
with the RSD of 0.97 %.C nclusion This method is accurate，reliable and sensitive for the determination of euphol in
Radix Euphorbiae Pekinensis.
Keywords：Radix Euphorbiae Pekinensis；Euphol；HPLC；Co tent determination
384· ·
中药新药与临床药理 2015年 5月第 26卷第 3期
2996 DAD检测器，Waters 2695四元梯度泵）；
EMpower色谱数据工作站，美国 Waters公司；仪表
恒温水浴锅，上海树立仪器仪表有限公司；旋转蒸发
器 RE-2000，上海亚荣生化仪器厂；Sartorius电子天
平XS205DU（1/10万），梅特勒-托利多 仪器（上海）
有限公司。
1.2 药品及试剂 京大戟（产地湖北）药材，购自安徽
亳州药材市场，经山东省中医药研究院中药资源研究
室林慧彬研究员鉴定为京大戟 Euphorbia pekinensis
Rupr.的干燥根；大戟二烯醇为自制，系从京大戟中
分离得到（归一化法测得其纯度质量分数为99.21 %）；
甲醇、乙醇、乙酸乙酯，均为分析纯，天津市广成化
学试剂有限公司；乙腈，色谱纯，迪马科技有限公司。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 色谱柱：汉邦 Benetnach C8柱（4.6
mm×150 mm，5μm）；流动相系统：乙腈-0.2 %磷
酸（83∶17）；流速：1 mL·min-1；柱温：30℃，进样
量为10μL，检测波长为203 nm。
2.2 溶液制备
2.2.1 对照品溶液制备 精密称取大戟二烯醇对照品
9.56 mg，置10 mL容量瓶中，加甲醇溶解，定容至
刻度，得大戟二烯醇储备液。精密吸取储备液1 mL
至10 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，即得大戟
二烯醇对照品溶液。
2.2.2 供试品溶液制备 精密称取京大戟干燥粉末0.5
g（过 40目筛），置圆底烧瓶中，精密加入甲醇 50
mL，密塞，精密称质量。水浴回流提取0.5 h，放冷
后，精密称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀后
过滤。精密量取续滤液10 mL，以0.45μm微孔滤膜
过滤，取续滤液，即得。
2.3 系统适应性试验 在上述色谱条件下，分别精密
吸取对照品溶液和供试品溶液各 10μL注入液相色
谱仪，测定。结果表明，供试品中大戟二烯醇色谱峰
与其相邻峰的分离度大于1.5，大戟二烯醇色谱峰达
到基线分离，保留时间适中。大戟二烯醇对照品色谱
峰的保留时间及峰形与供试品中色谱峰的保留时间及
峰形一致，峰形对称，无拖尾现象产生。在该色谱条
件下，色谱柱理论塔板数以大戟二烯醇计算大于
8000。见图1、图2。
2.4 方法学考察
2.4.1 线性关系考察 分别精密吸取大戟二烯醇对照
品溶液5，10，15，20，25，30μL，注入液相色谱
仪，按上述色谱条件测定，以测得的色谱峰面积（Y）
为纵坐标，大戟二烯醇的进样量（X）为横坐标，绘制
标准曲线，计算得线性回归方程为 Y=2000000X-
87856（r=0.9999），大戟二烯醇在0.47～2.85μg范围
内与峰面积呈良好的线性关系。
2.4.2 精密度试验 精密吸取供试品溶液，连续进样
5次，测定峰面积，计算大戟二烯醇含量，RSD为
0.49 %，结果表明仪器精密度良好。
2.4.3 重复性试验 取京大戟粉末5份，每份0.5 g，
精密称定，按2.2.2项下方法制备，测定峰面积，计
算大戟二烯醇的平均含量为 8.73 mg·g-1，RSD为
1.24 %，说明本方法重复性良好。
2.4.4 稳定性试验 取同一供试品溶液，分别在
0，2，4，8，12，24 h进样测定，计算大戟二烯醇
峰面积的RSD（n=6）为0.46 %，表明供试品溶液在
24 h内稳定。
2.4.5 加样回收率试验 取京大戟药材粉末，平行称
取6份，每份0.25 g，精密称定，加入定量的大戟二
烯醇标准品，按 2.2.2项下方法制备，进样量为 10
μL，测定峰面积，计算大戟二烯醇的平均回收率为
99.96 %（n=6），RSD为0.97 %，见表1。
2.5 样品测定 取6批不同批次的京大戟饮片，按照
t/min
图 1 大戟二烯醇对照品 HPLC色谱图
Figure 1 HPLC chromatograms of euphol
t/min
图 2 京大戟 HPLC色谱图
Figure 2 HPLC chromatograms of Radix Euphorbia Pekinesis
A
U
0.30
0.25
0.20
0.15
0.10
0.05
0.00
0.00 10.00 20.00 30.00 40.00 50.00
3
.
3
8
4
1
7
.
3
1
3
2
.
0
2
A
U
0.50
0.40
0.30
0.20
0.10
0.00
0.00 5.00 10.00 15.00 20.00 25.00 30.00 35.00 40.00 45.00
峰
1
.
3
2
.
7
0
4
大
戟
二
烯
醇
大
戟
二
烯
醇
385· ·
Traditional Chinese Drug Research ＆ Clinical Pharmacology，2015 May，Vol． 26 No． 3
2.2.2项下方法制备供试品溶液，依法进样测定，计
算大戟二烯醇含量。见表2。
表 2 样品含量测定结果
Table 2 Content determination of samples
3 讨论
实验表明，同一产地不同批次京大戟中大戟二烯
醇含量在6.43~7.31 mg·g-1范围，不同产地京大戟中
大戟二烯醇的含量在6.43~10.26 mg·g-1范围。从结果
看同一产地不同批次京大戟中大戟二烯醇含量差异不
大，不同产地京大戟中大戟二烯醇含量差异较大，河
北的含量明显高于河南、湖北两地，分析其原因可能
与产地气候、采集时间以及样品的产地加工和储藏等
因素有关，故临床应用需对药材质量加以控制。
本研究通过正交试验对大戟二烯醇提取条件（提
取溶剂、溶剂用量、提取时间）进行了优选，实验提示
提取时间（0.5 h、1 h、1.5 h）及提取溶剂（甲醇、乙
醇、乙酸乙酯）对大戟二烯醇的提取没有明显影响；
而溶剂用量对大戟二烯醇的提取影响较大，50倍溶
剂用量的提取率明显高于其他用量组，且差异有统计
学意义（P < 0.01）。
对大戟二烯醇的提取方式也进行了对比研究，比
较了加热回流提取及超声法提取对京大戟中大戟二烯
醇提取率的影响，结果表明加热回流法提取率明显高
于超声提取法，综上所述，本研究采用的京大戟中大
戟二烯醇提取工艺为 50倍量的甲醇加热回流提取
0.5 h。对大戟二烯醇标准品及京大戟供试品溶液在
200～700 nm波长范围内进行全波长扫描，紫外光谱
图显示大戟二烯醇在203 nm波长处有最大吸收，故
选定203 nm为大戟二烯醇的测定波长。
本研究还考察了 Thermo Syncronis C18（4.6 mm×
250 mm，5μm） 色谱柱、汉邦 Benetnach C8（4.6
mm×150 mm，5μm）色谱柱、汉邦Benetnach C18（4.6
mm×250 mm，5μm）色谱柱，甲醇、甲醇-水、乙
腈-水及乙腈-磷酸水不同比例混合的流动相对大
戟二烯醇分离度的影响，结果显示，汉邦 Benetnach
C8（4.6 mm×150 mm，5μm）色谱柱、乙腈-0.2 %磷
酸（83∶17）作为流动相在色谱系统中能达到更好的基
线分离。对不同柱温条件下供试品溶液中大戟二烯醇
的液相色谱也进行了考察，结果表明在20℃～30℃
范围内基线均平稳，可达到良好的基线分离，但在
30℃柱温下大戟二烯醇色谱峰峰型更为平滑，故选
用30℃作为大戟二烯醇的分析柱温。
本文通过实验前期京大戟中大戟二烯醇的提取工
艺优选、测定波长、流动相、色谱柱以及柱温的系列
考察，借助系统的实验方法学考察手段，建立了京大
戟中大戟二烯醇的高效液相含量测定方法。方法学考
察试验结果表明，本法灵敏度、稳定性及重现性均符
合含量测定要求，且大戟二烯醇平均加样回收率为
99.96 %，RSD为0.97 %。综合评价表明，本文建立
的方法简单易行，可推荐作为京大戟中大戟二烯醇的
含量检测方法。
参考文献：
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90-92.
（编辑：邓响潮）
编号
1
2
3
4
5
6
称样量
/g
0.25112
0.25039
0.25200
0.25362
0.25075
0.25392
样品含量
/ mg
.845
1.840
1.851
1.863
1.842
1.866
加标量
/ mg
1.635
1.635
1.635
1.635
1.635
1.635
测得量
/ mg
3.475
3.455
3.507
3.506
3.460
3.510
回收率
/ %
99.75
98.82
101.24
100.47
98.92
100.58
平均回
收率/%
99.96
RSD
/ %
0.97
产地
河南
河南
河南
河南
湖北
河北
批号
20130103
20121214
20101108
20110812
20121024
20120912
大戟二烯醇/mg· -1
7.31
6.43
7.26
6.94
8.95
10.26
表 1 加样回收率试验结果
Table 1 Results of recovery test
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