全 文 ：１３８４－１３８９
０９／２０１２
草　业　科　学
ＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＬ　ＳＣＩＥＮＣＥ
２９卷０９期
Ｖｏｌ．２９，Ｎｏ．０９
尖叶胡枝子种子贮藏蛋白分析
王清郦１，２，孙启忠２，赵淑芬３，郭艳艳４，周国栋１
（１．中国农业科学院研究生院，北京１０００８１；２．中国农业科学院草原研究所，内蒙古 呼和浩特０１００１０；
３．林西县草原工作站，内蒙古 林西０２５０２５；４．内蒙古农业大学生态环境学院，内蒙古 呼和浩特０１００１９）
摘要：对３个不同类型尖叶胡枝子（Ｌｅｓｐｅｄｅｚａ　ｈｅｄｙｓａｒｏｉｄｅｓ）的种子贮藏蛋白进行ＳＤＳ－ＰＡＧＥ比较分析。结果表
明，３个不同类型尖叶胡枝子的盐溶蛋白和贮藏蛋白谱带表现出丰富的多态性，分子量１０．７５～１５４．５３ＫＤａ。盐
溶蛋白的特征蛋白谱带共１９条，多态性条带１３条，多态率６８．４２％；贮藏蛋白的特征蛋白谱带共２８条，其中９条
为多态性条带，多态率３２．１４％。利用盐溶蛋白和贮藏蛋白的条带信息进行聚类分析，供试材料可分为两类：Ⅰ
类为普通型和浓绿型尖叶胡枝子；Ⅱ类为高杆型尖叶胡枝子。由此认为，种子贮藏蛋白电泳技术可以作为研究胡
枝子属种内变异的重要研究手段。
关键词：尖叶胡枝子；种子贮藏蛋白；ＳＤＳ－ＰＡＧＥ
中图分类号：Ｑ９４６．１　　　文献标识码：Ａ　　　文章编号：１００１－０６２９（２０１２）０９－１３８４－０６
①
　　尖叶胡枝子（Ｌｅｓｐｅｄｅｚａ　ｈｅｄｙｓａｒｏｉｄｅｓ）为中旱生
草本小半灌木，在森林和森林草原带的草甸草原群落
中为优势种或伴生种，或为草原带的山地灌丛伴生成
分，常见于草甸草原带的丘陵坡地、沙质地上或林
缘［１－２］。尖叶胡枝子具有抗旱、耐寒、耐瘠薄及适应性
广等特性，是荒地造林、水土保持和土壤改良的先锋
植物，并且具有返青早、枯黄晚、叶量大、花期长、泌蜜
量大、营养价值高、再生能力强、适口性好等特点，可
用作饲料、薪炭林、蜜源植物和药用植物［３－５］。
种子贮藏蛋白（Ｓｅｅｄ　Ｓｔｏｒａｇｅ　Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，ＳＳＰ），
是指高等植物在种子成熟过程中合成并大量贮存的
贮藏蛋白质，为植物的生长发育提供重要的碳源、氮
源和硫源。贮藏蛋白质占种子总蛋白含量的６０％～
８０％，豆科植物中总蛋白含量较高，已成为人类除肉
类外重要的蛋白质来源［６－８］。种子贮藏蛋白根据溶
解特性可分为四大类，即溶于水的清蛋白、盐溶蛋白
（包括白蛋白和球蛋白）、醇溶蛋白和溶于稀酸或稀
碱溶液的谷蛋白。蛋白的组成由基因决定、几乎不
受外界环境的影响，蛋白组分的差异可以反映出基
因型的不同，因此，种子贮藏蛋白也被称为生化“指
纹”［９］。研究种子贮藏蛋白的方法有多种，蛋白质电
泳谱带具有较高的多态性、专一性和稳定性，在植物
的生化水平遗传多样性研究、品种鉴定、种群或居群
间的遗传变异以及遗传结构的研究等方面得到了广
泛应用［１０－１１］。十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳
（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）因其多种优良特性而得到研究者的青
睐，如电泳速度只与分子量大小有关、电泳结果稳
定、不受贮藏年限和外界环境影响等［１２－１３］。本试验
采用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳技术对３个不同类型尖叶胡
枝子的种子贮藏蛋白进行比较研究，从生化水平上
探讨尖叶胡枝子的遗传多样性，从而了解胡枝子属
的遗传背景，以期为胡枝子属种质资源的研究和合
理开发利用提供方法依据［１４］。
１　材料与方法
１．１试验区自然概况　试验地设在赤峰市林西
县城北５ｋｍ处的农研场。海拔９００ｍ，属于半干旱
大陆性季风气候；年均气温４～５℃，７月最热，平均
气温２０～２２℃，极端最高气温４０．４℃，１月最冷，
平均气温－１７～－１３℃，极端最低气温－３２．２℃，
≥１０℃积温２　６００℃·ｄ，年均日照时数２　９８５．９ｈ；
年均降水量３２０～３８０ｍｍ，降水主要集中在６－８月，
占全年的７６．７％，年蒸发量１　８００ｍｍ以上，是降水
量的４．９５倍；无霜期１２５～１３０ｄ；土壤为栗钙土。
１．２试验材料　供试材料为尖叶胡枝子，有３个
不同类型，其中一个类型是已经通过审查登记的品
种科尔沁尖叶胡枝子，另外２个类型是在科尔沁尖
① 收稿日期：２０１１－１１－２１　　接受日期：２０１２－０１－０９
基金项目：现代农业产业技术体系（ＣＡＲＳ－３５）建设专项资金
作者简介：王清郦（１９８６－），女，陕西榆林人，在读硕士生，研究方向为牧草资源利用。Ｅ－ｍａｉｌ：ｗａｎｇｑｉｎｇｌｉ５１１＠１６３．ｃｏｍ
通信作者：孙启忠　Ｅ－ｍａｉｌ：ｓｕｎｑｚ＠１２６．ｃｏｍ
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叶胡枝子多年的栽培过程中发现的具有稳定遗传的
种群分化类型。以科尔沁尖叶胡枝子自命名为普通
型，其他两种根据形态特性自命名为浓绿型和高杆
型。于 ２００８ 年 ６ 月 ３ 日播种，播种量为 ６．０
ｋｇ·ｈｍ－２。行距４５ｃｍ，开沟溜种，覆土１．５～２．０
ｃｍ。苗期除草２次，播种当年浇冻水，第２年返青
后除草２遍。
１．３试验方法　采用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ垂直平板电泳
方法，具体操作参照《蛋白质技术手册》［１５］。分别对
各类种子贮藏蛋白（清蛋白、谷蛋白、醇溶蛋白和盐
溶蛋白）及总贮藏蛋白进行电泳分析。
１．３．１种子贮藏蛋白的提取　不同溶剂的蛋白质提
取液配方及用量：①清蛋白提取液：去离子水，提取
用量３５０μＬ；②盐溶蛋白提取液：０．２５ｍｍｏｌ·Ｌ
－１
Ｎａ３ＰＯ４、２ｍｏｌ·Ｌ－１　ＮａＣｌ，ｐＨ 值７．０，提取用量
３５０μＬ；③醇溶蛋白提取液：７５％乙醇溶液，提取用
量３５０μＬ；④谷蛋白提取液：０．２％ＮａＯＨ 溶液，提
取用量３５０μＬ；⑤贮藏蛋白提取液：５ｍＬ　１０％ＳＤＳ，
１．５ｍＬ　２－ＭＥ，１．２５ｇ溴酚兰，３．４４ｍＬ甘油，２．０
ｍＬ　１ｍｏｌ·Ｌ－１　Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ，ｐＨ 值６．８，加双蒸水定
容到２５ｍＬ，提取用量３５０μＬ。
取２０粒种子洗净擦干，放入研钵中研碎，置于
１．５ｍＬ离心管中，加入上述配置的蛋白提取液［１６－１８］
［其中盐溶蛋白在加提取液之前需要进行前处理：在
加有研碎种子的离心管中加入２００μＬ脱脂剂（氯
仿∶甲醇∶丙酮＝２∶１∶１），振荡混匀，常温下脱脂２
ｈ，１０　０００ｒ·ｍｉｎ－１离心１０ｍｉｎ，弃上清后备用，待加
盐溶蛋白提取液］。室温振荡浸提２ｈ，１０　０００
ｒ·ｍｉｎ－１离心１０ｍｉｎ，取上清液置于４℃冰箱备用。
以１∶１的比例加入上样缓冲液，煮沸５ｍｉｎ后点样。
１．３．２　ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳　ＳＤＳ－ＰＡＧＥ的浓缩胶浓
度３％，分离胶浓度１２％。各类贮藏蛋白及总的贮
藏蛋白的上样量１５μＬ，标准蛋白 Ｄ５３２Ｓ（分子量
６．５～２００ｋＤａ），上样量５μＬ，用北京六一电泳仪器
厂生产的ＤＹＺ－２８Ｂ型电泳槽，浓缩时电压恒压２００
Ｖ，分离时电流恒流６０ｍＡ电泳，室温下电泳约７
ｈ，至指示剂跑到距底部１ｃｍ处，电泳结束后剥下胶
片，染色３～１０ｈ，脱色至条带清晰为止，照相并进
行统计［１８］。
１．４统计分析　根据ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳的特点，蛋
白质的电泳迁移率主要取决于它的分子量，而与所
带电荷和形状无关，单体电泳迁移率与蛋白单体分
子量的关系为：
ｌｇ　ＭＷ＝Ｋ１－ｂｍ
式中，ＭＷ 为蛋白单体分子量，ｍ 为蛋白单体迁移
率，Ｋ１ 和ｂ为常数。
蛋白质相对迁移率（Ｒｆ）＝
脱色后蛋白质移动距离×染色前分离胶长
染色前指示剂移动距离×脱色后分离胶长
。
通过已知分子量的标准蛋白（Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ｍａｒｋｅｒ）
在相同电泳条件下的迁移率，绘制出分子量与迁移
率的标准曲线，然后计算供试材料的蛋白单体迁移
率和分子量。对清晰蛋白质条带的有无进行标记，
有为１，无为０，得出（０，１）矩阵。利用Ｐｏｐｇｅｎｅ　１．３１
软件进行Ｎｅｉ’ｓ遗传距离（Ｄ）和遗传一致度（Ｉ）分
析。利用 ＮＴＳＹＳ－ｐｃ　２．１系统进行聚类分析［１９］。
通过ＳＡＳ软件对不同提取液做差异显著性检验。
２　结果与分析
利用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳技术对３个不同类型的
尖叶胡枝子种子贮藏蛋白进行电泳，获得清晰稳定
的遗传蛋白图谱（图１）。
图１　３个不同类型尖叶胡枝子的蛋白电泳图谱
Ｆｉｇ．１　Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｇｒａｍｓ　ｏｆ　ｓｅｅｄ　ｓｔｏｒａｇｅ　ｐｒｏｔｅｉｎｓ　ｏｆ
ｔｈｒｅｅ　Ｌｅｓｐｅｄｅｚａ　ｈｅｄｙｓａｒｏｉｄｅｓ
注：Ｍ为标准蛋白，１～３为盐溶蛋白谱带，４～６为贮藏蛋白
谱带，７、８为提取液空白对照；１、４为普通型，２、５为浓绿型，
３、６为高杆型，７为盐溶蛋白对照，８为贮藏蛋白对照；→表
示表达量１００％条带。
Ｎｏｔｅ：Ｍ，Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ｍａｒｋｅｒ；１～３，ｓａｌｔ－ｓｏｌｕｂｌｅ　ｐｒｏｔｅｉｎｓ；４～６，
ｓｅｅｄ　ｓｔｏｒａｇｅ　ｐｒｏｔｅｉｎｓ；７　＆８，ｃｏｎｔｒｏｌ　ｏｆ　ｅｘｔｒａｃｔｓ；１　＆４，ｃｏｍ－
ｍｏｎ－ｔｙｐｅ；２　＆５，ｄｅｅｐ　ｇｒｅｅｎ－ｔｙｐｅ；３　＆６，ｔａｌ－ｔｙｐｅ；７，ｃｏｎ－
ｔｒｏｌ　ｏｆ　ｓａｌｔ－ｓｏｌｕｂｌｅ　ｐｒｏｔｅｉｎｓ：８，ｃｏｎｔｒｏｌ　ｏｆ　ｓｅｅｄ　ｓｔｏｒａｇｅ　ｐｒｏ－
ｔｅｉｎ；→，ｂａｎｄｓ　ｗｉｔｈ　１００％ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ．
５８３１
ＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＬ　ＳＣＩＥＮＣＥ（Ｖｏｌ．２９，Ｎｏ．０９） ０９／２０１２
２．１清蛋白、谷蛋白和醇溶蛋白电泳结果　经
电泳染色、脱色后，点样孔加入清蛋白和谷蛋白的泳
道无清晰谱带出现，点样孔加入醇溶蛋白的泳道中
出现几条痕迹很浅的条带。
２．２盐溶蛋白谱带遗传多样性分析　３份供试
材料的盐溶蛋白质谱带存在差异，共检测出１９条蛋
白谱带，其中６条谱带为稳定表达谱带，表达率为
１００％；其余１３条为不同程度表达的多态性谱带，多
态性数目占总条带的６８．４２％。把整个蛋白谱带划
分为４个区域：α区、β区、γ区和ω区，其中α区相
对迁移率为０．７～１．０，β区相对迁移率为０．３～
０．７，γ区相对迁移率为０．１～０．３，ω区相对迁移率
为０～０．１。盐溶蛋白的各区域均有条带出现，其中
α区有４条，β区有６条，γ区有６条，ω区有３条，分
子量大小１３．５７～１５４．５３ＫＤａ（表１）。
　　计算３个不同类型尖叶胡枝子盐溶蛋白的
表１　３个不同类型尖叶胡枝子盐溶蛋白电泳出现频率和蛋白分子量
Ｔａｂｌｅ　１　Ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ　ｏｆ　ｂａｎｄｓ　ａｎｄ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｗｅｉｇｈｔ　ｏｆ　ｓａｌｔ－ｓｏｌｕｂｌｅ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｏｆ　ｔｈｒｅｅ　Ｌ．ｈｅｄｙｓａｒｏｉｄｅｓ
位点
Ｌｏｃｉ
出现频率
Ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ
相对迁移率
Ｒｆ
分子量
Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｗｅｉｇｈｔ／ＫＤａ
位点
Ｌｏｃｉ
出现频率
Ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ
相对迁移率
Ｒｆ
分子量
Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｗｅｉｇｈｔ／ＫＤａ
１　 ０．６７　 ０．０５　 １５４．５３　 １１　 １．００　 ０．３４　 ６７．０５
２　 ０．６７　 ０．０７　 １４４．９０　 １２　 ０．３３　 ０．３５　 ６４．８８
３　 ０．６７　 ０．０９　 １３７．８３　 １３　 ０．３７　 ０．３８　 ６０．７５
４　 ０．６７　 ０．１１　 １２９．１５　 １４　 ０．５４　 ０．５４　 ３８．０６
５　 ０．４７　 ０．１３　 １２０．９３　 １５　 １．００　 ０．６０　 ３２．５７
６　 ０．６７　 ０．１６　 １１２．３４　 １６　 ０．８１　 ０．７３　 ２２．５５
７　 １．００　 ０．２０　 １００．１３　 １７　 ０．６７　 ０．８１　 １７．７６
８　 １．００　 ０．２６　 ８５．０１　 １８　 ０．３３　 ０．８５　 １５．７３
９　 １．００　 ０．２８　 ７９．６５　 １９　 ０．３３　 ０．９１　 １３．５７
１０　 １．００　 ０．３１　 ７４．５８
Ｎｅｉ’ｓ的遗传距离和遗传一致度（表２），普通型与浓
绿型的遗传距离最小，为０．０２１　３；普通型与高杆型
的遗传距离最大，为１．０３５　５。高杆型与普通型的遗
传一致度最小，为０．３５５　１，浓绿型与普通型的遗传
一致度最大，为０．９７８　９。
表２　盐溶蛋白 Ｎｅｉ’ｓ遗传一致度（右上角）和
遗传距离（左下角）
Ｔａｂｌｅ　２　Ｎｅｉ’ｓ　ｏｆ　ｇｅｎｅｔｉｃ　ｉｄｅｎｔｉｔｙ（ｕｐｐｅｒ　ｒｉｇｈｔ　ｃｏｒｎｅｒ）ａｎｄ
ｇｅｎｅｔｉｃ　ｄｉｓｔａｎｃｅ（ｌｏｗｅｒ　ｌｅｆｔ　ｃｏｒｎｅｒ）ｏｆ
ｓａｌｔ－ｓｏｌｕｂｌｅ　ｐｒｏｔｅｉｎ
类型
Ｔｙｐｅ
普通型
Ｃｏｍｍｏｎ－ｔｙｐｅ
浓绿型
Ｄｅｅｐ　ｇｒｅｅｎ－ｔｙｐｅ
高杆型
Ｔａｌ－ｔｙｐｅ
普通型
Ｃｏｍｍｏｎ－ｔｙｐｅ
＊＊＊＊ ０．９７８　９　 ０．３５５　１
浓绿型
Ｄｅｅｐ　ｇｒｅｅｎ－ｔｙｐｅ
０．０２１　３ ＊＊＊＊ ０．４０６　４
高杆型
Ｔａｌ－ｔｙｐｅ
１．０３５　５　 ０．９００　５ ＊＊＊＊
　　根据３份供试材料的遗传距离和遗传一致度信
息聚类得到聚类图（图２）。１（普通型）与２（浓绿型）
之间距离系数为０．００，聚为一类；１、２与３（高杆型）
的距离系数为０．５６，３单独聚为一类。
图２　３个不同类型尖叶胡枝子的盐溶蛋白聚类图
Ｆｉｇ．２　Ｄｅｎｄｒｏｇｒａｍ　ｂａｓｅｄ　ｏｎ　Ｎｅｉ’ｓ　ｇｅｎｅｔｉｃ　ｄｉｓｔａｎｃｅ　ｏｆ
ｓａｌｔ－ｓｏｌｕｂｌｅ　ｐｒｏｔｅｉｎｓ
２．３贮藏蛋白谱带遗传多样性分析　３份供试
材料之间的贮藏蛋白质谱带存在差异，共检测到２８
条 蛋白谱带，其中１９条谱带为稳定表达谱带，表达
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表３　３个不同类型尖叶胡枝子贮藏蛋白电泳出现频率和蛋白分子量
Ｔａｂｌｅ　３　Ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ　ｏｆ　ｂａｎｄｓ　ａｎｄ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｗｅｉｎｇｈｔ　ｏｆ　ｓｔｏｒａｇｅ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｏｆ　ｔｈｒｅｅ　Ｌ．ｈｅｄｙｓａｒｏｉｄｅｓ
位点
Ｌｏｃｉ
出现频率
Ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ
相对迁移率
Ｒｆ
分子量
Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｗｅｉｇｈｔ／ＫＤａ
位点
Ｌｏｃｉ
出现频率
Ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ
相对迁移率
Ｒｆ
分子量
Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｗｅｉｇｈｔ／ＫＤａ
１　 ０．４６　 ０．１７　 １０７．７８　 １５　 １．００　 ０．３９　 ５８．０７
２　 ０．７３　 ０．１９　 １０１．７２　 １６　 ０．６２　 ０．４０　 ５６．１９
３　 ０．６７　 ０．２２　 ９３．６９　 １７　 １．００　 ０．４３　 ５１．７９
４　 １．００　 ０．２５　 ８７．７９　 ２８　 １．００　 ０．４７　 ４６．５６
５　 １．００　 ０．２６　 ８４．２２　 １９　 １．００　 ０．５２　 ４０．８２
６　 ０．６７　 ０．２７　 ８２．１４　 ２０　 ０．８１　 ０．５５　 ３７．３０
７　 １．００　 ０．２８　 ８０．１７　 ２１　 １．００　 ０．５７　 ３４．９８
８　 １．００　 ０．３１　 ７６．２５　 ２２　 １．００　 ０．５９　 ３３．３０
９　 １．００　 ０．３２　 ７１．９６　 ２３　 １．００　 ０．６１　 ３１．４７
１０　 ０．８１　 ０．３３　 ６８．５０　 ２４　 ０．３３　 ０．７２　 ２３．２７
１１　 １．００　 ０．３５　 ６６．２４　 ２５　 １．００　 ０．７５　 ２０．９２
１２　 ０．６２　 ０．３６　 ６４．０５　 ２６　 １．００　 ０．８２　 １７．３３
１３　 １．００　 ０．３７　 ６１．４９　 ２７　 １．００　 ０．８８　 １４．７９
１４　 １．００　 ０．３８　 ６０．０１　 ２８　 １．００　 ０．９４　 １２．４３
率为１００％；剩余９条为不同程度表达的多态性谱
带，多态率３２．１４％。α区有５条，β区有１６条，γ区
有７条，ω区无谱带出现，分子量大小１２．４３～
１０７．７８ＫＤａ。
　　计算３个不同类型尖叶胡枝子贮藏蛋白的
Ｎｅｉ’ｓ遗传距离和遗传一致度（表４），普通型与浓绿
型的遗传距离最小，为０．０２５　１；普通型与高杆型的
遗传距离最大，为０．２３８　２。高杆型与普通型的遗传
一致度最小，为０．７８８　０；浓绿型与普通型的遗传一
致度最大，为０．９７５　２。
表４　贮藏蛋白 Ｎｅｉ’ｓ遗传一致度（右上角）和
遗传距离（左下角）
Ｔａｂｌｅ　４　Ｎｅｉ’ｓ　ｏｆ　ｇｅｎｅｔｉｃ　ｉｄｅｎｔｉｔｙ（ｕｐｐｅｒ　ｒｉｇｈｔ　ｃｏｒｎｅｒ）ａｎｄ
ｇｅｎｅｔｉｃ　ｄｉｓｔａｎｃｅ（ｌｏｗｅｒ　ｌｅｆｔ　ｃｏｒｎｅｒ）ｏｆ
ｓｅｅｄ　ｓｔｏｒａｇｅ　ｐｒｏｔｅｉｎ
类型
Ｔｙｐｅ
普通型
Ｃｏｍｍｏｎ－ｔｙｐｅ
浓绿型
Ｄｅｅｐ　ｇｒｅｅｎ－ｔｙｐｅ
高杆型
Ｔａｌ－ｔｙｐｅ
普通型
Ｃｏｍｍｏｎ－ｔｙｐｅ ＊＊＊＊
０．９７５　２　 ０．７８８　０
浓绿型
Ｄｅｅｐ　ｇｒｅｅｎ－ｔｙｐｅ
０．０２５　１ ＊＊＊＊ ０．８１１　９
高杆型
Ｔａｌ－ｔｙｐｅ
０．２３８　２　 ０．２０８　４ ＊＊＊＊
　　根据３份供试材料的贮藏蛋白聚类结果可知
（图３），１（普通型）与２（浓绿型）之间距离系数为
０．０２，聚为一类；１、２与３（高杆型）的距离系数为
０．１０，３单独聚为一类。
图３　３个不同类型尖叶胡枝子的贮藏蛋白聚类图
Ｆｉｇ．３　Ｄｅｎｄｒｏｇｒａｍ　ｂａｓｅｄ　ｏｎ　Ｎｅｉ’ｓ　ｇｅｎｅｔｉｃ　ｄｉｓｔａｎｃｅ　ｏｆ
ｓｅｅｄ　ｓｔｏｒａｇｅ　ｐｒｏｔｅｉｎ
２．４不同提取液的遗传系数方差分析　对盐
溶蛋白和贮藏蛋白提取液的遗传距离和遗传一致度
进行方差分析，结果显示两种提取液的遗传系数之
间没有显著差异（Ｐ＞０．０５）。
３　讨论与结论
蛋白质作为基因表达的直接稳定产物，能在生
化水平上反映ＤＮＡ组成上的差异，种子贮藏蛋白
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在种子细胞内的积累、含量高低及组分的变化受相
关基因的严格调控［２０］。因此，种子贮藏蛋白被广泛
应用于种质资源的研究中，包括新品种登记和保护、
品种亲缘关系和分类研究以及构建蛋白质指纹图谱
等方面［２１－２２］。赵杨等［１６］通过对二色胡枝子（Ｌ．ｂｉ－
ｃｏｌｏｒ）种子贮藏蛋白的研究发现，１４个居群贮藏蛋
白电泳总谱带数为２８条，总多态带为２３条，多态带
率８２．１４％，胡枝子总遗传多样性指数为０．２５５，居
群内平均遗传多样性指数为０．１３６，占总遗传多样
性指数的５３．３３％，说明居群内变异是胡枝子基因
结构变异的主要来源。此外，各居群间也存在较高
的遗传分化。闫伟红等［１８］通过对４０个野生居群的
胡枝子属植物种贮蛋白研究表明，供试材料的种贮
蛋白谱带的多态性达９０．６％，这说明胡枝子属植物
无论在种间还是种内都具有丰富的蛋白质多态性。
通过对胡枝子属的蛋白质电泳研究可以发现，遗传
变异大多来自胡枝子属种内或居群间，推断导致遗
传变异的可能原因是长期生物进化而积累的遗传物
质的变异以及由于优胜劣汰而逐渐适应生境的不同
生态型之间的差异。
对３个不同类型尖叶胡枝子的蛋白电泳谱带位
点进行统计，不同提取液所获得的蛋白谱带各不相
同。其中使用去离子水和０．２％ＮａＯＨ溶液提取的
尖叶胡枝子种子清蛋白和谷蛋白几乎没有或者含量
甚微，使用７５％乙醇溶液提取的尖叶胡枝子种子醇
溶蛋白含量较少，在此不做详细讨论。利用盐溶蛋
白和贮藏蛋白提取液所得的总蛋白谱带的分子量介
于１２．４３～１５４．５３ＫＤａ，相对迁移率０．０５～０．９４。
从电泳结果可以看出，盐溶蛋白的γ区域是谱带颜
色、宽窄和多态性位点差异最明显的区域；β区是贮
藏蛋白均匀表达稳定且集中的区域，γ区是谱带多
态性位点出现差异的区域［２３－２４］。盐溶蛋白的蛋白谱
带总数为１９条，多态率为６８．４２％，贮藏蛋白的为
２８条，多态率为３２．１４％，说明３份材料的盐溶蛋白
的条带位点少于贮藏蛋白而种内变异大于贮藏蛋
白。聚类结果表明，利用盐溶蛋白和贮藏蛋白获得
的蛋白质图谱能很好地区分鉴别３个不同类型的尖
叶胡枝子，通过对盐溶蛋白和贮藏蛋白的遗传一致
度进行方差分析，结果显示两者之间没有显著差异。
供试材料分为两类：一类为普通型和浓绿型尖叶胡
枝子；另一类为高杆型尖叶胡枝子，这从生化水平上
证明高杆型尖叶胡枝子是尖叶胡枝子的种内变异
种。盐溶蛋白是豆科植物种子中主要的贮藏蛋白
质［２５］，且谱带的多态性和分辨率较高，建议使用盐
溶蛋白对胡枝子属植物的种内（居群内）变异进行遗
传多样性进行研究，效果更好。
参考文献
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Ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｎ　ｓｅｅｄ　ｓｔｏｒａｇｅ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｏｆ　Ｌｅｓｐｅｄｅｚａ　ｈｅｄｙｓａｒｏｉｄｅｓ
ＷＡＮＧ　Ｑｉｎｇ－ｌｉ　１，２，ＳＵＮ　Ｑｉ－ｚｈｏｎｇ２，ＺＨＡＯ　Ｓｈｕ－ｆｅｎ３，
ＧＵＯ　Ｙａｎ－ｙａｎ４，ＺＨＯＵ　Ｇｕｏ－ｄｏｎｇ１
（１．Ｇｒａｄｕａｔｅ　Ｓｃｈｏｏｌ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ａｃａｄｅｍｙ　ｏｆ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｂｅｉｊｉｎｇ　１０００８１，Ｃｈｉｎａ；
２．Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆ　Ｇｒａｓｓｌａｎｄ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　ｏｆ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ａｃａｄｅｍｙ　ｏｆ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｈｕｈｈｏｔ　０１００１０，Ｃｈｉｎａ；
３．Ｓｔａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｇｒａｓｓｌａｎｄ　Ｗｏｒｋ，Ｌｉｎｘｉ　Ｃｏｕｎｔｙ，Ｌｉｎｘｉ　０２５２５０，Ｃｈｉｎａ；
４．Ｉｎｎｅｒ　Ｍｏｎｇｏｌｉａ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｅｃｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｈｏｈｈｏｔ　０１００１９，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｓｅｅｄ　ｓｔｏｒａｇｅ　ｐｒｏｔｅｉｎｓ　ｏｆ　ｔｈｒｅｅ　Ｌｅｓｐｅｄｅｚａ　ｈｅｄｙｓａｒｏｉｄｅｓ　ｗｅｒｅ　ａｎａｌｙｚｅｄ　ｂｙ　ＳＤＳ－ＰＡＧＥ　ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ．
Ｒｅｓｕｌｔｓ　ｉｎｄｉｃａｔｅｄ　ｔｈａｔ　ＳＤＳ－ＰＡＧＥ　ｏｆ　ｓａｌｔ－ｓｏｌｕｂｌｅ　ｐｒｏｔｅｉｎｓ　ａｎｄ　ｓｅｅｄ　ｓｔｏｒａｇｅ　ｐｒｏｔｅｉｎｓ　ｗｅｒｅ　ｐｒａｃｔｉｃａｌ　ａｎｄ　ｒｅｌｉ－
ａｂｌｅ　ｍｅｔｈｏｄｓ　ｆｏｒ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ　ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ　ａｍｏｎｇ　ｔｈｒｅｅ　Ｌ．ｈｅｄｙｓａｒｏｉｄｅｓ．Ｓａｌｔ－ｓｏｌｕｂｌｅ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ａｎｄ　ｓｅｅｄ
ｓｔｏｒａｇｅ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｃｏｍｍｏｎ－ｔｙｐｅ　ａｎｄ　ｄｅｅｐ　ｇｒｅｅｎ－ｔｙｐｅ　Ｌ．ｈｅｄｙｓａｒｏｉｄｅｓ　ｗｅｒｅ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｆｒｏｍ
ｔｈｏｓｅ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｔａｌ－ｔｙｐｅ．Ｔｈｅ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｗｅｉｇｈｔ　ｒａｎｇｅｄ　ｆｒｏｍ　１０．３７５ＫＤａ　ｔｏ　１５５．５３ＫＤａ．６ｂａｎｄｓ
ｗｅｒｅ　ｓｈａｒｅｄ　ａｎｄ　１３ｂａｎｄｓ　ｗｅｒｅ　ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ （６８．４２％）ｏｆ　ｔｏｔａｌ　１９ｓａｌｔ－ｓｏｌｕｂｌｅ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｂａｎｄｓ．１９ｂａｎｄｓ
ｗｅｒｅ　ｓｈａｒｅｄ　ａｎｄ　９ｂａｎｄｓ　ｗｅｒｅ　ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ（３２．１４％）ｏｆ　ｔｏｔａｌ　２８ｓｅｅｄ　ｓｔｏｒａｇｅ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｂａｎｄｓ．Ｃｌｕｓｔｅｒｉｎｇ
ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｒｅｅ　Ｌ．ｈｅｄｙｓａｒｏｉｄｅｓ　ｗｅｒｅ　ｄｉｖｉｄｅｄ　ｉｎｔｏ　ｔｗｏ　ｇｒｏｕｐｓ．Ｔｈｅ　ｃｏｍｍｏｎ－ｔｙｐｅ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｄｅｅｐ　ｇｒｅｅｎ－
ｔｙｐｅ　ｗｅｒｅ　ｃｌａｓｓｉｆｉｅｄ　ａｓ　ｔｈｅ　ｆｉｒｓｔ　ｇｒｏｕｐ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｔａｌ－ｔｙｐｅ　ｏｎｅ　ｗａｓ　ｓｅｃｏｎｄ　ｇｒｏｕｐ．Ｔｈｅｒｅｆｏｒｅ，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ　ｔｅｃｈ－
ｎｏｌｏｇｙ　ｉｓ　ａｎ　ｉｍｐｏｒｔａｎｔ　ｍｅｔｈｏｄ　ｔｏ　ｓｔｕｄｙ　ｉｎｔｒａｓｐｅｃｉｅｓ　ｖａｒｉａｔｉｏｎ　ａｍｏｎｇ　Ｌｅｓｐｅｄｅｚａｓｐｅｃｉｅｓ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｌｅｓｐｅｄｅｚａ　ｈｅｄｙｓａｒｏｉｄｅｓ；ｓｅｅｄ　ｓｔｏｒａｇｅ　ｐｒｏｔｅｉｎ；ＳＤＳ－ＰＡＧＥ
Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ　ａｕｔｈｏｒ：ＳＵＮ　Ｑｉ－ｚｈｏｎｇ　Ｅ－ｍａｉｌ：ｓｕｎｑｚ＠１２６．ｃｏｍ
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