全 文 ：收稿日期:2011-08-03; 修订日期:2011-11-14
基金项目:福建中医学院服务海西建设重点项目(No． 20085) ;
福建省教育厅科技项目(No． JA10167)
作者简介:朱晓勤(1983-) ，女(汉族) ，福建南平人，现任福建中医药大学
中西医结合研究院医学实验中心助理实验师，硕士学位，主要从事中药化
学成分提取分离及活性筛选研究工作．
* 通讯作者简介:吴锦忠(1965-) ，男(汉族) ，福建莆田人，现任福建中医
药大学中西医结合研究院教授，博士学位，主要从事中药药效物质基础研
究工作．
截叶铁扫帚不同药用部位提取物体外抗氧化活性研究
朱晓勤1，郑孟苏2，邹秀红3，吴锦忠1*
(1．福建中医药大学中西医结合研究院，福建 福州 350108;
2．福建中医药大学药学院，福建 福州 350108; 3．福建省永春县林业局，福建 永春 362600)
摘要:目的 研究截叶铁扫帚根、枝、叶不同药用部位提取物体外抗氧化活性。方法 采用紫外分光光度法测定不同提取
物中总酚和总黄酮的含量。采用清除·DPPH、·OH自由基评价法、铁氰化钾还原法、螯合金属离子评价法比较不同提
取物体外抗氧化活性的差异。结果 药用部位不同提取物中总酚和总黄酮的量，对清除·DPPH、清除·OH、螯合 Fe2 +的
能力均有较大的影响，但对还原能力影响不大。结论 不同药用部位通过不同的途径发挥抗氧化作用，叶部位对清除自
由基作用效果明显，而根部位则在螯合 Fe2 +的能力方面效果更显著，枝部位无突出优势。因此临床用药要注意随症加
减，灵活施药。
关键词:截叶铁扫帚; 总酚; 总黄酮; 抗氧化
DOI标识:doi:10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2012． 01． 074
中图分类号:R284． 2 文献标识码:B 文章编号:1008-0805(2012)01-0166-02
截叶铁扫帚 Lespedeza cuneata (Dum． Cours．)G． Don 为豆科
一年生草本植物，全草入药，中药材为夜关门 ，具有补肝肾、益肺
阴、散淤消肿的作用［1］，临床上已有报道可用来治疗糖尿病、小
儿血尿、失眠、小儿疳积等病［2 ～ 4］。大量的临床资料及试验数据
表明癌症、动脉硬化、糖尿病等许多疾病的发生和发展都与过剩
的活泼氧自由基有关。近年来很多研究发现酚类化合物具有很
好的抗氧化、清除自由基的作用［5］。截叶铁扫帚中含有多种多
酚化合物，如槲皮素、山萘酚、异牡荆素、异荭草素等［6］，但目前
尚未有人对截叶铁扫帚进行抗氧化实验研究，所以本实验通过对
截叶铁扫帚不同药用部位提取物进行总酚和总黄酮的含量测定，
采用不同反应机制的抗氧化方法对不同药用部位提取物的抗氧
化活性、清除自由基能力进行全面的评价，探讨不同药用部位抗
氧化、清除自由基作用途径的差异，分析不同抗氧化活性指标同
总酚、总黄酮的量之间的关联，为临床应用提供理论依据，为寻找
天然的抗氧化剂提供了新的途径。
1 材料与仪器
1． 1 药材 截叶铁扫帚样品采自福建省永春县，经福建中医学院
杨成梓副教授鉴定为豆科植物截叶铁扫帚 Lespedeza cuneata
(Dum． Cours．)G． Don．
1． 2 药品与试剂 没食子酸、α －脱氧核糖、硫代巴比妥酸均购
自 BIO BASIC INC．，福林酚购自 sigma公司，ferrozine购自东京化
成工业株式会社，DPPH 购自和光纯药工业株式会社，BHT、维生
素 C、EDTA、槲皮素、芦丁、十二水合磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、铁
氰化钾、三氯乙酸、三氯化铝、硫酸亚铁、过氧化氢、甲醇、乙醇等
均为国产分析纯。
1． 3 仪器 UV － 1800 紫外 －可见分光光度计(日本岛津)、LXJ
－ⅡB低速大容量多管离心机、RZ01C旋转蒸发仪。
2 方法
2． 1 不同药用部位提取物的准备 精密称取截叶铁扫帚根、枝、
叶干燥粗粉 5 g，加 20 倍量 50%乙醇回流提取 3 次，2 h /次，合并
提取液，减压回收至无乙醇，3 600 r /min离心 10 min，上清液浓缩
至干，备用。
2． 2 总酚的含量测定［7］
2． 2． 1 标准曲线的制备 精密配制 20． 7μg /ml 没食子酸对照品
水溶液。精密吸取对照品溶液 0． 2，0． 4，0． 6，0． 8，1． 0，1． 2 ml 置
10 ml具塞刻度试管，加蒸馏水至 1． 2 ml，加 50%福林酚溶液 0． 5
ml，摇匀，放置 10 min后，加 7． 5%碳酸钠溶液 2 ml，摇匀，暗处放
置 30 min后，在 775 nm波长处测吸光度值。以吸光度值为纵坐
标、对照品的取样量为横坐标绘制标准曲线:Y = 0． 026 47X +
0． 039 49，r = 0． 999 5，线性良好。
2． 2． 2 样品测定 将各待测样品用蒸馏水配制成叶 0． 18 g /ml
溶液、根 0． 6 g /ml溶液、枝 0． 3 g /ml溶液，分别从中精密吸取 0． 1
ml置于 10 ml具塞刻度试管，按“2． 2． 1”项下的方法进行含量测
定，取 3 次的平均值，计算样品中总酚的量。结果见表 1。
2． 3 总黄酮的含量测定［8］
2． 3． 1 标准曲线的制备 精密配制 126． 9μg /ml 芦丁对照品
70%乙醇溶液。精密吸取对照品溶液 0． 5，1，1． 5，2，2． 5，3 ml，分
别置于 25 ml量瓶中，各加 1%三氯化铝溶液 4 ml，用水定容至刻
度，摇匀，放置 15 min，在 272 nm 波长处，以试剂空白作参比，测
定吸光度。以吸光度为纵坐标，芦丁浓度为横坐标，绘制标准曲
线，得回归方程为 Y = 0． 038 53X － 0． 044 02，r = 0． 999 4，线性良
好。
2． 3． 2 样品测定 将各待测样品用蒸馏水配制成叶 0． 08 g /ml
溶液、根 0． 08 g /ml溶液、枝 0． 08 g /ml 溶液、分别从中精密吸取
叶 0． 1 ml，根和枝 0． 4 ml置于 25 ml容量瓶，按“2． 3． 1”项下的方
法进行含量测定，取 3 次的平均值，计算样品中总黄酮的量。结
果见表 1。
2． 4 清除·DPPH自由基能力的测定 参照 Kumar等［9］的方法。
反应体系略作改进为:比色管中依次加入不同质量浓度受试样品
(5 ～ 160 μg /ml)1 ml 及 50 mg /ml 的 DPPH 甲醇溶液 2 ml，暗处
反应 30 min 后，在 520 nm 处测定吸光度值，空白对照组用蒸馏
水溶液代替样品溶液，设 3 个平行，取平均值。BHT 和维生素 C
做阳性对照。以清除率和样品浓度做标准曲线，求 IC50值。结果
见图 1。
2． 5 还原能力的测定 参照 Sousa 等［10］的方法。反应体系略作
改进为:比色管中依次加入不同质量浓度受试样品(5 ～ 160 μg /
ml)1 ml，(pH6． 6，0． 2 mol /L)的磷酸盐缓冲液 2． 5 ml及 1%铁氰
化钾溶液混合 2． 5 ml，50℃保温 20 min，加入 2． 5 ml 10%三氯乙
酸，混匀，静置 10 min。取 2． 5 ml该液体，加入 0． 5 ml 0． 1% Fe-
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SO4，静置 10 min于 700 nm处测吸光值，空白对照组用蒸馏水溶
液代替样品溶液，设 3 个平行，取平均值。BHT 和维生素 C 做阳
性对照。以吸光值大小表示还原能力大小。结果见图 2。
2． 6 螯合亚铁离子能力的测定 参照 Lee等［11］的方法。反应体
系略作改进为:比色管中依次加入不同质量浓度受试样品(5 ～
160 μg /ml)1 ml，0． 1 mmol硫酸亚铁 1 ml，0． 25 mmol菲咯嗪甲醇
溶液 1 ml，混匀，暗处放置 10 min，在 562 nm 处测吸光值。空白
对照组用蒸馏水溶液代替样品溶液，设 3 个平行，取平均值。
EDTA和槲皮素做阳性对照。结果见图 3。
2． 7 清除·OH 自由基能力的测定 参照 Ningappa 等［12］的方
法。反应体系略作改进为:比色管中依次加入不同质量浓度受试
样品(5 ～ 160 μg /ml)1ml，10 mmol·L －1 FeSO4 － EDTA 混合液
0． 20 ml及 10 mmol·L －1α －脱氧核糖溶液0． 20 ml，并用磷酸缓
冲液(pH = 7． 4，0． 1 mol·L －1)定容到 1． 8 ml，最后加入 10 mmol
·L －1H2O2 0． 20 ml，混匀后于 37℃水浴中恒温保持 1 h;然后再
加入 2． 8%(W/W)三氯乙酸(TCA)溶液 1． 0 ml，1． 0%(W/W)硫
代巴比妥酸(TBA)溶液 1． 0 ml，混匀后于沸水浴中加热 10 min;
冷水冷却后在 532 nm波长处测定吸光值。空白对照组用蒸馏水
溶液代替样品溶液，设 3 个平行，取平均值。维生素 C 做阳性对
照。结果见图 4。
3 结果
3． 1 提取率及总酚和总黄酮的量比较 表 1 为截叶铁扫帚根、
枝、叶提取物的提取率及浸膏中总酚和总黄酮的量比较。由表 1
可知，截叶铁扫帚叶部位提取浸膏得率最高，浸膏中总酚和总黄
酮的含量也最高。枝提取率介于根和叶之间，但是总酚和总黄酮
的含量最低。根的提取率最低，但总酚和总黄酮含量介于叶和枝
之间。上述结果表明，截叶铁扫帚不同药用部位浸膏得率不同，
总酚和总黄酮的含量也各有差异，其中叶部位提取率高，浸膏中
总酚和总黄酮的量也最高。从表中还可以看出，黄酮类化合物是
截叶铁扫帚不同药用部位中最主要的酚类物质，且含量的高低趋
势与总酚相一致。
表 1 根、枝、叶提取率及浸膏中总酚和总黄酮的量比较(珋x ± s) %
提取部位 提取率 总酚量(以没食子酸计) 总黄酮的量(以芦丁计)
根 7． 28 ± 1． 03 20． 41 ± 1． 71 17． 10 ± 1． 97
枝 12． 98 ± 0． 85 15． 60 ± 1． 42 10． 50 ± 1． 31
叶 24． 26 ± 1． 12 21． 00 ± 1． 65 18． 50 ± 1． 77
n =3
3． 2 清除·DPPH自由基能力的测定 ·DPPH在有机溶剂中是
一种稳定的自由基，当自由基清除剂存在时，·DPPH 的孤电子
被配对，颜色变浅，在最大吸收波长处吸光度变小，且颜色变化与
配对电子数成化学计量关系。因此，可用来评价自由基的清除情
况。由图 1 可知，3 个药用部位均有较强的清除·DPPH 自由基
的作用，且随着样品质量浓度的增大而增强，但作用效果比阳性
对照维生素 C弱。当质量浓度在 5 ～ 80 μg /ml时，叶部位提取物
清除·DPPH自由基效果较根和枝部位提取物效果好，当浓度达
到 160 μg /ml时，3 个部位的清除率相当，且接近阳性对照 BHT，
都达到 90%以上。对照各部位总酚及总黄酮的量可知，3 个药用
部位清除·DPPH自由基能力与其总酚及总黄酮的量不呈正相
关，这与文献提示的清除·DPPH自由基能力不仅与总黄酮的量
有关，同时还可能与总黄酮中化合物的结构、组成以及其他可能
存在的较高活性自由基清除剂有关相符合［13］。叶子部位在清除
·DPPH自由基方面比较有优势。
3． 3 还原能力的测定 抗氧化剂的还原力与其抗氧化活性之间
存在联系。抗氧化剂是通过自身的还原作用给出电子而清除自
由基的，还原力越大，抗氧化性越强。由此可根据还原力的大小
来判断其抗氧化活性的大小。从图 2 可以看出，随着样品质量浓
度的增加，还原力不断增强，且浓度与还原力呈正相关，当质量浓
度为 250 μg /ml时，截叶铁扫帚叶、枝、根部位的还原能力分别为
0． 613，0． 49 0，0． 542，而在相同质量浓度下，阳性对照维生素 C
和 BHT可达到 3． 587 和 1． 705。可见 3 个药用部位的还原能力
远低于阳性对照维生素 C 和 BHT。在各受试质量浓度下，各样
品还原能力相近，差别不是很显著。这表明截叶铁扫帚不同药用
部位提取物对还原能力影响不大。
图 1 不同药用部位清除·DPPH自由基能力
图 2 不同药用部位还原能力
3． 4 螯合亚铁离子能力的测定 一些金属离子，如铁离子在脂质
的氧化过程中起到催化作用，它们可通过 Fenton 反应使过氧化
物产生自由基，引起脂质、蛋白质、脱氧核糖和细胞等化合物或组
织氧化损伤。因此，对金属螯合力大小的测定也是评价抗氧化剂
抗氧化性能常用的方法。鳌合能力愈大，被评价的抗氧化剂潜在
的抗氧化性就愈强。截叶铁扫帚根、枝、叶部位均表现出较强的
螯合活性，随质量浓度的递增呈现逐渐增强的趋势，作用比槲皮
素强，但远小于阳性对照 EDTA。根部位的螯合能力明显强于叶
子部位，略强于枝部位，当浓度达到 2． 5 mg /ml时，可达到 70%的
螯合率。由此我们可以推测根部位可能含有较多的易于与亚铁
离子螯合的化合物结构。临床有文献报道截叶铁扫帚根对治疗
Ⅱ型糖尿病有良好的疗效，这可能与其能有效的螯合过渡金属离
子，抑制自由基的过渡产生，减少自由基诱发的红细胞膜过氧化
及抑制·OH自由基形成有关。
图 3 不同药用部位螯合亚铁离子能力
3． 5 清除·OH自由基能力的测定 羟自由基是生物活体内最
活泼的活性氧，对机体生物膜有极强的破坏能力，能杀死红细胞，
造成糖类、氨基酸、核酸和脂类等物质的氧化性损伤，引发细胞坏
死或突变。由于羟自由基极强的氧化性能，对羟自由基的清除能
力是反映药物抗氧化作用的重要指标之一。由图 4 可知，3 个药
用部位均有一定的清除·OH的能力，且随样品质量浓度增大而
逐渐增强。在较小质量浓度范围内(0． 25 ～ 0． 50 mg /ml) ，3 种样
品清除·OH 的能力比阳性对照维生素 C 略强。随着样品浓度
的进一步增大(1． 0 ～ 2． 5 mg /ml) ，阳性药物清除·OH 能力表现
出显著增强的趋势，叶和根部位也呈现较好的增强趋势，作用相
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近，而枝部位增强趋势比较平缓。当叶、根部位浓度达到 2． 5
mg /ml时，可达到 50%以上的清除率。根、枝、叶部位清除·OH
的能力与其总酚及总黄酮的量呈正相关。
图 4 不同药用部位清除·OH自由基能力
4 讨论
截叶铁扫帚根、枝、叶 3 个药用部位的提取物均有较好的清
除·DPPH自由基、清除·OH 自由、螯合 Fe2 +的能力，但对还原
能力影响不大。由实验结果可知，随样品质量浓度的增大，不同
药用部位提取物清除自由基、螯合 Fe2 +的能力都呈现逐渐增强
的趋势。清除·DPPH自由基不仅与提取的总酚、总黄酮的量有
关系，还可能与样品中酚类、黄酮类化合物的结构、组成以及其他
可能存在的较高活性自由基清除剂有关。酚类、黄酮类化合物的
结构则可能对螯合过渡金属离子具有更重要的影响。清除·OH
的能力与其总酚及总黄酮的量呈正相关。实验结果提示我们黄
酮类化合物是酚类化合物中种类最多、占比例最大的一类，黄酮
类化合物是具有较强抗氧化活性的一类物质，但是黄酮类化合物
的种类很多，不同的黄酮类化合物对不同体系的抗氧化作用不
同，作用机制也不同，所以有必要进一步分析药材不同药用部位
的活性成分，明确构效关系，为指导临床的合理用药提供依据。
截叶铁扫帚根、枝、叶 3 个药用部位均有一定的抗氧化作用，
叶部位侧重于通过清除自由基发挥作用，而根部位则侧重通过螯
合金属过渡离子，从而抑制自由基的过渡产生发挥作用。不同的
药用部位通过不同的作用机制发挥抗氧化作用，所以要求我们临
床上要根据病症灵活合理用药。
致谢:本实验在福建省中西医结合老年性疾病重点实验室、
福建中医药大学国家中医药管理局中药生药学三级科研实验室
和福建省卫生厅中药生药学重点研究室中完成。
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收稿日期:2011-07-12; 修订日期:2011-11-06
基金项目:重庆市教委科学技术研究资助项目(No． KJ090311)
作者简介:刘 莎(1977-) ，女(壮族) ，广西武鸣人，现任重庆医科大学中医药学院讲师，硕士学位，主要从事中药及方剂的教学和科研工作．
* 通讯作者简介:蒲晓东(1959-) ，男(汉族) ，重庆人，现任重庆医科大学中医药学院教授，硕士学位，主要从事温病学教学及临床研究工作．
三甲散防治大鼠实验性肝纤维化的抗氧化机制研究
刘 莎，蒲晓东* ，张义兵，曹维国
(重庆医科大学中医药学院，重庆 401331)
摘要:目的 该研究旨在观察三甲散对大鼠实验性肝纤维化的防治作用，探讨三甲散抗氧化的作用机制。方法 实验分为
空白组、模型组、马洛替酯组及三甲散小、中、大剂量组，四氯化碳造模，同时按马洛替酯 0． 1 g·kg －1，三甲散小、中、大组
分别为 0． 45，0． 90，1． 80 g·kg －1的剂量灌胃给药。12 周后，测定各组大鼠的肝脏指数、AST、ALT、Hyp、SOD、MDA、GSH －
Px及 HA、LN、PⅢNP、PⅣP等含量的变化。结果 模型组大鼠转氨酶升高，肝组织 SOD、GSH － Px降低，MDA、NOS升高，
血清 HA、LN、PⅢNP、PⅣP升高，与空白对照组比较，差异非常显著(P ＜ 0． 01) ;肝组织形态学检查显示模型组大鼠大部
分肝小叶结构被破坏、汇管区大量纤维组织增生。三甲散各治疗组大鼠转氨酶降低，肝组织 SOD、GSH － Px升高，MDA、
NOS降低，血清 HA、LN、PⅢNP、PⅣP降低，与模型组比较，差异显著(P ＜ 0． 05)。结论 三甲散抑制大鼠肝纤维化与其抗
氧化的作用机制有关。
关键词:肝纤维化; 抗氧化; 三甲散
DOI标识:doi:10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2012． 01． 075
中图分类号:R284． 2 文献标识码:B 文章编号:1008-0805(2012)01-0168-03
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时珍国医国药 2012 年第 23 卷第 1 期 LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2012 VOL． 23 NO． 1