全 文 ：依赖性，作用的机制与促进睾酮分泌、抑制凋亡和促进血管生成
有一定的关系，但其中具体的分子生物学机制尚有待进一步研
究。
参考文献:
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收稿日期:2016-04-22; 修订日期:2016-09-12
基金项目:第四次中药资源普查项目(财社〔2012〕13 号);江西省卫生厅课题(No． 2013A198) ;江西中医药大学校级课题(No． 2013ZＲ0053)
作者简介:陈世华(1964-)，男(汉族)，江西南昌人，江西中医药大学副教授，学士学位，主要从事中药生化研究工作．
* 通讯作者简介:黄佩蓓(1964-)，女(汉族)，浙江江山人，江西中医药大学教授，硕士学位，主要从事中药生化研究工作．
山香圆总黄酮对 LPS诱导的 ＲAW264． 7 细胞
iNOS，COX － 2，NF － кB表达的影响
陈世华，曾 贤，梁 昊，黄佩蓓* ，曹 岚
(江西中医药大学，江西 南昌 330004)
摘要:目的 观察山香圆总黄酮对 LPS诱导的 ＲAW264． 7 细胞中 iNOS、COX －2 及 NF － кB表达的抑制作用。方法 采用
Griess法检测山香圆总黄酮对 NO生成的影响，通过 western blot分析 iNOS、COX － 2 及 NF － кB 的表达。结果 山香圆总
黄酮能显著抑制 ＲAW264． 7 细胞中 NO的生成以及 iNOS、COX －2 及 NF － кB蛋白的表达，且随着浓度的增加，抑制效果
明显。结论 山香圆总黄酮的抗炎作用是通过下调 NF － кB的活性进而抑制 iNOS、COX －2 的表达来实现的。
关键词:山香圆总黄酮; 一氧化氮; 诱导型一氧化氮合酶; 环氧合酶 － 2; 核因子 － кB
DOI标识:doi:10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2016． 11． 026
中图分类号:Ｒ285． 5 文献标识码:A 文章编号:1008-0805(2016)11-2629-02
The effect of total flavonoids from Turpinia arguta Seem on iNOS and COX －2 expression
in LPS － stimulated ＲAW 264． 7 cells
CHEN Shi-hua，ZENG Xian，LIANG Hao ，HUANG Pei-bei * ，CAO Lan
(Jiangxi University of Traditional Chinese Medicine，Nanchang 330004，China)
Abstract:Objective To explore the inhibitory effect of total flavonoids of Turpinia arguta Seem(TFS)on inducible nitric oxide
synthase(iNOS)，cyclooxygenase(COX)－ 2 ，nuclear factor (NF)－ кB protein expression in lipopolysaccharides(LPS)－ stimu-
lated ＲAW264． 7 cells．Methods the effect of TFS on the product of NO in ＲAW264． 7 cells was measured by the Griess reagent;
and the expression of iNOS ，COX － 2 ，NF － кB protein in ＲAW264． 7 cells were analyzed by Western － blot method．
Ｒesults TFS inhibited the LPS － stimulated NO synthesis in ＲAW 264． 7 cells． The expression of iNOS，COX －2，NF － кB pro-
tein were also decreased by TFS in the ＲAW264． 7 cell，and the inhibitory effect was enhanced with the increasing of TFS concen-
tration． Conclusion The results show that the anti － inflammatory effects of TFS are due to the down － regulation of NF － кB and
the Consequen expressional suppressions of iNOS and COX － 2．
Key words:Total flavonoids of Turpinia arguta Seem; NO; iNOS; COX －2; NF － кB
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LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2016 VOL． 27 NO． 11 时珍国医国药 2016 年第 27 卷第 11 期
山香圆为省沽油科属植物，其制剂山香圆片、山香圆颗粒临
床用于咽喉炎及扁桃体炎的治疗，疗效显著 ［1］。有研究表
明［2 ～ 5］，山香圆总黄酮(total flavonoids of Turpinia arguta Seem，
TFS)具有抗炎作用，但其具体作用机制不明确。本研究通过观
察山香圆总黄酮对 LPS诱导的 ＲAW264． 7 细胞 iNOS、COX －2 及
NF － кB表达的干预作用，探讨其抗炎作用的机制，为进一步开
发利用提供实验依据。
1 材料与仪器
1． 1 药物与试剂 ＲAW264． 7 细胞购自上海细胞研究所，DMEM
高糖培养基(BI公司)，脂多糖(索莱宝北京科技有限公司)，β －
actin兔 IgG单克隆抗体、COX － 2、iNOS 和 NF － kBp65 兔 IgG 单
克隆抗体(美国 CST 公司)，辣根过氧化物酶标记山羊抗兔 IgG
(北京中山公司)。山香圆总黄酮(自提，纯度质量分数为
20%)，胞浆 /核蛋白提取试剂盒(南京凯基生物科技发展有限公
司)，其它所用化学试剂均为分析纯。
1． 2 主要仪器 CO2 培养箱(美国 Thermo 公司)，酶标仪(美国
Thermo公司)，电泳仪(美国 Bio － Ｒad 公司)，凝胶成像仪(Fluor
Chem M)。
2 方法
2． 1 细胞培养 用含质量分数为 10%的小牛血清、1%的青链霉
素混合液的 DMEM高糖培养基，于 37℃、5% CO2 条件下传代培
养 ＲAW264． 7 细胞，至对数生长期备用。
2． 2 NO含量的检测 接种 ＲAW264． 7 细胞，设空白组(不作任
何处理)、模型组(LPS处理组)及浓度分别为 100，200，300μg /mL
的山香圆总黄酮组，地塞米松作为阳性对照组，每组重复设 3 个
平行孔。37℃、5% CO2 条件下过夜后，分别用，100，200，300μg /
mL的山香圆总黄酮预处理 2h，继而加入 LPS(终质量浓度为
0． 1mg·L －1)继续培养 18h，吸取上清，按 Griess法测 NO含量。
2． 3 iNOS、COX － 2 和 NF － κB 蛋白表达水平的检测 细胞同
上处理，采用 Western － blot 法。胞浆蛋白(检测 COX － 2 和 iN-
OS)和核蛋白(检测 NF － kB)按试剂盒方法分别提取，BCA法测
定样品蛋白含量。每组各取 80μg蛋白样品电泳，转膜，封闭液室
温下作用 2h，加入一抗(iNOS、COX －2 及 NF － κBp65 抗体)孵育
过夜，洗涤，再加入二抗反应 2h，再洗涤，凝胶成像系统显色曝
光，分析计算各组细胞蛋白表达水平。
2． 4 统计方法 本实验数据用 珋x ± s表示，采用 SPSS19． 0 统计软
件，行单因素方差分析和显著性检验。
3 结果
3． 1 山香圆总黄酮对 LPS诱导的 ＲAW264． 7 细胞释放 NO的影
响 山香圆总黄酮对 LPS 诱导的 ＲAW264． 7 细胞释放 NO 的抑
制效果，见图 1。由图 1 可见，山香圆总黄酮能显著地抑制由 LPS
诱导的 NO产生，且 NO水平的抑制率随山香圆总黄酮的浓度增
加而增大，与模型组比较均有极显著性差异(P ＜ 0． 01)。
1 －空白组;2 － LPS模型组;3 － LPS +地塞米松;4 － LPS +
TFS300μg /mL;5 － LPS + TFS200μg /mL;6 － LPS + TFS100μg /mL。
与空白组比较，#P ＜ 0． 01;与模型组比较，＊＊P ＜ 0． 01
图 1 山香圆总黄酮对 LPS诱导的 ＲAW264． 7 细胞释放 NO的影响
3． 2 山香圆总黄酮对 LPS诱导的 ＲAW264． 7 细胞 iNOS 表达的
影响 Western blot法检测细胞中 iNOS 蛋白的表达，结果见图 2。
由图 2 可见，LPS模型组 iNOS 蛋白的表达明显高于空白对照组
(P ＜ 0． 01);而 TFS各组则剂量依赖性地抑制由 LPS 所诱导的
iNOS蛋白表达，与 LPS组比较均具有极显著性差异(P ＜ 0． 01)。
1 －空白组;2 － LPS模型组;3 － LPS +地塞米松;4 － LPS +
TFS300μg /mL;5 － LPS + TFS200μg /mL;6 － LPS + TFS100μg /mL。
与空白组比较，#P ＜ 0． 01;与模型组比较，＊＊P ＜ 0． 01
图 2 山香圆总黄酮对 LPS诱导的 ＲAW264． 7
细胞 iNOS蛋白表达的影响
3． 3 山香圆总黄酮对 LPS 诱导的 ＲAW264． 7 细胞 COX － 2 蛋白
表达的影响 Western blot 法检测细胞中 COX － 2 蛋白的表达 结
果见图 3。由图 3可见，LPS模型组 COX －2 蛋白的表达明显高于
空白对照组(P ＜0． 01);而 TFS各组则剂量依赖性地抑制由 LPS
所诱导的 COX －2蛋白的表达，200ug /mL和 300ug /mL剂量的 TFS
处理组与 LPS模型组比较具有极显著性差异(P ＜0． 01)。
1 －空白组;2 － LPS模型组;3 － LPS +地塞米松;
4 － LPS + TFS300μg /mL;5 － LPS + TFS200μg /mL;6 － LPS + TFS100μg /mL。
与空白组比较，#P ＜ 0． 01;与模型组比较，＊＊P ＜ 0． 01
图 3 山香圆总黄酮对 LPS诱导的 ＲAW264． 7
细胞 COX －2 蛋白表达的影响
3． 4 山香圆总黄酮对 LPS诱导的 ＲAW264． 7 细胞核内 NF － κB
蛋白表达的影响 Western blot 法检测细胞核内 NF － κB 蛋白的
表达，结果见图 4。由图 4 可见，LPS模型组 NF － κB蛋白的表达
明显高于空白对照组(P ＜ 0． 01);而 TFS各组则剂量依赖性地抑
制由 LPS所诱导的 NF － κB蛋白的表达，与 LPS模型组比较均具
有极显著性差异(P ＜ 0． 01)。说明 TFS可以抑制 LPS诱导的 NF
－ κB的核转位，抑制 NF － κB的活化。
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时珍国医国药 2016 年第 27 卷第 11 期 LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2016 VOL． 27 NO． 11
1 －空白组;2 － LPS模型组;3 － LPS +地塞米松;4 － LPS +
TFS300μg /mL;5 － LPS + TFS200μg /mL;6 － LPS + TFS100μg /mL。
与空白组比较，#P ＜ 0． 01;与模型组比较，＊＊P ＜ 0． 01
图 4 山香圆总黄酮对 LPS诱导的 ＲAW264． 7 细胞
NF － κB蛋白表达的影响
4 讨论
iNOS及 COX －2 是介导炎症的多种分子机制中的两个重要
分子机制。正常状态下 iNOS 和 COX － 2 都不表达或极少量表
达，炎症反应中则被诱导生成，继而促进机体产生炎症介质 NO
和 PEG2，导致炎症反应的发生
［6］。LPS 诱导的 iNOS 和 COX － 2
的表达受 NF － κB调控。NF － κB受刺激因子诱导激活由细胞质
转移至核内，诱导多种基因如 iNOS 以及 COX － 2 的表达［7］。本
研究结果表明，在实验药物浓度(100 ～ 300 μg·ml －1)范围内，
山香圆总黄酮能显著地抑制由脂多糖诱导的 NO 的分泌、NF －
κB的核移位以及 iNOS、COX － 2 蛋白的表达，并呈剂量依赖关
系。由此说明，山香圆总黄酮的抗炎作用是通过下调 NF － κB的
活性进而抑制 iNOS、COX － 2 蛋白的表达减少 NO的分泌来实现
的。这可能是山香圆总黄酮发挥抗炎效应的作用机制之一。
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收稿日期:2016-04-29; 修订日期:2016-09-21
基金项目:广东省中医药局立项资助项目(No． 20141282);
广东省中山市科技局重点资助项目(No． 2014A1FC004)
作者简介:李乐愚(1969 －)，男(回族)，四川都江堰人，广州中医药大学
教授，主任医师，硕士研究生导师，硕士学位，主要从事中西医结合糖尿病
及代谢性疾病的防治工作．
复方番石榴制剂对超重肥胖 2 型糖尿病患者
胰岛素抵抗影响的临床研究
李乐愚 ，成金燕，林泽宏，肖天梅，徐瑞颜
(广州中医药大学附属中山医院，广东 中山 528400)
摘要:目的 研究复方番石榴制剂对超重肥胖 2 型糖尿病患者胰岛素抵抗的影响。方法 选取广州中医药大学附属中山
医院诊治的超重肥胖 2 型糖尿病患者 120 例，将入组患者随机分为 2 组，治疗组予复方番石榴制剂联合二甲双胍肠溶片，
对照组予二甲双胍肠溶片，两组均用药 12 周，于治疗前、治疗 12 周后分别记录其空腹血糖(FBG)、餐后 2h血糖(P2BG)、
糖化血红蛋白(HbA1c)、胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL － C)、高密度脂蛋白(HDL － C)、脂联素
(APN)、C －反应蛋白(CＲP)、空腹胰岛素(FINS)等指标，根据公式计算患者胰岛素分泌指数(HOMA － β)，并对以上指
标进行统计学分析。结果 治疗组治疗后 FBG、P2BG、HbA1c、TC、TG、LDL － C、CＲP 较治疗前明显下降(P ＜ 0． 05);两组
比较，治疗 12 周后治疗组患者的 FBG、P2BG、HbA1c、TC、TG、LDL － C与对照组比较有显著性差异(P ＜ 0． 05)，但 CＲP与
对照组比较无显著性差异(P ＞ 0． 05) ;治疗后，两组的 FINS、HOMA － β、APN 均有一定程度的上升，治疗组治疗前后比
较，差异有统计学意义(P ＜ 0． 05)，两组治疗后比较，差异亦有统计学意义(P ＜ 0． 05)。结论 复方番石榴制剂联合二甲
双胍具有较好的降糖、降脂作用，且能改善胰岛素抵抗。其对脂联素水平的调控可能是纠正胰岛素抵抗的重要机制。
关键词:复方番石榴制剂; 超重; 肥胖; 2 型糖尿病; 胰岛素抵抗
DOI标识:doi:10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2016． 11． 027
中图分类号:Ｒ259;Ｒ285． 6 文献标识码:A 文章编号:1008-0805(2016)11-2631-03
随着社会经济的发展和人类生活方式的转变，2 型糖尿病
(T2DM)的患病率逐年升高，国内的流行病学调查显示，我国糖
尿病患病率达到 9． 7%，总人数接近 1 亿［1］。而我国 2 型糖尿病
患者中，体重指数 (BMI)大于 24、小于 27． 9 的超重患者和 BMI
大于等于 28 的肥胖患者比例分别达到 41． 1%和 24． 3%，肥胖、
超重是糖尿病患者出现心血管疾病、糖尿病肾病、高脂血症、高血
压等的独立危险因素［2］。因此，对超重肥胖 T2DM的防治尤为严
峻。
胰岛素抵抗(IＲ)是 2 型糖尿病发病的重要因素和显著特
征，超重肥胖者常伴有脂代谢紊乱，是造成 IＲ 的重要因素［3］，前
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LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2016 VOL． 27 NO． 11 时珍国医国药 2016 年第 27 卷第 11 期