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八角枫不同药用部位的高效液相指纹图谱测定



全 文 :书 [收稿日期] 2014-08-15;2015-01-30修回
 [作者简介] 王其勇(1970-),男,副主任药师,从事药物分析。E-maiL:qiyoo_king@sina.com
[文章编号]1001-3601(2015)02-0086-0133-02
八角枫不同药用部位的高效液相指纹图谱测定
王其勇1,许亚玲1,钟宏波2
(1.贵州省食品药品检验所,贵州 贵阳550004;2.贵州省产品质量监督检验院,贵州 贵阳550004)
  [摘 要]为更好地开发和利用八角枫药材,对贵州织金地产八角枫药材不同药用部位茎、根茎、主根、
须根及支根进行 HPLC指纹图谱研究。采用高效液相色谱法测定了同一产地不同药用部位共10批八角枫
药材,使用计算机辅助相似度评价软件进行数据处理。结果表明:八角枫药材 HPLC-DAD色谱指纹图谱标
示出6个共有峰。相似度计算发现,10批八角枫不同部位,其化学组成相似,但峰面积相对比例具有差异。
[关键词]八角枫;茎;根茎;主根;须根;支根;高效液相色谱法;指纹图谱
[中图分类号]S567 [文献标识码]A
HPLC Fingerprint of Diferent Medicinal Parts of Alangium platanifolium
WANG Qiyong1,XU Yaling1,ZHONG Hongbo2
(1.Guizhou Institute for Food and Drug Control,Guiyang,Guizhou550004;2.Guizhou Product Quality
Supervision and Inspection Institute,Guiyang,Guizhou550004,China)
  Abstract:To preferably use and develop A.platanifolium,the HPLC fingerprints were conducted on
different medicinal parts-stem,rhizome,taproot,fibrous root and rootlet of A.platanifoliumproduced in
Zhijin County of Guizhou.Samples of different medicinal parts of totaly 10batches of A.platanifolium
from the same producing area were analyzed by HPLC,and a computer aided program for similarity
assessments was used for data analysis.Results:the HPLC-DAD fingerprints chromatogram of
A.platanifoliumwere established and six characteristic common peaks were selected.Through similarity
assessment,it was found that although the chemical compositions of different parts from 10batches of
A.platanifoliumare similar,the peak area relative contents are varying.
Key words:Alangium platanifolium;stem;rhizome;taproot;fibrous root;rootlet;HPLC;finger-
print chromatogram
  八角枫为《贵州省中药材及民族药材质量标准》
2003年版收载药材,为八角枫科植物八角枫Alan-
gium chinense(Lour.)Harms及瓜木Alangium
platani f olium (Sieb.Et Zucc.)Harms的干燥
细须根(白龙须)或干燥支根(白金条)[1]。分布于
贵州各地,多为野生,四季均可采挖,为少数民族用
药。具有祛风通络,散淤镇痛、麻醉及松弛肌肉等作
用[2-4],用于治疗风湿疼痛、麻木瘫痪、心力衰竭、劳
损腰痛、跌打损伤等。其须根及支根含生物碱、酸
类、氨基酸、有机酸、树脂等,而其中的生物碱为八角
枫碱,是松弛肌肉的主要活性成分,也是其毒性的主
要来源[4-5]。近年来,八角枫药材在贵州省中成药中
的应用逐渐增多,由于该药材主要以野生为主,传统
以须根入药,因此随着使用量的增加,其野生资源也
越来越少,而单用其他部分入药又不达功效,造成有
效部位使用率较低,形成资源浪费。为更加有效地
利用八角枫药材,试验采用 HPLC-DAD法分析八
角枫药材不同药用部位的指纹图谱,并对指纹图谱
进行了相似度分析,以期为八角枫药材的合理开发
利用提供基础数据及研究方向。
1 材料与方法
1.1 药材、试剂与试药
1.1.1 药材 10批药材均来源于企业,产于贵州
省毕节地区织金县,海拔约为1 500m。由贵阳中
医学院陈德媛研究员鉴定(样品信息见表1)。
1.1.2 试验仪器 岛津高效液相色谱仪,Labso-
lusion色谱处理系统(配有四元梯度泵、在线脱气装
置、自动进样器、柱温箱、DAD检测器),METTLE
AE 240电子天平(上海梅特勒-托利多仪器有限公司)。
色谱柱:Thermo C18(250mm×4.6mm,5μm)。
1.1.3 试药 八角枫碱对照品,批号:10110058,
含量94.0%,购自阿法埃莎天津化学有限公司。甲
醇(色谱醇,Merck公司),水为超纯水,氨水、三氯甲
烷、醋酸、磷酸、庚烷磺酸钠、磷酸二氢钾试剂试药均
为分析纯。
1.2 八角枫HPLC指纹图谱的测定
1.2.1 样品溶液的制备 取样品粉末(过四号
筛),约0.5g,精密称定,精密量取5%醋酸的30%
甲醇25mL,称定重量,回流30min,放冷,用5%醋
 贵州农业科学 2015,43(2):133~136
 Guizhou Agricultural Sciences
表1  10批八角枫药材样品
Table 1 Ten batches of A.platanifolium
编号
No.
批号
Lot No.
药材部位
Medicinal parts
采收期
Harvesting time
编号
No.
批号
Lot No.
药材部位
Medicinal parts
采收期
Harvesting time
1  20110126 根茎 12-1月 6  20120313 茎 2-3月
2  20110818 根茎 7-8月 7  20120426 茎 3-4月
3  20111014 主根 9-10月 8  20120502 茎 4-5月
4  20111123 主根 10-11月 9  20120601 支根 5-6月
5  20111228 主根 11-12月 10  20100607 须根 5-6月
酸的30%甲醇补足减失的重量,滤过,取续滤液,即
得。
1.2.2 参照物溶液的制备 精密称取L(-)-八角
枫碱对照品10.97mg,置于100mL容量瓶中,加甲
醇溶解并稀释至刻度,摇匀,精密量取5mL置于
50mL量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,即得。
1.2.3 色谱条件[7-10] 色谱柱为 Thermo C18
(250mm×4.6mm,5μm)柱,流动相为甲醇(A)-
缓冲液(0.2g庚烷黄酸钠、2.0g磷酸二氢钾、
0.3mL磷酸加水到1 000mL B),梯度洗脱:0~
15min,A 5% ~ 18%;15 ~ 20min,A 18% ~
26%;20~25min,A 26% ~36%;25~35min,A
36% ~46%;35~40min,A 46% ~54%;40~
50 min,A 54% ~ 70%。柱 温 30℃,流 速 为
1.000mL/min,检测波长为259nm;理论板数按
L(-)-八角枫碱峰计算应不低于6 000。
1.2.4 八角枫生物碱的含量测定 分别精密吸取
对照品溶液与供试品溶液各10μL,注入液相色谱
仪,记录色谱图,按外标法以峰面积进行计算。
1.3 方法学考察
1.3.1 精密度及稳定性 取同一供试样品,于
0h、3h、5h、7h、9h、12h进样6次,记录指纹图
谱,以S峰为参照峰。
1.3.2 重复性 取批号为20120601(支根)的样品
6份,按样品溶液的制备方法进行供试品溶液的制
备和测定,考察测定方法的重现性,以S峰为参照
峰。
2 结果与分析
2.1 检测方法的精密度、稳定性及重复性
精明度及稳定性试验表明,试验采用方法的各
主要色谱峰相对保留时间和相对峰面积比值无明显
变化,RSD小于3%,表明仪器精密度良好,样品溶
液在12h内稳定。重复性试验表明,各主要色谱峰
相对保留时间和相对峰面积比值无明显变化,RSD
小于3%,符合指纹图谱要求[11-12],重复性良好。
2.2 八角枫的生物碱含量
八角枫药用部位主要含有生物碱、酸类、氨基
酸、有机酸、树脂等,而其中的生物碱以八角枫碱为
主,是松弛肌肉的主要活性成分。采用 HPLC法,
参照上述色谱条件,按外标法以峰面积计算,须根、
支根、主根、根茎、茎L(-)-八角枫碱的含量分别为
0.95%、0.13%、0.032%、0.034%和0.018%。
2.3 指纹图谱及技术参数
通过对10批不同部位八角枫药材进行测定,并
将其导入“国家药典委员会颁布的指纹图谱2.0软
件”进行数据处理,建立了八角枫药材的共有模式色
谱图,并确定了6个共有色谱峰。将八角枫碱峰定
为参照峰(S峰,图1)。计算图2各色谱峰与参照峰
的保留时间及相对峰面积值,相对保留时间RSD
小于3%,相对峰面积值差异较大,共有峰的峰面积
之和大于90%。




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保留时间/min
Retention time
-0.02
17.78
35.58
53.38
71.18
0 7.54 15.07 22.61 30.15 37.68 45.22 52.76
保留时间/min
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0 7.54 15.07 22.61 30.15 37.68 45.22 52.76




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-0.80
11.16
23.12
35.12
47.03
A
B
S
S
1
2
3
4 6
 注:A为10批样品共有峰标识,B为L(-)-八角枫碱。
 Note:A,marking of common peaks of ten batch of producing;B,L
(-)-Anabasine.
   图1  10批八角枫药材指纹图谱共有峰标识及
参照物色谱图
Fig.1 HPLC chromatogram of fingerprint of marking of
common peaks of ten batches A.platanifoliumand
the reference substance
·431·
                                        贵 州 农 业 科 学
                                   Guizhou Agricultural Sciences




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36.24
73.33
110.42
147.52
0 8.7 17.4 26.1 34.8 43.49 52.19 60.89
保留时间/min
Retention time
S1
S2
S3
S4
S5
S6
S7
S8
S9
S10
图2  10批八角枫的指纹图谱
Fig.2 Fingerprint chromatograms of ten batch of A.platanifolium
表2  10批八角枫药材各部位的相似度
Table 2 Similarity of ten batches of Radix Alagi
编号
No.
药材部位
Medicinal parts
相似度
Similarity
编号
No.
药材部位
Medicinal parts
相似度
Similarity
1 根茎 0.936  6 茎 0.912
2 根茎 0.947  7 茎 0.927
3 主根 0.943  8 茎 0.841
4 主根 0.938  9 支根 0.992
5 主根 0.927  10 须根 0.714
2.4 各部位相似度比较
从表2可知,除了须根,其余各部位均有较好的
相似度。由于须根八角枫碱含量远远大于其他各部
位,且峰信息量也较多,因此须根相似度对于其他部
位有所差别;同时茎的峰信息量和其丰度都比其他
各部位小,其相似度与主根、根茎也有差别,说明八
角枫药材各部位在具有一定的相似度的同时也存在
部分差异。
2.5 不同药用部位八角枫的HPLC图谱的分析比较
比较和分析同一地区产八角枫的须根、支根、主
根、根茎、茎的 HPLC图谱发现(图3),须根中S峰
丰度最高,支根次之,丰度强弱顺序为须根>支根>
主根>根茎>茎,须根S峰比3号峰丰度高,说明八
角枫含量高,其余药用部位均是3号峰比S峰丰度
高,茎S峰的丰度最低。
2.6 同一药用部位八角枫的 HPLC图谱
由图3可知,3批主根的指纹图谱基本一致,2
批根茎的指纹图谱也比较一致,3批茎的指纹也相
差不大,但峰信息量较少。相对根茎、茎而言,须根、
支根中成分八角枫碱含量较高。茎中基本不含八角
枫碱,这也与标准中收载的药用位为干燥细须根(白
龙须)或干燥支根(白金条)是吻合的。




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61.06
91.71
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29.05
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58.07
87.11
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10.48
21.30
32.12
42.95
0 14.49 28.99 43.48
7.25 21.74 36.23 50.73
保留时间/min
Retention time
0 14.49 28.99 43.48
7.25 21.74 36.23 50.73
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7.25 21.74 36.23 50.73
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Retention time
0 14.49 28.99 43.48
7.25 21.74 36.23 50.73
保留时间/min
Retention time
A B
C D E
S
S
S S S
注:A为须根,B为支根,C为主根,D为根茎,E为茎。
Note:A,fibrous root;B,rootlet;C,taproot;D,rhizome;E,stem.
图3 八角枫不同药用部位的HPLC图谱
Fig.3 HPLC chromatograms of different medical parts of A.platanifolium
·531·
 王其勇 等 八角枫不同药用部位的高效液相指纹图谱测定
 WANG Qiyong et al HPLC Fingerprint of Different Medicinal Parts of Alangium platanifolium
3 结论与讨论
研究发现,八角枫药材茎、根茎、主根、须根及支
根的指纹图谱有6个共有峰,支根和须根峰信息量
较丰富,主根和根茎次之,而茎最少,各部位八角枫
碱的含量高低依次为须根>支根>根茎>主根>
茎。1)在同一地区产八角枫药材须根、支根、主根、
根茎、茎的指纹图谱中,各药用部位的相似度在
0.714~0.992,具有较高的相似性,说明各药用部位
成分较一致。中药所含成分较为复杂,不同的药用
部位差异也明显,该药材虽然指纹图谱的相似度较
一致,但八角枫碱的含量却相差很大,目前八角枫药
材主要是须根入药,其他部位少有使用。随着用量
的增加,须根资源越来越少,因此试验为八角枫药材
的全面开发和利用提供科学依据。2)八角枫药材
所含生物碱以八角枫碱为主。各部位八角枫碱的含
量高低依次为须根>支根>根茎>主根>茎。但是
须根是毒性最大的部位,过量使用会引起中毒。因
此,降低须根的使用量,配合使用主根和根茎等其他
药用部位,在保证疗效的前提下,以降低使用该药物
导致中毒的产生,同时使八角枫药材各部位得到合
理利用。
八角枫药材在贵州以野生为主,四季均可采挖,
不同产区及采收期收集的药材其质量会有不同,由
于本试验收集到的药材均来源于企业,对样品的收
集有所限制,因此所得到的结果未能全面反映该药
材的质量情况,下一步会对生长环境、采收季节、产
地加工等影响药材质量因素进行固定考察,以对药
材进行深入研究。
[参 考 文 献]
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上海科学技术出版社,2006:32-34.
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(责任编辑:孙小岚
櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁

(上接第132页)
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(责任编辑:杨 林)
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