全 文 ：[成分分析]
莱菔子中芥子碱的含量测定
刘丽芳1 , 　王宇新1 , 　张新勇2 , 　刘雪芳
(1.中国药科大学 ,南京 210038;2.江苏省药物研究所 ,南京 210009)
关键词:莱菔子;芥子碱;含量测定
摘要:目的:采用 RP-HPLC 法测定了不同产地莱菔子药材中芥子碱的含量。方法:色谱柱:Alltima Phenyl 5u , 250×4.6
mm;流动相:乙腈-0.08mol/ L磷酸二氢钾溶液(15∶85);检测波长:326nm;流速:1mL/ min。 柱温:室温。结果:不同产地
的莱菔子中芥子碱的含量差异较大。结论:该法具有很好的重现性和稳定性
中图分类号:R927.2　　　　　文献标识码:A　　　　　文章编号:1001-1528(2002)01-052-03
Determination of Sinapine in Semen Raphani
LIU Li-fang1 , 　WANG Yu-xin1 , 　ZHANG Xin-yong2 , 　LIU Xue-fang1
(1.China Pharmeceut ical Universi ty , Nnaj ing , 210038 , China;2 .Insti tu te of Meter ia Medica of Jiangsu Province , Nanjing 210009 , Ch ina)
Key words:Semen Raphani;sinapine;HPLC
Abstract　Objective:To determine the sinapine in Semen Raphani(Laifuzi)f rom different places by measns of
RP-HPLC.Method:The column empolyed w as Alltima Phenyl Collumn(250×4.6mm , 5μm).The mobile
phase w as acetonitrile-0.08mol/LKH2PO4(15∶85).The flow rate w as 1.0mL/min and detection was effected
at 326nm results.Conclusion:The results show the method is accurate , rapid and reproducible.We found it
has marked discrepancy in the content of Semen Raphani(Lai Fuzi)from dif ferent places.
收稿日期:2001-07-12
作者简介:刘丽芳(1969～ ),女 ,博士 ,主要从事中药分析及动物药研究工作。
　　莱菔子为十字花科植物萝卜 Raphanus sat ious
L 的种子。具有下气 、化痰 、消食的作用[ 1] 。莱菔子
中主含莱菔素(Raphanin),芥子碱(Sinapine)、芥酸
(erucic acid)、亚油酸 、植物甾醇等 。其中 ,芥子碱是
其降压作用的活性成分之一[ 2] 。实验表明 ,莱菔子
中芥子碱多以芥子碱硫氰酸盐(Sinapine thio-
cyanate)的形式存在 。因此 ,测定芥子碱的含量对于
控制药材质量具有较重要的意义。
1　仪器与药品
仪器:日本岛津 LC-6A 高效液相色谱仪;惠普
HP3395A记录仪;对照品的来源及纯度:对照品自
莱菔子中提取 ,经13CNMR 、1HNMR 、元素分析等鉴
定为芥子碱硫氰酸盐 ,纯度大于 98%(HPLC)。
样品:莱菔子药材购于南京 、上海 、杭州 、天津 、
江西等地 , 经作者鉴定为十字花科植物萝卜
Raphanus sat ious L .的种子 。
药品:磷酸二氢钾 、甲醇均为分析纯 ,乙腈为色
谱纯(进口)。
2　色谱条件与系统适用性试验
用 Alltima pheny l柱 ,乙腈-0.08mol/ L 磷酸二
氢钾溶液(15∶85)为流动相。检测波长 326nm 。理
论塔板数按芥子碱峰计算应不低于 3000。
3　标准曲线的绘制
精密称取芥子碱硫氰酸盐对照品(五氧化二磷
干燥器中减压干燥 48h)2.10mg ,用 0.08mol/ L 磷
酸二氢钾溶液定容至 10mL ,精密吸取 2.5 , 5 , 6 ,
7.5 ,10μL ,注入液相色谱仪 ,用上述色谱条件测定。
以进样量(μg)为横坐标 ,测得的对照品吸收度积分
值为纵坐标绘制标准曲线 ,并计算得过原点的线性
回归方程:Y=17990977.25X+101828.3566 , r =
0.9996 。表明在 0.525μg ～ 2.10μg 之间有良好的线
性关系 。
4　精密度试验
精密吸取等体积的对照品溶液分别注入液相色
谱仪 ,同上法测定 。结果见表 1。
5　稳定性试验
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第 24 卷　第 1 期
中 成 药
Chinese T raditional Patent Medicine
Jan., 2002
Vol.24　No.1
表 1　 精密度试验
编号 积分值
1 28145856
2 29259728
3 28381824
4 29650353
5 28404944
6 29568032
7 29685056
8 29925488
9 29214688
10 29150048
平均值 29128601.7
RSD(%) 2.1
　　取同体积的对照品溶液 ,分别在 0 , 1 ,2 ,3 , 4 , 5 ,
6h后测定 ,结果见表 2。
表 2　 稳定性试验
时间(h) 积分值
0 29159728
1 28381824
2 29650353
3 29568032
4 28294496
5 29214688
6 29150048
RSD(%) 1.8
　　表明其积分值在 6h内基本稳定。
6　重复性实验
取同一批药材 5份 ,按上述方法测定 。结果见
表 3。
表 3　 重复性试验
编号 取样量(g) 含量(%)
1 0.9895 0.23
2 1.0534 0.23
3 0.999 0.22
4 1.0003 0.22
5 1.0006 0.23
平均值(%) 0.23
RSD(%) 2.4
7　回收率实验
表 4　 回收率实验
编号 加入量(mg)
样品含量
(mg)
实测量
(mg)
回收率
(%)
1 1.84 2.19 4.02 99.5
2 2.20 2.30 4.45 97.7
3 2.66 2.21 4.82 98.1
平均值(%) 98.4
RSD(%) 0.96
　　精密称取样品(含量为 0.44%)0.5g 加入精密
称定的芥子碱硫氰酸盐标准品 1.8mg , 2.2mg ,2.6
mg ,置 100mL 三角瓶中 ,同法制备供试品溶液 ,进
样 20μL ,同法测定计算 ,结果见表 4。
8　样品测定
精密称取供试药材 1g ,置 100m l三角瓶中 ,加
甲醇50ml超声提取20min后过滤 ,并用少量甲醇洗
涤滤器 ,洗液并入滤液中 ,药渣再用法提取 2次 ,合
并 3次提取液 ,蒸干甲醇 ,残渣用 0.08mol/L 磷酸
二氢钾溶液溶解并定容至 50mL 量瓶中 ,摇匀 ,用微
孔滤膜(0.45μm)滤过 ,取续滤液 ,进样 20μL ,依法
测定 ,图谱见图 1。
1　对照品 2　样品
图 1　莱菔子药材的 HPLC图谱
(a.芥子碱硫氰酸盐 , 1.对照品 , 2.样品)
　　依上述方法对 5批不同产地的莱菔子进行了测
定 ,结果见表 5 。
表 5　 莱菔子药材中芥子碱的含量
样品来源 平均含量(%) RSD(%)(n=5)
南京商品 0.36 2.7
上海商品 0.17 3.3
天津商品 0.31 2.6
杭州商品 0.20 2.8
江西商品 0.23 2.6
　　芥子碱硫氰酸盐的结构解析
　　分子式:C16H24NO5SCN
分子量:368
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Chinese T raditional Patent Medicine
Jan., 2002
Vol.24　No.1
m.p:181.5 ～ 182.5°C 。
元素分析:C:55.25%,H:6.5%,N:7.63%,S:
8.95%;推出分子式为 C16H 24NO5SCN 。
1
HNMR(D2O):δppm 3.27(9H , s)(文献值:3.27),
3.86(6H , s)(-OCH3)(文献值:3.87), 3.82(2H , br ,
s)(-CH2-N+)(文献值:3.82), 4.64(2H , br , s)(-O-
CH2)(文献值:4.68), 6.80(2H , s)(Ar-H)(文献值:
6.92),6.24(1H , d , J=16Hz)(文献值:6.45), 7.42
(1H , d , J=16Hz)(文献值:7.66),为苯环与酯羰基
间形成共轭的反式烯的两个质子共振峰 。
13CNMR(D2O):δppm 56.54(C-1 , 2 , 3)(文献
值:54.70), 57.11(C-15 , C-16)(文献值:57.00),
58.88(C-5)(文献值:58.90), 67.41(C-4)(文献值:
66.28),149.50(C-8)(文献值:148.06), 116.31(C-
7)(文献值:114.92), 128.31(C-12)(文献值:123.
07 ,139.72(C-9)(文献值:140.01), 150.35(C-11 ,C-
13)(文献值:149.47),108.79(C-10 ,C-14)(文献值:
107.36), 170.75(C-6)(文献值:167.54)。
纯度检查:
HPLC法:取样品适量 ,加流动相配制成 1mg/
mL 的溶液 , 进样 20μL , 依法测定 , 记录时间至
60min。
含量:99.5%(HPLC)
8　讨论
芥子碱为季铵类生物碱 ,易溶于水和甲醇 、乙
醇 。我们比较了不同提取方法和提取时间对测定结
果的影响 ,结果显示 ,药材经超声提取 20min ,提取3
次后 ,可将待测成分提取完全。
采用 HPLC 法测定莱菔子药材中芥子碱的含
量具有快速 、精确的特点。结果表明 ,不同产地的药
材芥子碱的含量差异较大 ,为控制药材质量提供了
新的依据。
参考文献:
[ 1] 　徐国钧主编.中国药材学[M ] .下册 , 1229-1231.
[ 2] 　王维兰等.莱菔子降压活性成分的研究[ J] .中草药 , 18(3), 5 ～
7(1987).
RP-HPLC分离制备银杏酚酸类单体成分
倪澜荪1 , 　林雁飞1 , 　张　鉴2
(1.湖北出入境检验检疫局 武汉 430022;2.中国科学院等离子体研究所生物工程中心 合肥 230031)
收稿日期:2001-06-08
作者简介:倪澜荪(1962～ ),男 ,工程师。研究方向:残留分析 , T el:(027)85792860　E-mail:wmwnls@public.w h.hb.cn
关键词:银杏酸;制备;反相高效液相色谱法
摘要:目的:研究银杏酸α1单体的制备技术。方法:以乙醇为提取溶剂 , 获得的乙醇浸膏经硅胶吸附能除去大部分极性较
大的杂质 , RP-HPLC 分离制备银杏酸α1单体 。结果:银杏酸α1 的提取率达 84%以上 , 纯度可达 98%。结论:该方法简便
易行 ,大大降低了工作量。
中图分类号:R927.2　　　　　文献标识码:A　　　　　文章编号:1001-1528(2002)01-0054-03
Separation and Preparation of Ginkgolic Acid α1 by RP-HPLC
N I Lan-sun1 , 　LIN Yan-fei1 , 　ZHANG Jian2
(1 .Hubei Entry-E xi t Inspection and Quarantine Bu rea u , Wuhan 430022;2 .Biology Engineering Center , Inst itute of Plasma , Chinese Acade-
my of S cience , Hefei 230031 , China)
Key words:ginkgolic acid;preparation;RP-HPLC
Abstract:Objective:To develope a method for the separation and preparation ginkgolic acid α1.Methods:
Ginkgolic acids were ex tracted by alcohol , and adsorbed by silica gel to remove most of the polar impurities.It
w as preparated wi th RP-HPLC.Results:The ex t raction ratio of g inkgolic acidα1 by this ex traction process was
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第 24 卷　第 1 期
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