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作 者 ：崔彩云;晏国洪;姜山;Organ-单位: 贵州师范大学生命科学学院;

期 刊 ：北方园艺 2016年 05期 页码：113-118

关键词：小立碗藓C3 H基因；基因敲除；载体构建；退火温度；

摘 要 ：以小立碗藓作为试材,将总长为1 981bp的小立碗藓C3H基因分为上游片段(1 000bp),下游片段(981bp),并以此设计引物,得到上游臂(C3H1,735bp)、下游臂(C3H2,700bp)。在C3H1引物设计时引入XhoI、EcoRV酶切位点到两端,C3H2设计时引入NdeI、BamHI酶切位点到两端。以小立碗藓总DNA为模板,通过PCR扩增得到C3H1和C3H2片段。将C3H1和C3H2插入到pTN182载体中,获得敲除载体(C3H1-pTN182-C3H2质粒),通过PCR获得C3H1-nptⅡ?C3H2目的片段,并且采用单因素方法研究引物浓度与退火温度对PCR产物浓度及特异性...

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