全 文 ：KT对白花草木樨不同外植体愈伤组织培养的影响
毛雅妮1 , 2 ,张德罡1 ,孙　娟2 ,盛亦兵3 ,杨国锋2
(1.甘肃农业大学 草业学院 ,甘肃兰州　730070;2.青岛农业大学 ,山东 青岛　266109;
3.山东省农业可持续发展研究所 ,山东 济南　250110)
　　摘要:以改良 HS 为基本培养基 ,研究了白花草木樨不同外植体和 K T(激动素)浓度对愈伤组织诱
导的影响。结果表明:以无菌苗子叶 、下胚轴和幼根为外植体 ,下胚轴出愈率为 100.0%,为诱导愈伤组
织的最佳外植体;子叶和下胚轴出愈率随 KT 浓度增大呈抑制作用 ,在1.0 mg/L 2 ,4-D+0.1 mg/L KT
时出愈率分别为 98.00%和 100.00%,为最佳激素浓度配比;幼根出愈率随 K T 浓度增大先促进后抑
制 ,1.0mg/L 2 ,4-D+0.3 mg/L KT 时出愈率为 99.33%,为最佳激素浓度配比。
关键词:白花草木樨;外植体;KT ;愈伤组织
　　中图分类号:S 541.035;Q 813.1　　文献标识码:A　　文章编号:1009-5500(2009)05-0033-03
　　草木樨(Meli lotus suaveolens)俗名野苜蓿 ,豆科 ,
属一年生或二年生草本植物[ 1] ,其耐旱 、耐寒 、耐贫瘠
性强[ 1] ,耐盐碱性较强 ,适宜的土壤 pH 值 7 ～ 9 ,对土
壤要求不严格 ,适应性广 ,既可保持水土 ,又能培肥 、改
良土壤[ 2] 。随着我国西部退耕还林还草战略的实施 ,
抗旱 、耐盐碱 、耐瘠薄的牧草品种越来越成为紧缺的资
源 ,利用组织培养技术进行草木樨育种日益迫切 。但
是 ,国内外学者对草木樨组织培养的研究却较少 。为
此 ,试验研究了不同 K T 浓度对白花草木樨不同外植
体愈伤组织培养的差异性 ,以期为草木樨组织培养及
转基因育种提供依据 。
1　材料和方法
1.1　供试材料
白花草木樨(Meli lotus albus),由山东省农业科学
院农业可持续发展研究所提供 。
　　收稿日期:2009-09-22
　　基金项目:国家十一五科技支撑项目“牧草倍性育种技术
研究”和山东省农业良种工程牧草项目“优质高
产牧草和饲料作物新品种选育”(200612-01)
资助
　　作者简介:毛雅妮(1984-), 女 ,甘肃庆阳人 , 在读硕士生 , 主
要从事草业与生物技术。
杨国锋为通讯作者。
1.2 　无菌苗获得
选取饱满的白花草木樨种子 , 在室温下浸泡 20
min ,滤纸吸干 , 70%～ 75%酒精灭菌 10 s ,0.1%升汞
浸泡 11 min ,无菌水冲洗 5次 ,接种至 MS 培养基上 。
1.3　外植体准备
选取 6日龄白花草木樨子叶 、下胚轴和幼根 ,子叶
切成 2 ～ 3 mm2 ,下胚轴和幼根切成 3 mm小段备用。
1.4　愈伤组织诱导
将准备好的外植体接种在改良 HS 培养基(HS大
量 、微量 、铁盐和 MS 有机成分)上 ,蔗糖 3.0%,琼脂
0.7%,pH 5.8 ,附加水解酪蛋白 250.0 mg/L ,激素分
别设 2 ,4-D 1.0 mg/L 和 KT 0.1 、0.2 、0.3 、0.4 、0.5 、
1.0 mg/L 互相组合 ,每组重复 3次。
2 　结果与分析
培养 3周后统计出愈率 ,褐化率和晶体化率 。
　　出愈率=诱导出的愈伤组织外植体数/接种外植
体总数×100%,褐化率=褐化的愈伤组织外植体数/
接种外植体总数×100%,晶体化率=出现白色晶体的
愈伤组织外植体数/接种外植体总数×100%),结果见
表 1。
2.1 　不同外植体愈伤组织诱导的影响
选择子叶 ,下胚轴和幼根为外植体 ,用以研究外植
体类型对愈伤组织诱导的影响 。结果表明 , ①～ ③培
33草原与草坪　　2009年　　第 5期　　总第 136期DOI :10.13817/j.cnki.cyycp.2009.05.006
养基上 ,3种外植体培养 5 ～ 7 d愈伤组织发生 ,在④～
⑥培养基上 ,子叶培养 10 ～ 12 d 愈伤组织发生 ,下胚
轴和幼根培养 6 ～ 8 d发生;生长速度在①～ ③培养基
上以胚轴最快 ,幼根最慢 ,但④～ ⑥以幼根最快 ,子叶
最慢;愈伤组织诱导率下胚轴最高可达 100.00%,幼
根最高为 99.33%,子叶为 98.00%;下胚轴的褐化率
最低 ,为 1.33%;晶体化率下胚轴和幼根最低均为
0.00%。因此可得出 ,下胚轴的出愈率最高 ,褐化率和
晶体化(愈伤表面呈现的像雪花的白色晶体状物质)率
最低 ,为最佳诱导愈伤组织的外植体。
2.2 　不同 KT浓度对愈伤组织诱导的影响
本试验以不同外植体 ,在同一培养基上添加不同
KT 浓度 ,研究 KT 浓度对不同外植体愈伤组织诱导
的影响。结果发现 , KT 浓度不同 , 愈伤组织出愈时
间 、愈伤形态 、出愈率 、褐化率和晶体化率均不同。
2.2.1　不同 KT 浓度对愈伤组织出愈时间和形态的
影响　出愈时间随 K T 浓度的增加而推迟 ,最早发生
在5 d后 ,最迟在 10 d后。愈伤形态有 3种 , Ⅰ型为浅
黄色或浅黄绿色 ,松软致密 ,较湿润;Ⅱ型为浅黄色 ,稀
软致密 ,很湿润;Ⅲ型为浅黄色或浅黄绿色 ,愈伤硬脆 ,
干燥 。 Ⅰ型和 Ⅱ型愈伤组织出现在①～ ③培养基上 ,
Ⅲ型出现在④～ ⑥培养基上 。
2.2.2　不同 KT 浓度对愈伤组织诱导率的影响　子
叶和下胚轴出愈率随 K T 浓度增加而降低 ,最高出愈
率都是①培养基 ,分别为 98.00%和 100.00%;而幼根
则呈现先升高后降低的趋势 , ③培养基最高 ,出愈率为
99.33%。
2.2.3　不同 KT 浓度对愈伤组织褐化率和晶体化率
的影响　子叶和下胚轴的褐化率随 KT 浓度增加而升
高 ,都是①培养基最低 ,分别为 10.00%和 1.33%;而
幼根则呈现先降低后升高的趋势 , ③培养基最低 ,为
7.86%。子叶晶体化率随 KT 浓度增加而升高 , ①最
低 ,为 14.00%;下胚轴和幼根①～ ③没有显著区别 ,
均为 0.00%, ④～ ⑥随 KT 浓度增加而降低。
　　根据以上分析 ,可得出子叶和下胚轴的①培养基
出愈率最高 ,褐化率和晶体化率最低 ,最佳 KT 浓度为
0.1 mg/L ;幼根的③培养基出愈率最高 ,褐化率和晶
体化率最低 ,最佳 K T 浓度为 0.3 mg/L。
3 　讨论
3.1　不同外植体愈伤组织诱导的差异性
在苜蓿组织培养中 ,研究表明几乎所有器官和组织
都能作为外植体[ 3] ,但种类 、品种 、单株 、甚至同种单株
不同来源的外植体 ,其组织培养都会存在明显差异[ 4] 。
但是 ,对草木樨外植体的差异性国内外研究几乎没有 ,
因此本试验研究了子叶 、下胚轴和幼根愈伤组织诱导的
差异性 ,结果表明 ,它们的生长速度 、出愈率 、褐化率和
晶体化率均有显著区别。然而 ,本试验没有进一步研究
不同外植体对分化的影响 。
3.2　KT浓度对愈伤组织诱导的差异性
在草木樨愈伤组织诱导中使用的细胞分裂素主要
有 KT 和 BA P 等 ,而不同 K T 浓度 、不同 BAP 浓度和
不同细胞分裂素之间对愈伤组织的诱导的差异性国内
外研究很少 。因此本试验对不同 KT 浓度对愈伤组织
诱导的影响进行了研究 ,结果表明 , K T 浓度不同愈伤
组织的形态 、出愈率 、褐化率和晶体化率均有显著区别 。
目前 ,不同细胞分裂素对愈伤组织分化的影响国内外研
究的也很少 。
随着组织培养技术在牧草研究领域的不断发展与
应用 ,苜蓿组织培养技术已经发展的很完善。但是 ,对
于草木樨组织培养的研究还属于起步阶段 ,应借鉴其他
牧草研究中的生物技术手段 ,加强研究力度 ,深入研究
程度 ,为培育抗旱 、耐盐碱 、耐瘠薄牧草奠定基础。
(下转 37页)
34 Grassland and Turf　　(Bimonthly)　　2009　　No.5　　(Sum 　No.136)
Effects of biological ferment bed and
warm pen on the pig fattening
DUAN Qi-bin , JI Yong-lian ,ZHAO Dong-qing ,ZHANG Fan-hua ,
FENG Qiang ,WU Li-gang
(Foreign Capi tal P roject Management O f f ice of Gansu Province , Lanzhou 730000 , China)
　　Abstract:Under biological ferment bed condition , 40 heal thy pigs (Duroc × Landrace × Gan hybrid ,
60kg)were divided into 2 g roups to study the fat tening ef ficiency .Resul ts show n that the average daily gains of
pig s in treatment and control g roups w ere 686 g and 610 g respect ively , and the body w eight in t reatment g roup
w as increased by 12.46%(P<0.05), and the average feed consumption w ere 115.62 kg and 122.27 kg respec-
tively.5.75% of feeds we re reduced in t reatment g roup.The average incomes w ere 234.15 Yuan and 144.58
Yuan respectively , and it w as increased by 89.57 Yuan in t reatment group.
　　Key words:biolo gy;ferment;fat tening
(上接 34页)
参考文献:
[ 1] 　何冬梅.白花草木樨的栽培技术[ J] .当代畜牧养殖业 ,
2004(5):34-35.
[ 2] 　 周旺才 , 陈寅初 , 孙伟 , 等.白花草木樨的栽培技术[ J] .
新疆农垦科技 , 2004(3):15-17.
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牧业工程高等专科学校学报 , 2001 , 21(2):105-108.
[ 4] 　 刘晓静 ,植物生长延缓剂对草坪植物生长和生理特性的
影响[ J] .草原与草坪 , 2003(4):12-15.
Effects of KT on culture tissue of different
explants of Melilotus suaveolens
MAO Ya-ni1 ,ZHANG De-gang1 ,SUN Juan2 ,SHENG Yi-bing3 , YANG Guo-feng2
(1.College o f P ratacultural S cience , Gansu Agricultural University , Lanzhou 730070 , China;
2.Qingdao Agricultural Universi ty , Qingdao 266109 , China;
3.Shandong I nst itute o f Agricultural S ustainable Development , J inan 250100 , China)
　　Abstract:The modif ied HS w as used as a basal medium to study the ef fects of different explants of Meli lo-
tus suaveolens , including asept ic seedling of coty ledon , hypocotyl and radicle , and KT(kine tin)concentrat ions
on callus induction.The results showed that the hypocotyl w as the best explant for inducing callus and the cal-
lus rate of w as 100.0%.The callus induction rates of co ty ledon and hypoco ty l we re inhibited along wi th the in-
crease of K T concentration , and under the condi tion of 1.0mg/L 2 ,4-D+0.1mg/L KT , thei r callus rates we re
98.00% and 100.00%, respectively.As for radicle , it s callus induction w as increased along w ith the increase of
KT concentration and then reduced.A nd under the condit ion of 1.0mg/L 2 , 4-D+0.3 mg/ L K T , the callus rate
w as 99.33%.
　　Key words:Meli lotus suaveolens;explant;K T ;callus
37草原与草坪　　2009年　　第 5期　　总第 136期