全 文 ：［收稿日期］ 20130312(015)
［基金项目］ 国家自然科学基金项目(81373367)
［第一作者］ 曾颜，硕士研究生，从事中药质量标准研究，Tel:
13898174024，E-mail:zengyan66@ yahoo． com． cn
［通讯作者］ * 陈晓辉，教授，博士生导师，从事中药药效物质
基础及药物质量控制分析方法的研究，Tel:024-
23986259，E-mail:cxh_syphu@ yahoo． com． cn
HPLC同时测定京大戟生品和炮制品中
3 种三萜类成分含量
曾颜1，侯朋艺2，马冰洁2，周增慧2，毕开顺2，陈晓辉2*
( 1. 沈阳药科大学中药学院，沈阳 110016; 2. 沈阳药科大学药学院，沈阳 110016)
［摘要］ 目的:建立同时测定京大戟生品和炮制品中甘遂甾醇、大戟二烯醇和 24-亚甲基环阿尔廷醇含量的方法。方法:
采用 HPLC，Agilent XDB C8 色谱柱(4. 6 mm × 150 mm，5 μm) ，流动相乙腈-水(90∶ 10) ，流速 1. 0 mL·min
－1，柱温 35 ℃，检测波
长 205 nm。结果:甘遂甾醇、大戟二烯醇、24-亚甲基环阿尔廷醇分别在 0. 506 ～ 5. 06 μg (r = 1. 000 0) ，1. 052 ～ 10. 52 μg
(r = 0. 999 9)和 1. 124 ～ 11. 24 μg(r = 0. 999 8)线性关系良好。平均加样回收率分别为 99. 7%(ＲSD 0. 9%) ，99. 4%(ＲSD
1. 0%) ，99. 4%(ＲSD 1. 3%)。结论:方法简便、快速、灵敏度高、专属性好，为京大戟药材及其炮制品质量控制提供依据。
［关键词］ 京大戟;炮制品;三萜;高效液相色谱法
［中图分类号］ Ｒ284. 1 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2013)22-0141-04
［doi］ 10． 11653 /syfj2013220141
HPLC Simultaneous Determination of Three Triterpenes in
Euphorbiae Pekinensis Ｒadix and its Processed Products
ZENG Yan1，HOU Peng-yi2，MA Bing-jie2，ZHOU Zeng-hui2，BI Kai-shun2，CHEN Xiao-hui2*
(1. School of Traditional Chinese Materia Medica，Shenyang Pharmaceutical University，Shenyang 110016，China;
2. School of Pharmacy，Shenyang Pharmaceutical University，Shenyang 110016，China)
［Abstract］ Objective:To establish a method for the determination of tirucallol，euphol and 24-methylene
cycloartanol in Euphorbiae Pekinensis Ｒadix and its processed products． Method:An HPLC method had been
developed for detecting． The separation was performed on an Agilent XDB C8 column (4. 6 mm ×150 mm，5 μm)
at 35 ℃ with acetonitrile-H2O (90∶ 10)as the mobile phase． The flow rate was 1. 0 mL·min
－1，and the detection
wavelength was set at 205 nm． Ｒesult:The linear response range was 0. 506-5. 06 μg (r = 1. 000 0)for tirucallol，
1. 05-10. 5 μg (r = 0. 999 9)for euphol and 1. 12-11. 2 μg (r = 0. 999 8)for 24-methylene cycloartanol． The
average recoveries of these components were 99. 7% (ＲSD 0. 9%) ，99. 4% (ＲSD 1. 0%)and 99. 4% (ＲSD
1. 3%) respectively． Conclusion:The method is simple，accurate and reproducible for quality control of
Euphorbiae Pekinensis Ｒadix and its processed products．
［Key words］ Euphorbiae Pekinensis Ｒadix;processed products;triterpenes;HPLC
京大戟为大戟科大戟属植物大戟的干燥根，味 苦，性寒，有毒，具有泻水逐饮、消肿散结的功效［1］，
利尿降压、抗炎抗痛［2-3］。京大戟的主要药理成分
是三萜类化合物［4］，其中甘遂甾醇具有局部抗炎作
用［5］;其同分异构体大戟二烯醇有降压［6］、抗肿
瘤［7］和镇痛作用;24-亚甲基环阿尔廷醇有体外对抗
恶性疟原虫和抗炎作用［8］。《中国药典》2010 年版
增补版中仅对京大戟中大戟二烯醇的含量有限度要
求［9］，不能全面控制药材的质量。
本文以京大戟中分离出的 3 种主要三萜类成分
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Vol． 19，No． 22
Nov．，2013
作为指标性成分，建立了高效液相色谱法同时测定
3 种三萜的含量，以期为京大戟生品及炮制品制定
合理的质量标准提供依据。
1 材料
岛津 LC-10T 高效液相色谱仪(SPD-10A 型紫
外检测器，LC-10AD 型高效液相输液泵，CLASS-VP
工作站) ，AB135-S 型 (1 /10 万)天平 (瑞士
METTLEＲ TOLEDO公司) ，BP 210S型电子天平(德
国 Sartorius 公司) ，甲醇(色谱纯，山东禹王实业有
限公司)、乙酸乙酯(色谱纯，山东禹王实业有限公
司)、乙腈(色谱纯，J＆K SCIENTIFIC LTD．)、纯净水
(杭州娃哈哈集团有限公司)。
甘遂甾醇、大戟二烯醇、24-亚甲基环阿尔廷醇
对照品均为实验室自制(经核磁和质谱确定结构，
采用 HPLC 峰面积归一化法测定其纯度质量分数
均 ＞ 98%)。
京大戟药材购自于河北安国药材市场，并经沈
阳药科大学路金才教授鉴定为大戟科京大戟
Euphorbia pekinensis Ｒupr．的干燥根。所有批次炮制
品均由生品按 2010 年版《中国药典》醋煮法规定，
进行规范炮制。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件与系统适用性试验 Agilent XDB C8
色谱柱(4. 6 mm × 150 mm，5 μm) ，流动相乙腈-水
(90∶ 10) ，流速 1. 0 mL·min －1，波长 205 nm，柱温
35 ℃，进样量 20 μL。在上述色谱条件下，各色谱峰
与相邻色谱峰的分离度均 ＞ 1. 5，理论塔板数按大戟
二烯醇计算不低于 5 000，拖尾因子符合要求，HPLC
图见图 1。
2. 2 溶液的制备
2. 2. 1 混合对照品溶液的制备 分别取甘遂甾醇、
大戟二烯醇和 24-亚甲基环阿尔廷醇对照品适量，
精密称定，用甲醇溶解，配制成每 1 mL 含甘遂甾醇
253 μg、大戟二烯醇 526 μg 和 24-亚甲基环阿尔廷
醇 562 μg的混合对照品溶液。
2. 2. 2 供试品溶液的制备 取京大戟粉末(过 40
目筛)约 1 g，精密称定，置 250 mL 具塞锥形瓶中，
精密加入乙酸乙酯 40 mL，称定质量，超声(功率
250 W，频率 50 kHz)提取 30 min，放冷，精密称定，
用乙酸乙酯补足失去的质量，摇匀，滤过，精密量取
续滤液 5 mL，蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至 5 mL
量瓶中，定容至刻度，用 0. 22 μm 滤膜过滤，取续滤
液作为供试品溶液。
2. 3 方法学确证
1. 甘遂甾醇;2. 大戟二烯醇;3. 24-亚甲基环阿尔廷醇
A． 对照品;B． 京大戟;C． 炮制品
图 1 对照品和样品 HPLC
2. 3. 1 线性关系考察 精密量取混合对照品溶液
0. 5，1，2，3，4 mL，分别置于 5 mL 量瓶中，加甲醇稀
释至刻度，摇匀，作为系列对照品溶液，按 2. 1 项下
色谱条件测定，以对照品峰面积(Y)为纵坐标，对照
品质量浓度(X，mg·L －1)为横坐标，以最小二乘法求
得回归方程(n = 6)和相关系数，Y甘遂甾醇 = 2. 145 ×
104X + 8. 956 × 103(r = 1. 000 0) ，线性范围 0. 506 ～
5. 06 μg;Y大戟二烯醇 = 1. 934 × 10
4X + 6. 459 × 104
(r = 0. 999 9) ，线 性 范 围 1. 05 ～ 10. 5 μg;
Y24-亚甲基环阿尔廷醇 = 6. 029 × 10
3X － 8. 890 × 102(r =
0. 999 8) ，线性范围 1. 12 ～ 11. 2 μg。
2. 3. 2 精密度试验 取混合对照品溶液，按 2. 1 项
下色谱条件，重复进样 6 次，测定峰面积。甘遂甾
醇、大戟二烯醇和 24-亚甲基环阿尔廷醇峰面积的
ＲSD分别为 1. 9%，1. 7%，2. 6%，符合方法学验证
要求，表明仪器的精密度良好。
2. 3. 3 重复性试验 取京大戟药材(云南 1)6 份，
每份约 1. 0 g，精密称定，按 2. 2. 2 项下制成供试品
溶液，按 2. 1 项下色谱条件进行测定。结果测得甘
遂甾醇、大戟二烯醇和 24-亚甲基环阿尔廷醇的平
均质量分数分别为 4. 16，8. 13，3. 75 mg·g －1，ＲSD
分别为 2. 5%，2. 3%，3. 0%，符合方法学验证要求，
表明方法的重复性良好。
2. 3. 4 稳定性试验 取上述供试品溶液，在室温下
放置，按 2. 1 项下色谱条件，分别在 0，2，4，8，12，
24 h进样，测定峰面积。甘遂甾醇、大戟二烯醇和
24-亚甲基环阿尔廷醇在不同时间点峰面积的 ＲSD
分别为 2. 5%，2. 3%，2. 7%，符合方法学验证要求，
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表明供试品溶液在室温条件下 24 h内稳定。
2. 3. 5 回收率试验 取已知含量的京大戟药材
(云南 1)共 6 份，每份约 1 g，精密称定，分别加入对
照品粉末，按 2. 2. 2 项方法进行处理，按 2. 1 项下色
谱条件进行分析。测定甘遂甾醇、大戟二烯醇和
24-亚甲基环阿尔廷醇平均加样回收率分别为
99. 7%，99. 4%，99. 4%，ＲSD 分别为 0. 9%，1. 0%，
1. 3%，符合方法学验证要求，表明该方法准确度良
好，测定结果见表 1。
2. 3. 6 样品测定 取所收集各产地京大戟药材粉
末及炮制品药材粉末，按 2. 2. 2 项下制成供试品溶
液，在上述色谱条件下测定，平均含量见表 2。
表 1 京大戟中 3 种成分的加样回收率测定
成分 称样量 / g 样品含量 /mg 加入量 /mg 测得量 /mg 回收率 /% 平均回收率 /% ＲSD /%
甘遂甾醇 1. 000 6 4. 163 0 4. 162 5 8. 304 5 99. 50 99. 7 0. 9
1. 000 8 4. 163 0 4. 162 5 8. 359 7 100. 8
1. 000 4 4. 162 7 4. 162 5 8. 278 8 98. 89
1. 000 5 4. 162 7 4. 162 5 8. 291 3 99. 19
1. 000 2 4. 162 4 4. 162 5 8. 357 2 100. 8
1. 000 3 4. 162 5 4. 162 5 8. 272 1 98. 73
大戟二烯醇 1. 000 6 8. 134 0 8. 133 5 16. 257 1 99. 87 99. 4 1. 0
1. 000 8 8. 134 1 8. 133 5 16. 362 7 101. 2
1. 000 4 8. 133 6 8. 133 5 16. 165 8 98. 75
1. 000 5 8. 133 6 8. 133 5 16. 234 8 99. 60
1. 000 2 8. 133 0 8. 133 5 16. 131 5 98. 35
1. 000 3 8. 133 0 8. 133 5 16. 174 3 98. 87
24-亚甲基环阿尔廷醇 1. 000 6 3. 752 3 3. 752 2 7. 571 3 101. 8 99. 4 1. 3
1. 000 8 3. 752 3 3. 752 2 7. 498 2 99. 83
1. 000 4 3. 752 2 3. 752 2 7. 459 9 98. 81
1. 000 5 3. 752 2 3. 752 2 7. 474 2 99. 20
1. 000 2 3. 751 9 3. 752 2 7. 451 4 98. 60
1. 000 3 3. 752 2 3. 752 2 7. 431 6 98. 07
表 2 京大戟生品、炮制品中 3 种成分含量测定(n = 3) %
来源
生品 醋制品
甘遂甾醇 大戟二烯醇 24-亚甲基环阿尔廷醇 甘遂甾醇 大戟二烯醇 24-亚甲基环阿尔廷醇
河北 1 0. 600 6 1. 116 0. 462 4 0. 483 8 1. 049 0. 398 2
河北 2 0. 658 0 1. 190 0. 402 0 0. 558 6 1. 059 0. 331 1
江苏 1 0. 545 6 1. 107 0. 412 9 0. 440 0 0. 995 0 0. 337 6
江苏 2 0. 510 2 1. 051 0. 393 4 0. 426 8 0. 870 4 0. 297 3
陕西 1 0. 331 3 0. 710 9 0. 590 2 0. 251 6 0. 608 7 0. 466 0
陕西 2 0. 386 6 0. 776 0 0. 579 8 0. 308 6 0. 681 9 0. 435 9
云南 1 0. 416 2 0. 813 3 0. 375 1 0. 340 7 0. 679 2 0. 273 7
云南 2 0. 378 2 0. 750 8 0. 361 7 0. 314 4 0. 630 2 0. 270 2
3 讨论
3. 1 流动相的选择 考察了甲醇-水、乙腈-水两种
种流动相系统，使用乙腈-水(90∶ 10)为流动相时待
测的 3 种成分的色谱峰峰型良好，分离效果好。
3. 2 提取方法和溶剂的考察 比较了超声提取和
加热回流提取，2 种方法对待测成分提取效率相差
不大，故选择操作简单的超声提取。提取溶剂考察
了甲醇、95%乙醇、乙酸乙酯和二氯甲烷，使用乙酸
乙酯提取，提取效率高，杂峰干扰少，所以选择乙酸
乙酯为提取溶剂。考察了提取溶剂倍量和提取时
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曾颜，等:HPLC同时测定京大戟生品和炮制品中 3 种三萜类成分含量
檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶
间，用 40 倍量提取 0. 5 h效率高。
3. 3 结果分析 不同产地的生品和炮制品中，大戟
二烯醇和甘遂甾醇的含量比值约为 2 ∶ 1，炮制前后
二者变化趋势一致，其中，炮制前后大戟二烯醇的含
量均符合药典标准(不少于 0. 6%)。历版药典中，
以醋制来降低京大戟毒性，缓和其泻下作用。在本
研究中，醋京大戟中 3 种三萜成分略有降低，经过统
计学分析，与生品未有显著性差异(P ＞ 0. 05)。所
以若要应用抗炎、降压、抗肿瘤等功效，可以以炮制
品代替生品使用。
［参考文献］
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［4］ 曹小迎． 京大戟三萜成分及生物合成途径中关键酶
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acanthothamnos ［J］． Biochem Syst， Ecol， 2012，
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［9］ 国家药典委员会． 中华人民共和国药典． 第一增补
本［S］． 北京:中国医药科技出版社，2010:106.
［责任编辑 顾雪竹］
藤茶的 HPLC指纹图谱及化学模式识别研究
苏素娇1，李娜1，陈亮1，林培玲2，丁春花3，陈诗强1，梁一池1*
( 1. 福建中医药大学药学院，福州 350122;
2. 漳州卫生职业学院，福建 漳州 363000; 3. 西岸生物科技有限公司，福建 宁德 355300)
［摘要］ 目的:建立藤茶药材 HPLC指纹图谱，并进行主成分聚类分析，为其质量控制提供依据。方法:采用 UltimateXB-
C18色谱柱(4. 6 mm × 250 mm，5 μm) ;流动相乙腈-0. 5%甲酸溶液梯度洗脱，检测波长 365 nm;柱温 40 ℃;应用 SPSS软件对数
据进行统计学分析。结果:建立了藤茶药材 HPLC指纹图谱共有模式，确定了 11 个共有峰，并指认了 2 个主要共有峰。通过
主成分聚类分析，18 个藤茶不同无性系种质可分为 3 类。结论:该方法快速，可较全面的反映藤茶药材中化学成分的信息，为
评价藤茶药材提供了科学实验依据。
［关键词］ 藤茶;高效液相色谱指纹图谱;主成分分析;聚类分析
［中图分类号］ Ｒ284. 1 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2013)22-0144-04
［doi］ 10． 11653 /syfj2013220144
［收稿日期］ 20130313(004)
［基金项目］ 福建省科技厅社发处重大项目(2011Y4005)
［第一作者］ 苏素娇，在读硕士，从事质量控制与品质评价研究，Tel:15806024425，E-mail:583071742@ qq． com
［通讯作者］ * 梁一池，博士生导师，教授，从事中药材品质评价与质量标准研究，Tel:13799399596，E-mail:fafulyc@ 126． com
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