全 文 ：＊基金项目:国家科技支撑计划项目(2007BAI48B08-1)“民族医药发展关键技术示范研究”
修回日期:2011-09-10
不同炮制方法对了哥王中总黄酮含量的影响＊
王建科 1 ,李　玮 1 ,郭建民 1 ,高言明 1 , 张丽艳 1 , 杨　蓉 2
(1.贵阳中医学院 ,贵州贵阳　550002;2.贵阳中医学院药学系 06级本科生 , 贵州贵阳　550002)
　　摘要:目的:测定了哥王不同炮制品中总黄酮的含量 , 探讨不同炮制方法对了哥王中总黄酮含量的影响。方法:采用
紫外 -可见分光光度法对了哥王生品 、人工汗液炮制品 、人体汗液炮制品中总黄酮的含量进行测定。结果:了哥王不同炮
制品中总黄酮含量有一定差异 ,其中人工汗液 3-2制品中的总黄酮含量最高 ,为 1.45%;人工汗液 1-2制品中总黄酮含
量最低 , 为 0.76%;回收率平均值为 98.86%, RSD值为 2.50%。结论:不同炮制方法对了哥王中总黄酮的含量有一定
影响。
关键词:分光光度法;了哥王;炮制品;总黄酮
Doi:10.3969/j.issn.1002-1108.2011.01.07
　　中图分类号:R927.2　文献标识码:A　文章编号:1002-1108(2011)01-0017-02
　　了哥王为瑞香科荛花属植物南岭荛花(Wikstroemiain-
dicaC.A.Mey)的干燥根或根皮。具有消炎解毒 ,散瘀逐水
的功效。用于治疗支气管炎 、肺炎 、腮腺炎 、淋巴结炎 、风
湿痛 、晚期血吸虫病腹水 、疮疖痈疽等症 [ 1] 。了哥王含有
小麦黄素 、羟基芫花素 、酸性树脂 、挥发油 、黄酮类等成
分 [ 3] , 黄酮类成分具有抗菌 、抗炎 、镇痛等作用 [ 2] , 黄酮类
成分是了哥王的有效部位之一 , 因此 , 本实验以了哥王中
的总黄酮为指标成分进行测定。了哥王为苗族有毒药材 ,
民间有多种炮制方法 , 其中的 “身背汗湿法”(又称 “汗渍
法”)是具有民族特色的加工方法 , 它是将药材捆扎于人体
的腰部 , 利用人体产生的汗液和人体的温度加工药材 , 达
到炮制的目的。本文在保持民族特色的基础上 , 模仿人体
条件 , 以人工汗液为辅料 , 以了哥王中的总黄酮为指标成
分进行对比研究 , 为了哥王的规范化生产及临床应用提供
科学依据。
1　仪器与试药
1.1　仪器　紫外 -可见分光光度计(GBCCintra20);高速
万能粉碎机(FW-100);分析天平(AUW200D);超声波清
洗器(HS10260D)。
1.2　材料　芦丁标准品(批号:100080-200707,中国药品
生物制品检定所);无水乙醇 、亚硝酸钠 、硝酸铝 、氢氧化钠
均为分析纯;水为蒸馏水;了哥王购自广西灵山县 ,经我院
生药教研室周汉华教授鉴定为瑞香科荛花属植物南岭荛
花(WikstroemiaindicaC.A.Mey)的根及根皮。
1.3　炮制品的制备
1.3.1　了哥王　取原药材 , 除去杂质 ,洗净 , 润透 ,切薄片 ,
干燥 , 筛去碎屑。
1.3.2　人工汗液制了哥王　取净了哥王片 , 每天喷入定量
的人工汗液 , 拌匀 ,待吸尽后 , 置 36.5℃ ～ 37℃的烘箱内烘
30d, 取出 ,放凉。辅料用量见表 1。
1.3.3　人体汗液制了哥王　取净了哥王片 , 装入特制的腰
带内 , 捆绑于人的腰部 ,经过 30天 ,取出 , 放凉。
1.3.4　不加辅料制了哥王　取净了哥王片 , 置 36.5℃ ～
37℃的烘箱内烘 30d,取出 , 放凉。
　表 1 人工汗液制了哥王辅料用量
炮制品名称 炮制方法 每天辅料用量
人工汗液品 1-1 炮制方法同 1.3.2 了哥王每 100kg,用人工汗液 0.1kg
人工汗液品 1-2 同上 了哥王每 100kg,用人工汗液 0.5kg
人工汗液品 1-3 同上 了哥王每 100kg,用人工汗液 1.0kg
人工汗液品 2-1 同上 了哥王每 100kg,用人工汗液 0.1kg
人工汗液品 2-2 同上 了哥王每 100kg,用人工汗液 0.5kg
人工汗液品 2-3 同上 了哥王每 100kg,用人工汗液 1.0kg
人工汗液品 3-1 同上 了哥王每 100kg,用人工汗液 0.1kg
人工汗液品 3-2 同上 了哥王每 100kg,用人工汗液 0.5kg
人工汗液品 3-3 同上 了哥王每 100kg,用人工汗液 1.0kg
　　以上样品粉碎 ,过 40目筛 ,备用。
·17·
第 33卷　第 1期
2011年 1月　 　　　　　　　　　　　
贵阳中医学院学报
JGCTCM 　　　　　　　　　　　
No.1　Vol.33
January　2011
2　方法与结果
2.1　对照品溶液的制备　精密称取芦丁对照品 25.0 mg,
置 100 mL容量瓶中 , 加入 80%乙醇溶解 , 定容至刻度 , 摇
匀 , 即得对照品溶液(0.25 mg· mL-1)。
2.2　供试品溶液的制备　精密称取了哥王粉末各约 1.2
g, 置 100 mL平底烧瓶中 , 加入 80%乙醇 18 mL,回流提取
90 min, 过滤 ,滤液转移至 50 mL容量瓶中 , 加 80%乙醇定
容至刻度 , 摇匀后即得。
2.3　标准曲线绘制　精密吸取芦丁对照品溶液 2.0、3.0、
4.0、 5.0、6.0 mL置于 25 mL比色管中 ,加入 80%乙醇补足
至 6.0 mL。先加入 5%NaNO
2
1.1 mL, 摇匀 ,放置 6 min;再
加 10%Al(NO3)3 1.7 mL, 摇匀 ,放置 6 min;最后加入 4%
NaOH8.8mL,用 80%乙醇定容至刻度 ,摇匀 , 放置 15min。
以不加芦丁对照品溶液作为空白 , 在分光光度计上于 510
nm处测定吸光度 , 以浓度 C为横坐标 , 吸光度 X为纵坐
标 , 作线性回归 ,得回归方程为 C=-3.99×10-3 +8.714
×10 -2X, r=0.9994。结果表明芦丁对照品在 20 ～ 60 μg
范围内线性关系良好 。结果(见图 1)。
图 1　标准曲线图
2.4　精密度试验　精密吸取同一批供试品溶液 , 按 “标准
曲线绘制”项下方法显色 ,连续测定 6次 , 吸光度的平均值
为 0.3936, RSD为 0.87%, 结果表明 ,仪器精密度良好。
2.5　稳定性试验　取同一批供试品溶液 , 按 “标准曲线绘
制”项下方法显色 ,分别于 10, 20, 30, 40, 50, 60 min进行测
定 , 吸光度的平均值为 0.3923, RSD为 0.97%, 结果表明 ,
供试品溶液在 1h内稳定性良好。
2.6　重复性试验　精密称取同一批了哥王样品 7份 , 按
“供试品溶液的制备”项下方法制备供试品溶液 , 按 “标准
曲线绘制”项下方法显色 , 测定吸光度 , 并分别求出各含
量 , 总黄酮的平均含量为 1.07% , RSD为 1.33%, 表明本
法重复性良好。
2.7　加样回收试验　精密称取已知含量的了哥王生品粉
末 6份 ,每份约 0.6 g,分别精密加入芦丁对照品溶液适量 ,
按 “供试品溶液的制备”项下方法制备 , 按 “标准曲线绘制 ”
项下方法显色 , 并进行测定 ,计算回收率。结果(见表 2)。
　表 2 加样回收试验结果(n=6)
称样量
(g)
样品含量
(mg)
加入量
(mg)
测得量
(mg)
回收率
(%)
平均值
(%)
RSD
(%)
0.601 6.42 6.41 12.92 101.33%
0.601 6.42 6.41 12.63 96.75%
0.601 6.42 6.41 12.64 96.86%
98.86% 2.50%
0.601 6.42 6.41 12.60 96.29%
0.606 6.48 6.41 12.92 100.44%
0.605 6.47 6.41 12.97 101.46%
2.8　样品含量测定　精密称取了哥王粉末各约 1.2g, 按
“供试品溶液的制备”项下制备供试品溶液 , 精密吸取 3ml
供试品溶液 , 按 “标准曲线制备”方法显色 , 于 510nm波长
处测定吸光度 , 结果(见表 3)。
　表 3 样品含量测定结果(n=3)
序号 炮制品名称 平均含量(%)RSD(%)
1 人工汗液 1-1 0.99 1.68
2 人工汗液 1-2 0.76 1.29
3 人工汗液 1-3 1.07 2.02
4 人工汗液 2-1 0.96 1.42
5 人工汗液 2-2 1.00 0.45
6 人工汗液 2-3 1.09 0.42
7 人工汗液 3-1 0.87 0.29
8 人工汗液 3-2 1.45 1.48
9 人工汗液 3-3 1.05 1.86
10 人体汗液制品 0.80 1.30
11 不加辅料制品 1.32 2.65
12 　生　　　品 1.07 2.67
3　结果与讨论
3.1　实验表明　了哥王不同炮制品中总黄酮含量不同 ,
含量由高到低的排列顺序为:人工汗液制品 3-2 >不加辅
料制品 >人工汗液制品 2-3>人工汗液制品 1-3、生品 >
人工汗液制品 3-3>人工汗液制品 2-2>人工汗液制品
1-1>人工汗液制品 2-1 >人工汗液制品 3-1>人体汗
液制品 >人工汗液制品 1-2, 其中人工汗液制品 3 -2的
总黄酮含量最高 , 为 1.45%;人工汗液制品 1-2的总黄酮
含量最低 , 为 0.76%。
3.2　从实验结果分析可知 ,其作用机理有待进一步研究。
3.3　本实验通过对了哥王中黄酮的提取方法 、提取溶剂
以及溶剂浓度的考察 , 结果以 80%的乙醇回流提取的方法
·18· 　　　　　　　　　　　　　　　　　贵阳中医学院学报　　　　　　　　　　　　　　　　第 33卷
最佳。
参考文献
[ 1] 　国家药典委员会 .中华人民共和国药典 [ S] .一部 .北京:
人民卫生出版社 , 1977.16.
[ 2] 　陈爽 ,邵曼莉 ,杨振宇 ,等 .正交试验优选了哥王的提取工艺
[ J] .中草药 , 2007, 38(2)208.
[ 3] 　张美玲 ,甄汉深 .了哥王片总黄酮含量测定方法的研究 [ J] ,
2008, 14(7)3.
＊基金论文:贵州省科技厅项目 [黔科合 SY字(2008)3025, 黔科合计省合(2008)7004]
＊通讯作者:杨小生 ,男 , 研究员 ,博士。Tel∶0851-3805459, E-mail∶gzcnp@yahoo.com.cn
修回日期:2010-06-30
溴甲酚绿比色法测定苦参不同年份
不同部位中苦参总碱的含量＊
徐石稳 1 , 杨小生＊2
(1.贵阳中医学院 ,贵州贵阳　550002;2.贵州中国科学院天然产物化学重点实验室 ,贵州贵阳　550002)
　　摘要:目的:采用溴甲酚绿比色法测定苦参不同年份 、不同部位中苦参总碱的含量 。方法:利用溴甲酚绿结合生物碱
后在 420nm处有最大吸收 ,测定吸收度 A, 将 A与苦参总碱的浓度建立线性关系。结果:线性范围 2.006 ～ 12.036 mg/L, r
=0.9998, 平均加样回收率 102.08 %, RSD为 1.80 %。结论:本方法操作简便 、准确 , 研究结果对苦参药材质量评价及苦
参全草的有效开发利用具有一定的参考价值。
关键词:溴甲酚绿比色法;苦参总碱;含量测定
Doi:10.3969/j.issn.1002-1108.2011.01.08
　　中图分类号:R927.2　文献标识码:A　文章编号:1002-1108(2011)01-0019-02
　　苦参(SophoraflavescensAit.)系豆科植物苦参的干燥
根 , 具有清热燥湿 、杀虫 、利尿等功能。用作苦味健胃剂 、
利尿剂 、消炎药 、止泻药和驱虫药 。苦参总碱系从中药苦
参中提取的总生物碱 , 主要含苦参碱和氧化苦参碱 , 总生
物碱含量超过 50%。其具有抗病原体作用 、免疫作用和抗
肿瘤作用 , 能抑制乙肝病毒的增殖 , 促进乙肝病毒标志物
转阴 , 并能增强白细胞的吞噬能力 , 防止放 、化疗所致的白
细胞减少 , 明显升高其白细胞数量 [ 1] 。苦参中生物碱含量
测定方法很多。测定总碱含量常用紫外分光光度计法和
酸碱滴定法 [ 2] 、HPLC法 、毛细管电泳法等。由于大多数生
物碱的最大吸收波长为 210nm左右 , 将受溶剂及杂质的干
扰 , 实验误差较大 ,仅能用于常量和半微量的测定 ,不适用
于微量测定。本文选用溴甲酚绿显色法 , 利用溴甲酚绿结
合生物碱后在 420 nm处有最大吸收 , 测定吸收度 A, 将吸
光度与苦参总碱的浓度建立线性关系 ,方法简单可行。
1　仪器与试药
HP8345紫外分光光度仪(美国惠普);AL104型电子
天平(万分之一 、十万分之一);旋转蒸发仪(BUCHI);超声
清洗仪;恒温水浴锅(上海申生科技有限公司);
槐定碱对照品自制并通过 MS、NMR鉴定其结构 , 并经
HPLC检测纯度大于 98%。溴甲酚绿(天津市大茂化学试
剂厂),邻苯二甲酸氢钾(中国医药集团上海化学试剂公
司),试剂均为分析纯。苦参药材采自贵阳新天药业羊昌
苦参药材基地 , 经贵阳中医学院陈德媛教授鉴定为豆科槐
属植物苦参 SophoraflavescensAit.的干燥茎叶 、芦头和根。
槐定碱对照品结构鉴定如下:
化合物:白色晶体(丙酮), m.p.102 ～ 103 ℃。 EI-
MSm/z:248[ M+] , 247(M-1), 233, 219, 205, 192, 177,
162, 150, 136, 122, 110, 96, 83, 69, 55, 41。 1H-NMR
(CDCl3)δ:3.46 (1H, dd, J= 13.6, 5.2 Hz, He-17),
3.35(1H, dt, J=10.4, 2.8Hz, H-11), 3.30 (1H, t, J
= 11.6 Hz, Ha-17), 2.89 (1H, d, J= 11.2 Hz, He-
10), 2.78 (1H, m, He-2), 2.40 (1H, m, He-14),
2.34(1H, m, Ha-14), 2.16(2H, m, Ha-10, 2), 2.13
-1.01(15H, m, Ha-3, He-12, 4, Ha-9, 13, 8, He-
13, 8, 9, 3, H -7, 5, 6, Ha-4, 12)。 13C-NMR
(CDCl3)δ:55.6 (C-2), 21.4 (C-3), 23.5(C-4),
30.7 (C-5), 63.2(C-6), 40.8(C-7), 30.1(C-8),
21.6 (C-9), 50.2 (C-10), 55.8 (C-11), 28.0 (C-
12), 18.8 (C-13), 32.4 (C-14), 170.0 (C-15),
47.5 (C-17)。以上数据与文献 [ 3, 4]报道一致 , 确定其
结构为槐定碱(sophoridine)。
·19·
第 33卷　第 1期
2011年 1月　 　　　　　　　　　　　
贵阳中医学院学报
JGCTCM 　　　　　　　　　　　
No.1　Vol.33
January　2011