全 文 :[收稿日期] 2010-03-01
[基金项目] 广西科技攻关与新产品试剂项目 (桂攻科
0718002-4-3).
[第一作者] 李萍,副教授,主要从事中药药理研究。Tel:
13005923060,E-mail:lizli92@ 163. com
[通讯作者] * 谢金鲜,教授,主要从事中药药理研究。Tel:
0771-2279423,E-mail:xjx8114@ sina. com.
广西莪术 5 种不同炮制品抗肿瘤作用研究
李萍1,谢金鲜1﹡,江海燕1,蒋君岚1,甄丹丹2
(1. 广西中医学院药学院,南宁 530001;2. 广西中医学院第一附属医院,南宁 530012)
[摘要] 目的:研究广西莪术 5 种不同炮制品体内抗肿瘤作用。方法:采用S180细胞、H22 细胞制备移植性肿瘤模型,以
S180肉瘤小鼠和H22荷瘤小鼠的实体瘤重、抑瘤率、生存延长率为指标,评价广西莪术 5 种不同炮制品对移植性肿瘤的抑制作
用,并计算肝系数、脾系数。结果:广西莪术 5 种炮制品对体内 S 180肉瘤小鼠具有一定的抑制作用,莪术醋煮品、莪术醋炙品、
环磷酰胺(CTX)的瘤重系数与模型组比较有显著性差异(P < 0. 05),其中莪术醋煮品、莪术醋炙品、CTX 抑瘤率分别为
51. 9%,41. 4%,54. 2%。对 H 22荷瘤小鼠莪术蒸煮品、莪术鲜品也有一定的抑瘤作用,抑瘤率分别为 32. 7%,35. 3%。结论:
广西莪术 5 种不同炮制品对体内移植性肿瘤(肉瘤、荷瘤)小鼠有一定的抑制作用。
[关键词] 广西莪术;5 种炮制品;体内抗肿瘤;S 180、H 22瘤株
[中图分类号] R285. 5 [文献标识码] B [文章编号] 1005-9903(2010)09-0155-04
莪术为姜科植物蓬莪术 Rhizoma Curcumae的根
茎。药理研究显示,莪术具有抗炎、镇痛、抗肿瘤等
药理作用[1]。莪术是治疗肿瘤的常用中药,莪术抗
癌活性成分的疗效已有很多报道。本课题主要研究
广西莪术 Curcuma kwangsiensis S. G. Lee et C. F. 5 种
不同炮制品的抗肿瘤作用。采用 S180,H22 细胞制
备移植性肿瘤模型,以荷瘤小鼠和腹水瘤小鼠的实
体瘤重、抑瘤率、生存延长率为实验指标评价广西莪
术 5 种不同炮制品对移植性肿瘤的抑制作用,为拓
展广西莪术临床应用提供实验依据。
1 材料
1. 1 药品及试剂 广西莪术 5 种不同炮制品饮片
(鲜品、醋煮品、水煮品、蒸品、醋炙品),由广西中医
学院炮制教研室江海燕教授提供。按文献[2],取 5
种炮制品药材饮片各1 000 g,用水浸拌润制 30 min,
煎煮 3 次,第 1 次 10 倍量水,微火煮 60 min,第 2 次
8 倍量水,微火煮 50 min,第 3 次 6 倍量水,微火煮
50 min。合并 3 次煎煮液,微火加热浓缩至1 000
mL,用 3 层纱布和棉花减压抽滤,滤液浓缩至 500
mL 即得。每 1 mL 浓缩液含 2g 药材。批号
200902023,莪术 5 种炮制品,根据试验需要配成适
当的浓度;环磷酰胺(CTX,上海华联制药有限公司,
批号 08072421)。
1. 2 动物 昆明种小白鼠,动物合格证号(桂)医动
字第 11004 号。由广西中医学院实验动物中心提
供,动物使用许可证 SYXK(桂)2003-0001。标准饲
料喂养,自由摄食,自由饮水。
1. 3 细胞株 小鼠 S 180肉瘤鼠,购自广西中医药
研究所,由广西中医学院药理学实验室接种保存。
H 22荷瘤鼠(腹水型),由广西中医学院药理学细胞
培养室体外细胞复苏后接种保存。
1. 4 仪器 1 /万电子天平,型号 EL-204,梅特勒-
托利多仪器(上海)有限公司;紫外-可见分光光度
计,型号 TU-1901,北京普析通用仪器有限责任
公司。
1. 5 统计学处理 所有数据用 珋x ± s 表示,采用
SPSS10. 0 软件进行统计学分析,组间比较用 t检验。
2 方法和结果
2. 1 广西莪术 5 种炮制品对 S 180肉瘤小鼠抑瘤作
用的影响
2. 1. 1 建立肿瘤(实体瘤)模型[3-4] 取转种 S 180
瘤株第 8 天并产生足够腹水的小鼠,脱颈椎处死,腹
部皮肤消毒剪开并剥去皮肤,用无菌注射器抽取腹
水,用无菌生理盐水按体积比 1 ∶ 5稀释。取昆明种
小鼠 77 只,每只小鼠右腋下接种(ih)S 180细胞悬
液 0. 2 mL,造模,24 h后随机分组。
2. 1. 2 分组与给药 S 180肉瘤小鼠,雌雄兼用,体
重 18 ~ 22 g,随机分为 7 组,每组 11 只,即模型对照
·551·
第 16 卷第 9 期
2010 年 8 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol. 16,No. 9
Aug.,2010
DOI:10.13422/j.cnki.syfjx.2010.09.022
组、阳性对照组、广西莪术 5 种炮制品 5 个组。阳性
对照组 ip CTX15 mg·kg -1,广西莪术 5 个炮制品组
均按含生药 20 g·kg -1 ig,模型对照组 ig 生理盐水,
容积均为 20 mL·kg -1。接种瘤株 24 h后开始给药,
1 次 /d,连续 11 d。
2. 1. 3 观察指标 末次给药后次日称体重,脱颈椎
处死小鼠后剥取皮下实体瘤,称瘤重。计算瘤重系
数及抑瘤率,并进行组间 t检验。见表 1。
表 1 广西莪术 5 种炮制品对 S 180肉瘤小鼠的抑瘤作用的影响(珋x ± s)
组 别
剂量
/ g·kg -1
n
体重 / g
始 末
瘤重
/ g
瘤重系数
/ g·g - 1
抑瘤率
/%
模型 - 8 20. 39 ± 1. 15 25. 48 ± 4. 03 1. 3112 ± 0. 6851 0. 0517 ± 0. 0279 -
CTX 0. 015 8 20. 85 ± 1. 85 23. 00 ± 2. 45 0. 6007 ± 0. 5714 0. 0256 ± 0. 02221) 54. 2
莪术水煮品 20 9 20. 20 ± 2. 03 26. 48 ± 2. 76 1. 0347 ± 0. 6974 0. 0391 ± 0. 0248 21. 1
莪术蒸品 20 10 20. 20 ± 1. 78 25. 47 ± 2. 04 0. 7974 ± 0. 5433 0. 0310 ± 0. 0203 39. 2
莪术醋煮品 20 10 20. 65 ± 1. 26 24. 73 ± 3. 42 0. 6309 ± 0. 4366 0. 0251 ± 0. 01751) 51. 9
莪术醋炙品 20 10 21. 12 ± 1. 74 25. 07 ± 3. 26 0. 7686 ± 0. 3854 0. 0307 ± 0. 01531) 41. 4
莪术鲜品 20 11 20. 60 ± 1. 58 25. 85 ± 2. 08 0. 8147 ± 0. 5122 0. 0313 ± 0. 0200 37. 9
注:与模型对照组比较1)P﹤ 0. 05,2)P﹤ 0. 01(表 2 ~ 6 同)。
表 1 显示,广西莪术 5 种炮制品对 S 180肉瘤
小鼠具有一定的抑制作用,莪术醋煮品、莪术醋
炙品、CTX 的瘤重系数与模型组比较有显著性差
异 (P ﹤ 0. 05),其 抑 瘤 率 分 别 为 51. 9%,
41. 4%,54. 2%,提示对移植性 S180 肉瘤有一定
的抑制作用。
2. 2 广西莪术 5 种炮制品对 S 180肉瘤小鼠肝、脾
系数的影响 动物的造模、分组及给药同 2. 1。末
次给药后次日称体重,脱颈椎处死小鼠后剖取肝脏
和脾脏,称重,计算脏器系数,见表 2。
表 2 广西莪术 5 种炮制品对 S 180肉瘤小鼠肝、脾系数的影响(珋x ± s,n = 11)
组别 剂量 / g·kg -1 肝重 / g 脾重 / g 肝系数 / g·g - 1 脾系数 / g·g - 1
模型 - 1. 992 ± 0. 439 0. 288 ± 0. 063 0. 078 ± 0. 011 0. 011 ± 0. 002
CTX 0. 015 1. 549 ± 0. 294 0. 284 ± 0. 336 0. 067 ± 0. 012 0. 012 ± 0. 013
莪术水煮品 20 2. 058 ± 0. 571 0. 270 ± 0. 068 0. 077 ± 0. 017 0. 010 ± 0. 003
莪术蒸品 20 2. 049 ± 0. 709 0. 272 ± 0. 147 0. 081 ± 0. 027 0. 011 ± 0. 006
莪术醋煮品 20 1. 771 ± 0. 280 0. 224 ± 0. 034 0. 072 ± 0. 006 0. 009 ± 0. 0002)
莪术醋炙品 20 1. 868 ± 0. 298 0. 237 ± 0. 060 0. 074 ± 0. 005 0. 009 ± 0. 0021)
莪术鲜品 20 1. 792 ± 0. 406 0. 240 ± 0. 057 0. 069 ± 0. 013 0. 009 ± 0. 0021)
表 2 显示,广西莪术 5 种炮制品对 S 180肉瘤小
鼠肝重、脾重及肝系数均无明显的影响,莪术醋煮
品、莪术醋炙品、莪术鲜品可降低脾系数,与模型组
比较有显著性差异(P < 0. 05 或 P < 0. 01)。
2. 3 广西莪术 5 种炮制品对 S 180肉瘤小鼠生存期
影响 试验方法同 2. 1。在接种之日起观察用药后
小鼠肉瘤存活时间,计算生存天数和生存延长率,结
果见表 3。
表 3 显示,广西莪术 5 种炮制品可使 S 180肉瘤
小鼠生存期有一定的延长,莪术醋炙品对小鼠的生
命延长率为 26. 2%,但生存时间与模型组比较无显
著性差异。
表 3 广西莪术 5 种炮制品对 S 180肉瘤小鼠
生存期的影响(珋x ± s,n = 11)
组别 剂量 / g·kg -1 生存时间 /d 生命延长率 /%
模型 - 14. 55 ± 4. 82 -
CTX 0. 015 14. 64 ± 7. 30 0. 6
莪术水煮品 20 17. 73 ± 3. 13 21. 9
莪术蒸品 20 15. 45 ± 5. 41 6. 2
莪术醋煮品 20 17. 00 ± 6. 63 16. 8
莪术醋炙品 20 18. 36 ± 5. 28 26. 2
莪术鲜品 20 14. 91 ± 4. 74 2. 5
2. 4 广西莪术 5 种炮制品对 H 22荷瘤小鼠的抑瘤
作用
·651·
第 16 卷第 9 期
2010 年 8 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol. 16,No. 9
Aug.,2010
2. 4. 1 造模 取转种 H 22瘤株第 8 d 并产生足够
腹水的小鼠,步骤同 2. 1. 1,造模,24 h后随机分组。
2. 4. 2 分组与给药 H 22荷瘤小鼠 70 只,雌雄兼
用,体重 17 ~ 22 g,随机分为 7 组,每组 10 只,分组
及给药同 2. 1. 2。
2. 4. 3 观察指标 同 2. 1. 3。结果见表 4。
表 4 广西莪术 5 种炮制品对 H 22荷瘤小鼠的抑瘤作用(珋x ± s)
组别 剂量 / g·kg -1 n
体重 / g
始 末
瘤重 / g 瘤重系数 / g·g - 1 抑瘤率 /%
模型 - 10 26. 38 ± 3. 89 37. 63 ± 4. 76 2. 608 ± 0. 751 0. 069 ± 0. 017 -
CTX 0. 015 10 26. 66 ± 3. 78 28. 89 ± 8. 682) 0. 866 ± 0. 542 0. 028 ± 0. 0132) 58. 8
莪术水煮品 20 9 26. 02 ± 2. 91 36. 53 ± 3. 80 3. 036 ± 1. 211 0. 083 ± 0. 033 6. 8
莪术蒸品 20 10 27. 17 ± 1. 99 36. 45 ± 6. 99 1. 750 ± 1. 135 0. 046 ± 0. 0301) 32. 7
莪术醋煮品 20 10 25. 82 ± 2. 31 37. 02 ± 5. 51 2. 547 ± 0. 973 0. 066 ± 0. 019 4. 5
莪术醋炙品 20 9 26. 64 ± 2. 25 33. 96 ± 8. 61 1. 914 ± 1. 360 0. 053 ± 0. 037 6. 9
莪术鲜品 20 9 25. 35 ± 3. 29 40. 25 ± 7. 23 1. 700 ± 0. 828 0. 045 ± 0. 0251) 35. 3
表 4 显示,广西莪术 5 种炮制品对 H 22荷瘤小
鼠具有一定的抑制作用,莪术蒸煮品、莪术鲜品、
CTX的瘤重系数与模型组比较有显著性差异(P <
0. 05),其抑瘤率分别为 32. 7%,35. 3%,58. 8%,提
示对移植性 H 22荷瘤有一定的抑制作用。
2. 5 莪术 5 种炮制品对 H 22荷瘤小鼠肝重、脾重的
影响 基本方法同 2. 4。结果见表 5。
表 5 显示,广西莪术 5 种炮制品对 H 22荷瘤小
鼠肝重、脾重及其系数无明显影响,CTX对脾脏系数
有明显的抑制作用,与模型组比有显著性差异(P <
0. 01)。
2. 6 广西莪术 5 种炮制品对 H 22荷瘤小鼠生存期
影响 取昆明种小鼠 98 只,雌雄兼用,体重 17 ~
22 g,造模同 2. 4. 1。24 h 后随机分为 7 组。每组
14 只。分组及给药同 2. 4. 2,观察同 2. 3。结果见
表 6。
表 5 广西莪术 5 种炮制品对 H 22荷瘤小鼠肝重、脾重系数的影响(珋x ± s,n = 10)
组别 剂量 / g·kg -1 肝重 / g 脾重 / g 肝系数 / g·g - 1 脾系数 / g·g - 1
模型 - 2. 396 ± 0. 288 0. 395 ± 0. 103 0. 064 ± 0. 003 0. 011 ± 0. 003
CTX 0. 015 1. 703 ± 0. 741 0. 149 ± 0. 066 0. 057 ± 0. 012 0. 005 ± 0. 0012)
莪术水煮品 20 2. 473 ± 0. 303 0. 430 ± 0. 117 0. 068 ± 0. 006 0. 012 ± 0. 004
莪术蒸品 20 2. 460 ± 0. 560 0. 396 ± 0. 102 0. 067 ± 0. 008 0. 011 ± 0. 002
莪术醋煮品 20 2. 439 ± 0. 635 0. 367 ± 0. 133 0. 065 ± 0. 009 0. 010 ± 0. 003
莪术醋炙品 20 2. 018 ± 0. 730 0. 370 ± 0. 237 0. 058 ± 0. 011 0. 011 ± 0. 006
莪术鲜品 20 2. 426 ± 0. 599 0. 369 ± 0. 121 0. 060 ± 0. 010 0. 010 ± 0. 003
表 6 广西莪术 5 种不同炮制品对 H 22荷瘤小鼠
生存期的影响 (珋x ± s,n = 14)
组 别
剂量
/ g·kg -1
生存时间
/d
生命延
长率 /%
模型 - 13. 43 ± 6. 47 -
CTX 0. 015 12. 64 ± 3. 27 - 5. 9
莪术水煮品 20 13. 43 ± 5. 14 0
莪术蒸品 20 16. 62 ± 6. 74 23. 8
莪术醋煮品 20 19. 14 ± 4. 092) 42. 5
莪术醋炙品 20 13. 79 ± 5. 37 2. 7
莪术鲜品 20 15. 43 ± 5. 56 14. 9
表 6 显示,广西莪术 5 种炮制品可使 H 22荷瘤
小鼠存活期有一定的延长,莪术醋煮品对小鼠生命
延长率为 42. 5%,生存时间与模型组有显著性差异
(P < 0. 01)。其他各组对生命延长率无明显的影
响。
3 讨论
本研究采用 S 180,H 22细胞制备移植性肿瘤模
型,以荷瘤小鼠和腹水瘤小鼠的实体瘤重、抑瘤率、
生存延长率为实验指标评价广西莪术 5 种不同炮制
品对移植性肿瘤的抑制作用。结果显示,广西莪术
5 种炮制品对体内 S 180肉瘤小鼠具有一定的抑制
作用,莪术醋煮品、莪术醋炙品的瘤重系数与模型组
(下转第 161 页)
·751·
第 16 卷第 9 期
2010 年 8 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol. 16,No. 9
Aug.,2010
本实验中,癫痫大鼠的 3 级发作次数比其他级
别次数明显增多;治疗后,石菖蒲去挥发油水提液高
剂量组、丙戊酸钠组 3 级发作的次数减少,α-细辛醚
组 2 级和 3 级发作的次数减少,说明这些部位或单
体能减少癫痫的发作。石菖蒲挥发油和 β-细辛醚对
降低发作的级别和次数,效果不明确,这与以往报道
不同[7-8],原因可能是选取的点燃模型不同、治疗时
间长短不同引起,本实验经过两阶段的治疗,中间还
因动物状态欠佳,停药 14 d,前后治疗时间长达 36
d,其疗效更接近临床上癫痫需要长期治疗的实际。
石菖蒲去油水提液低剂量组和模型组的结果一
致,中剂量组没有统计学意义,高剂量组大鼠癫痫 3
级发作次数的降低(P < 0. 05),说明随着给药剂量
增加,癫痫发作的级别降低、次数减少,呈一定的量
效关系;高剂量组大鼠死亡数最多,主要原因是药物
浓度太高,ig困难,可能造成大鼠内伤,药物太稠影
响大鼠进食和消化,如能去除无效成分,减少给药体
积,将能更好地发挥药效。石菖蒲挥发油组大鼠死
亡数也较高,提示挥发油可能有的一定的毒性。α-
细辛醚组、β-细辛醚和阳性组死亡情况相当,提示给
药剂量是合适的。
综上所述,对戊四唑点燃模型,石菖蒲的主要有
效部位是高剂量的去油水提液部位和 α-细辛醚;石
菖蒲挥发油和 β-细辛醚在降低发作的级别和次数方
面,效果尚不明确,是否从其他方面发挥抗癫痫作
用,有待进一步研究。
[参考文献]
[1] 魏刚,林双峰,方永奇,等. GC-MS 建立石菖蒲挥发油
质量标准研究[J].中国中药杂志,2005,30(10):794.
[2] 陈俐,廖卫平.石菖蒲水煎剂抗癫痫动物模型的药效学
研究[J].广州医学院学报,2002,30(3):13.
[3] Ono J,Chamorro G,Tomaus F,et al. Electrocortico-
graphical observation of seizure induced by pentylenetet-
razol injection in rats[J]. Exp Neural,1982,78:7.
[4] 王晓鹏,王维平. 癫痫动物模型点燃的研究进展[J].
脑与神经疾病杂志,2006,14 (4):316.
[5] 程桂玲,迟兆富,赵玉英,等.尼膜同对戊四氮致痫大鼠
海马神经细胞凋亡和 p53 蛋白表达的影响[J].陕西医
学杂志,2004,33(1):6.
[6] 吴启端,王绮雯,陈奕芝,等. β-细辛醚对缺血-再灌注
损伤心肌细胞的保护作用[J]. 广州中医药大学学报,
2009,26(3):251.
[7] 陈俐,廖卫平. 石菖蒲萃取挥发油抗癫痫药效研究
[J]. 中药新药与临床药理,2003,14 (3):171.
[8] 方若鸣,方更利,方永奇.安脑片治疗癫痫的药效观察
[J].中成药,2006,28(9):1323
[责任编辑 聂淑琴
檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶
]
(上接第 157 页)
比较有显著性差异(P < 0. 05),抑瘤率分别为
51. 9%,41. 4%。对 S 180肉瘤小鼠生存期可有一定
的延长,莪术醋炙品的小鼠生命延长率为 26. 2%,
但生存时间与模型组比较无显著性差异。对H22荷
瘤小鼠莪术蒸煮品、莪术鲜品也有一定的抑瘤作用,
抑瘤率分别为 32. 7%,35. 3%。莪术醋煮品对H22
荷瘤小鼠生命延长率为 42. 5%,生存时间与模型组
有显著性差异(P < 0. 01),提示其对小鼠存活期可
有一定的延长作用,其他各组作用不明显。
综上所述,广西莪术 5 种不同炮制品对体内移
植性肿瘤(肉瘤、荷瘤)小鼠有一定的抑制作用,以
莪术醋煮品、莪术醋炙品抗瘤作用稍强。其抗肿瘤
机制及其抗瘤活性成分有待进一步研究。
[参考文献]
[1] 吴贻谷 . 中华本草[M]. 上海:上海科学技术出版社,
1998:2272.
[2] 叶定江 . 中药炮制学[M]. 北京:人民卫生出版社,
1998:161.
[3] 金莉 . 中药复方的抑瘤和免疫调节作用的初步研究
[J]. 现代肿瘤医学,1997,5(1):55.
[4] 杨镇 . 肿瘤免疫学[M]. 武汉:湖北科学技术出版社,
1998:98.
[责任编辑 何伟]
·161·
第 16 卷第 9 期
2010 年 8 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol. 16,No. 9
Aug.,2010