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田皂角醇提取物药理作用的实验研究



全 文 :▲基金项目:广西中医药管理局中医药科技专项课题(GZKZ09 - 45)
田皂角醇提取物药理作用的实验研究▲
李燕婧 钟正贤 陈家源 卢文杰
(广西中医药研究院,南宁市 530022,E-mail:liyanjing2009@ 163. com)
【摘要】 目的 观察田皂角醇提取物的药理作用。方法 采用试管二倍稀释法、巴豆油致耳郭肿胀法、
醋酸扭体法、皮肤过敏试验和急性毒性试验。结果 田皂角醇提物对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌有较强抑
菌作用,能减轻巴豆油致小鼠耳郭肿胀,减少醋酸致小鼠扭体次数,降低皮肤过敏反应。急性毒性试验表明,田
皂角醇提取物的最大给药量为 150. 7g生药 /kg。结论 田皂角醇提物具有一定的抑菌、抗炎、镇痛和抗过敏作
用,且毒性小。
【关键词】 田皂角醇提取物;药理试验;急性毒性
【中图分类号】 R 285. 5 【文献标识码】 A 【文章编号】 0253-4304( 2013) 10-1308-03
DOI: 10. 11675 / j. issn. 0253-4304. 2013. 10. 11
Experimental Study on Pharmacological Effects of Alcohol Extracts of Aeschynomene indica L.
LI Yan-jing,ZHONG Zheng-xian,CHEN Jia-yuan,LU Wen-jie
( Guangxi Institute of Traditional Medical and Pharmaceutical Sciences,Nanning 530022,China)
【Abstract】 Objective To observe the pharmacological effects of alcohol extracts of Aeschynomene indica L. .
Methods The methods of tube doubling dilution,the ear swelling induced by the croton oil,acetic acid twisting as
well as the test of skin allergy and acute toxicity test were adopted in the study. Results Alcohol extracts of Ae-
schynornene indica L. had strong bacteriostatic effects on staphylococcus aureus and bacillus subtilis,it inhibited the
ear swelling induced by the croton oil,decreased the body twisting times induced by acetic acid,and alleviated skin
anaphylaxis in mice. The acute toxicity test showed that the maximum dosage of alcohol extracts of Aeschynomene in-
dica L. was 150. 7g crude drug /kg. Conclusion Alcohol extracts of Aeschynormene indica L has some bacteriostat-
ic,anti-inflammatory,analgesic and antiallergic effects as well as little toxicity.
【Key words】 Alcohol extracts of Aeschynomene indica L. ; Pharmacological test; Acute toxicity
田皂角(Aeschynomene indica L.)别名合萌、水
皂角,为蝶形花科植物田皂角,分布于华北、华东、中
南、西南等地;味甘、苦,性微寒;具有清热利湿,祛风
明目,通乳等作用;主治热淋、血淋、水肿、泄泻、痢疾、
目赤肿痛等症 [1]。关于其药理研究未见报告。本文
根据其民间功用,对田皂角醇提取物进行相关药理试
验,以期发现新的药用途径,为临床应用提供科学依
据,现将研究报告如下。
1 材料与方法
1. 1 试验药物及仪器 田皂角醇提取物(8. 69g 生
药 / g膏) ,由我院化学研究所提供。实验时用蒸馏水
研磨配制成药液备用。阿司匹林肠溶片为武汉远大
制药集团股份有限公司产品,批号:081101。地塞米
松为天津药业集团新郑股份有限公司产品,批号:
090611。息斯敏,西安杨森制药有限公司产品,批号
090218967。722 型光栅分光光度计,上海分析仪器
三厂产品。FA1004-型万分之一电子天平,上海精密
科学仪器有限公司产品。
1. 2 试验动物 昆明种小鼠,体重 18 ~ 22g,雌雄各
半,由广西医科大学实验动物中心提供,清洁级,许可
证号:SCXK桂 2009 - 0003。小鼠分性别饲养于空调
实验室内,室温(22 ± 2)℃,相对湿度(60 ± 2)%,喂
颗粒标准饲料,自由饮水和摄食。
1. 3 方法
1. 3. 1 抗菌试验:取田皂角醇提取物用水配制成试
8031 Guangxi Medical Journal,Oct. 2013,Vol. 35,No. 10
验药液,115℃高压灭菌 20 min,备用。采用液体试管
二倍稀释法,用营养肉汤培养基、改良马丁培养基将
供试液作系列稀释,使药液浓度为 1 ∶ 2、1 ∶ 4、1 ∶ 8、
1 ∶ 16、1 ∶ 32、1 ∶ 64、1 ∶ 128、1 ∶ 256、1 ∶ 512、
1 ∶ 1 024,分装试管,每管 1. 0 ml,第 11 管作为阳性
对照,第 12 管作为阴性对照。除阴性对照管外,每管
接种 100 000CFU /ml相应菌液 0. 1 ml,菌液分别接种
大肠埃希菌、乙型副伤寒沙门菌、福氏志贺氏菌、铜绿
假单胞菌、金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、枯草芽孢
杆菌、白色念珠菌。细菌置 35℃ ~ 37℃培养 24 h,真
菌置 25℃ ~ 28℃培养 24 ~ 48 h;将各管培养物分别
接种于相应的不含药物的琼脂培养基平板上,细菌置
35℃ ~37℃培养 24 h,真菌置 25℃ ~ 28℃培养 24 ~
48 h。以生长菌落不超过 5 个者为中药有效部位的
最小抑菌浓度(MIC)。
1. 3. 2 对醋酸所致小鼠扭体次数的影响[2]:取小鼠
50 只,雌雄各半,随机分为空白对照组,田皂角醇提
物高、中、低剂量(15. 0 g /kg、7. 5 g /kg、5. 0 g /kg)组
和阿司匹林组(0. 2 g /kg) ,每组 10 只。用药组每天
灌胃药一次,空白对照组给予等体积蒸馏水,连续灌
胃 7 d。于末次给药后 1 h,每只小鼠腹腔注射 0. 6%
醋酸溶液 0. 2 ml,立即观察并记录 20 min 内各小鼠
的扭体次数。比较给药物组与空白对照组小鼠扭体
次数的差异,评价受试药物的镇痛作用。
1. 3. 3 对巴豆油所致小鼠耳郭肿胀的抑制作用[4]:
取正常小鼠 50 只,随机分为空白对照组,田皂角醇提
物高、中、低剂量(15. 0 g /kg、7. 5 g /kg、5. 0 g /kg)组
和地塞米松(0. 0045 g /kg)组,每组 10 只。用药组每
天灌胃药一次,空白对照组给予等体积蒸馏水,连续
灌胃 7 d。于末次给药 30 min 后,用微量注射器取
2%巴豆油溶液 0. 05 ml涂于小鼠右耳,待 4 h后处死
小鼠。立即用口径为 8 mm 的打孔器,沿着小鼠左右
耳郭相同部位打孔取材,然后在电子天平上分别称
重,以两耳片重量(mg)的差值作为肿胀程度指标,并
求出抑制率(%)。肿胀抑制率 =(对照组耳肿胀度
-给药组耳肿胀度)/对照组耳肿胀度 × 100% 。
1. 3. 4 对小鼠被动皮肤过敏试验[5]:抗原:医用天花
粉;佐剂:4%氢氧化铝凝胶。临用时以 3. 75 mg 天花
粉溶于 1. 5 ml氢氧化铝凝胶中。致敏:健康小鼠 10
只,体重 18 ~ 22g,将上述天花粉氢氧化铝凝胶混悬
液作脚掌注射,两只后脚掌各注入 0. 05 ml,共注射
0. 1 ml。15 d 后,断头取血,离心取抗血清备用。被
动皮肤致敏:另取小鼠 50 只,雌雄各半,随机分为空
白对照组,田皂角醇提物高、中、低剂量(15. 0 g /kg、
7. 5 g /kg、5. 0 g /kg)组和息斯敏(0. 01 g /kg)组,每组
10 只。每天给药一次,空白对照组给予等体积蒸馏
水,连续给予 7 d。取上述 10 只致敏小鼠的混合抗血
清加生理盐水稀释成 1∶ 5,每鼠腹壁皮内注射两个点
(相距 0. 2 cm) ,每点 0. 03 ml。并再连续给药 2 d,于
末次给药 12 h 后,每只小鼠进行抗原攻击,尾静脉注
射天花粉(2. 5 mg /ml,用 1%伊文思蓝—生理盐水配
制)0. 2 ml /只,20 min 后处死动物,剪下腹部蓝斑皮
肤(0. 5g) ,剪碎,浸泡于丙酮生理盐水溶液(7 ∶ 3)
5 ml中 48 h,离心取上清液,用分光光度计 610 nm波
长测定吸收度,并做组间比较,评价药物的抗过敏
作用。
1. 3. 5 急性毒性试验:取昆明种小鼠 40 只,雌雄各
半,分为对照组和给药组,小鼠禁食 24 h,不禁水。将
田皂角醇提物用蒸馏水配制成药液最大浓度,以最大
给药体积(0. 4 ml /10 g体重)的药液灌胃给药,24 h内
给药 3次;对照组给予蒸馏水,连续观察 14 d,记录动
物体重、外观、食欲、行为活动、死亡等毒副反应情况。
1. 4 统计学分析 采用 PEMS 3. 1 统计软件分析数
据,计量资料以(x ± s)表示,采用 t 检验,以 P < 0. 05
为差异有统计学意义。
2 结 果
2. 1 体外抗菌作用 田皂角醇提物对金黄色葡萄球
菌、枯草芽孢杆菌有较强抗菌作用;对白色念珠菌、大
肠杆菌、表皮葡萄球菌具有中度的抗菌作用;对乙型
副伤寒沙门菌、福氏志贺氏菌、铜绿假单胞菌具有低
度抗菌作用。田皂角醇提物对各菌种的最小抑菌浓
度见表 1。
表 1 田皂角醇提物体外对各菌种的最小抑菌浓度
试验菌种 菌号 稀释度
药物最小
抑菌浓度(MIC)
金黄色葡萄球菌 26003 1 ∶ 64 5. 85
表皮葡萄球菌 26069 1 ∶ 32 11. 71
大肠埃希杆菌 44102 1 ∶ 32 11. 71
乙型副伤寒沙门菌 50094 1 ∶ 8 46. 87
福氏志贺氏菌 51572 1 ∶ 16 23. 43
铜绿假单胞菌 10104 1 ∶ 16 23. 43
枯草芽孢杆菌 63501 1 ∶ 64 5. 85
白色念珠菌 10104 1 ∶ 32 11. 71
2. 2 对醋酸所致小鼠扭体次数的影响 与空白对照
组比较,田皂角醇提物大、中、小剂量组及阿司匹林组
均有明显减少小鼠扭体次数(F = 10. 124,P = 0. 000) ,
9031广西医学 2013 年 10 月第 35 卷第 10 期
提示田皂角醇提物具有一定镇痛作用,见表 2。
表 2 田皂角醇提物对醋酸所致
小鼠扭体反应的影响(x ± s)
组别
剂量
(g /kg)
动物数
(只)
扭体次数
空白对照组 — 10 19. 8 ± 13. 9
阿司匹林组 0. 2 10 7. 8 ± 5. 3*
田皂角高浓度组 15. 0 10 9. 0 ± 6. 4*
田皂角中浓度组 7. 5 10 8. 4 ± 6. 5*
田皂角低浓度组 5. 0 10 8. 6 ± 5. 9*
注:与空白对照组比较,* P < 0. 05
2. 3 对巴豆油引起小鼠耳郭肿胀的影响 与空白
对照组比较,田皂角醇提物大、中、小剂量组及阿
司匹林组均有明显降低小鼠耳郭肿胀度(F = 13. 625,
P =0. 000),肿胀抑制率分别是 32. 0%、30. 9%、29. 8%、
26. 3%,提示田皂角醇提物具有抗炎作用,结果见
表 3。
表 3 田皂角醇提物对巴豆油引起
小鼠耳郭肿胀度比较(x ± s)
组别 剂量(g /kg) 动物数 肿胀度(mg)
空白对照组 - 10 17. 09 ± 4. 39
地塞米松 0. 0045 10 11. 62 ± 4. 14*
田皂角 15. 0 10 11. 80 ± 4. 81*
田皂角 7. 5 10 12. 00 ± 3. 74*
田皂角 5. 0 10 12. 60 ± 2. 93*
注:与空白对照组比较,* p < 0. 05
2. 4 对小鼠被动皮肤过敏反应的影响 与空白对
照组比较,田皂角醇提物大、中剂量组及息斯敏组
均有明显降低小鼠皮肤蓝斑吸光度(F = 1. 028,
P = 0. 000) ,提示田皂角醇提物具有抗皮肤过敏作
用,结果见表 4。
表 4 田皂角醇提物对小鼠
被动皮肤过敏反应的影响(x ± s)
组别
剂量
(g /kg)
动物数
(只)
光密度值(OD)
空白对照组 - 10 0. 369 ± 0. 150
息斯敏 0. 01 10 0. 083 ± 0. 045#
田皂角 15. 0 10 0. 214 ± 0. 081*
田皂角 7. 5 10 0. 228 ± 0. 036*
田皂角 5. 0 10 0. 257 ± 0. 076
注:与空白对照组比较,* p < 0. 05,#p < 0. 01
2. 5 毒性作用 小鼠体重正常增长,无任何毒副作
用,均存活。测出田皂角醇提物的最大给药量为
150. 7g生药 /kg体重,结果表明田皂角醇提物的毒性
很小。
3 讨 论
田皂角是广西瑶族常用的传统药物之一,临床上
有以田皂角为主药治疗肾炎取得较好效果的报
告[6]。为了探讨和开发田皂角的药用价值,本文采
用多种动物模型及实验方法,对其醇提物进行了抗
菌、镇痛、抗过敏等药效及毒理作用的研究,结果表
明,田皂角醇提物对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌
有较强抗菌作用,对白色念珠菌、大肠杆菌、表皮葡萄
球菌具有中度的抗菌作用,对乙型副伤寒沙门菌、福
氏志贺氏菌、铜绿假单胞菌具有低度抗菌作用;田皂
角醇提物能降低小鼠由化学刺激引起的疼痛次数,说
明对中枢神经疼痛有抑制作用;田皂角醇提物能抑制
巴豆油引起小鼠耳郭肿胀,说明对早期炎症有抑制作
用;田皂角醇提物抑制小鼠被动皮肤通透性,说明对
速发型过敏反应有抑制作用,提示该药具有一定的抗
菌、镇痛、抗过敏等药理作用,且毒性很小。目前有研
究从田皂角中分离出多种化学成分,推测这些药理作
用可能与该植物所含的生物碱、黄酮类、多糖等化学
物质有关。本文仅对田皂角醇提物进行了初步的药
理作用研究,我们下一步将对其有效部位作进一步提
取分离,针对药理活性做深入研究,可望获得活性更
强的有效成分。
参 考 文 献
[1] 中华人民共和国国家中医药管理局中华本草编委会.中
华本草[M].第 4 册.上海:上海科学技术出版社,1999:
316.
[2] 钟正贤,周桂芬,陈学芬.黄杞总黄酮的实验研究.时珍
国医国药,2000,11(6) :495 - 496.
[3] 吴 虹,魏 伟,宋礼华. 栀子总苷的抗炎镇痛作用
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[4] 王 璐,高菊珍,张红宇,等.雪上一枝蒿速效止痛搽剂
的抗炎镇痛作用研究[J]. 中药药理与临床,2005,21
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[6] 李 波.以合萌为主药治疗肾脏病体会[J].河南中医,
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(收稿日期:2013 - 05 - 10 修回日期:2013 - 06 - 24)
0131 Guangxi Medical Journal,Oct. 2013,Vol. 35,No. 10