全 文 ：收稿日期:2016-01-25
基金项目:湖北省中药材及中药饮片质量标准研究(KJ2015QT032)
作者简介:尉小琴(1992-) ，女，在读硕士研究生，专业方向:药理学;E-mail:262480010@ qq. com。
* 通讯作者:刘呈雄，E-mail:liuchengxiong666@ 126. com。
华泽兰化学成分及其抗肿瘤活性研究
尉小琴，刘呈雄* ，邹 坤，贺海波，汪鋆植，吴一航，许应超
(三峡大学生物与制药学院/天然产物研究与利用湖北省重点实验室，湖北 宜昌 443002)
摘要 目的:研究华泽兰的化学成分及其抗肿瘤活性。方法: 采用正相硅胶柱层析、制备薄层层析及制备型
HPLC等方法分离纯化，利用 NMＲ、MS等波谱学方法鉴定化合物结构，利用 MTT比色法评价 6 个化合物的肿瘤细
胞毒活性。结果:从华泽兰乙酸乙酯部位分离得到6 个化合物，分别鉴定为:eupalinilide G(1)、8β-(4-hydroxytigloy-
loxy)-5-desoxy-8-desacyleuparotin(2)、3-(hydroxymethyl)-1，13，14，15-tetrahydroxy-7，11，15-trimethyl-2，6，10-hexadeca-
triene(3)、3-(hydroxymethyl)-1，13，15-trihydroxy-7，11，15-trimethyl-2，6，10-hexadecatrien-14-yl acetate(4)、eupafolin
(5)、hiyodorilactone B(6)。化合物 2 对人胃癌 HGC-27 细胞及小鼠黑色素瘤 B16 细胞的 IC50分别为 4. 29 μg /mL、
5. 53 μg /mL。结论:其中，化合物2 ～ 6 为首次从华泽兰中分离得到;化合物2 对 HGC-27 细胞有显著的细胞毒活
性。
关键词 华泽兰;化学成分;抗肿瘤活性
中图分类号:Ｒ284. 1 /Ｒ284. 2 文献标识码:A 文章编号:1001-4454(2016)04-1782-04
DOI:10. 13863 / j. issn1001-4454. 2016. 08. 023
Ｒesearch on Chemical Constituents and Anti-tumor Activity of Eupatorium chinense
YU Xiao-qin，LIU Cheng-xiong，ZOU Kun，HE Hai-bo，WANG Jun-zhi，WU Yi-hang，XU Ying-chao
(College of Biological ＆ Pharmaceutical Sciences，Hubei Key Laboratory of Natural Products Ｒesearch ＆ Development，Three Gorges U-
niversity，Yichang 443002，China)
Abstract Objective:To study the chemical constituents and their anti-tumor activity of Eupatorium chinense. Methods:The chemi-
cal constituents were separated and purified by the normal phase silica gel column chromatography，preparative thin-layer chromatogra-
phy，and preparative HPLC. Their structures were determined by various spectral data，their antitumor activity in vitro was determined by
MTT assay. Ｒesults:Six compounds were isolated from the ethyl acetate extract of Eupatorium chinense，and the structures were identi-
fied as eupalinilide G(1)，8β-(4-hydroxytigloyloxy)-5-desoxy-8-desacyleuparotin(2) ，3-(hydroxymethyl)-1，13，14，15-tetrahydroxy-
7，11，15-trimethyl-2，6，10-hexadecatriene(3) ，3-(hydroxymethyl)-1，13，15-trihydroxy-7，11，15-trimethyl-2，6，10-hexadecatrien-14-yl
acetate(4) ，eupafolin(5)and hiyodorilactone B(6). Compound 2 showed cytotoxicity against HGC-27 and B16 cancer cell lines with
IC50 values of 4. 29 μg /mL and 5. 53 μg /mL，respectively. Conclusion:Compounds 2 ～ 5 are isolated from the Eupatorium chinense for
the first time，and compound 2 has significant cytotoxic activity against HGC-27 cell line.
Key words Eupatorium chinense L.;Chemical constituents;Antitumor activity
华泽兰系菊科泽兰属植物华泽兰 Eupatorium
chinense L. 的全草。又名六月雪、多须公、土牛膝
等，具有清热解毒、疏肝活血等功效，主治风热感冒、
胸胁痛、脘痛腹胀、跌打损伤、痈肿疮毒、咽喉炎等疾
病，是广东地区治疗白喉、咽炎常用药之一〔1〕。华
泽兰化学成分以萜类、黄酮类等化合物为主，而药理
活性鲜有报道〔2〕。本实验从华泽兰乙酸乙酯部位
分离得到 6 个化合物，分别鉴定为:eupalinilide G
(1)、8β-(4-hydroxytigloyloxy)-5-desoxy-8-desacyle-
uparotin(2)、3-(hydroxymethyl)-1，13，14，15-tetra-
hydroxy-7，11，15-trimethyl-2，6，10-hexadecatriene
(3)、3-(hydroxymethyl)-1，13，15-trihydroxy-7，11，
15-trimethyl-2，6，10-hexadecatrien-14-yl acetate(4)、
eupafolin(5)、hiyodorilactone B(6)。其中，化合物 2
～ 6 为首次从该植物中分离得到，化合物 2 对人胃
癌 HGC-27 细胞及小鼠黑色素瘤 B16 细胞均有细胞
毒活性，其 IC50分别为 4. 29 μg /mL、5. 53 μg /mL。
1 仪器与材料
Amozon SL + 1200 液相色谱-双重漏斗传输离子
阱质谱仪( 瑞士Bruker 公司) ;Bruker AV 400 MHz
核磁共振波谱仪( 瑞士Bruker 公司) ;Dionex Ulti-
mate 3000 型高效液相色谱仪( 美国Dioned 公司) ;
Venusil XBP C18色谱柱(250 mm × 10 mm，10 μm 半
制备型;250 mm ×4. 6 mm，5 μm分析型) ( 天津博纳
艾杰尔科技有限公司) ; 低温冷冻干燥机( 美国
Labconco公司) ;正相色谱硅胶( 烟台化学工业研究
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所);反相色谱硅胶( 日本YMC 公司) ; 二氧化碳培
养箱( 日本三洋公司) ;Stat Fax-2100 型酶联免疫检
测仪( 美国Awareness) ;XDS-1B 倒置显微镜( 日本
Nicon 公司) ; 低温离心机( 德国Eppendorf 公司) ;
SZ-93 自动双重纯水蒸馏器( 上海亚荣生化仪器
厂) ;电子天平( 上海民桥精密仪器有限公司) ;超净
工作台( 北京东联哈尔仪器制造有限公司) ;Sepha-
dex LH-20( 美国Pharmacia 公司)。高效液相用甲
醇、乙腈均为色谱纯( 美国TEDIA 公司) ; 水为三蒸
水;其他试剂均为分析纯( 天津科密欧化学试剂有
限公司) ;MTT( 美国Sigma 公司) ;1640 培养基( 美
国 Gibico公司) ;新生牛血清;DMSO;胰蛋白酶。
实验用华泽兰采自湖北省长阳土家族自治县乐
园乡，经三峡大学生物与制药学院王玉兵教授鉴定
为菊科泽兰属植物华泽兰 Eupatorium chinense L. 的
全草。植物标本现保存于三峡大学天然产物研究与
利用湖北省重点实验室。实验所用人乳腺癌 MD-
MAB-231 细胞、人胃癌 HGC-27 细胞、小鼠黑色素瘤
B16 细胞、人肺癌 A549 细胞、人结肠癌 Caco-2 细胞
均购自武汉大学细胞保藏中心。
2 提取与分离
华泽兰干燥全草 4. 4 kg，粉碎，用 95%乙醇浸
泡过夜，采用加热回流方式提取 3 次，每次 2 h，合并
提取液减压浓缩至无醇味，利用水悬浮混匀后，依次
用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取，减压浓缩得
到石油醚部位浸膏 50 g，乙酸乙酯萃取部位浸膏 67
g，正丁醇部位浸膏 35 g。取乙酸乙酯部位浸膏 67
g，经正相硅胶柱层析，以氯仿-甲醇溶剂系统梯度洗
脱，经薄层色谱检测，合并相似流分，得到 160 个流
分 Fr. 1 ～ 160。其中 Fr. 60 ～ 80 经过中压制备液相
(42%乙腈，3. 0 mL /min) 进行分离纯化，得化合物1
(20 mg)、2(14 mg)。Fr. 100 ～ 120 经过中压制备液
相(42%乙腈，3. 0 mL /min) 进行分离纯化，得化合
物 3(25 mg)、4(15 mg)。流分 Fr. 140 经过中压制
备液相(42%乙腈 /水，3. 0 mL /min) 进行分离纯化，
得化合物 5(17 mg) ，Fr. 150 经过中压制备液相
(42%乙腈，3. 0 mL /min) 进行分离纯化，得化合物6
(10 mg)。
3 结构鉴定
化合物 1: 淡黄色粉末。EI-MS m/z:392. 1
［M］+，分子式为 C20H24O8。
1H-NMＲ (400 MHz，
CD3OD)δ:6. 71(1H，t，J = 5. 7 Hz，H-3)，6. 25(1H，
d，J = 3. 5 Hz，H-13a) ，5. 59(1H，d，J = 2. 9 Hz，H-
13b) ，5. 56(1H，ddd，J = 8. 2，3. 8 Hz，H-8) ，4. 90
(1H，d，J = 8. 2 Hz，H-6) ，4. 28(1H，d，J = 4. 9 Hz，H-
2) ，4. 24(2H，d，J = 5. 8 Hz，H-4) ，3. 60(1H，dd，J =
7. 9，3. 7 Hz，H-7) ，3. 32(1H，s，H-3) ，2. 86(1H，dd，
J = 14. 8，7. 7 Hz，H-9a) ，2. 76(1H，d，J = 4. 9 Hz，H-
14a) ，2. 69(1H，d，J = 4. 9 Hz，H-14b) ，2. 49(1H，
dd，J = 11. 3，8. 6 Hz，H-5) ，2. 13(1H，dd，J = 14. 8，
8. 8 Hz，H-9b) ，1. 76(3H，s，5-CH3)，1. 65(1H，dd，J
= 8. 6，4. 6 Hz，H-1) ，1. 63(3H，s，15-CH3);
13C-NMＲ
(100 MHz，CD3OD)δ:51. 1(C-1)，73. 7(C-2) ，66. 0
(C-3) ，66. 9(C-4) ，51. 5(C-5) ，78. 5(C-6) ，49. 7(C-
7) ，69. 0(C-8) ，37. 1(C-9) ，56. 8(C-10) ，136. 1(C-
11) ，171. 0(C-12) ，122. 9(C-13) ，57. 2(C-14) ，18. 8
(C-15) ，168. 1(C-1) ，128. 5(C-2) ，143. 1(C-3) ，
59. 7(C-4) ，12. 6(C-5)。以上数据与文献〔3〕报道
对照基本一致，故鉴定该化合物为 eupalinilide G。
化合物 2: 淡黄色粉末。EI-MS m/z:376. 2
［M］+，分子式为 C20H24O7。
1H-NMＲ(400 MHz，DM-
SO-d6)δ:6. 58(1H，td，J = 5. 9，1. 4 Hz，H-3)，6. 15
(1H，d，J = 3. 2 Hz，H-13a) ，5. 59(1H，d，J = 3. 1 Hz，
H-13b) ，5. 40(1H，td，J = 8. 3，4. 1 Hz，H-8) ，4. 97
(1H，dd，J = 10. 9，5. 6 Hz，H-3) ，4. 67(1H，td，J =
10. 9，8. 1 Hz，H-6) ，4. 48(1H，s，H-2) ，4. 09(2H，s，
H-4) ，3. 53(1H，td，J = 7. 4，3. 5 Hz，H-7) ，2. 77
(1H，d，J = 4. 8 Hz，H-14) ，2. 76(1H，dd，J = 11. 0，
8. 3 Hz，H-5) ，2. 73(1H，d，J = 4. 8 Hz，H-14b) ，2. 62
(1H，dd，J = 14. 6，8. 3 Hz，H-9a) ，2. 07(2H，dd，J =
14. 6，8. 4 Hz，H-9b) ，1. 88(3H，s，5-CH3)，1. 77
(1H，dd，J = 8. 0，6. 7 Hz，H-1) ，1. 65(3H，d，J = 1. 2
Hz，15-CH3);
13C-NMＲ(100 MHz，DMSO-d6)δ:51. 9
(C-1)，75. 2(C-2) ，130. 0(C-3) ，145. 3(C-4) ，54. 5
(C-5) ，80. 7(C-6) ，47. 0(C-7) ，67. 4(C-8) ，35. 6(C-
9) ，56. 2(C-10) ，134. 4(C-11) ，169. 0(C-12) ，122. 2
(C-13) ，55. 2(C-14) ，17. 2(C-15) ，166. 0(C-1) ，
125. 7(C-2) ，143. 4(C-3) ，58. 0(C-4) ，12. 3(C-
5)。以上数据与文献〔4〕报道对照基本一致，故鉴定
该化合物为 8β-(4-hydroxytigloyloxy)-5-desoxy-8-
desacyleuparotin。
化合物 3:白色粉末。EI-MS m/z:356. 3［M］+，
分子式为 C20 H36 O5。
1H-NMＲ(400 MHz，CDCl3)δ:
5. 70(1H，t，J = 6. 9 Hz，H-2)，5. 19(1H，t，J = 6. 7
Hz，H-10) ，5. 09(1H，t，J = 6. 2 Hz，H-6) ，4. 20(2H，
d，J = 6. 9 Hz，H-1) ，4. 08(2H，s，H-17) ，3. 87(1H，
m，H-13) ，3. 33(1H，d，J = 6. 9 Hz，H-14) ，2. 62(1H，
d，J = 13. 7 Hz，H-12) ，2. 12(2H，m，H-4) ，2. 10(2H，
m，H-5) ，2. 08(2H，m，H-9) ，2. 06(1H，m，H-12) ，
2. 05(2H，m，H-8) ，1. 66(3H，s，18-CH3)，1. 58(3H，
·3871·Journal of Chinese Medicinal Materials 第 39 卷第 8 期 2016 年 8 月
s，16-CH3)，1. 30(3H，s，19-CH3)，1. 26(3H，s，20-
CH3);
13C-NMＲ(100 MHz，CDCl3)δ:58. 7(C-1)，
124. 5(C-2) ，142. 2(C-3) ，28. 1(C-4) ，27. 0(C-5) ，
124. 8(C-6) ，135. 6(C-7) ，39. 3(C-8) ，25. 8(C-9) ，
129. 2(C-10) ，131. 8(C-11) ，44. 5(C-12) ，69. 3(C-
13) ，78. 8(C-14) ，73. 0(C-15) ，15. 7(C-16) ，66. 2
(C-17) ，16. 0(C-18) ，25. 5(C-19) ，26. 2(C-20)。以
上数据与文献〔5〕报道对照基本一致，故鉴定该化合
物为 3-(hydroxymethyl)-1，13，14，15-tetrahydroxy-7，
11，15-trimethyl-2，6，10-hexadecatriene。
化合物 4:白色粉末。EI-MS m/z:398. 3［M］+，
分子式为 C20 H38 O6。
1H-NMＲ(400 MHz，CD3OD)δ:
5. 61(1H，t，J = 6. 9 Hz，H-2)，5. 21(1H，m，H-10) ，
5. 09(1H，m，H-6) ，4. 71(1H，d，J = 8. 4 Hz，H-14) ，
4. 15(2H，d，J = 6. 7 Hz，H-1) ，4. 01(2H，s，H-17) ，
3. 87(1H，m，H-13) ，2. 24(1H，m，H-12) ，2. 13(2H，
m，H-9) ，2. 12(2H，m，H-4) ，2. 10(3H，s，14-OCH3)，
2. 08(2H，m，H-5) ，2. 05(2H，m，H-8) ，2. 04(1H，m，
H-12) ，1. 62(3H，s，18-CH3)，1. 57(3H，s，16-CH3)，
1. 29 (3H，s，19-CH3)，1. 21 (3H，s，20-CH3 );
13C-NMＲ(100 MHz，CD3OD)δ:59. 2(C-1)，125. 8
(C-2) ，142. 5(C-3) ，29. 1(C-4) ，27. 1(C-5) ，125. 0
(C-6) ，136. 6(C-7) ，40. 7(C-8) ，26. 9(C-9) ，128. 4
(C-10) ，132. 9(C-11) ，42. 1(C-12) ，73. 2(C-13) ，
79. 5(C-14) ，73. 8(C-15) ，16. 1(C-16) ，66. 5(C-
17) ，16. 3(C-18) ，26. 3(C-19) ，28. 2(C-20) ，21. 3
(14-CH3)，172. 2(-CO)。以上数据与文献
〔5〕报道对
照基本一致，故鉴定该化合物为 3-(hydroxymethyl)-
1，13，15-trihydroxy-7，11，15-trimethyl-2，6，10-hexa-
decatrien-14-yl acetate。
化合物 5:黄色粉末。EI-MS m/z:316. 0［M］+，
分子式为 C16 H12 O7。
1H-NMＲ(400 MHz，CD3OD)δ:
7. 37(1H，s，H-6)，7. 35(1H，s，H-2) ，6. 89(1H，d，
J = 6. 9 Hz，H-3) ，6. 50(1H，s，H-3) ，6. 48(1H，s，H-
8) ，3. 86 (3H，s，6-OCH3);
13C-NMＲ (100 MHz，
CD3OD)δ:166. 1(C-2)，103. 2(C-3) ，183. 9(C-4) ，
155. 0(C-5) ，133. 4(C-6) ，153. 4(C-7) ，96. 0(C-8) ，
161. 6(C-9) ，105. 4(C-10) ，123. 3(C-1) ，120. 2(C-
2) ，116. 7 (C-3) ，150. 6 (C-4) ，147. 1 (C-5) ，
114. 0(C-6) ，60. 8(-OCH3)。以上数据与文献
〔6〕报
道对照基本一致，故鉴定该化合物为 eupafolin。
化合物 6:白色粉末。EI-MS m/z:404. 1［M］+;
分子式为 C22 H28 O7。
1H-NMＲ(400 MHz，CD3OD)δ:
6. 43(1H，qt，J = 7. 3，1. 4 Hz，H-3)，6. 35(2H，d，J
= 2. 2 Hz，H-13) ，5. 89(1H，d，J = 10. 7 Hz，H-6) ，
5. 26(1H，m，H-3) ，5. 24(1H，s，H-8) ，5. 22(1H，m，
H-1) ，5. 21(1H，m，H-5) ，4. 17(2H，m，H-4) ，3. 21
(1H，s，H-7) ，2. 74(1H，d，J = 13. 5 Hz，H-9a) ，2. 71
(1H，d，J = 12. 1 Hz，H-2a) ，2. 57(1H，d，J = 13. 8
Hz，H-2b) ，2. 37 (1H，s，H-9b) ，2. 09 (3H，s，3-
OCH3)，1. 85(3H，s，H-15) ，1. 84(3H，s，H-14) ，
1. 80(3H，s，H-5) ;13C-NMＲ(100 MHz，CD3OD)δ:
126. 6(C-1)，44. 2(C-2) ，78. 8(C-3) ，137. 7(C-4) ，
127. 4(C-5) ，77. 7(C-6) ，48. 4(C-7) ，80. 2(C-8) ，
30. 1(C-9) ，136. 9(C-10) ，139. 5(C-11) ，172. 1(C-
12) ，125. 5(C-13) ，19. 7(C-14) ，23. 1(C-15) ，166. 9
(C-1) ，132. 9(C-2) ，140. 1(C-3) ，63. 4(C-4) ，
15. 8(C-5) ，21. 4(-CH3)，171. 4(-CO)。以上数据
与文献〔7〕报道对照基本一致，故鉴定该化合物为
hiyodorilactone B。
4 细胞毒活性研究
本实验中，利用 MTT实验作为抗肿瘤活性评价
手段，测试从华泽兰乙酸乙酯部位分离得到化合物
1 ～ 6 的活性。
4. 1 方法
4. 1. 1 细胞培养: 人乳腺癌细胞(MD-MAB-231)、
人胃癌细胞(HGC-27)、小鼠黑色素瘤细胞(B16)、
人肺癌细胞(A549)、人结肠癌细胞(Caco-2) 用ＲP-
MI-1640 培养液( 另加2. 0 g /L HEPES、2. 0 g /L
NaHCO3、100 U /mL 青霉素、100 μg /mL 链霉素和
10%胎牛血清) ，于CO2孵箱中 37 ℃、5 % CO2饱和
湿度下培养。细胞单层长到 80 %时，用 0. 25 %的
胰蛋白酶消化，传代。
4. 1. 2 MTT 实验: 培养细胞按1 × 105个 /mL 的密
度种植于 96 孔培养板中，37 ℃，5% CO2培养箱中
培养 12 h，将各个样品配制成 4 个浓度梯度(50、25、
12. 5、6. 25 μg /mL) ，加入到96 孔培养板中，每个浓
度梯度设 4 个复孔，并设置空白孔( 含细胞的培养
液 + MTT + DMSO) 及调零孔( 培养液+ MTT + DM-
SO)。继续培养 24 h 后，于每孔中加入 20 μL 的
MTT试剂(5 mg /mL) 显色，继续培养4 h，吸出孔内
的培养液，于每孔中加入 150 μL 的 DMSO，震荡摇
匀 10 min，使结晶物充分溶解。酶标仪 492 nm波长
下测其 OD值，并计算抑制率，抑制率 =(1 －药物孔
OD /空白孔 OD)× 100%。
4. 2 结果 如表 1 所示，化合物 1、2 对 MD-MAB-
231、HGC-27、B16、A549 及 Caco-2 细胞均有一定的
抑制作用，但化合物 2 对 HGC-27 和 B16 细胞有相
对较好的选择性，且化合物 2 对 HGC-27 细胞的抑
制作用更加明显。
·4871· Journal of Chinese Medicinal Materials 第 39 卷第 8 期 2016 年 8 月
表 1 化合物 1 ～6 对 5 种肿瘤细胞株的 IC50(μg /mL)
细胞株 1 2 3 4 5 6
B16 12. 68 5. 53 ＞ 100 46. 08 ＞ 100 ＞ 100
231 57. 23 35. 86 58. 15 49. 02 12. 04 69. 34
A549 50. 75 40. 87 ＞ 100 50. 74 ＞ 100 ＞ 100
HGC-27 19. 20 4. 29 ＞ 100 38. 04 ＞ 100 ＞ 100
Caco-2 37. 27 22. 67 ＞ 100 ＞ 100 ＞ 100 ＞ 100
参 考 文 献
［1］ 国家中医药管理局《中华本草》编委会 . 中华本草
［M］．第七册 . 上海:上海科学技术出版社，1999.
［2］ Liu PY，Liu D，Li WH，et al． Chemical constituents of
plants from the genus Eupatorium(1904-2014) ［J］． Chem
Biodivers，2015，12(10) :1481-1515.
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·5871·Journal of Chinese Medicinal Materials 第 39 卷第 8 期 2016 年 8 月