全 文 ：＊基金项目：广西壮族自治区中医药管理局项目（Ｎｏ．ＧＺＺＣ１１３４、
ＧＺＺＣ１４－５１）
△通信作者，Ｅ－ｍａｉｌ：ｙｙｆ＿６９＠１６３．ｃｏｍ
１广西医科大学第一附属医院检验科细菌室
２广西医科大学硕士研究生
３桂林医学院药学院实习生　桂林　５４１００４
收稿日期：２０１４－０５－１２
广西地桃花水提物与抗菌药物对Ｇ－杆菌的体外联合抗菌作用＊
黄振光　李　萌１　杨玉芳△　覃　巧２　杨莎莎３　黄小理２　刘新文２
（广西医科大学第一附属医院药学部　南宁　５３００２１）
摘要　目的：探讨广西地桃花水提物与临床常用抗菌药物对Ｇ－杆菌的体外联合抗菌作用。方法：采用试管二倍稀释法分别测
定地桃花水提物，以及哌拉西林钠／他唑巴坦钠、硫酸阿米卡星、盐酸左氧氟沙星单药时对大肠杆菌、铜绿假单胞菌的最小抑菌
浓度（ＭＩＣ），采用试管棋盘法测定地桃花水提物分别与以上抗菌药物联用对大肠杆菌、铜绿假单胞菌的 ＭＩＣ，并计算联合指数
（ＦＩＣ）。结果：地桃花水提物分别与哌拉西林钠／他唑巴坦钠、硫酸阿米卡星、盐酸左氧氟沙星合用，对大肠杆菌的ＦＩＣ分别为
０．５３、０．７５、０．７５，０．５＜ＦＩＣ≤１，即两种药物合用，对大肠杆菌的抗菌作用有相加作用；对铜绿假单胞菌的ＦＩＣ分别为２、１．８４、
２，１＜ＦＩＣ≤２，即两种药物合用对铜绿假单胞菌为无关作用。结论：地桃花水提物分别与哌拉西林钠／他唑巴坦钠、阿米卡星、
左氧氟沙星合用，对大肠杆菌、铜绿假单胞菌的体外联合抗菌作用分别为相加、无关作用。
关键词　地桃花水提物；大肠杆菌；铜绿假单胞菌；抗菌药物；联合抗菌
中图分类号：Ｒ９６５　　　文献标志码：Ａ　　　文章编号：１００５－９３０Ｘ（２０１４）０５－０７４１－０２
　　铜绿假单胞菌、大肠杆菌是医院获得性感染中最常见的
Ｇ－杆菌之一，而且随着抗菌药物的广泛应用，由这两种细菌
引起的感染及其耐药性日趋严重［１］。不少研究表明，中草药
在抗菌方面有其自身的优势，但有关中草药与抗菌药物的联
合抗菌研究少见报道。体外抗菌研究发现，地桃花水提物对
铜绿假单胞菌、大肠埃希菌均有一定的抗菌作用［２］，但未见
其与临床常用抗菌药物的联合抗菌报道。因此，本文探讨广
西地桃花水提物与抗菌药物对这两种Ｇ－杆菌的体外联合抗
菌作用，现报道如下。
１　材料与方法
１．１　材料
１．１．１　药物与试剂：地桃花药材于２０１２年９月采自广西武
鸣县，经广西中医药大学蔡毅教授鉴定为为锦葵科植物肖梵
天花Ｕｒｅｎａ　Ｌｏｂａｔａ　Ｌ．的干燥地上部分，注射用哌拉西林钠／
他唑巴坦钠２．２５ｇ（中诺药业有限公司，批号：０３７１２０６０３），
硫酸阿米卡星注射液（阿米卡星）２ｍＬ：０．２ｇ（徐州莱恩药业
有限公司，批号：１２０３２２１），盐酸左氧氟沙星注射液（左氧氟
沙星）２ ｍＬ：０．２ｇ（扬 子 江 药 业 集 团 有 限 公 司，批 号：
１２０７１５３１），Ｍｕｅｌｅｒ－Ｈｉｎｔｏｎ肉汤培养基５００ｇ（北京陆桥技术
有限责任公司，批号：１２０３１３２），ＭＨ 琼脂平板（郑州安图绿
科生物工程有限公司，批号２０１２１０１５）。
１．１．２　供试菌株：大肠杆菌 ＡＴＣＣ２５９２２和铜绿假单胞菌
ＡＴＣＣ２７８５３，由广西壮族自治区人民医院检验科提供。
１．１．３　仪器：ＦＡ２００４Ａ精密电子天平（上海精天电子仪器
有限公司，１／１０万）；ＰＹＸ－ＤＨＳ－５０Ｘ６５－ＢＳ隔水式电热恒温培
养箱（上海跃进医疗机械厂）；ＬＤＺＸ－３０ＫＢＳ立式压力蒸汽灭
菌器（上海申安医疗器械厂）；ＨＦｓａｆｅ－１８００ＴＥ生物安全柜
（上海力申科学仪器有限公司）。
１．２　方法
１．２．１　地桃花水提物的制备：将药材剪碎，晒干称重，加１０
倍量蒸馏水浸泡３０ｍｉｎ后，加热煮沸１ｈ，用纱布滤过，药渣
再加蒸馏水煮沸１ｈ，将两次滤液合并并浓缩至相当于生药
的２ｇ／ｍＬ，置４℃冰箱保存备用。
１．２．２　药物原液的配制：精密称取哌拉西林钠／他唑巴坦钠
３．２０ｍｇ，用灭菌水配制成６４ｍｇ／Ｌ的药液，药液需现配现
用。分别精密吸取硫酸阿米卡星、盐酸左氧氟沙星各３２μＬ，
用灭菌水配制成６４ｍｇ／Ｌ的药液，置４℃冰箱保存备用。
１．２．３　Ｍ－Ｈ 肉汤的制备：称取 ＭＨ 肉汤干粉５ｇ加入
２００ｍＬ蒸馏水溶解，分装于小试管，每管１ｍＬ，于１２１．５℃
高压灭菌２０ｍｉｎ后，置４℃冰箱保存备用。
１．２．４　菌悬液的制备：在０．５标准麦式比浊管中加入２ｍＬ
左右肉汤，用棉签在血培养皿上沾取少量细菌接种于 Ｍ－Ｈ
肉汤，使浊度至０．５麦式浊度单位（１．５×１０８　ＣＦＵ／ｍＬ），再用
肉汤按１∶３０倍稀释作为接种物（约５×１０６　ＣＦＵ／ｍＬ）。
１．２．５　单药 ＭＩＣ的测定：采用试管二倍稀释法［３］测定单药
最小抑菌浓度（ＭＩＣ）。具体操作：①取已灭菌装有１ｍＬ　Ｍ－
Ｈ肉汤带胶塞的试管１２支，编号１～１２；第一支试管加入抗
菌药物１ｍＬ，混匀，倍比稀释至第１０管。第１０管混匀后取
出１ｍＬ弃去，使成１∶２∶４∶８∶１６……各种浓度。②１～１０
管中分别加入０．１ｍＬ上述制备好的菌悬液，第１１管不加药
液加菌液，作为阳性对照，第１２管加药液不加菌作为阴性对
照。上述各试管盖塞摇匀后在３５℃培养１８～２４ｈ后观察结
果，以不出现肉眼可见生长的最低药物浓度为 ＭＩＣ。以上实
验重复３次，ＭＩＣ取均值。
１．２．６　联合药敏试验：采用试管棋盘法测定联合 ＭＩＣ，根据
上述“单药 ＭＩＣ的测定”结果，按各药对应各菌株的 ＭＩＣ来
确定药物稀释浓度，药物最高浓度为其单药 ＭＩＣ的４倍，依
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广 西 医 科 大 学 学 报
ＪＯＵＲＮＡＬ　ＯＦ　ＧＵＡＮＧＸＩ　ＭＥＤＩＣＡＬ　ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ
　２０１４Ｏｃｔ；３１（５）
次用肉汤倍比稀释成２、１、１／２、１／４、１／８、１／１６ＭＩＣ进行７×７
联合。具体操作：在试管架上纵横各７排小试管，地桃花水
提物以纵列方式（浓度低到高），硫酸阿米卡星以横列方式
（浓度低到高），将各种不同浓度的药液０．５ｍＬ加入各试管
中。横排和纵排的第一管为无药对照管，第１排为单药对照
管。加完药液后，每管加入０．１ｍＬ菌悬液，振摇均匀后在３５
℃培养１８～２４ｈ后观察结果。细菌生长指标同单药药敏试
验，无菌生长的最低浓度为联用时的 ＭＩＣ。上述步骤重复３
次，ＭＩＣ取均值。ＦＩＣ指数按公式ＦＩＣ＝（ＭＩＣ甲药联用／
ＭＩＣ甲药单用）＋（ＭＩＣ乙药联用／ＭＩＣ乙药单用）计算。ＦＩＣ≤０．５，为协
同作用；０．５＜ＦＩＣ≤１，为相加作用；１＜ＦＩＣ≤２，为无关作用；
ＦＩＣ＞２，为拮抗作用。
２　结　果
２．１　单药 ＭＩＣ试验：地桃花水提物，以及临床常用抗菌药物
对大肠杆菌、铜绿假单胞菌的 ＭＩＣ，其中地桃花水提物对大
肠杆 菌 和 铜 绿 假 单 胞 菌 的 ＭＩＣ 分 别 为 ０．５ｇ／ｍＬ 和
０．２５ｇ／ｍＬ，见表１。
表１　地桃花水提物及３种抗菌药物对大肠杆菌和铜绿假单胞菌的 ＭＩＣ
菌株
地桃花水提物＊
（ρＢ／ｇ·ｍＬ
－１）
哌拉西林钠／他唑巴
坦钠（ρＢ／ｍｇ·Ｌ
－１）
阿米卡星
（ρＢ／ｍｇ·Ｌ
－１）
左氧氟沙星
（ρＢ／ｍｇ·Ｌ
－１）
Ｅ．ｃｏｌｉ　 ０．５　 ２　 ０．５　 ０．２５
Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　 ０．２５　 ２　 ２　 ０．５
２．２　体外联合药敏试验结果：地桃花水提物与临床常用抗
菌药物对大肠杆菌、铜绿假单胞菌的体外联合抗菌结果，见
表２、表３。
　　从表２和表３中可知，地桃花水提物分别与哌拉西林
钠、阿米卡星、左氧氟沙星合用对铜绿假单胞菌的体外联合
抗菌效应均为无关作用；对大肠杆菌的体外联合抗菌效应均
为相加作用。
表２　地桃花水提物与３种抗菌药物对大肠杆菌的体外联合实验
抗菌药物
３种抗菌药物
（ρＢ／ｍｇ·Ｌ
－１）
地桃花水提物
（ρＢ／ｇ·ｍＬ
－１）
单药 ＭＩＣ 联合 ＭＩＣ 单药 ＭＩＣ 联合 ＭＩＣ
ＦＩＣ 结果判定
哌拉西林钠／
他唑巴坦钠 ２　 １　 ０．５　 ０．０１５　６　 ０．５３ 相加作用
阿米卡星 ０．２５　 ０．０６２　５　 ０．５　 ０．２５　 ０．７５ 相加作用
左氧氟沙星 ０．２５　 ０．０６２　５　 ０．５　 ０．２５　 ０．７５ 相加作用
表３　地桃花水提物与３种抗菌药物对铜绿假单胞菌的体外联合实验
抗菌药物
３种抗菌药物
（ρＢ／ｍｇ·Ｌ
－１）
地桃花水提物
（ρＢ／ｇ·ｍＬ
－１）
单药 ＭＩＣ 联合 ＭＩＣ 单药 ＭＩＣ 联合 ＭＩＣ
ＦＩＣ 结果判定
哌拉西林钠／
他唑巴坦钠 ２　 １　 ０．２５　 ０．２５　 ２ 无关作用
阿米卡星 ２　 １．６７　 ０．２５　 ０．２５　 １．８４ 无关作用
左氧氟沙星 ０．５　 ０．５　 ０．２５　 ０．２５　 ２ 无关作用
３　讨　论
　　目前，临床上病原菌对抗菌药物的耐药现象越来越严
重，而联合用药可以减少细菌耐药。研究表明，不少中草药
具有抗菌效果，但体外抑菌浓度比较高，而目前中草药在体
内较难达到这么高的血药浓度。因此，探讨中草药和抗菌药
物的联合抗菌效果有重要的现实意义。
　　地桃花（Ｕｒｅｎａ　ｌｏｂａｔａ　Ｌ．）主产于广西、福建、云南、四川、
贵州等地，具有祛风利湿、活血消肿、清热解毒功效，主治感
冒发热、肺热咳嗽、急性扁桃体炎、痢疾、痈肿等疾病［４］。据
报道，地桃花根或叶的醇提取物具有抗菌作用［５］，对多种临
床常见致病菌有抗菌作用，但有关其与抗菌药物的联合抗菌
作用的研究仍是空白。本实验结果表明，广西地桃花水提物
分别与哌拉西林钠、阿米卡星、左氧氟沙星合用，对铜绿假单
胞菌的体外联合抗菌效应均为无关作用，而对大肠杆菌的体
外联合抗菌效应均为相加作用，其机制有待进一步研究。
参考文献：
［１］　李　红，伊惠霞．２００７～２０１１年铜绿假单胞菌的构成比
及耐药变迁［Ｊ］．中国抗生素杂志，２０１２，３７（７）：５５８－
５６０．
［２］　陈　勇，谢　臻，韦　韬，等．地桃花水提物的体外抗菌
实验研究［Ｊ］．亚太传统医药，２０１１，７（１０）：２９－３０．
［３］　李仪奎．中药药理实验方法学［Ｍ］．上海：上海科学技术
出版社，２００５：７５６－７５８．
［４］　国家中医药管理局《中华本草》编委会．中华本草（第十
四卷）［Ｍ］．上海：上海科学技术出版社，１９９９：３７２－３７３．
［５］　Ｍａｚｕｍｄｅｒ　ＵＫ，ＭａｌａｙａＧｕｐｔａ，Ｍａｎｉｋａｎｄａｎ　Ｌ，ｅｔ　ａｌ．Ａｎ－
ｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　Ｕｒｅｎａ　ｌｏｂａｔａ　ｒｏｏｔ［Ｊ］．Ｆｉｔｏｔｅｒａｐｉａ，
２００１，７２：９２７－９２９．
·２４７· 广西医科大学学报　２０１４Ｏｃｔ；３１（５）