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侵染朱槿的木尔坦棉花曲叶病毒及其卫星DNA全基因组结构特征



全 文 :第 24卷 第 1期
2 0 0 8 年 1 月             
病  毒  学  报
CHINESE JOURNA L OF VIRO LOGY
             Vol.24  No.1
Janu ary  2008
侵染朱槿的木尔坦棉花曲叶病毒及其卫星 DNA全基因组结构特征
毛明杰1 , 2 ,何自福1 ,虞皓1 ,李华平2
(1.广东省农业科学院 植物保护研究所 , 广州 510640;2.华南农业大学 植物病毒研究室 , 广州 510642)
摘要:从广州朱槿上分离到病毒分离物 G6 ,全序列测定结果表明 , G6 DNA-A 全长为 2 737 个核苷酸。序列比较显
示 , G6 DNA-A 与木尔坦棉花曲叶病毒(CLCuMV)各分离物的同源率均大于 89%,其中与 C LCuM V-[ 62] 的同源
率最高(96.1%), 与拉贾斯坦棉花曲叶病毒(CLCuRV)的同源率 87.1%~ 89.8%, 而与其他菜豆金色花叶病毒属
病毒同源率均在 87%以下。 DNA-A 系统进化关系分析显示 , G6与 CLCuMV 各分离物的亲缘关系最近 ,聚在一起
形成一个分支 ,而与其他几种双生病毒的亲缘关系相对较远。利用 DNAβ 特异引物 β01 和 β02 , 从 G6 中扩增到卫
星 DNA 分子(DNAβ)。序列分析结果表明 , G6 DNAβ 全长 1 346 个核苷酸 , 推导其互补链上编码一个 ORF(C1)。
序列比较结果表明 , G6 DNAβ 与 CLCuMV DNAβ 的同源率最高(92.1%), 与 CLCuRV DNAβ 的同源率为 88.7%,
而与其他已报道的 DNAβ 的同源率均在 80%以下。 DNAβ 系统进化关系分析显示 , G6 DNAβ 与 CLCuMV DNAβ
形成一个独立的分支 ,再与 CLCu RV 及 M YVV-[ Y47] 的 DNAβ 形成一个较大分支。从上述研究结果可以得出 , 侵
染广东朱槿的病毒分离物 G6 应该是 C LCuM V一个分离物。
关键词:木尔坦棉花曲叶病毒;朱槿;卫星 DNAβ;Begomov irus
中图分类号:S432.4+1  文献标识码:A  文章编号:1000-8721(2008)01-0064-05
收稿日期:2007-03-20;修回日期:2007-09-30
基金项目:国家自然科学基金(30670085)和广东省自然科学基
金(031992;05103387)资助
作者简介:毛明杰(1981-), 男 , 河南人 , 硕士 ,研究方向为植物
病毒学。
通迅作者:何自福(1966-),男 , 安徽人 , 博士 , 副研究员 , 研究
方向植物病毒学研究 T el:86-20-87597476;Fax:86-20-85201471;
E-mail:hezf@gd ppri.com
  烟粉虱传双生病毒(whitefly-t ransmit ted gemi-
niviruses)引起的病毒病是热带 、亚热带地区作物上
重要病害 ,已在美洲 、非洲 、亚洲和澳大利亚等地区
造成了严重经济损失 ,该病毒是一类具有孪生颗粒
形态的单链环状 DNA 植物病毒 , 属双生病毒科
(Geminiv iridae) 菜 豆 金 色 花 叶 病 毒 属
(Begomov irus), 其基因组由 2个组分(DNA-A 和
DNA-B)组成 ,每个组分的大小为 2.5 ~ 2.8 kb;部
分病毒为单组分 ,基因组只含 DNA-A ,大小约 2.8
kb
[ 1] 。近年来的研究还发现 ,部分单组分菜豆金色
花叶病毒属病毒还伴随着卫星分子(DNAβ),该分
子是症状相关因子 ,但其复制 、包装 、移动和传播等
依赖辅助病毒的 DNA-A[ 2-6] 。目前 ,该类病毒已在
多个国家的菜豆 、番茄 、棉花 、木薯和烟草上造成严
重危害[ 7] ,我国广西 、云南 、海南和广东等地的烟草 、
番茄和番木瓜等作物上 ,也先后发现多种烟粉虱传
双生病毒的严重为害[ 8-12] 。
朱槿 (Hibiscus rosa-sinensis L inn.)又称扶
桑 、火红花 、假牡丹和大红花等 ,属锦葵科黄槿属常
绿灌木 ,原产于我国云南 、广东及南美 ,目前已被选
为马来西亚国花和我国南宁市市花。该植物在华南
地区几乎终年开花 ,是重要的园林花卉植物 。但近
期广州市部分地区的朱槿植株表现全株曲叶或黄化
曲叶症状 ,分子检测及室内试验结果表明 ,该病害是
由烟粉虱传双生病毒侵染引起的 。为了进一步明确
引起该病害的病毒种类 ,我们对其代表分离物的基
因组进行了克隆和序列分析 。
材料与方法
1 毒源 病毒分离物 G6 分离自广州市的朱槿 , 病株表现为
叶片叶脉增大 、叶片向上卷曲(曲叶)、黄化等症状。
2 DNA提取  采用 NaOH 法提取病株总 DNA[ 8] , 作为
PC R模板。
3 PCR 扩增 、克隆和序列测定 利用烟粉虱传双生病毒通
用简并引物 AV 494和 CoPR进行 PCR扩增[ 13 , 14] ,获得 DNA-
A 约 570 bp 片段 , 并进行克隆及序列测定;根据测出的序列
再设计特异引物 G6F 和 G6R扩增 DNA-A 近全长序列 。特
异引物序列分别为:G6F:5′-GCAGGAAAATACGAGAAT-
CA TACGG-3′(921 ~ 945nt), G6R:5′-AAC TTCTTGAC-
CAAAGCCTGTTCCT-3′(850~ 886nt)。
应用引物 β01/β02[ 15]扩增 DNAβ 全长序列 ,进行克隆和
序列测定 , 再根据测得的序列设计一对反向引物 β03/β04 , 以
DOI :10.13242/j.cnki.bingduxuebao.001881
扩增包括 β01/β02区在内约 1 000 bp 的片段。引物序列分
别为:β03:5′-GACCCAAACACTTTCAACCCATTA-3′(83
~ 106 nt), β04:5′-AT TT GATGAGCGATGGTGACTTGG-
3′(426 ~ 449 nt)。
上述各 PCR产物均分别分离纯化后, 克隆到 pGEM-T 载
体(Promega公司)上。引物由上海生工生物技术工程服务有
限公司合成 ,序列测定由英骏生物技术有限公司完成。
4 序列分析   通过上述方法分别获得 G6 DNA-A 和
DNAβ 全序列。利用 BLAS T 程序对该序列进行同源率检
索;利用 DNAStar MegA lign 5.01(DNAS TAR Inc.)Clustal
W方法进行多序列比较分析;系统进化树的构建采用 DNA-
M AN Version 5.2.9(Lynnon biosoft)的邻近相连法(Neigh-
bo r-Joining me thod)。
结  果
1 G6基因组 DNA-A全序列及其特征
利用烟粉虱传双生病毒特异简并引物 AV494
和 CoPR ,PCR扩增得到一条预期大小约 570 bp 的
特异片段 。在对该片段进行克隆和序列测定的基础
上 ,再设计一对特异引物 G6F 和 G6R , PCR扩增出
一条约 2.7 kb的特异片段 ,并对其进行克隆和序列
分析 ,健康对照均无条带出现。2个特异片段序列
重叠部分核苷酸序列完全一致 ,拼接后得到 G6 全
序列长为 2737nt(GenBank登录号为:EF465535)。
G6 DNA-A 具有 Begomovirus 病毒基因组典
型特征 , 为闭合环状单链 DNA , 推导编码 6 个
ORFs ,分别是位于病毒链上的 AV1 基因(276 ~
1 046 nt)、AV 2基因(116 ~ 481 nt)、及位于互补链
上的 AC1基因(1 495 ~ 2 586 nt)、AC2基因(1 146
~ 1 598 nt)、AC3基因(1 049 ~ 1 453 nt)和 AC4基
因(2 127 ~ 2 429 nt);在AV 2与 AC1之间有266 nt
(2 587 ~ 115 nt)的非编码区(Intergenic region ,
IR),该区域中含有病毒复制和转录所需的调控元
件 ,包括 11 nt茎和 11 nt环的茎环结构(2 717 ~ 13
nt)、保守的 TAA TAT TAC序列等 。
2 G6 DNA-A与其它双生病毒的同源率比较分析
BLAST 检索结果表明 ,与 G6 DNA-A 有较高
同源率的病毒有 20种(暂定种或分离物),它们均为
Begomov irus 病毒 , 而且其中 11 种是 Cotton lea f
curl Mul tan virus(CLCuMV)的不同分离物 。进一
步比较结果(表 1)显示:G6与 CLCuMV 各分离物
的 DNA-A 同源率均大于 89%, 其 AV1 、AV2 、
AC1 、AC2 、AC3 和 AC4 基因的同源率分别为
88.5% ~ 98.1%、 92.4% ~ 97.5%、 88.5% ~
96.1%、 96.2% ~ 98.0%、 95.9% ~ 98.3%和
91.9%~ 97.4%(表中数据未显示),而编码的 6个
蛋白质氨基酸序列同源率依次为 95.3%~ 98.4%、
93.2% ~ 97.8%、 88.1% ~ 95.9%、 92.0% ~
95.3%、95.5%~ 98.5%和 83.0%~ 94.0%(表 1)。
在这些分离物中 ,G6 与 CLCuMV-[ 62]的同源率最
高 ,为 96.1%,二者的 AV1 、AV2 、AC1 、AC2 、AC3
和 AC4 基因的同源率分别为 97.8%、97.8%、
95.1%、97.8%、98.0%和 97.4%(表中数据未显
示),即使 Begomov irus 基因组中最易变异的 IR区
同源率也达 91.7%;而编码的 6个蛋白质氨基酸序
列同源率为 94.0%~ 98.5%(表 1)。
从 DNA-A 系统进化关系树(图 1)可见 , G6与
CLCuMV各分离物的亲缘关系最近 ,聚在一起形成
一个分支 ,而与其他几种双生病毒的亲缘关系相对
较远。
3 病毒伴随的 DNAβ分子结构及同源率比较
应用 DAN β的特异引物 β01和 β02 ,PCR扩增
到一条约 1.3 kb的特异片段 ,而健康对照无任何条
带;克隆测序后得到 G6 DNAβ 全序列。反向引物
β03/β04 PCR扩增得到一条 1 026 bp的特异片段 ,
经序列测定表明 ,该片段与 β01/β02扩增获得的片
段序列相重叠 ,二者除 2 nt 差异(是由引物 β01和
β02引入 ,位于引物近 5′端)外 ,其余部分序列完全
一致。因此 , 拼接后获得 G6 DNAβ 全长序列为
1 346 nt(GenBank 登录号为:EF465536)。该序列
为闭合环状单链 DNA ,推导在其互补链上有一个
ORF(193 ~ 549 nt),编码含 118个氨基酸的 C1蛋
白 ,在 764 ~ 994 nt位核苷酸之间富含 A ,在 1 246
~ 15 nt位核苷酸含有一个长为 115 nt的保守区域
(Conse rved region ,CR), CR 区含有双生病毒科病
毒共有的茎环结构和 TAATA TAC 。
G6 DNAβ 与已报道的 Begomov irus 病毒
DNAβ的全序列同源率比较表明(表 2),G6 DNAβ
与 CLCuMV DNAβ同源率为 92.1%,与 CLCuRV
β的同源率为 88.7%,而与其他双生病毒 DNAβ同
源率均在 80%以下 。从 βC1编码的氨基酸序列比
较看 ,G6与 CLCuMV DNAβ 的同源率也是最高 ,
为 91.5%,与 CLCuRV DNAβ的同源率为 90.7%,
而与其他 DNAβ 的同源率较低(27.1%~ 78.0%)。
CR是 DNAβ中最保守的区域 , G6与其他 10种双
生病毒 DNAβ的 CR的同源率均大于 93%,其中与
CLCuMV 和 CLCuRV 的同源率高达 98.3%。从
基于 DNAβ全序列构建的系统进化树(图 2)可见 ,
·65· 1期        毛明杰等:侵染朱槿的木尔坦棉花曲叶病毒及其卫星 DNA 全基因组结构特征
表 1 G6 与 20 种 Begomovirus病毒 DNA-A、IR及各基因编码的氨基酸序列同源率比较(%)
Table 1 Percentages of nucleotide o r amino acid sequences identities among G6 and 20 o ther Begomoviruses
Viru s GenBank Accession No. DNA-A IR CP a AV2 a AC1a AC2a AC3 a AC4a
CLCuMV-[ 62] AJ002447 96.1 91.7 98.4 97.5 95.6 94.7 98.5 94.0
CLCuMV-[ 26] AJ002458 96.0 92.1 97.7 97.5 95.3 95.3 98.5 94.0
CLCuMV-[ Faisalabad1] X98995 95.8 91.7 97.3 95.1 93.7 94.0 95.5 94.0
CLCuMV-[ Mul tan] AJ496461 95.8 91.7 97.3 95.1 93.7 94.0 95.5 94.0
CLCuMV-[ Faisalabad2] AJ496287 95.5 92.1 95.3 95.1 95.9 92.7 95.5 94.0
CLCuMV-[ Okra] AJ002459 94.1 83.1 98.4 96.7 91.7 94.0 98.5 87.0
CLCuMV-[ Faisalabad3] AJ132430 92.1 82.1 96.1 93.6 88.1 92.0 95.5 83.0
CLCuMV-[ Ludhiana04] AY765257 91.5 83.1 96.5 95.9 89.8 94.7 95.5 85.0
CLCuMV-[ Hissar04] AY765253 91.0 84.2 94.5 94.1 89.8 92.0 96.6 85.0
CLCuMV- [ Delhi04] AY765256 90.4 78.6 94.5 94.1 90.3 94.7 98.1 85.0
CLCuMV-[ Bhatinda05] DQ191160 89.8 65.8 95.3 93.2 90.1 94.7 98.5 85.0
CLCuRV-[ Si rsa04] AY765254 89.8 68.0 98.0 96.7 86.2 92.7 97.8 73.0
CLCuRV-[ G] AF363011 87.1 65.8 94.9 93.2 86.2 92.0 97.0 71.0
OYVM V-[ 201] AJ002451 86.7 76.3 97.3 93.4 87.9 81.3 86.6 75.0
CLCuBV AY705380 85.1 64.7 91.8 73.9 92.3 82.0 81.3 89.0
BYVM V-[ Mad] AF241479 82.6 59.8 96.5 93.4 80.7 79.7 86.6 63.0
CLCuAV-[ 802a] AJ002455 81.6 69.2 97.3 93.4 72.5 82.0 86.6 43.5
MYVV-[ Y47] AJ457824 80.2 72.6 89.1 73.9 82.9 82.7 79.1 46.5
TbLCYNV-[ Y143] AJ512762 76.8 71.1 77.7 71.2 83.5 63.7 60.4 74.0
TbLCYNV-[ Y161] AJ566744 76.6 71.1 77.3 70.3 85.9 63.4 60.4 75.0
  CLCuM V.Cot ton lea f cur l Multan virus;CLCuRV.Cot ton lea f cur l Ra jasthan virus;OYVMV.Okra yellow vein mosaic virus;
CLC uBV.Cot ton leaf cu rl Bangalore viru s;BYVM V.Bhend i yel low vein mosaic vi rus;CLCuAV.Cotton lea f curl A labad v irus;MYVV.
Malvastrum yel low vein viru;TbLCYN V.Tobacco lea f cur l Y unnan viru s.
a:Amino acid.
图 1 G6 与 20种 Begomoviruses DNA-A 的系统关系树
Figure 1 Phy logenetic tree of DNA-A of G6 and 20 other
begomoviruses using the DNAMAN Version 5.2.9 so ftware
   The tree w as constructed by the Neighbor-Joining
method w ith boo tstrap 1 050 repetitions. Bootstrap val-
ues are indica ted a s pe rcentag es at all br anches(Bar , 5%
sequence div erg ence).
表 2 G6β 与其他双生病毒卫星 DNA β 的同源率比较(%)
Table 2 Percentage s o f nucleo tide acid sequence
identities of DNAβ among G6 and 13 o the r Begomov iruses
DNA β GenBank
Accession No.DNAβ CR βC1
a
CLCuMV DNA β AJ298903 92.1 98.3 91.5
CLCuRV DNAβ A Y083590 88.7 98.3 90.7
MYVV-[ Y47] DNAβ AJ421482 79.0 95.1 78.0
AYVV DNAβ AJ252072 61.7 94.8 54.1
SiYMCNV-[ H n8] DNAβ AJ810093 60.3 94.8 31.9
T YLCTHV DNAβ AJ566748 60.0 94.8 27.1
TbLCYNV DNAβ AJ536621 59.9 93.9 27.1
BYVM V DNAβ AJ308425 56.5 98.3 49.2
T YLCCNV-[ Y64] DNAβ AJ421483 51.6 96.5 32.2
T YLCCNV-[ Y36] DNAβ AJ506791 51.4 95.7 31.4
T YLCCNV-[ Y10] DNAβ AJ421621 50.8 96.5 31.4
TbC SV-[ Y35] DNAβ AJ421484 50.4 94.8 33.1
EpYVV DNAβ AJ438938 42.3 84.3 12.5
  CLCuMV DNAβ.Cotton lea f cur l Multan virus DNAβ ;CLCuRV
DNAβ.Cot ton lea f curl Rajasthan virus DNAβ;MYVV-[ Y47] DNAβ.
Malvastrum yel low vein virus-[ Y47] DNAβ;AYVV DNAβ.Ageratum
yellow vein virus DNAβ ;SiYMCNV-[ Hn8] DNAβ .Sid a yel low mosaic
China virus-[ Hn8] DNAβ;T YLCTHV DNAβ.Tomato yellow lea f
cur l Thai land virus DNAβ ;TbLCYNV DNAβ.Tobacco lea f cur l
Yunnan virus DNAβ;BYVMV DNAβ.Bhendi yellow vein mosaic virus
DNAβ;T YLCCNV-[ Y64] DNAβ.Tomato yellow lea f cur l China virus
-[ Y64] DNAβ ;TYLCCNV-[ Y36] DNAβ.Tomato yel low lea f cur l
China virus-[ Y36] DNAβ ;TYLCCNV- [ Y10] DNAβ .Tomato yel low
lea f curl China virus-[ Y10] DNAβ. TbCSV-[ Y35] DNAβ.Tobacco
cur ly shoot vi rus-[ Y35] DNAβ;EpYVV DNAβ.Eupatorium yellow vein
virus DNAβ;
a.amin o acid.
·66· 病  毒  学  报                   24 卷 
DNAβ分成 4 大类 ,G6与 CLCuMV 形成一个独立
的分支 ,再与 CLCuRV及 MYVV-Y47形成一个较
大分支;TYLCCNV 各分离物的 DNAβ形成一个分
支;TbLCYNV 、TbCSV-Y35 和 TYLCTHV DNAβ
形成另一个分支;EpYVV DNAβ 单独构成一个分
支。
图 2 G6与 13 种 Begomov iruses DNA β 的系统关系树
Figure 2 Phy logenetic tree of DNAβ of G6 and 13 o the r
Begomoviruses using the DNAMAN Version 5.2.9 sof t-
w are
   The tree w as constructed by the Neighbor-Joining
method with bootstrap 1050 repetitions. Boo tst rap val-
ues are indicated as percentag es at all branches(Bar , 5%
sequence div erg ence).
讨  论
对广东朱槿曲叶病病毒分离物 G6 基因组
DNA-A 全序列进行了分析 ,其具有 Begomov irus
病毒基因组 DNA 典型特征 ,且与已登陆 GenBank
中 CLCuMV 各分离物的同源率均大于 89%,其中
与分离物 62的同源率最高达 96.1%。双生病毒科
病毒全基因组核苷酸序列同源率小于 89%,往往定
名为不同病毒 ,反之则被认为是同一病毒的不同株
系或分离物[ 16] 。因此我们认为 ,G6是 CLCuMV 的
一个分离物。
应用卫星 DNAβ的特异引物 β01和 β02 ,从 G6
中分离到与病毒相伴随的卫星 DNA β 。比较分析
表明 ,G6 DNAβ 大小约为 DNA-A 的一半 ,除茎环
结构和 TAATA TTAC 外 , 与病毒基因组 DNA-A
无序列同源率。G6 DNAβ含有一个 115个核苷酸
的保守区 ,推测是辅助病毒 DNA-A 编码的复制蛋
白识别作用位点;G6 DNAβ还含一个约 230个核苷
酸 A-rich 区 ,该区域可能与 DNAβ分子包装过程中
的尺寸要求相关[ 15] 。
另外 ,用 DNA-B特异引物 PCR扩增和 South-
ern杂交 ,均未能在 G6 中检测到 DNA-B 存在。目
前 , 已发 现含 卫星 DNAβ 分 子的 双 生 病毒
CLCuMV 、AYVV 、BYVMV 和 TYLCCNV 等均为
单组分病毒 ,由此认为:DNAβ只与单组分双生病毒
相伴随[ 3-6] 。同时 ,CLCuMV 各分离物也未见报道
有 DNA-B组分。因此 ,我们推测引起广东朱槿曲
叶病的 CLCuMV 分离物 G6也属于单组分 Bego-
moviruses。
朱槿是广东及华南地区最重要的园林植物之
一 ,新发现的曲叶病使植株全株叶片黄化 、卷曲 ,感
病植株不再开花或即使开花 ,花小且不正常 ,最终导
致植株死亡 。本研究的结果证实 ,广东朱槿曲叶病
是由 CLCuMV 侵染引起的 。由于该病毒是由烟粉
虱传播 ,而烟粉虱在我省及华南地区普遍发生 ,势必
会导致该病害的传播 、扩散与漫延。因此 ,有必要立
即开展对朱槿曲叶病综合治理对策研究 ,以控制该
病害的扩散与漫延 。
更为重要的是 ,由于该病毒在印度和巴基斯坦
等国严重为害棉花 ,而在我国目前还未发现有棉花
曲叶病或 CLCuMV 为害棉花的报道 ,但朱槿和棉
花同属锦葵科 ,该病毒分离物有可能会在我国侵染
棉花 ,应引起我们高度重视 。可以肯定 ,该病毒在我
国是一个外来入侵有害生物 ,关于其初始来源还有
待于进一步调查。
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Molecular Characterization of Cotton Lea f Cur l Multan Virus and Its Satellite
DNA That Infects Hibiscus rosa-sinensis
MAO Ming-jie1 , 2 , HE Zi-fu1 , YU Hao1 , LI Hua-ping2
(1.Inst itute o f P lant Protect ion , Guangdong A cademy o f A gr icu ltura l Sciences , Guangzhou 510640 , Ch ina;
2.Laboratory o f P lan t Virolog y , South China Agr icul tural Universi ty , Guang zhou 510642 , Ch ina)
Abstract:Virus isolate G6 w as obtained from Hibiscus rosa-sinensis showing yellow and leaf curl symptoms
in Guang zhou , Guangdong Province.The complete nucleo tide sequence of DNA-A was dete rmined to be
2 737 nucleo tides encoding six potential O RFs.Comparison show ed that G6 DNA-A had more than 89%
sequence ident ify w ith all isolates of Cotton lea f curl Mul tan v irus(CLCuMV)and sha red the highest se-
quence identify (96.1%)w ith CLCuMV isola te 62.G6 DNA-A had 87.1%-89.8% sequence identity w i th
tho se of CLCuRV iso lates , while less than 87%identi ties w ith o ther begomoviruses.Phy logenetic analy sis
of G6 DNA-A and selected begomoviruses showed that G6 was most closely related to CLCuMV iso lates ,
and they clustered together as a separate branch.Satelli te DNA molecule(G6 DNAβ)was found to be as-
sociated w ith G6 using the primers β01 and β02.G6 DNAβ contains 1346 nucleot ides , w ith a po tential
functional ORF (C1)in complementa ry sense DNA.Pairw ise comparison indica ted that G6 DNAβ had the
highest sequence identi ties w ith CLCuMV DNAβ (92.1%)and CLCuRV DNAβ(88.7%), but less than
80% sequence identit ies w ith o ther repo rted satellite DNA molecules.Phy logenetic analy sis indicated that
G6 DN Aβ was most clo sely related to CLCuMV DNAβ and the tw o DNAβs cluste red to gether as a separate
branch , and formed the main branch w ith DNAβ of CLCuRV and MYVV-Y47.It is concluded that G6 in-
fect ing Hibiscus rosa-sinensis is an isolate of CLCuMV.
Key words:Cotton leaf curl Multan v irus;Hibiscus rosa-sinensis;satellite DNAβ ;Begomov irus
Corresp onding author:HE Zi-f u , Tel:86-20-87597476;Fax:86-20-85201471;E-mai l:hez f @gdpp ri.com
·68· 病  毒  学  报                   24 卷