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脉花党参中党参炔苷含量的高效液相色谱测定



全 文 :收稿日期:2010-07-13; 修订日期:2010-12-18
基金项目:国家“十一五”科技支撑计划项目(No. 2007BAI31B02)
作者简介:谢光波(1976-) ,男(汉族) ,四川成都人,现任电子科技大学副
教授,硕士研究生导师,博士学位,主要从事生物活性天然产物与质量标
准的研究工作.
脉花党参中党参炔苷含量的高效液相色谱测定
谢光波1,吴 超1,范 强2,周先礼2,格桑索朗3
(1.电子科技大学生命科学与技术学院,四川 成都 610054;
2.西南交通大学生命科学与工程学院,四川 成都 610031;
3. 西藏自治区食品药品检验所,西藏 拉萨 850000)
摘要:目的 测定脉花党参中党参炔苷的含量。方法 采用高效液相色谱法;Shim - pack CLC - ODS 色谱柱,波长 267
nm,流动相:乙腈 -水(17∶ 83) ,流速 1 ml /min。结果 脉花党参中党参炔苷在 0. 075 ~ 6. 25 μg 线性关系良好(R2 =
0. 998 9)。平均回收率为 99. 1%,RSD = 2. 3 %。结论 以高效液相色谱法测定脉花党参中党参炔苷的含量,操作简便,
专属性好。
关键词:脉花党参; 党参炔苷; 高效液相色谱法
DOI标识:doi:10. 3969 / j. issn. 1008-0805. 2011. 06. 013
中图分类号:R284. 1 文献标识码:A 文章编号:1008-0805(2011)06-1321-02
Determination of Lobetyolin in Codonopsis nervosa by High Performance Liquid Chroma-
tography
XIE Guang-bo1,WU Chao1,FAN Qiang2,ZHOU Xian-li2,GE - Sang Suo - lang3
(1. School of Life Science and Technology,University of Electronic Science and Technology of China,Chengdu
610054,China;2. College of Life Science and Engineering,Southwest Jiaotong University,Chengdu 610031,
China;3. Tibet Autonomous Region Institute for Food and Drug Control,Lasa 850000,China)
Abstract:Objective To determine lobetyolin content in Condonopsis nervosa by HPLC.Methods Shim - pack CLC - ODS (150
mm × 4. 6 mm,5 μm)was used with acetonitrile - water (17∶ 83)as the mobile phase and UV detection was wavelength at
267 nm. Results The linear range was within the range of 0. 076 ~ 6. 25 μg (R2 = 0. 998 9) ,the average recovery was 99.
1%,and RSD was 2. 3% . Conclusion The method is reliable,accurate and very suitable for the determination of lobetyolin in
Condonopsis nervosa.
Key words:Condonopsis nervosa; Lobetyolin; HPLC
藏党参,藏药名为陆得多吉(译音) ,来源于桔梗科党参属植
物,全草入药,用于治疗风湿性关节炎、疮疖痛肿、麻风病等。据
《晶珠本草》记载,藏党参分为黑色类和白色类两种,脉花党参
Codonopsis nervosa (Chipp.)Nannf. 和长花党参 C. thalictrifolia
Wall. var. mollis (Chipp.)L. T. Shen分别符合黑色类和白色类
的特征,视为正品。脉花党参,藏文名为吉布陆都多吉(译音) ,
产于西藏东部、青海东南部、四川西部、云南西北部、甘肃东南部,
生于海拔 3 500 ~ 4 500 m 的林缘草地和阴山坡的灌丛中,性味
苦、辛、涩、凉,具有消炎散肿、滋补壮阳、健脾胃、补气之功效[1]。
有关藏党参的化学成分研究报道极少,而关于中药党参的研
究报道较多。根据文献报道,党参中主要有三萜、甾类、聚乙炔
醇、酚酸、木脂素、倍半萜、黄酮等多种化学成分[2 ~ 4]。党参炔苷
(lobetyolin)作为党参的特有化合物,以其为指标性成分对党参及
其成药进行含量测定的文献报道较多[5 ~ 7]。薄层色谱检验证明,
脉花党参中含有党参炔苷。现代药理学研究表明,党参炔苷对乙
醇造成的胃黏膜损伤有很好的保护作用[8],与藏党参的滋补强
壮,健脾胃,补气的传统功效相符,故党参炔苷为脉花党参中的生
物活性成分,其含量高低与脉花党参的功效有一定关系,因此本
研究应用高效液相色谱法对不同产地的脉花党参进行了含量测
定。
1 仪器与材料
1. 1 仪器 LC - 20AD高效液相色谱仪(日本岛津) ,SPD - M20A
型 DAD检测器(日本岛津) ,KQ -100B超声清洗机(昆山市超声
仪器有限公司) ,TB214 电子分析天平(DENVER INSTRU-
MENT)。
1. 2 试剂与试药 党参炔苷对照品购自成都普思生物科技有限
公司(批号:PS 08011101) ;乙腈为色谱纯,水为纯净水,其余试剂
均为分析纯。脉花党参由西藏自治区食品药品检验所提供,由格
桑索朗副主任药师鉴定,粉碎(过 4 号筛) ,备用。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件 岛津色谱柱(Shim - pack CLC - ODS,4. 6 mm ×
150 mm,5 μm) ,柱温 35℃,检测波长 267 nm,流动相为乙腈 -水
(17∶ 83) ,流速 1 ml /min,进样量 10 μl。对照品及供试品溶液色
谱图见图 1 ~ 2。
2. 2 对照品溶液的制备 取党参炔苷对照品 5 mg,精密称定,置
于 5 ml容量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,即得对照品
溶液(1 mg /ml)。
2. 3 供试品溶液制备方法的确定 以氯仿为溶剂,采用索氏提取
器对药材粉末进行预处理。以甲醇为溶剂,分别考察了冷浸过
夜、水浴回流提取、超声 3 种提取方法。采用水浴回流提取法,分
别考察了甲醇、无水乙醇、80%乙醇 3 种提取溶剂。以甲醇为溶
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LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2011 VOL . 22 NO. 6 时珍国医国药 2011 年第 22 卷第 6 期
剂,采用水浴回流提取法,分别考察了 20,40,60,80 min 提取时
间。结果表明以甲醇为溶剂,水浴回流提取 40 min 为供试品溶
液的最佳制备方法。
2. 4 供试品溶液的制备 取药材粉末 1 g,精密称定,以滤纸包
好,置于索氏提取筒中,以氯仿为溶剂预处理 2 h,而后将药材放
在通风厨中自然挥干溶剂。预处理后药材置具塞锥形瓶中,精密
加入甲醇 20 ml,称定重量,水浴回流提取 40 min,放冷。称定重
量,加甲醇补足减少的重量,摇匀,过滤,弃去初滤液,取续滤液,
用微孔滤膜(0. 45 m)过滤,既得。
图 1 党参炔苷 A. 党参炔苷
对照品色谱图 图 2 供试品溶液色谱图
2. 5 方法学考察
2. 5. 1 线性关系考察 精密吸取对照品溶液(1 mg /ml)适量,分
别稀释,配成浓度为 7. 5,10,25,50,125,250,625 μg /ml的对照品
溶液。依次精密吸取所配不同浓度对照品溶液各 10 μl,按照上
述色谱条件测定党参炔苷峰面积。以峰面积的对数值为纵坐标
(Y) ,含量的对数值为横坐标(X)进行线性回归,求得回归方程为
Y = 1. 031 4 X + 2. 432 5,R2 = 0. 998 9,线性范围为 0. 075 ~
6. 25 g。
2. 5. 2 精密度实验 精密吸取对照品溶液(125 μg /ml)各
10 μl,连续进样 5 次,用峰面积求算 RSD,结果 RSD为 1. 3%。
2. 5. 3 稳定性实验 取同一份供试品溶液,分别于 0,2,4,8,12,
24 h进样,10 μl /次,由峰面积算得 RSD 为 1. 93%,表明 24 h 内
峰面积积分值基本不变。
2. 5. 4 加样回收率实验 精密称量药材粉末 6 份,每份 1. 0 g。
按表 1 量加入对照品,按供试品溶液的制备方法进行制备,精密
取供试品溶液 10 μl,按上述色谱条件进行分析,求得平均回收率
为 99. 1%,RSD = 2. 3%。
表 1 加样回收实验结果
序号
称样量
m /g
含对照品
量 m /mg
加入对照
品量 m /mg
测得量
m /mg
回收率
(%)
平均回收
率(%)
RSD
(%)
1 1. 000 0 0. 875 0. 8 1. 683 101
2 1. 000 0 0. 875 0. 8 1. 688 101. 75
3 1. 000 0 0. 875 0. 8 1. 673 99. 63 99. 1% 2. 3
4 1. 000 0 0. 875 0. 9 1. 763 98. 67
5 1. 000 0 0. 875 0. 9 1. 759 98. 22
6 1. 000 0 0. 875 0. 9 1. 733 95. 33
2. 6 样品的含量测定 按所建立的方法,对 5 批次脉花党参药
材进行了测定,结果表明,脉花党参中党参炔苷的含量在 0. 776
~ 2. 449 mg /g。结果见表 2。
3 讨论
关于中药党参的质量控制研究报道很多[9 ~ 11],但尚无统一
规范的质量控制方法,《中国药典》中也没有关于党参的含量测
定的指标[12]。而关于藏党参的质量控制研究报道极少,其质量
标准见于《中华人民共和国卫生部药品标准·藏药》第 1 册,亦
没有理化鉴别和含量测定的指标[13],为了确保藏党参合理有效
地利用,使藏党参的质量标准评价有具体的量化指标,对其开展
质量控制的研究是必要的。我们以藏党参主流品种之一的脉花
党参为研究对象,以党参炔苷作为指标性成分对其进行了含量测
定的研究。
表 2 脉花党参样品中党参炔苷的含量 mg·g - 1
样品序号 党参炔苷含量
2009 - 1 0. 776
2009 - 2 2. 449
2009 - 3 0. 875
2009 - 4 0. 899
2009 - 5 0. 931
本药材为草本植物全草,含有大量的叶绿素和小极性成分,
对色谱柱有较大损坏,为了保护色谱柱,需要对样品进行预处理。
实验表明氯仿可以有效地除去大量吸附性强的杂质,而且不会将
待测成分党参炔苷提取出来,故以氯仿为溶剂,采用索氏提取法
进行预处理。
通过含量测定结果可以发现,5 批次药材中党参炔苷的含量
差异较大,最高的含量达到 2. 449 mg /g,是最低含量(0. 776 mg /
g)的 3 倍多。脉花党参作为藏党参的主流品种之一,遍布于我国
横断山脉及周边地区,分布较广,不同产地的脉花党参中党参炔
苷的含量有着显著的差异,该研究可为脉花党参的质量评价提供
理论依据。
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时珍国医国药 2011 年第 22 卷第 6 期 LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2011 VOL. 22 NO. 6