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Determination of lobetyolin in root of Codonopsis tangshen fromvarious cultivation areas by high-performance liquid chromatography

HPLC测定不同产地川党参中党参炔苷的含量



全 文 :HPLC测定不同产地川党参中党参炔苷的含量
宋 丹1,2,3,程雪梅1,2,4,李隆云3,钟国跃3,王峥涛1,2,4
(1.上海中医药大学 中药研究所,上海 201203;2.中药标准化教育部重点实验室,上海 201203;
3.重庆市中药研究院,重庆 400065;4.上海中药标准化研究中心,上海 201203)
[摘要] 目的:分析不同产地的川党参中党参炔苷的含量,为川党参的质量标准建立提供参考。方法:采用高
效液相色谱分析,SupelcoDiscoveryC18色谱柱(46mm×250mm,5μm);乙腈05%醋酸水(20∶80)为流动相,检
测波长268nm。结果:24批不同种与不同产地的党参中党参炔苷含量介于00403~09667mg·g-1。结论:该方
法操作简便,结果稳定可靠,可用于川党参的质量评价。
[关键词] 川党参;高效液相色谱法;党参炔苷
[中图分类号]R284.1 [文献标识码]A [文章编号]10015302(2008)17213304
[收稿日期] 20071121
[基金项目] 国家“十一五”科技支撑项目(2006BAI06A11
09)
[通讯作者] 程雪梅,Tel:(021)508055223037,Email:cheng
xuemei1963@163.com;王峥涛,Tel:(021)02151322507,Email:
wangzht@hotmail.com
  桔梗科植物党参为常用中药。《中国药典》
2005年版一部收载了党参 Codonopsispilosula
(Franch.)Nannf.、素花党参C.pilosulaNannf.var.
modesta或川党参 C.tangshenOliv.3种。根据文献
报道,党参中主要要有三萜、甾类、聚乙炔醇、酚酸、
木脂素、倍半萜、黄酮等多种化学成分[12]。党参提
取物具有抗溃疡活性,初步的药理学研究证明,提取
物中党参炔苷对乙醇造成的胃黏膜损伤有很好的保
护作用,与党参补中益气的传统功效相符,为党参胃
粘膜保护作用的活性成分,可作为党参质量控制指
标之一。以往对党参的质量控制研究报道很多,但
至今尚无统一规范的质量控制方法,2005年版药典
仅收载了党参炔苷为对照的薄层定性鉴别方法,并
未收载党参的定量检测方法,且收载的3个品种作
为共有成分的党参炔苷含量的相关报道也较少[35]。
川党参 C.tangshenOliv.,产于重庆东部、南部
及重庆、湖北、陕西交界处,现已大面积栽培。川党
参因产地及加工方法不同,有不同的商品名。重庆
市巫溪县称“大宁党”、重庆市巫山县称“巫山党”、
“单支党”、“条党”、“庙党”,重庆市奉节县称“条
党”,川党参也是一种传统的出口品种,以其单支、
肥壮、狮头、味甜、肉厚质量为佳,畅销港澳、台湾及
东南亚地区。由于川党参产地较多,且价格较为混
乱,为了确保川党参合理有效的应用,使川党参的定
性、定量标准评价有具体的量化指标,作者对川党参
的资源分布进行了调查和样品采集,在川党参化学
成分系统研究的基础上,利用反相高效液相色谱法
测定了川党参药材主要产区重庆市巫溪县、巫山县、
奉节县、南川市、湖北省竹溪县、陕西省平利县的川
党参药材中党参炔苷含量。并跟药典收载的党参、
素花党参进行比较,为下一步川党参的质量标准研
究提供依据。
1 仪器与试药
Agilent1100Series高效液相色谱仪(Agilent
USA)包括在线真空脱气系统,四元泵,自动进样器,
柱温箱,二极管阵列检测器;SB2200超声清洗机
(SHANGHAIBRANSON);AE200电子分析天平
(METTLER);SB-2000旋转蒸发仪(EYELA上海
爱朗仪器有限公司)。
党参炔苷(lobetyolin)对照品(上海中药标准化
研究中心,供含量测定用);乙腈(FisherScientific);
甲醇为分析纯(上海化学试剂公司)。
川党参19批样品由重庆市中药研究院彭锐副
研究员鉴定为C.tangshen的干燥根,党参及素花党
参5批样品由香港科技大学董婷霞教授鉴定,样品
来源及采集时间见表1。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 SupelcoDiscoveryC18色谱柱(46
mm×250mm,5μm);流动相 乙腈05%醋酸水溶
·3312·
第33卷第17期
2008年9月
         
    中 国 中 药 杂 志
ChinaJournalofChineseMateriaMedica
       
Vol.33,Issue 17
September,2008
   表1 样品来源及采集日期
No. 样品名称 来源 采集日期
1 Codonopsistangshen 陕西省平利县正阳乡 20060922
2 C.tangshen 陕西省平利县正阳乡 20060922
3 C.tangshen 陕西省平利县正阳乡 20060922
4 C.tangshen 陕西省平利县正阳乡 20060922
5 C.tangshen 陕西省平利县正阳乡 20060923
6 C.tangshen 湖北省竹溪县丰溪镇 20060925
7 C.tangshen 湖北省竹溪县丰溪镇 20060925
8 C.tangshen 湖北省竹溪县丰溪镇 20060925
9 C.tangshen 湖北省竹溪县丰溪镇 20060925
10C.tangshen 重庆市奉节县龙桥乡 20060912
11C.tangshen 重庆市奉节县长安乡 20060912
12C.tangshen 重庆市奉节县长安乡 20060912
13C.tangshen 重庆市巫山县庙宇镇 20060915
14C.tangshen 重庆市巫山县庙宇镇 20060915
15C.tangshen 重庆市巫山县庙宇镇 20060915
16C.tangshen 重庆市巫溪县夏布坪 20061018
17C.tangshen 重庆市巫溪县兰英乡 20061018
18C.tangshen 重庆市南川市黄草坪 20061015
19C.tangshen 重庆市南川市黄草坪 20061015
20C.pilosula 山西省繁峙县    20030220
21C.pilosula 甘肃省文县中寨   20040206
22C.pilosula 山西省忻州     20030210
23C.pilosulavar.modesta陕西省汉中市    20040925
24C.pilosulavar.modesta陕西省洛南市    20031213
液(20∶80),柱温30℃;体积流量1mL·min-1,检
测波长 268nm,进样量 10μL。
2.2 对照品溶液的制备 精密称取党参炔苷对照
品适量,加甲醇制成392mg·L-1的溶液,即得。
2.3 样品溶液的制备 各批药材于60℃干燥3h,
粉碎,取药材粉末(过3号筛)约4g,精密称定,精
密加入甲醇100mL,称重,置80℃水浴中索式提取
3h,取出,放冷,用甲醇补足失重,摇匀,精密吸取上
清液50mL置100mL圆底瓶中,减压回收溶剂至
干,残渣加甲醇溶解并转移至5mL量瓶中(必要时
超声),加甲醇至刻度,摇匀,045μm微孔滤膜过
滤,取续滤液,即得。
2.4 线性关系 精密吸取392mg·L-1党参炔苷
对照品溶液适量,分别配置成 6125,1225,245,
49,98,196,2352,3136mg·L-1的溶液。将上述
对照品溶液进样,进样量10μL,以对照品的进样量
对峰面积积分值进行回归,得回归方程为 Y=
14874X+15552,r=09999,党参炔苷在
6125~392μg呈良好的线性关系。
2.5 精密度试验 精密吸取98mg·L-1的党参炔
苷对照品溶液,重复进样6次,每次进样10μL,党
参炔苷峰面积 RSD104%,精密度良好。
2.6 稳定性试验 精密吸取同一样品溶液,室温放
置,分别在0,2,4,8,16,24,48h进样,党参炔苷峰
面积 RSD163%,表明供试品溶液在48h稳定。
2.7 重复性试验 取同一样品,按2.3项下方法制
备6份供试品溶液,并测定党参炔苷含量,RSD
156%。
2.8 加样回收试验 采用加样回收法,精密称取已
知含量(含量为00415%)样品,9份,分别精密加
入不同量的党参炔苷对照品溶液,按样品溶液的制
备方法处理,在同样色谱条件下测定其党参炔苷的
含量,结果见表2。
表2 党参块茎中党参炔苷加样回收率
称样量
/g
样品中量/
mg
加入量/
mg
测得量
/mg
回收率
/%
平均值
/%
RSD
/%
20002 08308 0686015318 1022 1018 275
20001 08307 0686015088 988    
20004 08309 0686015472 1044    
20001 08307 0882017469 1039 1011 252
20000 08307 0882017169 1005    
20004 08309 0882017031 989    
20004 08309 1176020163 1008 1004 142
20003 08308 1176020109 1003    
20005 08309 1176020426 1030    
2.9 样品测定 分别精密吸取样品溶液和对照品
各10μL,注人高效液相色谱仪中,按2.1项下色谱
条件测定,测定峰面积积分值,按外标法计算样品溶
液中的党参炔苷含量,结果见表 3,样品溶液的
HPLC图见图1。
表3 样品中党参炔苷含量(n=3) % 
No. 质量分数 RSD No. 质量分数 RSD
1 00735 055 13 00423 16
2 00258 13 14 00256 17
3 00457 13 15 00167 05
4 00865 079 16 00967 011
5 00941 088 17 00611 24
6 00697 13 18 00447 041
7 00331 093 19 00298 26
8 00167 039 20 00106 064
9 00504 13 21 00042 22
10 00258 037 22 00103 23
11 00256 11 23 00502 11
12 00608 25 24 00140 27
3 讨论
依次选用 30% ~100%甲醇、甲醇01mol·
L-1盐酸(1∶1,2∶1,1∶2),甲醇氯仿(1∶1)为提取溶
剂进行考察,结果发现样品用甲醇提取效果最佳,故
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    中 国 中 药 杂 志
ChinaJournalofChineseMateriaMedica
       
Vol.33,Issue 17
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A.对照品;B.样品;1党参炔苷
图1 党参炔苷对照品和川党参样品HPLC图
选定甲醇为提取溶剂。考察了超声、回流、索式提
取、冷浸共4种提取方法和不同提取时间,发现索式
提取效率最高,结果选定用索式提取提取3h作为
提取方法。因为药材中党参炔苷含量较低,也考察
了1,2,4g3种药材用量进行提取,结果发现用4g
药材进行样品溶液制备,进样量10μL,效果最佳。
考察了乙腈水、甲醇水、乙腈不同浓度醋酸水溶
液,结果发现以乙腈05%醋酸水溶液(20∶80)为流
动相所得色谱图效果最佳。党参中醇溶性成分主要
包括聚乙炔醇类和酚酸类等成分,作者分别考察了
在230,254,268,285,290nm处样品溶液的色谱
图,结合 DAD三维图、峰形及个数,选择268nm作
为检测波长。
聚乙炔类化合物党参炔苷是重要的特征性成
分,对于党参类生药的品质评价以及化学系统学方
  
面的研究均具有一定的意义。党参炔苷的存在,可
作为党参的一个重要鉴别和质量评价手段。在对含
量测定结果分析时发现,川党参中党参炔苷的含量
高于党参和素花党参这两个品种,另外,在对比不同
川党参药材主要产区重庆市巫溪县、巫山县、奉节
县、南川市、湖北省竹溪县、陕西省平利县的川党参
药材中党参炔苷含量时发现,陕西省平利县、湖北省
竹溪县、重庆市巫溪县3地药材党参炔苷相对含量
较高,且3县地理位置相互靠近,也与其历来为川党
参的主产区相映证。同时作者也发现同一产地的川
党参药材中党参炔苷的含量也有一定差异,这是否
与本实验采集样品时选择的土壤,气候,海拔等条件
有联系,有待于进一步探索。
[参考文献]
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大学学报,2001,32(2):94.
[2] HEQing,ZHUEnyuan,WANGZhengtao,etal.Flavonesiso
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[4] 赵晓华,刘养清,裴晓丽.党参中党参炔苷的 HPLC分析[J].
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[5] 张勇慧,张锦文,阮汉利,等.参芪扶正注射液中党参药材
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DeterminationoflobetyolininrootofCodonopsistangshenfrom
variouscultivationareasbyhighperformanceliquidchromatography
SONGDan1,2,3,CHENGXuemei1,2,4,LILongyun3,ZHONGGuoyue3,WANGZhengtao1,2,4
(1.InstituteofChineseMateriaMedica,ShanghaiUniversityofTraditionalChinesemedicine,Shanghai201203,China;
2.KeyLaboratoryofStandardizationofChineseMedicinesofMinistryofEducation,Shanghai201203,China;
3.ChongqingAcademyofChineseMateriaMedica,Chongqing400065,China;
4.ShanghaiR&DCenterforStandardizationofChineseMedicine,Shanghai201203,China)
[Abstract] Objective:TodeterminelobetyolinintherootofCodonopsistangshenfromthevariouscultivationareas.Method:
ASupelcoDiscoveryC18Column(46mm×250mm,5μm)wasusedwithacetonitrile05% aceticacidinwater(20∶80)asthe
mobilephaseandUVdetectionwasat268nm.Result:Twentyfourbatchesofthesampleswereanalyzed.Thecontentoflobetyolin
rangedfrom0040309667mg·g-1.Conclusion:Themethodwassimple,reproducibleandreliable.Itcanbeusedtocontrolthe
qualityofC.tangshen.
[Keywords] Codonopsistangshen;highperformanceliquidchromatography;lobetyolin
[责任编辑 王亚君]
·5312·
第33卷第17期
2008年9月
         
    中 国 中 药 杂 志
ChinaJournalofChineseMateriaMedica
       
Vol.33,Issue 17
September,2008