全 文 :HPLC测定不同产地川党参中党参炔苷的含量
宋 丹1,2,3,程雪梅1,2,4,李隆云3,钟国跃3,王峥涛1,2,4
(1.上海中医药大学 中药研究所,上海 201203;2.中药标准化教育部重点实验室,上海 201203;
3.重庆市中药研究院,重庆 400065;4.上海中药标准化研究中心,上海 201203)
[摘要] 目的:分析不同产地的川党参中党参炔苷的含量,为川党参的质量标准建立提供参考。方法:采用高
效液相色谱分析,SupelcoDiscoveryC18色谱柱(46mm×250mm,5μm);乙腈05%醋酸水(20∶80)为流动相,检
测波长268nm。结果:24批不同种与不同产地的党参中党参炔苷含量介于00403~09667mg·g-1。结论:该方
法操作简便,结果稳定可靠,可用于川党参的质量评价。
[关键词] 川党参;高效液相色谱法;党参炔苷
[中图分类号]R284.1 [文献标识码]A [文章编号]10015302(2008)17213304
[收稿日期] 20071121
[基金项目] 国家“十一五”科技支撑项目(2006BAI06A11
09)
[通讯作者] 程雪梅,Tel:(021)508055223037,Email:cheng
xuemei1963@163.com;王峥涛,Tel:(021)02151322507,Email:
wangzht@hotmail.com
桔梗科植物党参为常用中药。《中国药典》
2005年版一部收载了党参 Codonopsispilosula
(Franch.)Nannf.、素花党参C.pilosulaNannf.var.
modesta或川党参 C.tangshenOliv.3种。根据文献
报道,党参中主要要有三萜、甾类、聚乙炔醇、酚酸、
木脂素、倍半萜、黄酮等多种化学成分[12]。党参提
取物具有抗溃疡活性,初步的药理学研究证明,提取
物中党参炔苷对乙醇造成的胃黏膜损伤有很好的保
护作用,与党参补中益气的传统功效相符,为党参胃
粘膜保护作用的活性成分,可作为党参质量控制指
标之一。以往对党参的质量控制研究报道很多,但
至今尚无统一规范的质量控制方法,2005年版药典
仅收载了党参炔苷为对照的薄层定性鉴别方法,并
未收载党参的定量检测方法,且收载的3个品种作
为共有成分的党参炔苷含量的相关报道也较少[35]。
川党参 C.tangshenOliv.,产于重庆东部、南部
及重庆、湖北、陕西交界处,现已大面积栽培。川党
参因产地及加工方法不同,有不同的商品名。重庆
市巫溪县称“大宁党”、重庆市巫山县称“巫山党”、
“单支党”、“条党”、“庙党”,重庆市奉节县称“条
党”,川党参也是一种传统的出口品种,以其单支、
肥壮、狮头、味甜、肉厚质量为佳,畅销港澳、台湾及
东南亚地区。由于川党参产地较多,且价格较为混
乱,为了确保川党参合理有效的应用,使川党参的定
性、定量标准评价有具体的量化指标,作者对川党参
的资源分布进行了调查和样品采集,在川党参化学
成分系统研究的基础上,利用反相高效液相色谱法
测定了川党参药材主要产区重庆市巫溪县、巫山县、
奉节县、南川市、湖北省竹溪县、陕西省平利县的川
党参药材中党参炔苷含量。并跟药典收载的党参、
素花党参进行比较,为下一步川党参的质量标准研
究提供依据。
1 仪器与试药
Agilent1100Series高效液相色谱仪(Agilent
USA)包括在线真空脱气系统,四元泵,自动进样器,
柱温箱,二极管阵列检测器;SB2200超声清洗机
(SHANGHAIBRANSON);AE200电子分析天平
(METTLER);SB-2000旋转蒸发仪(EYELA上海
爱朗仪器有限公司)。
党参炔苷(lobetyolin)对照品(上海中药标准化
研究中心,供含量测定用);乙腈(FisherScientific);
甲醇为分析纯(上海化学试剂公司)。
川党参19批样品由重庆市中药研究院彭锐副
研究员鉴定为C.tangshen的干燥根,党参及素花党
参5批样品由香港科技大学董婷霞教授鉴定,样品
来源及采集时间见表1。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 SupelcoDiscoveryC18色谱柱(46
mm×250mm,5μm);流动相 乙腈05%醋酸水溶
·3312·
第33卷第17期
2008年9月
中 国 中 药 杂 志
ChinaJournalofChineseMateriaMedica
Vol.33,Issue 17
September,2008
表1 样品来源及采集日期
No. 样品名称 来源 采集日期
1 Codonopsistangshen 陕西省平利县正阳乡 20060922
2 C.tangshen 陕西省平利县正阳乡 20060922
3 C.tangshen 陕西省平利县正阳乡 20060922
4 C.tangshen 陕西省平利县正阳乡 20060922
5 C.tangshen 陕西省平利县正阳乡 20060923
6 C.tangshen 湖北省竹溪县丰溪镇 20060925
7 C.tangshen 湖北省竹溪县丰溪镇 20060925
8 C.tangshen 湖北省竹溪县丰溪镇 20060925
9 C.tangshen 湖北省竹溪县丰溪镇 20060925
10C.tangshen 重庆市奉节县龙桥乡 20060912
11C.tangshen 重庆市奉节县长安乡 20060912
12C.tangshen 重庆市奉节县长安乡 20060912
13C.tangshen 重庆市巫山县庙宇镇 20060915
14C.tangshen 重庆市巫山县庙宇镇 20060915
15C.tangshen 重庆市巫山县庙宇镇 20060915
16C.tangshen 重庆市巫溪县夏布坪 20061018
17C.tangshen 重庆市巫溪县兰英乡 20061018
18C.tangshen 重庆市南川市黄草坪 20061015
19C.tangshen 重庆市南川市黄草坪 20061015
20C.pilosula 山西省繁峙县 20030220
21C.pilosula 甘肃省文县中寨 20040206
22C.pilosula 山西省忻州 20030210
23C.pilosulavar.modesta陕西省汉中市 20040925
24C.pilosulavar.modesta陕西省洛南市 20031213
液(20∶80),柱温30℃;体积流量1mL·min-1,检
测波长 268nm,进样量 10μL。
2.2 对照品溶液的制备 精密称取党参炔苷对照
品适量,加甲醇制成392mg·L-1的溶液,即得。
2.3 样品溶液的制备 各批药材于60℃干燥3h,
粉碎,取药材粉末(过3号筛)约4g,精密称定,精
密加入甲醇100mL,称重,置80℃水浴中索式提取
3h,取出,放冷,用甲醇补足失重,摇匀,精密吸取上
清液50mL置100mL圆底瓶中,减压回收溶剂至
干,残渣加甲醇溶解并转移至5mL量瓶中(必要时
超声),加甲醇至刻度,摇匀,045μm微孔滤膜过
滤,取续滤液,即得。
2.4 线性关系 精密吸取392mg·L-1党参炔苷
对照品溶液适量,分别配置成 6125,1225,245,
49,98,196,2352,3136mg·L-1的溶液。将上述
对照品溶液进样,进样量10μL,以对照品的进样量
对峰面积积分值进行回归,得回归方程为 Y=
14874X+15552,r=09999,党参炔苷在
6125~392μg呈良好的线性关系。
2.5 精密度试验 精密吸取98mg·L-1的党参炔
苷对照品溶液,重复进样6次,每次进样10μL,党
参炔苷峰面积 RSD104%,精密度良好。
2.6 稳定性试验 精密吸取同一样品溶液,室温放
置,分别在0,2,4,8,16,24,48h进样,党参炔苷峰
面积 RSD163%,表明供试品溶液在48h稳定。
2.7 重复性试验 取同一样品,按2.3项下方法制
备6份供试品溶液,并测定党参炔苷含量,RSD
156%。
2.8 加样回收试验 采用加样回收法,精密称取已
知含量(含量为00415%)样品,9份,分别精密加
入不同量的党参炔苷对照品溶液,按样品溶液的制
备方法处理,在同样色谱条件下测定其党参炔苷的
含量,结果见表2。
表2 党参块茎中党参炔苷加样回收率
称样量
/g
样品中量/
mg
加入量/
mg
测得量
/mg
回收率
/%
平均值
/%
RSD
/%
20002 08308 0686015318 1022 1018 275
20001 08307 0686015088 988
20004 08309 0686015472 1044
20001 08307 0882017469 1039 1011 252
20000 08307 0882017169 1005
20004 08309 0882017031 989
20004 08309 1176020163 1008 1004 142
20003 08308 1176020109 1003
20005 08309 1176020426 1030
2.9 样品测定 分别精密吸取样品溶液和对照品
各10μL,注人高效液相色谱仪中,按2.1项下色谱
条件测定,测定峰面积积分值,按外标法计算样品溶
液中的党参炔苷含量,结果见表 3,样品溶液的
HPLC图见图1。
表3 样品中党参炔苷含量(n=3) %
No. 质量分数 RSD No. 质量分数 RSD
1 00735 055 13 00423 16
2 00258 13 14 00256 17
3 00457 13 15 00167 05
4 00865 079 16 00967 011
5 00941 088 17 00611 24
6 00697 13 18 00447 041
7 00331 093 19 00298 26
8 00167 039 20 00106 064
9 00504 13 21 00042 22
10 00258 037 22 00103 23
11 00256 11 23 00502 11
12 00608 25 24 00140 27
3 讨论
依次选用 30% ~100%甲醇、甲醇01mol·
L-1盐酸(1∶1,2∶1,1∶2),甲醇氯仿(1∶1)为提取溶
剂进行考察,结果发现样品用甲醇提取效果最佳,故
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2008年9月
中 国 中 药 杂 志
ChinaJournalofChineseMateriaMedica
Vol.33,Issue 17
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A.对照品;B.样品;1党参炔苷
图1 党参炔苷对照品和川党参样品HPLC图
选定甲醇为提取溶剂。考察了超声、回流、索式提
取、冷浸共4种提取方法和不同提取时间,发现索式
提取效率最高,结果选定用索式提取提取3h作为
提取方法。因为药材中党参炔苷含量较低,也考察
了1,2,4g3种药材用量进行提取,结果发现用4g
药材进行样品溶液制备,进样量10μL,效果最佳。
考察了乙腈水、甲醇水、乙腈不同浓度醋酸水溶
液,结果发现以乙腈05%醋酸水溶液(20∶80)为流
动相所得色谱图效果最佳。党参中醇溶性成分主要
包括聚乙炔醇类和酚酸类等成分,作者分别考察了
在230,254,268,285,290nm处样品溶液的色谱
图,结合 DAD三维图、峰形及个数,选择268nm作
为检测波长。
聚乙炔类化合物党参炔苷是重要的特征性成
分,对于党参类生药的品质评价以及化学系统学方
面的研究均具有一定的意义。党参炔苷的存在,可
作为党参的一个重要鉴别和质量评价手段。在对含
量测定结果分析时发现,川党参中党参炔苷的含量
高于党参和素花党参这两个品种,另外,在对比不同
川党参药材主要产区重庆市巫溪县、巫山县、奉节
县、南川市、湖北省竹溪县、陕西省平利县的川党参
药材中党参炔苷含量时发现,陕西省平利县、湖北省
竹溪县、重庆市巫溪县3地药材党参炔苷相对含量
较高,且3县地理位置相互靠近,也与其历来为川党
参的主产区相映证。同时作者也发现同一产地的川
党参药材中党参炔苷的含量也有一定差异,这是否
与本实验采集样品时选择的土壤,气候,海拔等条件
有联系,有待于进一步探索。
[参考文献]
[1] 朱恩圆,贺 庆,王峥涛,等.党参化学成分研究[J].中国药科
大学学报,2001,32(2):94.
[2] HEQing,ZHUEnyuan,WANGZhengtao,etal.Flavonesiso
latedfromCodonopsisxundianensis[J].ChinPharmSci,2004,13
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[3] 贺 庆,朱恩圆,王峥涛,等.党参中党参炔苷HPLC分析[J].
中国药学杂志,2005,40(1):56.
[4] 赵晓华,刘养清,裴晓丽.党参中党参炔苷的 HPLC分析[J].
山西中医学院学报,2006,7(5):49.
[5] 张勇慧,张锦文,阮汉利,等.参芪扶正注射液中党参药材
HPLC指纹图谱研究[J].中药材,2006,29(12):1355.
DeterminationoflobetyolininrootofCodonopsistangshenfrom
variouscultivationareasbyhighperformanceliquidchromatography
SONGDan1,2,3,CHENGXuemei1,2,4,LILongyun3,ZHONGGuoyue3,WANGZhengtao1,2,4
(1.InstituteofChineseMateriaMedica,ShanghaiUniversityofTraditionalChinesemedicine,Shanghai201203,China;
2.KeyLaboratoryofStandardizationofChineseMedicinesofMinistryofEducation,Shanghai201203,China;
3.ChongqingAcademyofChineseMateriaMedica,Chongqing400065,China;
4.ShanghaiR&DCenterforStandardizationofChineseMedicine,Shanghai201203,China)
[Abstract] Objective:TodeterminelobetyolinintherootofCodonopsistangshenfromthevariouscultivationareas.Method:
ASupelcoDiscoveryC18Column(46mm×250mm,5μm)wasusedwithacetonitrile05% aceticacidinwater(20∶80)asthe
mobilephaseandUVdetectionwasat268nm.Result:Twentyfourbatchesofthesampleswereanalyzed.Thecontentoflobetyolin
rangedfrom0040309667mg·g-1.Conclusion:Themethodwassimple,reproducibleandreliable.Itcanbeusedtocontrolthe
qualityofC.tangshen.
[Keywords] Codonopsistangshen;highperformanceliquidchromatography;lobetyolin
[责任编辑 王亚君]
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第33卷第17期
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