全 文 ：＊湖北省卫生厅科研基金项目(2005 , JX2C42)
长叶胡颓子对大鼠结肠炎氧自由基和炎症介质的影响＊
(445000　恩施)　湖北省恩施自治州中心医院检验科　张廉生
(445000　恩施)　湖 北 民 族 学 院 医 学 院　李玉山　林　平
　　【摘要】　目的　研究长叶胡颓子果实提取物对大鼠结肠炎损伤氧自由基和炎症介质的影响。方法　建立大鼠结肠炎模
型 ,采用长叶胡颓子果实提取物(300 、500、1 000 mg/ kg)灌胃 2 周后 , 检测超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶
(GSH-Px)活性以及丙二醛(MDA)含量和肿瘤坏死因子(TNF)、血清白细胞介素(IL)-6 、IL-8 、IL-10 水平。 结果　长叶胡颓
子果实提取物灌胃均能不同程度减少模型大鼠 MDA 含量 , 提高 SOD、GSH-Px 活性 , 使显著升高的 TNF 、IL-6 、IL-8 水平下
降 ,降低的 IL-10水平升高 , 且与用药剂量呈一定量效关系。结论　长叶胡颓子通过清除氧自由基 、抑制炎症介质的激活 , 对
结肠炎大鼠结肠损伤进行修复 ,减轻炎症反应和组织破坏。
【关键词】　结肠炎　长叶胡颓子　自由基　炎症介质　大鼠
　　Protective effects of Elaeagnus bockii Diels on the colon injury in colonitis rats.Zhang L iansheng 1 , Li Y ushan , L in Ping.
1Central Hospital o f Enshi Autonomy Pre f ecture , Enshi 445000
【Abstract】　Objective　To study the protective effect of Elaeagnus bockii Diels water ex tract on co lonitis in rats.Methods　Rat
colonitis model w as established.Elaeagnus bockii Diels water ex tract(300 , 500 amd 1000 mg/ kg)was administered by cly ster once a
day of tw o weeks.The activity of GSH-Px , SOD and the levels of MDA in the colon , and the levels of serum TNF , IL-6 , IL-8 and
IL-10 w ere measured.Results　Elaeagnus bockii Diels water extract could reduce the levels of MDA , increase the activity of SOD and
GSH-Px in model rats , could decrease the significantly elevated TNF , IL-6 , IL-8 , and lower the levels of IL-10 in the model g roup in
a do se-dependent manner.Conclusion　Treatment with Elaeagnus bockii Diels can relieve the inflammation reaction and alleviate the co-
lon injury in co lonitis rats by eliminating oxygen free radical and inhibiting the activation of inflammato ry mediators.
【Key words】　Colonitis　Elaeagnus bockii　Diels　F ree radical　I nflammatory mediato rs　Rats
　　长叶胡颓子(EBD)属珍贵的药食两用植物 ,根 、
叶 、果皆可入药[ 1] 。长叶胡颓子可健胃 ,治疗脾胃虚
弱 、消化不良等症状 ,其果实有涩肠止泻作用[ 2] 。为
探讨长叶胡颓子对炎症性肠炎是否有抗损伤保护作
用 ,笔者通过建立大鼠免疫性结肠炎模型 ,采用长叶
胡颓子灌胃给药 ,进行了相关研究 。
材料与方法
一 、长叶胡颓子果实水提取物
长叶胡颓子果实于 2005年 4月采自湖北恩施
自治州巴东野三关。长叶胡颓子果实水提取物:以
下简称提取物(生药含量 1 g/ml),挑选上好果实用
水煎煮 3次 ,过滤后浓缩成 1 g/ml的浓度即得 。
二 、试剂和仪器
2 ,4 , 6-三硝基苯磺酸(TNBS)为美国 Sigma 公
司产品 ,5-氨基水杨酸(5-ASA)原料药由国怡药业
有限公司提供(批号 0209477), 超氧化物歧化酶
(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶
(GSH-Px)检测试剂盒由南京建成生物工程研究所
提供 ,肿瘤坏死因子(TNF)、白细胞介素(I L)-6 、IL-
8试剂盒由解放军总医院科技开发中心放免所提
供 , IL-10试剂盒由深圳晶美生物工程公司提供 ,
722-1型分光光度计(上海精密科学仪器有限公司
生产)。T L-16G 型高速冷冻离心机(上海实验仪
器厂生产),GC-1200γ放射免疫计数器(中国安徽
科大创新股份有限公司)。
三 、动物模型的建立及处理
健康Wirst大鼠 ,60 只 ,雌雄兼用 ,体重 250 ～
270 g ,由湖北省动物实验中心提供。实验设正常
组 、模型组 、阳性药物治疗组(5-ASA100 mg/kg)、
胡颓子给药组(300 、500 、1 000 mg/kg),每组 10只。
参照文献[ 3]方法:大鼠禁食 24 h 后(饮水照常),
将溶于体积分数为 50%乙醇的 TNBS 按 100 mg/
kg 体重 、体积0.25 ml/只 ,用导管(直径 4 mm)经肛
门插入结肠内约 8 cm 灌肠 1次 ,建立大鼠结肠炎模
型 。从制备模型 7 d 后开始灌胃给药 , 1 次/d ,共
14 d 。正常组与模型组均给予等容量生理盐水灌
胃 。
四 、检测方法
实验用药结束后先行尾动脉采血放免法检测
·383·华中医学杂志 2006 年第 30卷第 5期
TNF 、IL-6 、IL-8 、IL-10;处死动物 ,结肠标本常规石
蜡包埋 、切片 , HE染色 ,光镜观察;另取新鲜结肠组
织 ,用预冷的生理盐水冲洗除去血液 ,滤纸吸干称
重 ,加 9倍生理盐水 ,在低温(冰水)中用玻璃研磨器
研磨制成 10%的组织匀浆 ,高速离心取上清液低温
(3 ℃)保存待测。MDA 、SOD 、GSH-Px 检测操作
按试剂盒说明书进行 。
结　　果
一 、对结肠炎大鼠氧自由基的影响 与模型组比
较 ,长叶胡颓子提取物(300 、500 、1 000 mg/kg)与
5-ASA(100 mg/kg)灌胃均降低结肠组织中 MDA
含量 ,升高 SOD 、GSH-Px 活性 ,且长叶胡颓子中 、
大剂量作用显著 ,见附表。
二 、对结肠炎大鼠血清中炎症介质的影响　与
正常组比较 ,模型组大鼠血清中 TNF 、IL-6 、IL-8水
平明显升高 , IL-10明显降低;经过 2周的灌胃用药
后 ,与模型组比较 ,胡颓子组大鼠血清中 TNF 、IL-
6 、IL-8水平均降低 , IL-10明显升高 ,见附表 。
附表　长叶胡颓子对结肠炎大鼠氧自由基及血清中 TNF 及 IL-6、8、10 水平的影响( x±s)
　　　组别 n MDA[ nmol/mg.pro]
SOD
[ Nu/ mg.p ro]
GSH-Px
[ U/ g.pro]
TNF
(μg/ L)
IL-6
(ng/ L)
IL-8
(μg/ L)
IL-10
(ng/ L)
正常组 10 1.73±0.24 270.30±37.45 25.64±6.62 1.79±0.31 174.06±40.97 0.59±0.17 88.31±16.62
模型组 10 2.66±0.65# 159.77±36.22# 10.54±1.14# 3.30±0.63# 311.31±69.19# 1.53±0.38# 30.74±12.91#
5-ASA100 mg/ kg 10 1.86±0.49■ 243.99±44.78■ 20.50±5.71■ 2.19±0.35■ 208.10±35.08■ 0.83±0.16■ 67.32±10.36■
EBD 300 mg/kg 10 2.16±0.41＊ 217.04±32.30＊ 14.52±3.78＊ 2.65±0.40＊ 234.73±26.85＊ 1.20±0.33＊ 39.36±9.65＊
EBD 500 mg/kg 10 1.97±0.35■ 225.37±34.64■ 16.36±5.46■ 2.51±0.47■ 219.49±30.83■ 1.05±0.24■ 50.26±11.32■
EBD 1 000 mg/k g 10 1.96±0.30■ 251.80±22.54■ 19.09±7.34■ 2.21±0.41■ 212.97±29.98■ 0.92±0.13■ 59.68±13.65■
注:与正常组比较 #P<0.01;与模型组比较 ■P<0.01 , ＊ P<0.05
讨　　论
本实验采用 TNBS 与乙醇诱发大鼠结肠炎模
型后 ,通过结肠标本病理组织学观察显示:模型组大
鼠结肠粘膜充血水肿 ,大量炎性细胞浸润 ,肠壁增
厚 ,黏膜表面有明显坏死及溃疡形成 ,腺体中杯状细
胞减少 ,表明模型的建立成功 。主要机制为乙醇破
坏结肠黏膜屏障 , TNBS 渗入结肠与大分子物质结
合 ,形成全抗原引起肠壁一系列免疫应答与炎症反
应。其发病机制及病理表现与人类炎症性肠炎非常
相似 。本实验发现 ,模型组大鼠血清中的促炎因子
与抗炎因子水平变化明显 ,结肠组织中 MDA 含量
明显升高 、SOD 活性降低 ,证明了免疫异常与氧自
由基在炎症性肠病的发病机制中起重要作用 。
实验中 ,长叶胡颓子果实水提取物能明显减少
模型大鼠结肠组织代谢产生的 MDA 含量 ,升高重
要抗氧化酶 SOD 、GSH-Px 的活性 ,表现出抗氧化
特性 ,从而抑制结肠组织中的脂质过氧化反应 ,保护
组织细胞 。炎症介质实质上是维持免疫细胞功能协
调运转 、相互联络的“信使” ,其促炎因子与抗炎因子
间的失衡是导致结肠免疫损伤的主要因素。实验结
果显示 ,长叶胡颓子能明显降低结肠炎大鼠 TNF 、
IL-6 、IL-8水平和升高 IL-10水平 ,表明其对促炎因
子的激活有明显抑制作用 ,这对减轻炎症反应与组
织破坏有积极作用;另外 ,通过病理组织学检查表
明:长叶胡颓子组病理组织损伤程度明显缓解 ,且呈
一定剂量效应关系 ,显示采用长叶胡颓子提取液灌
胃用药可明显减轻结肠炎模型大鼠结肠损伤 ,缓解
炎症反应 ,表现出抗炎抗损伤的保护作用 。5-氨基
水杨酸是临床上最常用的治疗和预防溃疡性结肠炎
和节段性回肠炎的有效药物[ 4] ,在本实验中作为阳
性药物治疗与实验用药组进行对比 ,符合实验要求 ,
且达到明显效果。
以上结果表明 ,长叶胡颓子通过清除氧自由基
和免疫调节 ,对结肠炎大鼠结肠损伤进行修复 ,减轻
炎症反应和组织破坏。胡颓子为野生植物资源 ,果
实富含蛋白质 、氨基酸 、维生素 、糖类 、有机酸及矿物
质元素等 ,具有很高的营养食用价值 、药用价值和经
济价值 ,开发利用前景广阔 。
参 考 文 献
1　胡丰林.中国胡颓子属植物利用价值的初步分析.生物
学杂志 , 1996 , 13(4):30
2　黄泰康 ,丁志遵 , 赵守训等.现代本草纲目.第 1 版.北
京:中国医药科技出版 , 2001 , 1843 ～ 1844
3　梅　俏 ,于皆平 , 许建明等.褪黑素对结肠炎大鼠免疫功
能的影响.世界华人消化杂志 , 2002 , 10(2):193
4　刘文娟 ,赵正保.抗炎性肠病的氨基水杨酸类药物研究概
况.实用医药杂志 , 2004 , 21(4):373
收稿日期:2006.1.3.
·384· Cent ral China Medical Journal , 2006 , Vol.30 , No.5