全 文 ：伤大鼠免疫调节作用 ,一方面可能与怀牛膝本身能增强免疫功能
作用有关;另一方面还可能与改善中枢神经免疫调控障碍等有
关。但是怀牛膝水煎剂治疗重型颅脑损伤的最佳给药时机 、剂
量 、疗程及免疫调节机制有待进一步实验研究探讨。
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收稿日期:2010-05-03;　修订日期:2010-07-05
基金项目:甘肃省科技厅科技支撑计划项目(No.0804NKCA119-08)
作者简介:景　明(1963-),男(汉族),甘肃定西人 ,现任甘肃中医学院教
授 ,学士学位 ,主要从事中药新药的研究开发工作.
藏药湿生扁蕾对三硝基苯磺酸诱导
的大鼠溃疡性结肠炎模型的影响
景　明1 ,罗永皎 1 ,陈正君 1 ,李季文2
(1.甘肃中医学院 ,甘肃 兰州　730000;　2.甘肃省中医医院 ,甘肃 兰州　730050)
摘要:目的 观察藏药湿生扁蕾提取物(GTP)对实验性结肠炎大鼠过氧化物酶(MPO)、超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二
醛(MDA)水平的影响。方法 采用三硝基苯磺酸(TNBS)乙醇溶液灌肠制备大鼠实验性结肠炎(UC)模型 , 以正常大鼠 、UC
模型大鼠作对照 ,从大鼠结肠组织形态学改变及结肠组织内髓 MPO、SOD活性和 MDA水平等方面 ,考察 GTP对大鼠 UC的
影响。结果 UC模型组的 SOD活性显著低于正常组(P<0.05), MPO活性 、MDA水平显著高于正常组(P<0.05);GTP各
剂量组大鼠结肠组织大体形态和组织学损伤明显改善(P<0.05), SOD活性显著高于 UC模型组(P<0.05), MPO活性、
MDA水平显著低于 UC模型组(P<0.05), 与治疗药柳氮磺胺吡啶(SASP)比较无显著性差异(P>0.05)。结论 藏药湿生
扁蕾提取物对 TNBS诱导的大鼠溃疡性结肠炎有一定的治疗作用, 抗氧化应激可能是其作用机制之一。
关键词:结肠炎;　髓过氧化酶;　超氧化物歧化酶;　丙二醛;　湿生扁蕾
DOI标识:doi:10.3969 /j.issn.1008-0805.2011.02.039
中图分类号:R291.4　　文献标识码:B　　文章编号:1008-0805(2011)02-0351-02
　　湿生扁蕾是龙胆科扁蕾属植物 Gentianopsispaludosa
(Mum.)Ma.的干燥全草 ,藏药名为机合斗 , 具有清热解毒 、镇痛
止泻之功效 , 藏医用于治疗流行性感冒及胆病引起的发烧 , 民间
常用于肠胃炎 、小儿腹泻 [ 1] 。 对湿生扁蕾提取物体外抑菌作用
的研究已有报道 [ 2] , 有关湿生扁蕾对溃疡性结肠炎治疗方面的
研究 , 目前尚未见报道 , 为此 , 本实验应用三硝基苯磺酸(TNBS)
诱导的大鼠溃疡性结肠炎模型 ,研究湿生扁蕾提取物(GTP)对大
鼠结肠炎 MPO、SOD、MDA表达的影响 , 为湿生扁蕾的进一步开
发利用提供理论依据 。
1　材料与仪器
1.1　药品与试剂 湿生扁蕾药材采自甘肃甘南州冶力关镇 ,经甘
肃省药品检验所宋平顺主任药师鉴定为龙胆科扁蕾属植物 Gen
tianopsispaludosa(Mum.)Ma.的干燥全草;GTP(由甘肃中医学院
科研实验中心提供 , 含量为 1 g原生药 /ml);柳氮磺胺吡啶
(SASP, 海南红惠制药有限公司生产 , 临用前用蒸馏水配成 0.3
mg/ml的混悬液);2, 4, 6-三硝基苯磺酸(TNBS, Sigma公司);戊
巴比妥钠(北京化学试剂公司);MPO、SOD、MDA检测试剂盒(西
安舟鼎国生物技术有限责任公司)。
1.2　动物 SPF级 Wistar大鼠 , 体质量 180 ～ 220 g,雌雄各半 , 均
由甘肃中医学院实验动物中心提供 ,合格证号 SCXK(甘)2004-
0006。
1.3　仪器 UV-3010紫外分光光度计(日本岛津);Primo高速
台式冷冻离心机(德国 Heraeus公司);R-200旋转蒸发仪(瑞士
BUCHI公司);HH-601恒温水浴锅(金坛市恒丰仪器厂);XH-
B旋涡混合器(姜堰市康健医疗器械有限公司);玻璃匀浆器(上
海玻璃仪器厂);AE-240电子天平(梅特勒 -托利多仪器上海
分公司)。
2　方法 [ 3 , 4]
2.1　造模与取材 随机将大鼠分为正常组 、模型组 、SASP组(0.3
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LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2011VOL.22NO.2 时珍国医国药 2011年第 22卷第 2期
g/kg), GTP高 、中 、低剂量组(15, 7.5, 3.5 g生药 /kg), 每组 10
只 , 禁食不禁水。 24 h后腹腔注射 2%的戊巴比妥钠 , 使大鼠轻
微麻醉后 , 将直径 2mm的乳胶管经肛门轻轻插入大鼠体内大约
8 cm处 , 用注射器一次性注入 TNBS的 50%乙醇溶液到大鼠的
肠腔内(TNBS125 mg/kg), 每只 0.5ml, 将大鼠的尾部提起 ,倒置
30 s,使造模剂充分渗透入大鼠的肠腔 , 正常组注入等量 50%乙
醇溶液。造模 24h后开始灌胃给药 , 正常组和模型组灌等量生
理盐水 , 连续给药 4周。末次给药 2 h后脱颈椎处死大鼠 , 开腹
分离结肠 , 沿肠系膜缘剪开肠腔 , 4 ℃生理盐水冲洗 , 平铺在塑料
板上 , 肉眼观察结肠损伤程度 ,进行结肠大体形态损伤评分 ,指标
包括粘连局部充血 、溃疡形成及炎症。留取距肛门 8 ～ 10 cm的
结肠黏膜组织 , 石蜡包埋 , 常规 HE染色 , 镜下观察结肠黏膜损
伤 , 进行结肠组织学损伤评分 ,指标包括溃疡炎症肉芽肿 、纤维化
及病变深度。余下的大鼠结肠组织液氮 -70℃保存待测 。
2.2　生化指标测定 取大鼠结肠组织 , 分别按照 MPO、SOD、MDA
检测试剂盒说明书进行操作。
2.3　数据处理 实验结果用 x±s表示 ,采用统计软件 SPSS13.0
进行单因素方差分析处理 ,对大体形态和组织学损伤等级资料采
用秩和检验 , 以 P<0.05有统计学意义。
3　结果
3.1　GTP对 TNBS诱导的 UC大鼠结肠大体形态和组织学损伤
的影响 结果见表 1。正常组大鼠无腹泻 、便血 , 结肠黏膜光滑无
溃疡 , 腺体排列整齐。模型组(TNBS组)大鼠表现为萎靡 、竖毛 、
拱背 、懒动 、厌食 , 均出现不同程度的腹泻 、稀便 , 伴有血便 , 可持
续 3周以上。 4周后处死动物 , 可见结肠与组织粘连 , 黏膜充血
水肿 , 溃疡形成 ,肠管病变部位出现狭窄 ,光镜下可见溃疡及炎性
渗出物 , 主要表现为中性粒细胞浸润 ,出现黏膜腺体排列变形 ,与
正常组比较大体形态评分和组织学评分明显增高(P<0.05)。
GTP高 、中 、低剂量组及 SASP组大体形态评分和组织学评分明
显降低 , 与模型组比较 (P<0.05), 均可改善结肠充血水肿等炎
性症状 , 减少溃疡面积 ,促进溃疡愈合。
3.2　GTP对 TNBS诱导的 UC大鼠结肠组织 SOD、MPO活性及
MDA水平的影响 结果见表 2。模型组大鼠结肠黏膜组织 SOD
值显著低于正常组 , MPO、MDA值显著高于正常组(P<0.05)。
GTP各剂量组及 SPSA组均能升高 UC大鼠 SOD值 , 降低 MPO、
MDA值(P<0.05)。
表 1　GTP对 TNBS诱导的 UC大鼠结肠大体
形态和组织学损伤的影响( x±s)
组别 剂量 C/g·kg-1 大体形态评分 组织学评分
正常 - 0.57±0.41 0.66±0.38
模型 - 5.75±1.22△ 4.92±0.83△
SASP 0.3 2.29±0.79▲ 1.79±0.76▲
GTP高 15.0 2.71±0.91▲ 2.21±0.86▲
GTP中 7.5 3.01±0.92▲ 3.13±0.84▲
GTP低 3.5 3.77±0.97▲ 3.69±0.95▲
　　与正常组比较 , △P<0.05;与模型组比较, ▲P<0.05;n=10
表 2　GTP对 UC大鼠结肠组织中
SOD、MPO和 MDA的影响( x±s)
组别 剂量C/g· kg-1
SOD/
U· mL-1
MDA/
nmoL· mL-1
MPO/
U· g-1
正常 - 14.75±0.77 31.25±1.97 0.38±0.04
模型 - 6.82±0.38△ 43.24±1.22△ 1.27±0.07△
SASP 0.3 13.27±0.59▲ 32.39±1.88▲ 0.55±0.06▲
GTP(高) 15.0 12.66±0.54▲ 34.18±1.70▲ 0.73±0.05▲
GTP(中) 7.5 10.63±0.72▲ 36.61±1.51▲ 0.88±0.10▲
GTP(低) 3.5 9.22±0.41▲ 37.43±1.29▲ 0.97±0.08▲
　　与正常组比较 , △P<0.05;与模型组比较 , ▲P<0.01;n=10
4　讨论
TNBS是一种半抗原 ,其诱导产生的大鼠(UC)模型除发生腹
泻 、便血 、体质量减轻等症状外 ,还可以诱发大鼠肠道炎症 ,肠黏
膜发生溃疡 、水肿 、糜烂 、大量的炎性细胞浸润等组织病理学改
变 , 类似于人类的 UC, 由于制备简单省时而被广泛地应用于抗
UC药物的药效学考察。 MPO是在中性粒细胞中含量较高的一
种酶 , 其含量的增高可以反映中性粒细胞在某一组织中的增高 ,
间接反映炎症在组织中的存在。因此 , MPO的水平可用来衡量
组织炎症的程度 ,成为评价 UC肠道炎性细胞浸润的指标 , 通过
测定 MPO酶的水平 , 可以间接的反映肠道炎症反应的程度。
SOD是存在于生物体内的一种抗氧化物酶 , 它能特异性清除超氧
自由基 ,从而抑制肠组织中的脂质过氧化反应 , 并能稳定细胞膜。
而 MDA是过氧化脂质的分解产物 , 它可引起蛋白质变性和交联 ,
使 DNA损伤 、酶及激素失活 , 损害细胞及细胞膜。 UC发生时 , 结
肠粘膜组织中 SOD活力下降 , MDA含量增高 , 而 MDA的高低又
间接反映了机体细胞受自由基攻击的严重程度 ,表明氧自由基通
过脂质过氧化反映参与了提取物 UC的发病过程 [ 5] 。
本研究表明 , GTP可升高 UC大鼠 SOD值 , 降低 MDA值 , 从
而清除氧自由基 ,减少过氧化脂质生成 , 降低 MPO活性 , 减少中
性粒细胞浸润 ,从而改善或减轻结肠炎症状。 GTP对 TNBS模型
大鼠的治疗作用是通过多个环节发生作用 ,但是具体的作用机制
还有待于进一步的研究。
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