全 文 ：第４０卷　第１１期
２０１２年１１月
西北农林科技大学学报（自然科学版）
Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｎｏｒｔｈｗｅｓｔ　Ａ＆Ｆ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ｎａｔ．Ｓｃｉ．Ｅｄ．）
Ｖｏｌ．４０ Ｎｏ．１１
Ｎｏｖ．２０１２
网络出版时间：２０１２－１０－３１　１６：５５
网络出版地址：ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｋｃｍｓ／ｄｅｔａｉｌ／６１．１３９０．Ｓ．２０１２１０３１．１６５５．０１２．ｈｔｍｌ
黄花补血草多糖的抗肿瘤作用研究
　［收稿日期］　２０１２－０８－２４
　［基金项目］　中央高校基本科研业务费专项（ＺＹＺ２０１１０６８）
　［作者简介］　龙　玲（１９７８－），女，新疆乌鲁木齐人，副教授，博士，主要从事天然产物抗癌活性研究。
Ｅ－ｍａｉｌ：ｌｏｎｇｌｗｓｍ＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｍ．ｃｎ
龙　玲１，王军平２，陈世恩１，马殊雯１，王明明１，阿依木古丽１，霍生东１
（１西北民族大学 生命科学与工程学院，甘肃 兰州７３００３０；２甘肃出入境检验检疫局 技术中心，甘肃 兰州７３００２０）
［摘　要］　 【目的】研究黄花补血草多糖对小鼠肝癌 Ｈ２２细胞生长的抑制作用及对Ｂｃｌ－２和Ｂａｘ蛋白表达的影
响。【方法】制备小鼠Ｈ２２实体瘤模型。提取黄花补血草多糖，研究其对小鼠Ｈ２２实体瘤的抑瘤率，并通过病理切片
观察肿瘤细胞的形态学变化。用免疫组化ＳＰ法检测黄花补血草多糖对 Ｈ２２肝癌细胞Ｂｃｌ－２和Ｂａｘ蛋白阳性细胞数
的影响，探讨其抗肿瘤机理。【结果】以阴性对照组为基数，黄花补血草多糖低（１２０ｍｇ／ｋｇ）、高（２４０ｍｇ／ｋｇ）剂量组及
环磷酰胺（ＣＴＸ，２５ｍｇ／ｋｇ）阳性对照组实体瘤各组抑瘤率分别为３１．３２％，４０．５２％和５６．６１％，与阴性对照组瘤体质
量相比显著或极显著减轻。与阴性对照组相比，黄花补血草多糖低、高剂量组Ｂｃｌ－２蛋白表达分别显著和极显著下
调，而Ｂａｘ蛋白表达显著上调。黄花补血草多糖高剂量组肿瘤细胞表现出坏死如核固缩深染、碎裂或溶解，甚至出现
红染区，个别细胞出现染色质浓缩、细胞皱缩、胞膜空泡化和膜周围凋亡小体的形成等凋亡现象。【结论】黄花补血草
多糖对小鼠肝癌Ｈ２２的生长有一定的抑制作用，其机制可能与抑制Ｂｃｌ－２和提升Ｂａｘ蛋白表达，从而促进肿瘤细胞凋
亡有关。
［关键词］　黄花补血草；多糖；Ｈ２２；Ｂｃｌ－２；Ｂａｘ
［中图分类号］　Ｒ９７９．１ ［文献标识码］　Ａ ［文章编号］　１６７１－９３８７（２０１２）１１－００１８－０５
Ａｎｔｉｔｕｍｏｒ　ｅｆｅｃｔｓ　ｏｆ　Ｌｉｍｏｎｉｕｍ　ａｕｒｅｕｍ（Ｌｉｎｎ．）ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ
ＬＯＮＧ　Ｌｉｎｇ１，ＷＡＮＧ　Ｊｕｎ－ｐｉｎｇ２，ＣＨＥＮ　Ｓｈｉ－ｅｎ１，ＭＡ　Ｓｈｕ－ｗｅｎ１，
ＷＡＮＧ　Ｍｉｎｇ－ｍｉｎｇ１，Ａｙｉｍｕｇｕｌｉ　１，ＨＵＯ　Ｓｈｅｎｇ－ｄｏｎｇ１
（１　Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｌｉｆｅ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｎｏｒｔｈｗｅｓｔ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｆｏｒ　Ｎａｔｉｏｎａｌｉｔｉｅｓ，Ｌａｎｚｈｏｕ，Ｇａｎｓｕ７３００３０，Ｃｈｉｎａ；
２　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　Ｃｅｎｔｅｒ，Ｇａｎｓｕ　Ｅｎｔｒｙ－ｅｘｉｔ　Ｉｎｓｐｅｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｑｕａｒａｎｔｉｎｅ　Ｂｕｒｅａｕ，Ｌａｎｚｈｏｕ，Ｇａｎｓｕ７３００２０，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：【Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ】Ｔｈｅ　ｒｅｓｅａｒｃｈ　ｗａｓ　ｔｏ　ｓｔｕｄｙ　ｔｈｅ　ａｎｔｉｔｕｍｏｒ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｓｔｉｎｇｓ　ｏｆ　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ
ｆｒｏｍＬｉｍｏｎｉｕｍ　ａｕｒｅｕｍ（Ｌｉｎｎ．）（ＬＡＬ－Ｐ）ｏｎ　ｍｉｃｅ　ｂｅａｒｉｎｇ　ｈｅｐａｔｏｃｅｌｕｌａｒ　ｃａｒｃｉｎｏｍａ（Ｈ２２）ａｎｄ　ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓ－
ｓｉｏｎ　ｏｆ　Ｂｃｌ－２ａｎｄ　Ｂａｘ．【Ｍｅｔｈｏｄ】Ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ＬＡＬ－Ｐ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｒａｔｅ　ｏｆ　ｓｏｌｉｄ　ｔｕｍｏｒ　ｗｅｒｅ　ｓｔｕｄｉｅｄ　ｂｙ
ｂｕｉｌｄｉｎｇ　Ｈ２２ｍｉｃｅ　ｔｕｍｏｒ　ｍｏｄｅｌ．Ｔｈｅ　ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ　ｃｈａｎｇｅｓ　ｏｆ　ｔｕｍｏｒ　ｃｅｌｓ　ｗｅｒｅ　ｏｂｓｅｒｖｅｄ　ｂｙ　ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ　ｓｅｃ－
ｔｉｏｎ．Ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｃｈａｎｇｅｓ　ｏｆ　ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ｃｅｌ　ｏｆ　Ｂｃｌ－２ａｎｄ　Ｂａｘ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｏｆ　ＬＡＬ－Ｐ　ｗｅｒｅ　ｏｂｓｅｒｖｅｄ　ｂｙ
ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌ　ＳＰ　ｍｅｔｈｏｄ　ｔｏ　ｓｔｕｄｙ　ｉｔｓ　ａｎｔｉｔｕｍｏｒ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍ．【Ｒｅｓｕｌｔ】Ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｒｏｌ
ｇｒｏｕｐ，ｔｈｅ　ＬＡＬ－Ｐ（１２０ｍｇ／ｋｇ　ａｎｄ　２４０ｍｇ／ｋｇ）ａｎｄ　ＣＴＸ（２５ｍｇ／ｋｇ）ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎｓ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ｒｅｄｕｃｅｄ
ｔｈｅ　ｔｕｍｏｒ　ｗｅｉｇｈｔ　ｏｆ　ｓｏｌｉｄ　ｔｕｍｏｒ．Ｔｈｅ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｒａｔｅｓ　ｏｆ　ｓｏｌｉｄ　ｔｕｍｏｒ　ｗｅｒｅ　ｕｐ　ｔｏ　３１．３２％，４０．５２％ａｎｄ
５６．６１％ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅｒｅ　ｗａｓ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ　ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ．Ｔｈｅ　ｔｕｍｏｒ　ｃｅｌｓ　ｏｆ
ＬＡＬ－Ｐ－ｔｒｅａｔｅｄ　ｍｉｃｅ　ｓｈｏｗｅｄ　ａ　ｍａｓｓｉｖｅ　ｎｅｃｒｏｓｉｓ　ｓｕｃｈ　ａｓ　ｎｕｃｌｅｕｓ　ａｔｒｏｐｈｙ，ｄｉｓｉｎｔｅｇｒａｔｉｎｇ　ａｎｄ　ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｌｅｓｓ
ｒｅｄ　ｓｔａｉｎｉｎｇ　ｒｅｇｉｏｎ．Ｓｏｍｅ　ｃｅｌｓ　ｕｎｄｅｒｇｏｉｎｇ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｃｈｒｏｍａｔｉｎ　ｃｏｎｄｅｎｓａｔｉｏｎ，ｃｅｌ　ｓｈｒｉｎｋａｇｅ，ｐｌａｓｍａ
ｍｅｍｂｒａｎｅ　ｂｌｅｂｂｉｎｇ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｆｏｒｍａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｍｅｍｂｒａｎｅ－ｅｎｃｌｏｓｅｄ　ａｐｏｐｔｏｔｉｃ　ｂｏｄｉｅｓ．Ｍｅａｎｗｈｉｌｅ，ｔｈｅ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｅｘ－
DOI:10.13207/j.cnki.jnwafu.2012.11.009
ｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　Ｂａｘ　ｉｎｃｒｅａｓｅｄ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　Ｂｃｌ－２ｄｅｃｒｅａｓｅｄ　ａｆｔｅｒ　ｏｒａｌ　ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＬＡＬ－Ｐ．
【Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ】ＬＡＬ－Ｐ　ｓｈｏｗｅｄ　ａｎｔｉｔｕｍｏｒ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ａｎｄ　ｉｔｓ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍ　ｍｉｇｈｔ　ｂｅ　ｒｅｌａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｕｐ－ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ
ｏｆ　Ｂａｘ　ａｎｄ　ｄｏｗｎ－ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｂｃｌ－２ｐｒｏｔｅｉｎ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｌｉｍｏｎｉｕｍ　ａｕｒｅｕｍ（Ｌｉｎｎ．）；ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ；Ｈ２２；Ｂｃｌ－２；Ｂａｘ
　　黄花补血草（Ｌｉｍｏｎｉｕｍ　ａｕｒｅｕｍ （Ｌｉｎｎ．））系蓝
雪科补血草属（Ｌｉｍｏｎｉｕｍ Ｍｉｌ）植物，又称干活草、
实花子（甘肃）、金佛花（青海），为多年生草本植物，
散生于滩地、湖盆、戈壁、石质山坡、流动沙丘等荒漠
草原带和草原带的盐化低地上，适于轻度盐化的土
壤及砂砾质、砂质土壤，我国呼伦贝尔沙地、腾格里
沙漠、甘肃河西走廊沙地及兰州等地均有分布。黄
花补血草具有解热、止痛、补血、消炎、消肿、止血、解
毒等功效［１－２］。目前，国内对黄花补血草的研究报道
仅限于组织培养技术、种子超干处理及保存技术和
化学成分研究等方面。如刘宇等［３］从黄花补血草中
提取挥发油，分离得到１３７个化合物，主要的化学成
分为２－硝基乙醇等。张应鹏等［４］对兰州地区的黄花
补血草进行了分离纯化，得到６种化合物———北美
圣草素、柚皮素、槲皮素、β－谷甾醇、６，８－二羟基色原
酮、胡萝卜苷。刘宇等［５］测定了黄花补血草中总黄
酮的含量。谷建等［６］研究了超声提取黄花补血草中
总黄酮的最佳工艺。叶冠等［７］对黄花补血草的药理
活性进行了研究，发现其对血小板活化因子有拮抗
作用。
国外目前尚未见对黄花补血草的研究报道，仅
有不到１０篇资料对补血草属其他植物的化学成分
和药理活性进行了阐述。Ｌｉｎ等［８］从西伯利亚补血
草中分离出了一种新的黄酮醇苷类化合物 ｍｙｒｉｃｅ－
ｔｉｎ　３－Ｏ－（２″－Ｏ－ｐ－ｈｙｄｒｏｘｙｂｅｎｚｏｙｌ）－α－ｒｈａｍｎｏｐｙｒａｎｏ－
ｓｉｄｅ。Ｋｏｚｈａｍｋｕｌｏｖａ等［９］从大叶补血草中分离得
到ＧｍｅｌｉｎｏｓｉｄｅⅠ。Ｍｕｒｒａｙ等［１０］从巴西补血草根
中分离了 ５ 种活性成分：ｍｙｒｉｃｅｔｉｎ　３－Ｏ－α－ｒｈａｍ－
ｎｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ、（－）－ｅｐｉｇａｌｏｃａｔｅｃｈｉｎ　３－Ｏ－ｇａｌａｔｅ、
（－）－ｅｐｉｇａｌｏｃａｔｅｃｈｉｎ、ｇａｌｉｃ　ａｃｉｄ和（＋）－ｇａｌｏｃａｔｅ－
ｃｈｉｎ。Ｋｕｏ等［１１］发现，从补血草中提取的ｓａｍａｒａｎ－
ｇｅｎｉｎ　Ｂ可抑制Ｖｅｒｏ细胞中Ⅰ型单纯疱疹病毒的增
殖，其抗病毒机制似乎与抑制Ⅰ型单纯疱疹病毒α
基因表达有关。Ｃｈａｕｎｇ等［１２］发现，补血草根的水
提物和叶的甲醇氯仿抽提物可显著降低急性肝衰竭
小鼠的氨基转氨酶浓度，而且甲醇氯仿抽提物对肝
癌Ｈｅｐ３Ｂ细胞有细胞毒作用，因此证明其具有保肝
功效。Ｔａｎｇ等［１３］发现，补血草属植物提取物可以
通过调节线粒体中 Ｃａ２＋－ＡＴＰ酶的活性来维持
Ｃａ２＋平衡，进而预防小鼠肝脏线粒体损伤。
近年来，对天然植物多糖的研究表明其在抗肿
瘤方面具有较好疗效，而笔者前期对黄花补血草化
学成分的研究也表明其中含有大量多糖。基于此，
本试验对黄花补血草多糖的抗肿瘤作用进行了研
究，并首次探讨了其抗癌的可能作用机理，旨在为进
一步开发黄花补血草为新型抗癌药物提供理论依据。
１　材料与方法
１．１　材　料
１．１．１　试验动物　昆明种小鼠，６～８周龄，体质量
（２０±２．０）ｇ／只，雌性，由兰州大学动物实验中心提
供，饲养环境：温度２０～２２℃，相对湿度４５％～５０％。
１．１．２　试　剂　环磷酰胺（ＣＴＸ），中美合资山西
泰盛制药有限公司提供，批号０１１１２１，使用前以注
射用水配制成２．５ｍｇ／ｍＬ药液，备用。鼠抗Ｂａｘ
（Ｐ－１９）、Ｂｃｌ－２（Ｎ－１９）单克隆抗体均购自Ｓａｎｔａ　Ｃｒｕｚ
生物技术公司。
１．１．３　肿瘤细胞株　小鼠肝癌 Ｈ２２细胞株引自甘
肃省医学科学研究院，在昆明小鼠腹腔内传代。
１．２　方　法
１．２．１　黄花补血草多糖的制备　黄花补血草于
２０１１－０９采自兰州市榆中县萃英山，由西北民族大
学生命科学与工程学院刘慧霞副教授鉴定，植物标
本保存于该院植物生物技术实验室。采摘时齐地面
割取地上部分，除去杂质和泥土并晒干，经粉碎机粉
碎后备用。称取黄花补血草１．０ｋｇ，加６倍体积蒸
馏水浸没后８０℃加热２ｈ，过滤，滤渣加６倍体积蒸
馏水浸没后，原温度下加热１ｈ，过滤，滤渣再次加
入蒸馏水浸没，原温度下加热０．５ｈ，过滤，将３次收
集到的滤液合并，５０℃减压浓缩后将浓缩液１００
ｍＬ和等量丙酮萃取脱脂，下层水相加体积分数
１０％三氯乙酸；冰箱内放置４ｈ，２　５００ｒ／ｍｉｎ离心除
去蛋白沉淀，对上清液再重复减压浓缩后步骤数次，
直至不再出现沉淀。取上清液，用氨水调节ｐＨ 值
至８．０，然后在４０℃滴加１０ｍＬ体积分数３０％
Ｈ２Ｏ２ 至溶液颜色为浅棕色，保温２ｈ，２　５００ｒ／ｍｉｎ
离心取上清液。加热上清液使 Ｈ２Ｏ２ 分解，并用高
锰酸钾溶液检测 Ｈ２Ｏ２ 是否去除干净。向上清液中
９１第１１期 龙　玲，等：黄花补血草多糖的抗肿瘤作用研究
加入无水乙醇４００ｍＬ，使其体积分数达８０％，置冰
箱过夜后２　５００ｒ／ｍｉｎ离心５ｍｉｎ，所得沉淀即为黄
花补血草粗多糖（Ｌｉｍｏｎｉｕｍ　ａｕｒｅｕｍ （Ｌｉｎｎ．）Ｐｏｌｙ－
ｓａｃｃｈａｒｉｄｅ，ＬＡＬ－Ｐ），干燥后称质量为６４．８ｇ（提取
率为原药材的６．５％），保存备用。参照预试验及活
性筛选给药量，将 ＬＡＬ－Ｐ配制成６ｍｇ／ｍＬ和１２
ｍｇ／ｍＬ的药液备用。
１．２．２　小鼠肝癌模型的建立　小鼠肝癌 Ｈ２２实体
瘤模型的建立：在无菌条件下，取在昆明小鼠体内传
代的 Ｈ２２肿瘤细胞，于每只小鼠右前肢腋下注射
２×１０６ 个肿瘤细胞（０．１ｍＬ），接种成功率１００％。
１．２．３　试验分组和治疗方案　肿瘤接种后２４ｈ，
将小鼠随机分为ＬＡＬ－Ｐ高、低剂量组及阴性和阳性
对照组，其中ＬＡＬ－Ｐ高、低剂量组灌胃给予ＬＡＬ－Ｐ
药液 ２０ ｍＬ／ｋｇ，给 药 剂 量 分 别 为 １２０ 和 ２４０
ｍｇ／ｋｇ；阴性对照组灌胃给予等量生理盐水；阳性对
照组腹腔注射２．５ｍｇ／ｍＬ的ＣＴＸ药液１０ｍＬ／ｋｇ，
给药剂量为２５ｍｇ／ｋｇ。所有动物每天给药１次，连
续１２ｄ。
１．２．４　实体瘤抑瘤率的测定　停药次日脱颈处死
小鼠，剖取瘤块称质量，计算抑瘤率：抑瘤率＝（对照
组平均瘤质量－给药组平均瘤质量）／对照组平均瘤
质量×１００％。
１．２．５　Ｂｃｌ－２和Ｂａｘ表达的测定　对剖取的各组瘤
体进行常规石蜡包埋，制备切片，然后用免疫组化
ＳＰ法检测Ｂｃｌ－２和Ｂａｘ蛋白表达水平，免疫组化ＳＰ
法具体操作按说明书进行，以细胞核呈现棕褐色颗
粒状染色为阳性反应。每个标本随机观察１０个高
倍镜视野，统计每个高倍镜视野１００个肿瘤细胞中
的阳性细胞数，取其平均值作为Ｂｃｌ－２和Ｂａｘ蛋白
的阳性细胞数。
１．２．６　肿瘤细胞的形态学观察　剖取阴性对照组
和ＬＡＬ－Ｐ高剂量组的瘤体进行常规石蜡包埋，制备
切片，ＨＥ染色后在光学显微镜下观察肿瘤细胞形
态。
１．３　统计方法
所有数据用ＳＰＳＳ　１０．０统计软件中的单因素方
差分析进行统计处理。
２　结果与分析
２．１　ＬＡＬ－Ｐ对肿瘤生长的影响
与阴性对照组相比，ＬＡＬ－Ｐ高、低剂量组和阳
性对照组瘤体质量显著（Ｐ＜０．０５）或极显著（Ｐ＜
０．０１）减轻；ＬＡＬ－Ｐ低、高剂量组和ＣＴＸ阳性对照
组抑瘤率分别为３１．３２％，４０．５２％和５６．６１％（表
１）。
表１　ＬＡＬ－Ｐ对小鼠 Ｈ２２肿瘤生长的影响 （珚ｘ±ＳＤ，ｎ＝１０）
Ｔａｂｌｅ　１　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ＬＡＬ－Ｐ　ｏｎ　ｔｕｍｏｒ　ｇｒｏｗｔｈ　ｏｆ　ｍｉｃｅ　ｂｅａｒｉｎｇ　Ｈ２２ｈｅｐａｔｏｃｅｌｕｌａｒ　ｃａｒｃｉｎｏｍａ（珚ｘ±ＳＤ，ｎ＝１０）
组别
Ｇｒｏｕｐ
剂量／（ｍｇ·ｋｇ－１）
Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ
初始体质量／ｇ
Ｂｅｇｉｎｎｉｎｇ　ｂｏｄｙ　ｗｅｉｇｈｔ
终末体质量／ｇ
Ｅｎｄ　ｂｏｄｙ　ｗｅｉｇｈｔ
瘤体质量／ｇ
Ｔｕｍｏｒ　ｗｅｉｇｈｔ
抑瘤率／％
Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｒａｔｅ
阴性对照组Ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ － ２０．８９±１．６７　 ２３．１４±１．９８　 ３．４８±０．４５
阳性对照组ＣＴＸ　ｇｒｏｕｐ　 ２５　 ２１．３３±１．７７　 １９．６６±１．６１　 １．５１±０．２４＊＊ ５６．６１
ＬＡＬ－Ｐ低剂量组
Ｌｏｗ　ｄｏｓｅ　ｇｒｏｕｐ　ｏｆ　ＬＡＬ－Ｐ
１２０　 ２０．６７±１．５３　 ２３．６７±２．１２　 ２．３９±０．３４＊ ３１．３２
ＬＡＬ－Ｐ高剂量组
Ｈｉｇｈ　ｄｏｓｅ　ｇｒｏｕｐ　ｏｆ　ＬＡＬ－Ｐ
２４０　 ２０．０９±１．８９　 ２３．４５±１．８８　 ２．０７±０．３９＊ ４０．５２
　　注：与阴性对照组比较，＊Ｐ＜０．０５，＊＊Ｐ＜０．０１。下表同。
Ｎｏｔｅ：Ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ　ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｒｏｌ，＊Ｐ＜０．０５ａｎｄ＊＊Ｐ＜０．０１．Ｔｈｅ　ｓａｍｅ　ａｓ　ｔｈｅ　ｆｏｌｏｗｉｎｇ　ｔａｂｌｅ．
２．２　ＬＡＬ－Ｐ对Ｂｃｌ－２和Ｂａｘ表达的影响
Ｂｃｌ－２蛋白免疫组化染色结果（表２，图１）显示，
ＬＡＬ－Ｐ低、高剂量组Ｂｃｌ－２阳性细胞百分率由阴性
对照组的（７６．３４±６．７６）％分别下降为（５３．６６±
７．２１）％和（４１．３４±７．５６）％，差异达显著或极显著
水平；Ｂａｘ蛋白免疫组化染色结果（表２，图２）显示，
Ｂａｘ阳性细胞百分率则由阴性对照组的（１２．３１±
５．４８）％分别上升为（２６．４４±７．４９）％和（３２．４３±
７．８３）％，差异达显著水平。
表２　ＬＡＬ－Ｐ对小鼠 Ｈ２２肿瘤细胞中Ｂｃｌ－２和Ｂａｘ表达的影响 （珚ｘ±ＳＤ，ｎ＝１０）
Ｔａｂｌｅ　２　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ＬＡＬ－Ｐ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　Ｂｃｌ－２ａｎｄ　Ｂａｘ　ｉｎ　Ｈ２２ｔｕｍｏｒ　ｃｅｌｓ　ｏｆ　ｍｉｃｅ（珚ｘ±ＳＤ，ｎ＝１０）
组别
Ｇｒｏｕｐ
剂量／（ｍｇ·ｋｇ－１）
Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ
Ｂｃｌ－２阳性细胞／％
Ｂｃｌ－２ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ｃｅｌｓ
Ｂａｘ阳性细胞／％
Ｂａｘ　ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ｃｅｌｓ
阴性对照组Ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ － ７６．３４±６．７６　 １２．３１±５．４８
ＬＡＬ－Ｐ低剂量组Ｌｏｗ　ｄｏｓｅ　ｇｒｏｕｐ　ｏｆ　ＬＡＬ－Ｐ　 １２０　 ５３．６６±７．２１＊ ２６．４４±７．４９＊
ＬＡＬ－Ｐ高剂量组 Ｈｉｇｈ　ｄｏｓｅ　ｇｒｏｕｐ　ｏｆ　ＬＡＬ－Ｐ　 ２４０　 ４１．３４±７．５６＊＊ ３２．４３±７．８３＊
０２ 西北农林科技大学学报（自然科学版） 第４０卷
图１　ＬＡＬ－Ｐ对小鼠 Ｈ２２肿瘤细胞中Ｂｃｌ－２蛋白表达的影响（１００×）
Ａ．阴性对照组；Ｂ．ＬＡＬ－Ｐ低剂量组；Ｃ．ＬＡＬ－Ｐ高剂量组
Ｆｉｇ．１　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ＬＡＬ－Ｐ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｏｎ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　Ｂｃｌ－２ｐｒｏｔｅｉｎ　ｉｎ　Ｈ２２ｔｕｍｏｒ　ｃｅｌｓ　ｏｆ　ｍｉｃｅ（１００×）
Ａ．Ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ；Ｂ．Ｌｏｗ　ｄｏｓｅ　ｇｒｏｕｐ　ｏｆ　ＬＡＬ－Ｐ；Ｃ．Ｈｉｇｈ　ｄｏｓｅ　ｇｒｏｕｐ　ｏｆ　ＬＡＬ－Ｐ
图２　ＬＡＬ－Ｐ对小鼠 Ｈ２２肿瘤细胞中Ｂａｘ蛋白表达的影响（１００×）
Ａ．阴性对照组；Ｂ．ＬＡＬ－Ｐ低剂量组；Ｃ．ＬＡＬ－Ｐ高剂量组
Ｆｉｇ．２　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ＬＡＬ－Ｐ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｏｎ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　Ｂａｘ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｉｎ　Ｈ２２ｔｕｍｏｒ　ｃｅｌｓ　ｏｆ　ｍｉｃｅ（１００×）
Ａ．Ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ；Ｂ．Ｌｏｗ　ｄｏｓｅ　ｇｒｏｕｐ　ｏｆ　ＬＡＬ－Ｐ；Ｃ．Ｈｉｇｈ　ｄｏｓｅ　ｇｒｏｕｐ　ｏｆ　ＬＡＬ－Ｐ
２．３　ＬＡＬ－Ｐ对肿瘤细胞形态学的影响
由图３可见，与阴性对照组肿瘤组织相比，
ＬＡＬ－Ｐ高剂量组肿瘤组织切片中的 Ｈ２２肿瘤细胞
出现了坏死，如核固缩深染、碎裂或溶解，甚至出现
红染区，而且许多细胞出现凋亡现象，如染色质浓
缩、细胞皱缩、胞膜空泡化和膜周围凋亡小体的形
成。而阴性对照组肿瘤细胞呈现正常染色。
图３　ＬＡＬ－Ｐ对小鼠 Ｈ２２肿瘤细胞形态学的影响（ＨＥ，×４００）
Ａ．阴性对照组；Ｂ．ＬＡＬ－Ｐ高剂量组
Ｆｉｇ．３　Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｈ２２ｔｕｍｏｒ　ｃｅｌｓ　ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ　ｏｆ　ｍｉｃｅ　ｔｒｅａｔｅｄ　ｂｙ　ＬＡＬ－Ｐ（ＨＥ，×４００）
Ａ．Ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ；Ｂ．Ｈｉｇｈ　ｄｏｓｅ　ｇｒｏｕｐ　ｏｆ　ＬＡＬ－Ｐ
１２第１１期 龙　玲，等：黄花补血草多糖的抗肿瘤作用研究
３　讨　论
在抗癌药物体内筛选中，判断某一药物是否有
效的标准是：实体瘤抑瘤率＞３０％，且统计学处理有
显著性差异者，认为该药有一定的抗癌疗效。本试
验以 Ｈ２２肿瘤小鼠为动物模型研究了ＬＡＬ－Ｐ的抑
瘤作用，结果表明，ＬＡＬ－Ｐ高、低剂量组对小鼠肝癌
的抑瘤率均＞３０％，且有统计学意义，说明ＬＡＬ－Ｐ
对小鼠肝癌有一定的抗癌疗效。
凋亡信号通路中由基因改变导致的凋亡障碍可
能是癌症发生的关键因素［１４］。凋亡受抗凋亡和促
凋亡因子共同调控。Ｂｃｌ－２家族的抗凋亡和促凋亡
成员在细胞凋亡中起到了双向调节作用，被当作是
抗癌治疗的靶点［１５］。凋亡抑制基因（Ｂｃｌ－２，Ｂｃｌ－
ｘＬ）和凋亡促进基因（Ｂａｘ，Ｂａｄ，Ｂｉｄ）的比例决定了
细胞对凋亡刺激的反应。凋亡抑制基因Ｂｃｌ－２的下
调可以通过促进程序化细胞死亡来抑制肿瘤生
长［１６］。本研究发现，ＬＡＬ－Ｐ处理后Ｂｃｌ－２的表达明
显低于阴性对照组，而Ｂａｘ的表达明显高于阴性对
照组，表明ＬＡＬ－Ｐ可以通过调节肿瘤细胞中Ｂａｘ
和Ｂｃｌ－２基因的表达及两者的比例来引发肿瘤细胞
凋亡，提示其抗肿瘤机制可能与促进肿瘤细胞凋亡
有关。ＬＡＬ－Ｐ作为黄花补血草中的粗多糖成分，其
中包含大量多糖，它们可以作为肿瘤治疗过程中不
同靶点的作用物。分离纯化ＬＡＬ－Ｐ中的活性成分
并从分子生物学水平阐明其药理学作用机制是下一
步的研究重点。
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