全 文 ：天然产物研究与开发 NatProdResDev2010, 22:949-951
文章编号:1001-6880(2010)06-0949-03
　
　
　收稿日期:2009-05-11　　　接受日期:2009-07-03
＊通讯作者 Tel:86-731-2650395;E-mail:tgs395@yahoo.com.cn
百两金细胞毒活性成分研究
黄　伟 ,谭桂山 1, 2＊ ,徐康平 2 ,李福双 2 ,李忠魁 3 ,刘艳平 3
1中南大学附属湘雅医院 ,湖南 长沙 410008;2中南大学药学院 , 长沙 410013;
3中南大学生物科学与技术学院 ,长沙 410013
摘　要:利用色谱技术从百两金 ArdisiaCrispa根的 65%乙醇溶液中分离得到四个黄酮类化合物 ,根据理化性质
和光谱数据分别鉴定为汉黄芩素(wogonin, 1),千层纸素(oroxylinA, 2), 汉黄芩苷(wogonoside, 3)和黄芩苷(ba-
icalin, 4)。四个化合物均为首次从该属植物中得到 , 其中化合物 3对肝癌细胞 Bel-7402具有较强的细胞毒活
性 , IC50为 7.64μg/mL。
关键词:百两金;黄酮;Bel-7402细胞;细胞毒活性
中图分类号:Q946.91;R284.2 文献标识码:A
CytotoxicConstituentsfromtheRootofArdisiacrispa
HUANGWei, TANGui-shan1, 2＊ , XUKang-ping2 , LIFu-shuang2 , LIZhong-kui3 , LIUYan-ping3
1XiangyaHospital, CentralSouthUniversity, Changsha410008 , China;
2SchoolofPharmaceuticalSciences, CentralSouthUniversity, Changsha410013 , China;
3SchoolofBioscienceandtechnology, CentralSouthUniversity, Changsha410013 , China
Abstract:FourflavonoidswereisolatedfromtherootofArdisiacrispa.byusingchromatographictechniquesandtheir
structureswereidentifiedaswogonin(1), oroxylinA(2), wogonoside(3), andbaicalin(4)bychemicalevidenceand
spectralanalysis.AllofthemwereisolatedfromthegenusArdisiaforthefirsttime, andcompound3 exhibitedstrongcy-
totoxicityagainstBel-7402 celwithIC50 valueof7.64 μg/mL.
Keywords:Ardisiacrispa;flavonoid;Bel-7402 cell;cytotoxicity;
　　百两金(Ardisiacrispa)是紫金牛科(Myrsinace-
ae)紫金牛属(Ardisia)植物 [ 1] 。上世纪八十年代 ,中
国中医研究院中药研究所抗肿瘤小组在总结民间用
药经验的基础上 ,于江西省上饶地区 ,针对几十种民
间抗肿瘤 、抗蛇毒草药进行了全面筛选 ,从中发现紫
金牛属植物朱砂根(Ardisiacrenta)80%乙醇提取物
有明显的抗肿瘤活性[ 2] 。有研究表明 ,从白两金中
提取出的 2-甲氧基 -6-三癸基 -1, 4-苯醌 (AC7-1)对
B16-F10黑素瘤细胞具有明显的抑制的作用 [ 3] 。作
者对百两金的化学成分进行较为系统的研究 ,并对
所分离的单体化合物进行抗肿瘤活性筛选 ,以期发
现良好活性的先导化合物 。
1　实验部分
1.1　材料
仪器:BǜCHMeltingPointB-54熔点仪 (未校
正);AV-ATAR360FT红外光谱仪 , KBr压片(美国
Nicolet公司);ZabSpec高分辨磁质谱仪(美国 Mi-
cromass公司);INOVA600核磁共振仪(美国 Varian
公司), TMS为内标。
试剂:肝癌细胞株 Bel-7402(中南大学医学遗传
学国家重点实验室提供);柱层析硅胶(青岛海洋化
工厂);HPD-100大孔吸附树脂(沧州宝恩化工有限
公司);MCIGELCHP20P精细分离树脂(日本三菱
化学);新生牛血清(北京鼎国公司);RPMI1640细
胞培养基 (Giboca公司);MTT(Sigma公司);DMSO
(Sigma公司);其余试剂为分析纯 。
药材:百两金采自江西崇义县 ,经中南大学药学
院生药学教研室李劲平博士鉴定为 Ardisiacrispa,标
本存放于中南大学药学院。
1.2　提取分离
百两金根 5 kg,粉碎后用 65%乙醇回流提取 3
次 ,回收乙醇至小体积 ,依次用石油醚 、乙酸乙酯萃
取。将乙酸乙酯部分经反复硅胶柱层析 ,以石油醚 -
乙酸乙酯为洗脱剂 ,分别得到化合物 1(56 mg),化
DOI :10.16333/j.1001-6880.2010.06.016
合物 2(15 mg);将水部分经 HPD-100大孔树脂层
析 ,分别以 0%, 30%, 50%, 70%, 95%的乙醇进行
洗脱 ,浓缩 50%乙醇洗脱部分 ,经 MCIGELCHP20P
柱层析 ,分别以 0%, 30%, 50%, 95%的乙醇进行洗
脱 ,浓缩 50%乙醇洗脱部分 ,用硅胶柱层析(CHCl3-
MeOH-H2O)得到化合物 3(98 mg), 化合物 4(23
mg)。
图 1　化合物 1 ～ 4结构
Fig.1　structuresofcompounds
1.3　结构鉴定
化合物 1　淡黄色针状结晶(石油醚 -乙酸乙
酯), mp.202 ～ 204 ℃。在硅胶薄层板上用不同的
溶剂体系展开 ,均为单点 , FeCl3 -EtOH试剂显紫黑
色 。 ESI-MS:284 [ M] + , 269 [ M-CH3 ] +。 UV
(CHCl3)λmax(nm):210.0, 276.0。 IR(KBr)νmax
(cm-1):3422(OH), 1657, 1610, 1580。1HNMR(DM-
SO-d6 , 400MHz)δ:12.5(1H, s, 5-OH), 10.8(1H, s,
7-OH), 8.1(2H, m, H-2′, 6′), 7.6(3H, m, H-3′, 4′,
5′), 7.0(1H, s, H-3), 6.3(1H, s, H-6), 3.9(3H, s,
8-OCH3)。13CNMR(DMSO-d6 , 100 MHz):182.0(C-
4), 163.0(C-2), 157.4(C-7), 156.2(C-5), 149.6
(C-8a), 132, 1(C-4′), 130.8(C-1′), 129.3(C-3′, C-
5′), 127.8(C-8), 126.3(C-2′, C-6′), 105.1(C-3),
103.8(C-4a), 99.1(C-6), 61.1(8-OCH3)。以上光
谱数据与文献波谱数据基本一致[ 4] ,鉴定化合物 1
为汉黄芩素(Wogonin)。
化合物 2　淡黄色针状结晶(石油醚 -乙酸乙
酯), mp.191 ～ 193 ℃。在硅胶薄层板上用不同的
溶剂体系展开 ,均为单点 , FeCl3 -EtOH试剂显红色 。
ESI-MS:284[ M] + , 269 [ M+-CH3 ] 。 UV(CHCl3 )
λmax(nm):218.0, 277.0。 IR(KBr)νmax(cm-1):
3418(OH), 2972 , 2926, 1629, 1604。1HNMR(DMSO-
d6 , 400 MHz)δ:3.8(3H, s, 6-OCH3), 6.6(1H, s, H-
8), 7.0(1H, s, H-3), 7.6(3H, m, H-3′, 4′, 5′), 8.1
(2H, m, H-2′, 6′), 10.8(1H, s, 7-OH), 12.9(1H, s,
5-OH)。13CNMR(DMSO-d6 , 100 MHz)δ:60.0(6-
OCH3), 94.5(C-6), 104.4(C-4a), 104.7(C-3),
126.5(C-2′, C-6′), 129.2(C-3′, C-5′), 130.8(C-
8), 131.5(C-1′), 132.1(C-4′), 152.6(C-8a), 152.8
(C-5), 157.7(C-7), 163.3(C-2), 182.3(C-4)。以
上光谱数据与文献波谱数据基本一致 [ 4] ,鉴定化合
物 2为千层纸素(OroxylinA)。
化合物 3　淡黄色粉末(甲醇)。在硅胶薄层板
上用不同的溶剂体系展开 ,均为单点 , FeCl3-EtOH
试剂显紫黑色。 ESI-MS:446[ M] +。 UV(CHCl3)
λmax(nm):217.8 , 275.4。 IR(KBr)νmax(cm-1 ):
3446(OH), 1652, 1625。1H NMR(DMSO-d6 , 400
MHz)δ:12.6(1H, s, 5-OH), 8.1(2H, m, H-2′, 6′),
7.6(3H, m, H-3′, 4′, 5′), 7.1(1H, s, H-3), 6.7(1H,
s, H-6), 5.6(1H, GlcA-H-1), 3.9(3H, s, 8-OCH3),
3.4(brs,糖上质子)。13CNMR(DMSO-d6 , 100 MHz)
δ:182.4(C-4), 170.0(C-6′), 163.6(C-2), 156.0
(C-5, 7), 149.2(C-9), 132.3(C-4′), 130.7(C-1′),
129.3(C-8, 3′, 5′), 126.4(C-2′, 6′), 105.4(C-10),
105.3(C-3), 99.6(C-1′), 98.6(C-6), 75.8(C-
5′), 75.4(C-3′′), 72.9(C-2′), 71.2(C-4′′), 61.4
(-OCH3)。以上光谱数据与文献波谱数据基本一
致[ 5] ,鉴定化合物 3为汉黄芩苷(Wogonoside)。
化合物 4　淡黄色粉末(甲醇)。在硅胶薄层板
上用不同的溶剂体系展开 ,均为单点 , FeCl3-EtOH
试剂显紫黑色。 ESI-MS:446[ M] +。 UV(CHCl3)
λmax(nm):218.0 , 277.0。 IR(KBr)νmax(cm-1 ):
3427(OH), 2924, 1649, 1621。1HNMR(DMSO-d6 ,
400 MHz)δ:8.1(2H, m, H-2′, 6′), 8.0(1H, 6-OH),
7.6(3H, m, H– 3′, 4′, 5′), 7.045(1H, s, H-3), 7.0
(1H, s, 8-H), 5.0(1H, GlcA-H-1)。13CNMR(DMSO-
d6 , 100 MHz)δ:182.6(C-4), 172.0(C-6′′), 163.4
(C-2), 151.8(C-7), 149.1(C-9), 146.6(C-5),
132.0(C-4′), 130.8(C-1′), 129.2(C-6, 3′, 5′),
126.4(C-2′, 6′), 106.1(C-3), 104.7(C-10), 100.8
(C-1′′), 94.4(C-8), 75.9(C-5), 74.0(C-3), 72.9
(C-2′′), 72.0(C-4′)。以上光谱数据与文献波谱
数据基本一致 [ 4] ,鉴定化合物 4为黄芩苷 (Baica-
lin)。
1.4　化合物对肝癌细胞的增殖抑制作用
用 MTT法 [ 6]测定化合物 1、3、4和阳性对照药
5-Fu对肝癌细胞(Bel-74-02)增殖的影响 ,将肝癌细
胞(Bel-7402)单细胞悬液以 1×105个 /mL,接种于
96孔培养板 ,每孔 100μL,在 37 ℃, 5%CO2条件下
培养 24h后 ,弃去培养基。依次加 0.5、 1、2、4、8、
950 天然产物研究与开发　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 　Vol.22
15.6、25、31.25、62.5 μg.mL-1样品 100 μL, 调零组
和空白对照组加相应体积的培养液 ,溶媒对照组加
0.2%DMSO100 μL,每组设 4个平行孔 。分别培养
24、48、72h后 ,每孔加 5g/LMTT20 μL,继续培养
4h,倒掉板中液体 ,离心 ,再加 120 μLDMSO,摇匀 ,
待甲臜完全溶解后 ,用酶联免疫仪在 570nm处测定
吸光度 A值 。
细胞生长抑制率(%)=(对照组吸光度 A值 -
实验组吸光度 A值)/对照组吸光度 A值 ×100%,
按改良的 Karber公式计算各样品的 IC50值。
2　结果
　　结果表明化合物 1、4的抑制 Bel-7402肝癌细胞
增殖作用不明显 ,化合物 3具有显著的抑制 Bel-
7402肝癌细胞增殖作用 ,其 48h的 IC50为 7.64 ug.
mL-1。而 5-Fu的 IC50为 37.88 ug·mL-1。在一定浓
度范围内化合物 3的抑制作用明显比 5-Fu强 。结
果见 Fig2。
图 2　化合物 1, 3, 4对 Bel-7402细胞 48h抑制作用△:
化合物 1, □化合物 2, ○化合物 4, ×:5-Fu.
Fig.2　Inhibitoryeffectofcompound1.3.4 onBel-7402
cellgrowthat48 h.△:compound1, □:compound
3, ○:compound4, ×:5-Fu.
3　讨论
　　近年来研究发现紫金牛属植物具有抗肿瘤活
性 ,其有效部位已经申请专利[ 7] 。有研究称此属植
物的主要活性成分是皂苷类 ,但据报道苯醌化合物
AC7-1具有良好活性 。因此 ,作者对百两金中的黄
酮类化学成分进行抗癌活性筛选 ,初步发现汉黄芩
苷对肝癌细胞(Bel-7402)具有明显的抑制作用。黄
酮类化学成分是否为百两金中抗肿瘤的主要活性化
学成分 ,作者正在做进一步的研究 。
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951Vol.22 　　　　　　黄　伟等:百两金细胞毒活性成分研究