全 文 ：　 2010年 11月第 29卷　第 11期
绵阳师范学院学报
JournalofMianyangNormalUniversity
Nov.2010
Vol.29　No.11　
收稿日期:2010-10-28
基金项目:贵州省凯里学院重点项目(2009Z0903),西南野生动植物资源保护教育部重点实验室开放基金项目(XNYB-0903)。
作者简介:蔡凌云(1972-),女 ,高级实验师 ,硕士 ,主要研究方向:天然产物提取 、分离和结构鉴定。
白簕叶中黄酮成分的鉴定和含量测定
蔡凌云1 ,肖　娟 2 ,韩素菊 3 ,肖　杭 2
(1.贵州凯里学院环境与生命科学学院 ,贵州凯里 556011;
2.西南野生动植物资源保护教育部重点实验室 , 四川南充 637009;
3.绵阳师范学院 ,四川绵阳 621000)
摘　要:目的:初步确定了白簕叶中黄酮成分及测定含量。方法:采用理化分析法和薄层色谱法对白簕叶的
黄酮成分进行鉴定 ,利用比色法在 510 nm处测定总黄酮含量。结果　白簕叶中含有黄酮 , 总黄酮含量为 48.85
mg/g。结论　白簕叶中含有槲皮素为苷元的黄酮醇。
关键词:白簕;黄酮;化学预试;薄层层析
中图分类号:R927.11　　文献标识码:A　　文章编号:1672-612x(2010)11-0078-03
白簕(Acanthopanantrifoliatus(L.)Mer.),又称鹅掌簕 、三加皮 、刺三加等 ,为五加科(Araliaceae)五加
属(Acanthopanan)攀援状灌木 。白簕全株均可入药 ,味苦 、辛 、凉 ,具有清热解毒 、祛风利湿 、舒筋活 、止咳平
喘之功效 [ 1] 。国外学者对白簕的研究多处于对其三萜皂苷的研究 [ 2 -4] ,对白簕中黄酮成分的研究少见报
道。现代药理研究表明黄酮具有多种生物活性 [ 5] ,主要表现在降低血糖 、对心血管系统的作用 、护肝作用 、
抗炎作用 、抗菌抗病毒作用 、免疫激活作用 、抗氧化作用等方面。一些黄酮类化合物还可以作甜味剂 ,在食
品行业中可作为食品添加剂或直接应用于食品中增加其保健作用。因此本文以白簕为研究对象 ,采用超
声辅助提取 、分光光度法测定白簕中总黄酮含量 ,采用系统预试法对四川南充产白簕黄酮成分进行系统预
试 ,实验中还采用薄层色谱法和二氢黄酮等黄酮的专属性反应对白簕总黄酮进行初步鉴定 ,为开发利用白
簕提供理论基础。
1　材料与仪器
1.1　材料
白簕 2008年 10月采于四川南充市西山 ,经生命科学学院秦自生教授鉴定为五加属植物白簕。标本保
存于西华师范大学生命科学学院标本室 。
1.2　实验仪器
旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂), UV-2102C型紫外分光光度计(尤尼柯(上海)仪器有限公司),
BT124S电子天平(北京赛多利斯有限公司)、电子恒温水浴锅(天津市泰斯特仪器有限公司), SHZ-II型
循环水真空泵(上海亚荣生化仪器厂),低速离心机(北京医用离心机厂),恒温干燥箱(杭州蓝天化验仪器
厂)。
1.3　实验试剂
乙醇等试剂均为分析纯 。水为蒸馏水 。金丝桃苷标准品(中国药品生物制品检定所 ,编号:111521-
200303),槲皮素标准品(中国药品生物制品检定所 ,编号:100081-200406)、槲皮苷标准品(中国药品生物
制品检定所 ,编号:11538-200302)。山奈酚标准品(中国药品生物制品检定所 ,编号:110861-200808),
芦丁标准品(中药固体制剂制造技术国家工程研究中心 ,编号:1097-060918),
DOI :10.16276/j.cnki.cn51-1670/g.2010.11.015
2　实验方法和结果 [ 6 -7]
2.1　白簕叶黄酮的提取
称取自然干燥的白簕叶粉末 10g,过 40目筛 ,置于 500mL锥形瓶中 ,加 100mL石油醚脱脂 、脱色 2h,
重复几次 ,至石油醚层几乎无色 ,倾去浸提液 ,样品置于通风处干燥备用。精确称取上述白簕叶粉末 2.000
g,置 150 mL锥形瓶中 ,加 50%乙醇 ,超声间歇提取 2次 ,每次 30min,超声功率 60%,合并提取液 ,减压蒸
干 ,用乙醇溶解定容于 100 mL容量瓶 ,待用。
2.2　单项预试
分别取上述白簕叶黄酮提取液 1 ～ 2ml于各试管中 ,加入检测试剂观察反应现象 ,用 “ +”表示正反应 ,
“ -”表示负反应 ,其检测结果如表 1所示。
表 1　白簕黄酮成分预试实验现象和结果
Tab.1 ExperimentalphenomenaandresultofthepretestofflavonoidinAcanthopanantrifoliatus
检测项目Testitems 检测实验内容及反应现象Reactionphenomena 结果Results
黄酮及其苷类Flavonoids
　　　　　　浓氨水试验:颜色变为黄色 +
　　　　　　盐酸镁粉试验:加镁粉后显深红色反应 +
　　　　　　醋酸铅沉淀反应:产生黄色沉淀 +
二氢黄酮Dihydroflavonols NaBH4-KOH试剂:颜色变为红或紫红 -
2.3　薄层色谱
取白簕叶的黄酮提取液进行聚酰胺薄层色谱实验 ,分别在展层剂:甲醇 -水(5:1)和正丁醇 -乙醇 -
水(1:4:5)中展开 ,以槲皮素 、金丝桃苷 、芦丁 、槲皮苷 、山萘酚标准品作对照 ,以 1%三氯化铝乙醇溶液作显
色剂 ,在紫外光下观察(254nm、365nm),见表 2。
表 2　薄层层析实验结果
Tab.2　ExperimentalresultsofTLC
色谱 TLC 展开剂ExpandAgent 实验现象Phenomena Rf值Rfvalue 结论Conclusion
聚酰胺
polyamide
正丁醇 -乙醇 -水
(1:4:5) 　　黄色斑点 3个
0.379、 0.448、 0.553、0.
603
金丝桃苷 、槲皮苷 、芦丁
甲醇 -醋酸 -水
(90:5:5) 　　黄色斑点 4个 0.428、0.464、0.536 槲皮苷 、芦丁
Rf值正丁醇 -乙醇 -水 (1:4:5v/v)=槲皮素 0.069;金丝桃苷 0.379, 槲皮苷 0.448, 芦丁 0.603;山萘酚 0.103。Rf值甲醇 -醋酸 -水(90:5:5 v/v)
=槲皮素 0.107;金丝桃苷 0.313;槲皮苷 0.428;芦丁 0.464;山萘酚 0.167
由表 2可知:在展层剂:正丁醇 -乙醇 -水(1︰ 4︰ 5)中 ,槲皮素标品的 Rf值是 0.069,金丝桃苷标品的 Rf
值是 0.379,槲皮苷标品的 Rf值是 0.448,芦丁标品的 Rf值是 0.603。正丁醇 -乙醇 -水(1︰ 4︰ 5)中 , 提取液
中有 4个斑点 ,斑点 1、斑点 2、斑点 3和斑点 4的 Rf值分别是 0.379、0.448、0.553和 0.603,斑点 1、2、4的 Rf值金
丝桃苷 、槲皮苷 、芦丁标品的 Rf值一样 ,斑点 3与所选 5个黄酮标品的 Rf值未能对应 ,需进一步确认。在展层剂:
甲醇 -醋酸 -水(90︰ 5︰ 5)中 ,槲皮素标品的 Rf值是 0.107,金丝桃苷标品的 Rf值是 0.313,槲皮苷标品的 Rf
值是 0.428,芦丁标品的 Rf值是 0.464。提取液有 3个斑点 ,斑点 1、斑点 2、斑点 3的 Rf值分别是 0.428、0.464、0.
536,其中斑点 1、2的 Rf值与槲皮苷标品和芦丁标品的一致 ,斑点 3与所选 5个黄酮标品的 Rf值未能对应 ,需进
一步确认。可以确定白簕中含有以槲皮素为苷元的黄酮醇。
2.4　最大吸收波长的确定
精密吸取芦丁标准溶液和提取液 1mL分别置于 1、2号两支 10mL具塞试管中 ,再分别加入 0.3 mL质
量分数为 5%NaNO2溶液 ,混匀 ,放置 5min后分别加入 0.3 mL质量分数为 10%的 Al(NO3)3溶液 ,混匀 , 6
·79·第 11期 白簕叶中黄酮成分的鉴定和含量测定
min后分别加入 4 mL浓度为 1mol/L的 NaOH溶液 ,混匀 ,用乙醇标定至刻度线 ,放置 10 min后 ,以试剂作
为空白参照 ,在波长 400 ～ 600nm之间测定吸光度 ,确定 510 nm为最大吸收波长 。
2.5　芦丁标准工作曲线及回归方程的建立
2.5.1　芦丁标准溶液的制备
准确称取 120℃减压干燥至恒重的芦丁标准品 10.000 mg,用乙醇溶解 ,并转入 50 mL容量瓶中 ,再用
乙醇定容 ,摇匀 。即得质量浓度为 0.2mg/mL的标准溶液。
2.5.2　标准曲线的绘制
精密吸取芦丁标准溶液 0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5和 3.0 mL,分别置于 0、1、2、3、4、5和 6号共 7支 10
mL容量瓶中 ,参照 2.2项下测定吸光度 。以吸光度为纵坐标 ,浓度为横坐标 ,绘制标准曲线 。用最小二乘
法进行线形回归 ,求得回归方程:A=10.6C-0.0032, R =0.9988。其中 C为芦丁浓度(mg/mL), A为吸
光度 ,表明在 0.01-0.06mg/mL浓度范围内线性良好(图 1)。
图 1　芦丁标准曲线
Fig.1　ThestandardcurveoftheRutinsamples
2.6　白簕叶总黄酮含量的测定
精密吸取 1 mL的白簕叶黄酮提取液于 10 mL容量瓶中 , 按 2.4项下操作 ,测定其吸光度值 ,再按下述
公式求出黄酮含量 。白簕叶中总黄酮含量为 48.85 mg/g。
总黄酮(mg/g)=(C· V1·V2)/(W· V3)
式中 C-根据校准曲线得出的供试品液质量浓度(mg/mL);V1 -提取定容体积(mL);V2 -显色反应
定容体积(mL);W -样品重量(g);V3 -显色反应取样体积(mL)。
3　讨论与结论
预试实验只能作为成分的初步判断 。根据预试结果 ,如某类成分的检查均为正反应 ,则初步认为含有
某类成分;如部分为正反应 ,或由于成分干扰以致反应结果难以判断者 ,则初步认为可能含有某类成分;如
均为负反应 ,则初步肯定无某类成分。
由上表 1可知 ,白簕中含有黄酮 ,但无二氢黄酮。由表 2可知:白簕中含有以槲皮素为苷元的黄酮醇 ,
实验结果与刘向前 、陈貌连等 [ 8-11]对同属植物的研究一致 。
实验研究结果确定了白簕含有黄酮类成分并测定其含量 。可为合理有效地开发和利用白簕药用成分
资源研究提供依据 。
参考文献:
[ 1] 　江苏新药学院.中药大辞典.[ M] .上海:上海人民卫生出版社 , 1977.
[ 2] 　TyPhD, LischewskiM, PhietHV, etal.TwotriterpenoidcarboxylicacidsfromAcanthopanaxtrifoliatus[ J] .Phytochemis-
try, 1984, 23(12):2889-2891.
[ 3] 　ParkSY, ChangSY, OhOJ, etal.nor-OleanenetypetriterpeneglycosidesfromtheleavesofAcanthopanaxjaponicus[ J] .
Phytochemistry, 2002, 59(4):379 - 384.
(下转第 84页)
·80· 绵阳师范学院学报(自然科学版) 第 29卷
EffectofThermalShockTreatmenton
theFormationofRiceAntherCalus
ZHANGYue-fei1 , WANGJin-ling2 , DENGXiao-rong1
(1 MianyangInstituteofAgriculturalScienceandTechnology, Mianyang, Sichuan, 621023;
2.MianyangNormalUniversity, Mianyang, Sichuan, 621000)
Abstract:Inthispaper, riceanthersaretreatedbythermalshockatdiferenttemperaturesfordiferenttimes
andthenthecalusisinduced.Theresultshowsthattheoptimumthermalshocktreatmenttemperatureis35℃
andtheappropriatetimeis24hbeforethericeantherculture.Bothlowheat-shocktemperatureandshorttime
arenotconducivetotheformationofricecalus, whichresultsinthedecreaseofgreenseedlings, whilehighheat
treatmenttemperatureandlongheatshockleadstosharpincreaseofalbino.
Keywords:riceantherculture;calusinductionrate;diferentiationrate;albino
(上接第 80页)
[ 4] 　YookCS, KimIH, HahnDR, etal.ALupane-TriterpeneGlycosidefromleavestwoAcanthopanax[ J] .
Phytochemistry, 1998, 49(3):839 -843.
[ 5] 　焦晶晶 ,张英.黄酮类化合物在防治糖尿病及其并发症方面的最新研究进展 [ J] .中国药学杂志 ,
2006, 29(5):119-123.
[ 6] 　王宁 , 赵明.柴达木盆地大叶白麻叶化学预试及总黄酮提取研究 [ J] .青海科技 , 2007, (3):7-8.
[ 7] 　肖崇厚.中药化学 [ M] .上海:上海科学技术出版社 , 2004:15 -16.
[ 8] 　刘向前 , 陆昌洙 , 张承烨.细柱五加皮化学成分的研究 [ J] .中草药 , 2004, 35(3):250 -252.
[ 9] 　曹建国 ,赵则海 ,李庆勇 ,等.刺五加丁香苷和总黄酮含量及其季节动态 [ J] .植物学通报 , 2006 , 23
(3):269-274.
[ 10] 　常琪 , 陈迪华 , 朱兆仪 , 等.毛梗红毛五加的化学成分研究 [ J] .中国中药杂志 , 1993, 18(3):162-164.
[ 11] 　陈貌连 , 宋凤瑞 , 郭明全 , 等.刺五加叶中黄酮类化合物的结构鉴定 [ J] .高等学校化学学报 ,
2002 , 23 (5):805-808.
ComponentEvaluationandContentDetermination
ofFlavonoidintheleavesofAcanthopanantrifoliatus
CAILing-yun1 , XIAOJuan2 , HANSu-ju3 , XIAOHang2
(1.SchoolofEnvironmentandLifeScience, KailiCollege, Kaili, Guizhou, 556011;
2.KeyLaboratoryofSouthwestChinaWildlifeResourcesConservation, MinistryofEducation, Nanchong, Sichuan, 637009;
3.MianyangNormalUniversity, Mianyang, Sichuan.621000)
Abstract:Objective:TohaveapreliminarydeterminationofflavonoidcontentintheleavesofA.trifoliatus.
Methods:PhysicalandchemicalanalysisandTLCareemployedtoevaluatethecomponent.Colorimetryisusedto
determinethecontentofflavonoidat510 nm.Result:Theresultshowsthattheplantcontainsdiferentkindsof
flavonoid, thetotalcontentofflavonoidis48.85mg/g.Conclusion:ThereexistsinAcanthopanantrifoliatusfla-
vonoidwithquercetinasaglycon.
Keywords:A.trifoliatus;flavonoid;chemicalpretest;TLC.
·84· 绵阳师范学院学报(自然科学版) 第 29卷