全 文 ：江西农业大学学报 2014，36(4) :861 － 867 http:/ / xuebao． jxau． edu． cn
Acta Agriculturae Universitatis Jiangxiensis DOI:10． 13836 / j． jjau． 2014139
王芳，高瑾，毛宇，等．猪屎豆叶片提取物总黄酮含量及其抑菌活性研究［J］．江西农业大学学报，2014，36(4) :861 －867．
猪屎豆叶片提取物总黄酮含量及
其抑菌活性研究
王 芳，高 瑾，毛 宇，赵高卷，梁 倩*
(西南林业大学 国家林业局西南地区生物多样性保育重点实验室，云南 昆明 650224)
摘要:测定了猪屎豆叶片提取物的石油醚相、氯仿相、乙酸乙酯相和水相的黄酮含量，并以大肠杆菌、枯草芽孢
杆菌、普通变形杆菌、金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌 5 种细菌及可可葡萄座腔菌、尖孢镰刀菌、腐皮镰刀菌、
多主棒孢霉和尖孢炭疽菌 5 种真菌为供试菌，采用抑菌圈法和抑制菌丝生长速率法测定了其抑菌活性。石油
醚相的黄酮含量为 65． 1 mg /g(6． 51%) ，氯仿相的黄酮含量为 128． 6 mg /g(12． 86%) ，乙酸乙酯相的黄酮含量
为 61． 4 mg /g(6． 14%) ，水相的黄酮含量为 114． 6 mg /g(11． 46%)。石油醚相和氯仿相对 5 种细菌无明显的
抑制作用，乙酸乙酯相和水相对其中 4 种细菌有明显的抑菌活性，且均对金黄葡萄球菌的抑菌效果最好，其最低
抑菌浓度(MIC)分别为 1 mg/mL，2 mg/mL;氯仿相和乙酸乙酯相对 5种真菌均具有抑制作用，乙酸乙酯相对腐皮镰
刀菌和多主棒孢霉的抑制作用最强，EC50分别为 3． 44、2． 70 mg/mL，其次为氯仿相，对这两种菌的 EC50分别为6． 53、4．
22 mg/mL。水相和石油醚相除对尖孢炭疽菌无作用外，对其余 4种真菌具有抑制作用，水相对可可葡萄座腔菌和尖
孢镰刀菌的抑制作用最强，EC50分别为 9． 62、8． 98 mg/mL。石油醚相的抑制作用相对较弱，对可可葡萄座腔菌、尖孢
镰刀菌、腐皮镰刀菌和多主棒孢霉的 EC50值分别为 180． 15，81． 96，53． 41，128． 92 mg/mL。
关键词:猪屎豆;黄酮;抑菌活性
中图分类号:S482． 1 文献标志码:A 文章编号:1000 － 2286(2014)04 － 0861 － 07
A Study on the Flavonoids Content and Anti － microbial Activity of the
Extracts from Crotalaria pallid Leaves
WANG Fang，GAO Jin，MAO Yu，ZHAO Gao-juan，LIANG Qian*
(Key Laboratory of State Forestry Administration for Biodiversity Conservation in Southwest China，South-
west Forestry University，Kunming 650224，China)
Abstract:The extracts from leaves of Crotalaria pallid were divided into four fractions of petroleum ether
extract，chloroform extract，ethyl acetate extract and water extract． The content of the flavonoids and the anti －
microbial activity of the four extracts were determined． The flavonoid contents of petroleum ether extract，chlor-
oform extract，ethyl acetate extract and water extract were 65． 1 mg /g(6． 51%) ，128． 6 mg /g(12． 86%) ，61．
4 mg /g(6． 14%) ，114． 6 mg /g(11． 46%)respectively． The anti － bacterial activity on Escherichia coli，Ba-
cillus subtilis，Proteus vulgaris，Staphylococcus aureus and Pseudomonas aeruginosa were studied by inhibition
zone method and the anti － fungal activity on Botryosphaeria rhodina，Fusarium oxysporum，Fusarium solani，Corynes-
pora cassiicola and Colletotrichum acutatum were studied by hypha growth － inhibiting method． The petroleum
收稿日期:2013 － 12 － 04 修回日期:2014 － 03 － 28
基金项目:国家自然科学基金项目(31360003)和云南省重点学科森林保护学项目(XKZ200905)
作者简介:王芳(1981—) ，女，讲师，博士，主要从事资源微生物研究，E － mail:35445230@ qq． com;* 通信作者:梁
倩，讲师，博士，E － mail:liangqian533@ 163． com。
江 西 农 业 大 学 学 报 第 35 卷
ether extract and chloroform extract had no obvious inhibition to the 5 bacteria． The water extract and ethyl ac-
etate extract had different extents of inhibition to the other 4 bacteria except Pseudomonas aeruginosa and the
best inhibition of these two extracts were all to Staphylococcus aureus with the minimal inhibitory concentrations
(MIC)of 1 mg /mL and 2 mg /mL respectively． The extents of inhibition of the different extracts to the 5 spe-
cies fungi were different． The ethyl acetate extract had the best inhibition to Fusarium solani and Corynespora
cassiicola with the EC50 values of 3． 44 and 2． 70 mg /mL respectively． The chloroform extract also had the best
inhibition to Fusarium solani and Corynespora cassiicola with the EC50 values of 6． 53 and 4． 22mg / mL respec-
tively． The water extract had the best inhibition to Botryosphaeria rhodina and Fusarium oxysporum with the
EC50 values of 9． 62 and 8． 98 mg /mL respectively． The petroleum ether extract had weak inhibition to Botryo-
sphaeria rhodina，Fusarium oxysporum，Fusarium solani and Corynespora cassiicola with the EC50 values of
180． 15，81． 96，53． 41and 128． 92 mg /mL respectively．
Key words:Crotalaria pallida;flavonoids;anti － microbial activity
近年来，植物源药剂以其天然低毒的特点倍受青睐，而黄酮类化合物更是以其广谱的药理作用引人
瞩目。黄酮类化合物是一类重要的天然有机化合物，是植物在长期自然选择过程中产生的一类次生代
谢产物［1］，包括黄酮、黄酮醇、异黄酮醇、黄烷酮、异黄酮等［2 － 3］，广泛存于豆科等高等植物中，还是茶及
众多中草药黄芩、银杏、沙棘等的主要活性成分［4 － 6］。许多研究已表明黄酮类化合物具有多种生物活
性，在抗菌、抗病毒、抗炎症、抗过敏、抗氧化、抗癌等方面均具有显著效果，且无毒无害，对人类的肿瘤、
衰老、心血管病等退变性疾病的治疗和预防有重要意义，它作为弱雌激素，在治疗妇女更年期综合症方
面有很好的应用前景。
猪屎豆(Crotalaria pallida Ait．)为豆科(Leguminosae)、蝶形花亚科(Papilionoideae)、猪屎豆属(Cro-
talaria Linn．)植物，分布于美洲、非洲、大洋洲、亚洲热带及亚热带地区［7］。猪屎豆植物的不少种类具有
悠久的民间药用历史，大都具有清热解毒之功效［8］。国内外学者对多种猪屎豆属植物进行了研究，发
现该属植物主要含有黄酮类物质、生物碱、及苷类等成分［9 － 11］，具有广泛的生物活性。加强对猪屎豆植
物活性化学成分的研究，探明猪屎豆属植物药用的物质基础及作用机制，可以更好地为开发和利用猪屎
豆资源提供理论依据。本试验对猪屎豆叶片不同溶剂提取物中的总黄酮含量及抑菌活性进行了初步研
究，为该植物的进一步利用提供科学依据。
1 试验材料
1． 1 植物材料
猪屎豆(Crotalaria pallida Ait．)叶片于 2013 年 5 月 25 日采自云南省昆明市红河州个旧冷墩，经西
南林业大学林学院杜凡教授鉴定为豆科(Leguminosae)猪屎豆属(Crotalaria)猪屎豆叶片，取采集的猪屎
豆植物的叶片，干燥粉碎备用。
1． 2 供试菌种
供试的菌种包括 5 种细菌和 5 种植物病原真菌。其中 5 种供试细菌为:大肠杆菌(Escherichia co-
li)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、普通变形杆菌(Proteus vulgaris)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus
aureus)和铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa) ;5 种供试真菌为:可可葡萄座腔菌(Botryosphaeria
rhodina)、尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)、腐皮镰刀菌(Fusarium solani)、多主棒孢霉(Corynespora cas-
siicola)和尖孢炭疽菌(Colletotrichum acutatum)。
1． 3 培养基
牛肉膏蛋白胨固体培养基:蛋白胨 10 g、牛肉膏 3 g、氯化钠 5 g 和琼脂 18 ～ 20 g，蒸馏水定容到
1 000 mL，pH 值调至 7． 0 ～ 7． 2。牛肉膏蛋白胨液体培养基:除不加琼脂外，与牛肉膏蛋白胨固体培养
基配制方法相同。马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA) :马铃薯 200 g，葡萄糖 20 g，琼脂 18 ～ 20 g。
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第 4 期 王 芳等:猪屎豆叶片提取物总黄酮含量及其抑菌活性研究
1． 4 仪器与试剂
仪器:EYELA旋转蒸发仪(上海爱郎仪器有限公司，N － 1001) ，循环水式多用真空泵(巩义市莫峪
予华仪器厂，SHZ － D(Ⅲ) ) ，CP224C 电子天平(奥豪斯仪器(上海)有限公司) ，紫外可见分光光度计
(SHIMADZU COＲP，UV －2450) ，超净工作台(SW － CT － IFD)、高压灭菌锅(Yamato SN510C)、恒温培养
箱(SPX －300B － G型)。
试剂:芦丁(中国食品药品检定研究院，供含量测定用，按 C27 H30 O16计，供 UV 法测定，含量为
92． 5%) ，乙醇、石油醚、乙酸乙酯、氯仿试剂均为分析纯。
2 试验方法
2． 1 猪屎豆叶片提取物的制备
取干燥猪屎豆叶片粉碎样品 685 g，用 80%的乙醇提取，在 50 ℃水浴下回流提取 3 次，每次 1 h，
合并提取液，减压浓缩，加水悬浮，用石油醚萃取 3 次，合并浓缩得浸膏 30 g，接着用氯仿萃 3 次，合并
浓缩得浸膏 16 g，最后用乙酸乙酯萃取 3 次，合并浓缩得浸膏 10 g，最后蒸干水得浸膏 82 g。
2． 2 标准曲线的制作
称取芦丁标准样品0． 005 0 g，放入 50 mL 容量瓶中，用体积分数 80%乙醇溶液定容至 50 mL(标
准样品的浓度为 0． 10 mg /mL)。取芦丁标准液 0，1． 0，2． 0，3． 0，4． 0，5． 0 mL 分别置于 10 mL 容量瓶
中，并加入 5% NaNO2溶液 1mL，摇匀;静置 6 min 后，再加入 10% Al(NO3)3溶液 1 mL，摇匀;静置
6 min 后，再加入 4% NaOH溶液 3 mL，用 80%乙醇定容至刻度，摇匀;静置 15 min后，在 510 nm波长
下用分光光度计测定各标准溶液吸光度(A) ，绘制芦丁的标准曲线，求出吸光度值 A与芦丁的标准溶液
浓度(C，mg /mL)之间的线性回归方程。
2． 3 总黄酮含量测定
称取石油醚相、氯仿相、乙酸乙酯相和水相 4 部分供试样品，用体积分数 80%乙醇溶解在容量瓶
中，再分别取出各部分样品，加入容量瓶中，分别精密加入 5% NaNO2溶液，摇匀;静置 6 min，加入 10%
Al(NO3)3溶液，摇匀;静置 6 min;再加入 4% NaOH 溶液，用 80%乙醇定容，得待测溶液。在 510 nm
波长下，用分光光度计测定待测溶液的吸光度(A) ，按照标准曲线及其换算关系计算出猪屎豆叶片中石
油醚相、氯仿相、乙酸乙酯相和水相中黄酮含量。
2． 4 抑菌试验
2． 4． 1 抑细菌活性试验 菌种活化及菌悬液制备:将供试的 5 株细菌菌株接种于牛肉膏蛋白胨固体培
养基斜面，37 ℃培养 18 ～ 24 h活化，活化后接种于牛肉膏蛋白胨液体培养基中，37 ℃振荡培养得初
始菌悬液，利用 10 倍稀释法稀释后通过混平板计数，确定菌液的稀释度，使菌悬液所含活菌量在 106 ～
107 CFU /mL。
滤纸片法测定猪屎豆叶片各提取物的抑菌圈［12］:无菌操作下，将牛肉膏蛋白胨琼脂培养基制成平
板后，在分别将 5 种菌悬液(大肠杆菌:7． 2 × 106 CFU /mL，枯草芽孢杆菌:8． 7 × 106 CFU /mL，普通变形
杆菌:1． 2 × 106 CFU /mL，铜绿假单胞菌:5． 8 × 106 CFU /mL，金黄色葡萄球菌:2． 2 × 106 CFU /mL)各
200 μL注到平板上，涂布均匀。取直径 6 mm的无菌滤纸片，放入猪屎豆叶片提取物的水相(0． 32 g /
mL)、乙酸乙酯相(0． 24 g /mL)、石油醚相(0． 24 g /mL)和氯仿相(0． 28 g /mL)溶液中充分浸泡，以生
理盐水作对照，取出后放在上述含菌平板上，每皿 1 片对照，每种菌平行作 2 皿，37 ℃倒置培养 18 ～
24 h后，分别测量各样品的抑菌圈直径(mm)大小，即为测量直径减去 6 mm滤纸片直径。
最低抑菌浓度(MIC)的测定［13］:根据上述试验结果，对具有明显抑菌圈的样品进行 MIC值的测定。
对猪屎豆提取物的样品分别进行连续梯度稀释，取稀释后的样品 1 mL，分别加入到灭菌的 19 mL培养
基中，混匀，制成平板。待培养基凝固以后，分别加入上述 5 种菌悬液，各 200 μL，菌悬液的浓度为
106 CFU /mL，涂布均匀，于 37 ℃倒置培养 18 ～ 24 h，观察细菌生长情况，以完全无菌生长的浓度作为
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江 西 农 业 大 学 学 报 第 35 卷
供试样品溶液的 MIC值，同时以 1． 0 mL无菌生理盐水代替猪屎豆提取物溶液与培养基混合作对照。
2． 4． 2 抑真菌活性试验 采用菌丝生长速率法［14 － 15］测定猪屎豆叶片提取物对各供试真菌的抑菌率。
将猪屎豆叶片提取物配成一定的浓度，取 1 mL，然后加入到 19 mL灭菌后冷却至 50 ℃的 PDA培养基
中，充分摇匀制成含药平板备用。用直径 6 mm的打孔器从事先在 PDA平板上培养 3 d的各供试病原
真菌菌落边缘处切取菌饼，并接种到上述含药平板和不含药平板上，菌丝面向下，每个处理设 3 个重复，
28 ℃培养 4 d后，用十字交叉法测量菌落的直径，取其均值减去菌饼直径即得到菌落净生长直径。计
算抑菌率公式:
抑菌率 =(对照菌落直径 －处理菌落直径)/对照菌落直径 × 100% (1)
真菌半抑菌浓度(EC50)的测定
［16］。将猪屎豆提取物中抑菌活性较好的样品，用无菌水稀释成 2、
4、8 和 16 倍等浓度梯度的溶液，按上述方法测定各浓度下的菌落直径，计算抑菌率。以浓度对数 －抑
制率的几率值求出毒力回归曲线，根据曲线求出 EC50值，以 EC50作为衡量样品对不同植物病原真菌生
长抑制活性大小的指标。
图 1 不同芦丁标准溶液浓度的吸光度
Fig． 1 Standard curve of rutin
3 结果与分析
3． 1 猪屎豆样品的处理
取干燥猪屎豆叶片样品 685 g，经石
油醚、氯仿、乙酸乙酯和水提取，石油醚萃
取得浸膏 30 g，得率为 4． 4%;氯仿萃取
得浸膏 16 g，得率为 2． 3%;乙酸乙酯萃
取得浸膏 10 g，得率为 1． 5%;水相得浸
膏 82 g，得率为 12． 0%。
3． 2 吸光度值与标准溶液浓度的回归方程
吸光度值 A 与芦丁的标准溶液浓度
(C，mg /mL)之间的线性回归方程为 A =
9． 642 9C － 0． 008 2(Ｒ2 = 0． 999 0)。分析
表明，芦丁质量浓度在 0． 010 ～ 0． 050 mg /
mL时与吸光度值具有良好的线性关系(图 1)。
3． 3 各萃取部分黄酮含量
按照标准曲线及其换算关系，计算猪屎豆叶片提取物各部分的黄酮含量，其石油醚相的黄酮含量为 65．
1 mg /g，氯仿相的黄酮含量为 128． 6 mg /g，乙酸乙酯相的黄酮含量为 61． 4 mg /g，水相的黄酮含量为
114． 6 mg /g。从实验结果可以看出，各个萃取部分的黄酮含量差异比较显著，氯仿相和水相的黄酮含量较高。
3． 4 抑菌试验
3． 4． 1 抑细菌活性 经试验，猪屎豆叶片的氯仿相和石油醚相对 5 种供试细菌菌株均无作用，而乙酸
乙酯相和水相除对铜绿假单胞菌无作用外，对其他四种菌株均有不同程度的抑制作用(表 1)。猪屎豆
叶片的乙酸乙酯部分(0． 24 g /mL)对大肠杆菌抑菌圈平均直径为 3 mm，枯草芽孢杆菌的抑菌圈平均
直径为 6 mm，对普通变形杆菌的抑菌圈平均直径为 8 mm，金黄色葡萄球菌抑菌圈平均直径为
11 mm;水溶物部分(0． 32 g /mL)对大肠杆菌抑菌圈平均直径为 2 mm，枯草芽孢杆菌的抑菌圈平均直
径为 6 mm，对普通变形杆菌的抑菌圈平均直径为 9 mm，金黄色葡萄球菌抑菌圈平均直径为 11 mm。
对猪屎豆叶片的乙酸乙酯相和水相分别进行连续梯度稀释(乙酸乙酯相 0． 24，0． 16，0． 08，0． 04，0． 02，
0． 01 g /mL，水相 0． 32，0． 16，0． 08，0． 04，0． 02，0． 01 g /mL) ，后加入牛肉膏蛋白胨固体琼脂培养基，待
凝固后备用。以大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、普通变形杆菌和金黄色葡萄球菌为指示菌，测定猪屎豆叶片
乙酸乙酯萃取物的 MIC值分别为 12，8，12，1 mg /mL，水溶物的 MIC值分别为 8，4，42 mg /mL。
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第 4 期 王 芳等:猪屎豆叶片提取物总黄酮含量及其抑菌活性研究
表 1 猪屎豆叶片提取物的抑细菌作用
Tab． 1 Anti － bacterial activity of the extracts from Crotalaria pallid
供试菌种
Bacteria Strains
抑菌直径 /mm Inhibitory diameter
水相
Water fraction
乙酸乙酯相
Ethyl acetate fraction
空白
CK
最小抑菌浓度 /(mg·mL －1) MIC
水相
Water fraction
乙酸乙酯相
Ethyl acetate fraction
大肠杆菌
E． coli
3 2 0 8 12
枯草芽孢杆菌
B． subtilis
6 6 0 4 8
普通变形杆菌
P． vulgaris
8 9 0 4 12
金黄葡萄球菌
S． aureus
11 11 0 2 1
表 2 猪屎豆叶片提取物对 5 种植物病原真菌的抑制作用
Tab． 2 Inhibitory effect of extracts from the Crotalaria pallid on 5 types of pathogenic fungi
供试样品 /(mg·mL －1)
Fraction
抑菌率 /% Inhibitory rate
可可葡萄座腔菌
Botryosphaeria
rhodina
尖孢镰刀菌
Fusarium
oxysporum
腐皮镰刀菌
Fusarium
solani
多主棒孢霉
Corynespora
cassiicola
尖孢炭疽菌
Colletotrichum
acutatum
石油醚相(12)
Petroleum ether fraction
53． 10 54． 30 52． 10 48． 10 —
氯仿相(12)
Chloroform fraction
18． 69 21． 72 37． 04 29． 70 —
乙酸乙酯相(12)
Ethyl acetate fraction
38． 30 54． 20 61． 40 72． 60 39． 40
水相(12)
Water fraction
66． 36 79． 64 88． 89 93． 36 60． 22
3． 4． 2 抑真菌活性 从表 2 可看出，各样品对 5 种植物病原真菌的影响不同，并存在一定的差异，且同
一部分对不同种植物病原菌的抑制效果也不同。在 12 mg /mL 的浓度下，氯仿相和乙酸乙酯相对 5 种
植物病原菌均具有抑制作用，水相和石油醚相除对尖孢炭疽菌无作用外，对其余 4 种植物病原菌也具有
抑制作用。其中水相对尖胞镰刀菌的抑菌效果最好，抑菌率为 54． 30%，石油醚相对腐皮镰刀菌抑菌效
果最好，抑菌率为 37． 04%，氯仿相和乙酸乙酯相均对多主棒孢霉抑菌效果最好，抑菌率分别为 72． 60%
和 99． 36%。与其他样品相比，乙酸乙酯相的抑菌效果最好，对 5 种真菌的抑菌率分别为 66． 36%、79．
64%、88． 89%、93． 36%和 60． 22%。
由表 2 可知，猪屎豆叶子的各溶剂提取物对各真菌菌种的抑菌活性各不相同，为了考察各溶剂
提取物对相关病原菌的抑菌活性大小，进行了毒力测定，结果见表 3。乙酸乙酯相对腐皮镰刀菌和多
主棒孢霉的抑制作用最强，EC50分别为 3． 44 mg /mL，2． 70 mg /mL，其次为氯仿相，对这两种菌的
EC50分别为 6． 53 mg /mL，4． 22 mg /mL。水相对可可葡萄座腔菌和尖孢镰刀菌的抑制作用最强，
EC50分别为 9． 62 mg /mL，8． 98 mg /mL。石油醚相的抑制作用相对较弱，对可可葡萄座腔菌、尖孢镰
刀菌、腐皮镰刀菌和多主棒孢霉的 EC50值分别为 180． 15，81． 96，53． 41，128． 92 mg /mL。此外，从毒
力回归曲线可以看出，不同质量浓度的各样品对植物病原菌的抗菌活性和浓度呈正相关性，即各样
品对植物病原菌的毒力随着浓度的增高而增强。
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表 3 猪屎豆叶片提取物对植物病原菌菌丝生长抑制的毒力测定结果
Tab． 3 Virulence of extracts from the Crotalaria pallid on different pathogenic fungi
供试样品
Fraction
供试菌种
Fungi
Strains
毒力曲线
Virulence
equation
相关系数(Ｒ2)
Correlation
coefficient(Ｒ2)
EC50 /
(mg·mL －1)
石油醚相
Petroleum
ether fraction
可可葡萄座腔菌(Botryosphaeria rhodina) y = 0． 749 5x + 3． 309 4 Ｒ2 = 0． 999 4 180． 15
尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum) y = 0． 980 3x + 3． 124 1 Ｒ2 = 0． 985 5 81． 96
腐皮镰刀菌(Fusarium solani) y = 0． 595 5x + 3． 971 2 Ｒ2 = 0． 969 1 53． 41
多主棒孢霉(Corynespora cassiicola) y = 0． 516 7x + 3． 909 6 Ｒ2 = 0． 996 6 128． 92
氯仿相
Chloroform
fraction
可可葡萄座腔菌(Botryosphaeria rhodina) y = 0． 672 2x + 3． 978 1 Ｒ2 = 0． 957 1 33． 13
尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum) y = 1． 512 7x + 3． 472 3 Ｒ2 = 0． 943 6 10． 23
腐皮镰刀菌(Fusarium solani) y = 1． 093 4x + 4． 109 0 Ｒ2 = 0． 988 1 6． 53
多主棒孢霉(Corynespora cassiicola) y = 1． 888 1x + 3． 818 9 Ｒ2 = 0． 953 0 4． 22
尖孢炭疽菌(Colletotrichum acutatum) y = 2． 196 2x + 2． 598 2 Ｒ2 = 0． 947 2 12． 41
乙酸乙酯相
Ethyl
acetate fraction
可可葡萄座腔菌(Botryosphaeria rhodina) y = 1． 270 6x + 3． 911 3 Ｒ2 = 0． 956 8 7． 19
尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum) y = 2． 328 6x + 3． 217 3 Ｒ2 = 0． 973 2 5． 83
腐皮镰刀菌(Fusarium solani) y = 2． 035 0x + 3． 908 2 Ｒ2 = 0． 967 5 3． 44
多主棒孢霉(Corynespora cassiicola) y = 1． 965 5x + 4． 157 5 Ｒ2 = 0． 945 5 2． 70
尖孢炭疽菌(Colletotrichum acutatum) y = 1． 845 3x + 3． 172 5 Ｒ2 = 0． 984 8 9． 78
水相
Water
fraction
可可葡萄座腔菌(Botryosphaeria rhodina) y = 1． 115 5x + 3． 903 3 Ｒ2 = 0． 981 4 9． 62
尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum) y = 0． 622 6x + 4． 406 6 Ｒ2 = 0． 964 4 8． 98
腐皮镰刀菌(Fusarium solani) y = 1． 014 2x + 3． 977 6 Ｒ2 = 0． 993 0 10． 19
多主棒孢霉(Corynespora cassiicola) y = 0． 716 3x + 4． 191 0 Ｒ2 = 0． 920 3 13． 47
4 小结与讨论
(1)本试验采用体积分数 80%的乙醇，50 ℃回流提取了猪屎豆叶片中的有效成分，计算其石油醚
相的黄酮含量为 65． 1 mg /g(6． 51%) ，氯仿相的黄酮含量为 128． 6 mg /g(12． 86%) ，乙酸乙酯相的黄
酮含量为 61． 4 mg /g(6． 14%) ，水相的黄酮含量为 114． 6 mg /g(11． 46%)。结果说明乙醇溶液能较好
地提取猪屎豆叶片中的黄酮成分，乙酸乙酯相和水相能有效富集猪屎豆叶片中的黄酮类物质。
(2)抑细菌试验采用抑菌圈法和最低抑菌浓度(MIC)法，经测定猪屎豆叶片的氯仿相和石油醚相
对 5 种供试的菌株均无作用，其乙酸乙酯相和水相除对铜绿假单胞菌无作用外，对其他四种菌株均有不
同程度的抑制作用，且乙酸乙酯相和水相间的抑制作用没有明显的差异，都是对金黄葡萄球菌的抑菌效
果最好，其最低抑菌浓度(MIC)分别为 1 mg /mL，2 mg /mL。说明其乙酸乙酯相和水相具有潜在的广
谱抗细菌特点，其抑细菌活性部位可能集中于乙酸乙酯相和水相。
(3)抑真菌试验采用抑制菌丝生长速率法和真菌半抑菌浓度(EC50)测定法，经测定氯仿相和乙酸
乙酯相对 5 种供试验的植物病原菌均具有抑制作用，水相和石油醚相除对尖孢炭疽菌无作用外，对其余
4 种植物病原菌也具有抑制作用。其中乙酸乙酯相的抑菌效果最好，在浓度为 12 mg /mL的条件下，对
腐皮镰刀菌和多主棒孢霉的抑菌率可分别达到 88． 89%和 93． 36%，其 EC50值分别为 3． 44 mg /mL、
2． 70 mg /mL。
(4)试验表明，猪屎豆叶片中的黄酮含量与抑菌性之间没有很好的线性关系，氯仿相的黄酮含量最
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第 4 期 王 芳等:猪屎豆叶片提取物总黄酮含量及其抑菌活性研究
高，但对选用的 5 种细菌菌株没有抑制作用，对 5 种真菌的抑菌效果相对较好;乙酸乙酯相的黄酮含量
最低，但与其他样品相比其抑菌效果最好。这可能与猪屎豆叶片提取物中的其他活性物质有关如生物
碱，有机酸等，据报道，已从猪屎豆植物中分离出 30 多种生物碱［17］。我国豆科猪屎豆植物资源丰富，后
续研究将深入开展该植物化学成分研究，并具体分离鉴定其抗菌活性成分，探讨其抑菌作用机理，为该
植物的合理利用提供理论基础。
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