全 文 ：长叶胡颓子多糖对 TNBS诱导大鼠结肠炎作用的研究＊
李玉山

湖北民族学院医学院(湖北 恩施 445000)
　　摘要:目的:研究长叶胡颓子多糖对大鼠结肠炎损伤的保护作用。方法:建立大鼠结肠炎模型 , 灌胃用药 2 周
后 , 评价大鼠结肠粘膜损伤指数 (CMDI), 检测结肠髓过氧化物酶 (MPO)及超氧化物歧化酶 (SOD)活性 , 丙二醛
(MDA)含量和细胞肿瘤因子 (TNF)、 白细胞介素-8 (IL-8)、 白细胞介素-10 (IL-10)水平。结果:长叶胡颓子多糖
(100、 300、 500mg/ kg)灌胃均能不同程度降低模型大鼠 CMDI、 MPO 活性 、 减少MDA含量 , 提高 SOD活性 , 使显著升
高的TNF、 IL-8 水平下降 , 降低的 IL-10 水平升高 , 且与用药剂量呈一定量效关系。结论:长叶胡颓子多糖通过拮抗
氧化 、 免疫调节 、 损伤修复作用缓解结肠炎大鼠炎症反应 , 减轻结肠损伤。
　　关键词:长叶胡颓子　多糖　抗氧化作用　调节免疫　结肠炎
　　中图分类号:R2855　　文献标识码:A　　文章编号:1000-3649 (2006)05-0024-02
　　Effects of Elaeagnus bockii Diels polysaccharide on ulcerative colitis induced by TNBS in rats/ Li Yushan ∥Medical school of
Hubei Institute for Nationalities (Enshi Hubei 445000)
　　Abstract　Objective:To study the protect effect of Elaeagnus bockii Diels polysaccharide on colonitis in rats.Methods:Rat
colonitis model was established , Elaeagnus bockii Diels polysaccharide was used by clyster once a day of two weeks.The colonmucosa
damage index CMDI was evaluated.The activity of MPO , SOD and the levels of MDA in the colon , the levels of TNF , IL-8 and IL-10
in the serum were measured.Results:Elaeagnus bockii Diels polysaccharide (100 、 300、 500mg/kg.bw) can decrease the activity of
CMDI , MPO and the levels of MDA , increase the activity of SOD in model rats.Can decrease the high levels of TNF , IL-8 in the mod-
el group in a dose-depended manner.Conclusions:Treatment with Elaeagnus bockii Diels polysaccharide can relieve the inflammation
reaction , alleviate the colon injury in clolnitis rats by its immunoregulation , the ability to eliminate oxygenfree radical and repair
wound.
　　Key words:Elaeagnus bockii Diels　polysaccharide　anti-oxidation　immunoregulation　coloniti
　　胡颓子属在全球约有 80 余种[ 1] , 长叶胡颓子 (Elaeagnus
bockii diels)是其中一种 , 属珍贵的药食两用植物 , 根 、 叶 、
果皆可入药[ 2] 。长叶胡颓子可健胃 , 治疗脾胃虚弱 , 消化不
良等症状 , 其果实味酸 、 涩 , 含鞣质[ 3] , 有涩肠止泻作用[ 4] ,
药理实验也表明对实验引起腹泻的动物有抑制小肠运动功能。
在我国主要分布于湖北 、 四川 、 贵州 、 陕西和甘肃 , 民间习
用。为探讨长叶胡颓子对炎症性肠炎是否有抗损伤保护作用 ,
笔者通过建立大鼠免疫性结肠炎模型 , 采用长叶胡颓子多糖
灌胃给药 , 进行了相关实验研究 , 结果如下。
1　材料与方法
1.1　材料
1.1.1　长叶胡颓子多糖　野生长叶胡颓子果实于 2005年 4 月
采自湖北恩施自治州巴东野三关。长叶胡颓子果实多糖 (以
下简称胡颓子多糖)的提取[ 5] :采用水煮醇沉法粗提。
1.1.2　试剂和仪器　2 , 4 , 6-三硝基苯磺酸 (TNBS)为美国
Sigma公司产品 , 5-氨基水杨酸 (5-ASA)原料药由国怡药业
有限公司提供 (批号0209477), MPO、 SOD、 MDA 检测试剂盒
由南京建成生物工程研究所提供 , TNF、 IL-8 试剂盒由解放军
总医院科技开发中心放免所提供 , IL-10 试剂盒由深圳晶美生
物工程公司提供 , AEROSET09D05-01 全自动生化分析仪 (美
国), TL-16G型高速冷冻离心机 (上海实验仪器厂生产),
GC-1200r放射免疫计数器 (中国安徽科大创新股份有限公
司)。
1.1.3　动物　健康 Wirst大鼠 , 雌雄兼用 , 体重 200 ～ 220g ,
由湖北省动物实验中心提供。
1.2　方法
1.2.1　动物模型的建立及处理　参考文献[ 6] :大鼠禁食 24h
后 (饮水照常), 将溶于体积分数为 50%乙醇的 TNBS 按
100mg/kg体重 、 体积 0.25ml/只 , 用导管 (直径 4mm)经肛门
插入结肠内约 8cm 灌肠 1 次 , 建立大鼠结肠炎模型。实验设
正常组 、 模型组 、 阳性药物对照组 (5-ASA , 100mg/ kg)、 胡
颓子多糖组 (100 , 300 , 500mg/kg), 从制备模型 7d 后开始灌
胃给药 , 每日 1次 , 共 14d。正常组与模型组均给予等量生理
盐水灌胃。
1.2.2　指标检测及方法　实验完成后处死动物 , 参照文献[ 7]
方法及标准评价结肠粘膜损伤指数 (CMDI), 评分标准为:0=
无损伤;1=轻度充血 、 水肿, 表面光滑 , 无糜烂或溃疡;2=
充血水肿 , 粘膜粗糙呈颗粒状 , 有糜烂或肠粘连;3=高度充
血水肿 , 粘膜表面有坏死及溃疡形成 , 溃疡最大纵径<1cm ,
肠壁增厚或表面有坏死及炎症;4=在 3分基础上溃疡最大纵
径>1cm , 或全肠壁坏死。结肠标本常规石蜡包埋 、 切片 , HE
染色 , 光镜观察。尾动脉采血 , 放免法检测 TNF、 IL-8、 IL-10。
另取新鲜结肠组织, 用预冷的生理盐水冲洗除去血液 , 滤纸吸
干称重 , 加 9倍生理盐水 , 在低温 (冰水)中用玻璃研磨器研
磨制成 10%的组织匀浆 , 高速离心 , 取上清液低温 (3℃)保
存待测。结肠髓过氧化物酶 (MPO)、 超氧化物歧化酶 (SOD)、
·24· 四　川　中　医Journal of Sichuan of Traditional Chinese Medicine 2006 年第 24卷第 5 期Vol.24 , No.5 , 2006　
基金项目:湖北省卫生厅科研基金项目 (编号:JX2C42)
丙二醛 (MDA)检测按试剂盒说明书进行。
1.2.3　数据分析　实验数据采用 SPSS FOR WINDOWS 10.0 软
件进行 t检验统计处理。
2　结　果
2.1　结肠标本病理组织学观察　模型组大鼠结肠粘膜充血水
肿 , 粘膜及粘膜下层可见中性粒细胞 、 淋巴细胞 、 浆细胞及
嗜酸性粒细胞浸润 , 肠壁增厚 , 粘膜表面有明显坏死及溃疡
形成 , 腺体中环状细胞减少 , 血管壁呈纤维素样坏死。而不
同剂量的胡颓子多糖组以上病理组织表现明显缓解。
2.2　对结肠炎大鼠结肠损伤及炎症反应的影响　CMDI、 MPO
活性分别是反映结肠损伤与炎症程度的主要指标 , 两者在模型
组大鼠升高 , 而胡颓子多糖 (100 , 300 , 500 mg/kg)与 5-ASA
(100 mg/kg)灌胃不同程度降低 CMDI 及MPO 活性 (P <0.05 ,
P<0.01), 且胡颓子多糖用药呈现一定量效关系 (见表 1)。
表 1　长叶胡颓子多糖对 CMDI和
MPO的影响　(n=10 , x±s)
组别 剂量 (mg/ kg) CMDI MPO (U/g)
正常组 - 0.0±0.0 44.03±7.07
模型组 - 3.14±0.37а 163.68±34.32a
5-ASA 100 1.68±0.29b 88.71±17.11b
胡颓子多糖 100 2.66±0.45c 131.42±29.74c
胡颓子多糖 300 1.98±0.44b 119.08±23.52b
胡颓子多糖 500 1.81±0.41b 101.08±15.79b
　　注:与正常组比较 , a P<0.01;与模型组比较 , b P<0.01 , c P
<0.05
2.3　对结肠炎大鼠氧自由基的影响　与模型组比较 , 胡颓子
多糖 (100、 300 、 500mg/kg)与 5-ASA (l00mg/ kg)灌胃均降
低结肠组织中MDA含量 , 升高 SOD 活性 , 且胡颓子多糖中 、
大剂量作用显著 (P<0.01)(见表 2)。
表 2　长叶胡颓子多糖对 SOD 和
MDA的影响　 (n=10 , x ±s)
组别 剂量(mg/ kg)MDA (nmol/mgprot) SOD (nU/mgprot)
正常组 - 1.77±0.23 276.39±38.67
模型组 - 2.70±0.57a 161.09±37.26a
5-ASA 100 1.91±0.44b 244.14±41.58b
胡颓子多糖 300 2.23±0.55c 204.78±43.29c
胡颓子多糖 500 1.98±0.39b 232.31±32.52b
胡颓子多糖 1000 1.95±0.33b 249.11±28.31b
　　注:与正常组比较 , a P<0.01;与模型组比较 , b P<0.01 , c P
<0.05
表 3　长叶胡颓子多糖对 TNF、
IL-8 和 IL-10的影响　(n=10 , x±s)
组别 剂量 (mg/ kg)TNF (ng/ml) IL-8 (ng/ml)IL-10 (pg/ml)
正常组 - 1.90±0.36 0.67±0.20 92.33±17.58
模型组 - 3.41±0.68a 1.61±0.40a 34.76±13.92a
5-ASA 100 2.30±0.40b 0.91±0.19b 72.34±11.32b
胡颓子多糖 300 2.76±0.45c 1.28±0.36c 44.38±10.65c
胡颓子多糖 500 2.62±0.52b 1.13±0.27b 55.28±12.30b
胡颓子多糖 1000 2.33±0.46b 101±0.16b 64.70±14.63b
　　注:与正常组比较, a P<0.01;与模型组比较 , b P<0.01 ,
c P<0.05
2.4　对结肠炎大鼠免疫功能的影响　与对照组比较 , 模型组
大鼠血清中 TNF、 IL-8 水平明显升高 , IL-10 明显降低 (P <
0.01);经过 2 周的灌胃用药 , 大鼠血清中 TNF、 IL-8 水平降
低 , IL-10明显升高 (P<0.05 , P<0.01)(见表 3)。
3　讨　论
　　TNBS 与乙醇诱发大鼠结肠炎的主要机制为乙醇破坏结肠
粘膜屏障 , TNBS 渗入结肠与大分子物质结合 , 形成全抗原引
起肠壁一系列免疫应答与炎症反应 , 其发病机制及病理表现
与人类炎症性肠炎非常相似。免疫异常 、 氧自由基作用在炎
症性肠病的发病机制中占有重要地位。本实验采用 TNBS 与
乙醇诱发大鼠结肠炎模型后 , 发现大鼠血清中的促炎因子与
抗炎因子水平变化明显 , 结肠组织中 MDA 含量明显升高 、
SOD活性降低 , 证明了免疫异常与氧自由基在炎症性肠病的
发病机制中起重要作用。
　　在本研究中通过病理组织学观察到 , 长叶胡颓子多糖组
病理组织损伤程度明显缓解 , 且呈一定剂量效应 , 显示采用
长叶胡颓子多糖灌胃用药可明显减轻模型组大鼠结肠损伤 ,
缓解炎症反应 , 表现出抗炎 、 抗损伤的保护作用;实验中 ,
长叶胡颓子多糖灌胃用药能降低结肠炎模型组大鼠代谢产生
的脂质过氧化物MDA 含量 , 升高重要抗氧化酶SOD活性 , 表
现出抗氧化特性 , 从而抑制结肠组织中的脂质过氧化反应 ,
保护组织细胞;免疫异常在炎症性肠病的发病机制中起重要
作用 , 而细胞因子实质上是维持免疫细胞功能协调运转 , 相
互联络的 “信使” , 其促炎因子与抗炎因子间的失衡是导致结
肠免疫损伤的主要因素 , 实验结果显示 , 长叶胡颓子多糖灌
胃能明显降低模型组大鼠 TNF、 IL-8 及升高 IL-10 水平 , 足以
表明其对免疫异常有一定调节恢复作用 , 从而缓解结肠免疫
损伤与炎症反应。
　　以上结果表明 , 长叶胡颓子果实多糖通过免疫调节及抗
脂质过氧化作用 , 对大鼠结肠炎结肠损伤进行修复 , 抑制结
肠炎大鼠炎症反应 , 对结肠炎具有抗损伤保护作用。胡颓子
为野生植物资源 , 果实富含蛋白质 、 氨基酸 、 维生素 、 糖类 、
有机酸及矿物质元素等 , 具有很高的营养食用价值 、 药用价
值和经济价值 , 开发利用前景广阔。
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(收稿日期　2006-01-27)
·25·2006年第 24卷第 5期Vol.24 ,No.5 ,2006 四　川　中　医Journal of Sichuan of Traditional Chinese Medicine