全 文 ：收稿日期:2016 － 07 － 25
基金项目:新疆生产建设兵团科技援疆专项 (2014AB046)。
作者简介:王増尚 (1992 －)，男，壮族，硕士研究生在读，研究方向为天然产物研究与开发。E － mail:1207756820
@ qq. com
通信作者:刘江云，博士，副教授，主要从事天然产物研究与开发。E － mail:liujiangyun@ suda. edu. cn
HPLC法测定复方鹅绒藤中两种黄酮的含量
王增尚1 李 强2 盛芳婷1 扎西白珍1 刘江云1* 陈 虹2
1. 苏州大学药学院，江苏 苏州 215123;2. 石河子大学药学院，新疆 石河子 832000
【摘 要】 目的:建立同时测定复方鹅绒藤中小麦黄素 － 7 － O － β － D －葡萄糖醛酸苷和芹菜素含量的方法。方
法:采用高效液相色谱法，CosmosilC18 － AＲ －Ⅱ (4. 6mm × 250mm，5μm)色谱柱，乙腈 － 0. 1%乙酸水溶液为流动
相梯度洗脱，检测波长 330nm，流速 1. 0mL /min，柱温 30℃。结果:小麦黄素 － 7 － O － β － D －葡萄糖醛酸苷线性范
围为 4. 004 ～ 40. 04μg (Ｒ2 = 0. 9996)，平均加样回收率为 98. 1%;芹菜素的线性范围为 1. 996 ～ 19. 96μg (Ｒ2 =
0. 9990)，平均加样回收率为 98. 4%。结论:该方法操作简便，结果准确，可作为复方鹅绒藤中该两种成分的含量
测定方法。
【关键词】 鹅绒藤;白花菜籽;小麦黄素 － 7 － O － β － D －葡萄糖醛酸苷;芹菜素;含量
【中图分类号】Ｒ248. 1 【文献标志码】A 【文章编号】1007 － 8517 (2016)20 － 0030 － 03
Determination of Two Flavonoids in Compound Cynanchum Chinensis Extract by HPLC
WANG Zengshang1 LI Qiang2 SHENG Fangting1 ZHAXI Baizhen1 LIU Jiangyun1* CHEN Hong1
1． College of Pharmaceutical Sciences，SooChow University，Suzhou 215123，China;
2． School of Pharmacy，Shihezi University，Shihezi 832000，China
Abstract:Objective To establish a method for determination of both tricin － 7 － O － β － D － glucuronide and apigenin in Com-
pound Cynanchum Chinensis Extract by HPLC． Method A HPLCsystem was applied，using a Cosmosil C18 － AＲ －Ⅱ (4. 6mm ×
250mm，5μm)column;mobile phase consisted of cetonitrile － 1% acetic acid aqueous solution under gradient elution;the detection
wavelength was set at 330 nm;the flow rate was 1. 0 mL /min and thetemperature of column was maintained at 30℃ ． Ｒesults As for tri-
cin － 7 － O － β － D － glucuronide and apigenin，the linear range was between 4. 004 ～ 40. 04μg (Ｒ2 = 0. 9996)and 1. 996 ～ 19. 96μg
(Ｒ2 = 0. 9990)，with average recovery rate to be 98. 1% and98. 4% respectively． Conclusion The method developed is simple，rapid
with reliable results． The contents of both tricin － 7 － O － β － D － glucuronide and apigenin could be quantified simultaneously，which
may be applied for the quality control of the Compound Cynanchum Chinensis extract．
Key words:Cynanchum Chinensis;Cleome gynandra;Tricin － 7 － O － β － D － Glucuronide;Apigenin;Determination
复方鹅绒藤是由鹅绒藤、白花菜籽等药组成
的民间验方，是以新疆特产鹅绒藤药材为主药的
在研新药，主要外用治疗肩周炎、腰肌劳损等多
种外周关节炎性疼痛。根据复方鹅绒藤的药味组
成及其制备工艺，本研究在鹅绒藤［1 － 2］、白花菜籽
化学成分分离鉴定的基础上，采用高效液相色谱
建立该方中两种黄酮类成分的含量测定方法，为
复方鹅绒藤的质量控制标准提供参考。
1 仪器与材料
1. 1 仪器 Agilent1260 高效液相色谱仪 (美国安
捷伦公司);ME215S 型电子天平 (德国 Starorious
公司);MP2002 电子天平 (上海舜宇恒平科学仪
器有限公司)。
1. 2 材料 鹅绒藤茎叶 (批号:EＲ130901)采
自新疆维吾尔自治区石河子市郊，白花菜籽 (批
号:BZ140301，购自湖北武汉市)，经苏州大学
药学院陆叶博士鉴定依次为鹅绒藤 (Cynanchum
chinenseＲ. Br. )茎叶及白花菜 (Cleome gynandra
L. )的 种 子。复 方 鹅 绒 藤 提 取 物 (批 号:
FE140501)按相应处方工艺，采用鹅绒藤和白花
菜籽经醇提、减压浓缩、大孔树脂精制、减压浓
缩和干燥获得。
小麦黄素 － 7 － O － β － D －葡萄糖醛酸苷对照
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品为自制，从鹅绒藤中分离得到［1］;芹菜素对照
品为自制，从白花菜籽中分离得到，并经与相应
化合物［1］ NMＲ 数据比较确定。两种对照品经
HPLC检测，按峰面积归一法计算其纯度均大于
98%。乙腈 (色谱纯，美国 Fisher 公司)，纯水
(娃哈哈)，其余试剂为分析纯 (国药集团化学试
剂有限公司)。
2 方法与结果
2. 1 对照品溶液的制备 分别精密称取对照品小
麦黄素 － 7 － O － β － D －葡萄糖醛酸苷 10. 01mg、
芹菜素 9. 98mg 于 10mL 容量瓶中，用甲醇定容制
成相应对照品储备液 A、B。分别依次精密量取对
照品储备液 A 0. 2、0. 4、0. 8、1. 2、1. 6、2. 0mL，
对照 品 储 备 液 B 0. 1、 0. 2、 0. 4、 0. 6、 0. 8、
1. 0mL于 50mL容量瓶中，甲醇定容配制成系列小
麦黄素 － 7 － O － β － D －葡萄糖醛酸苷和芹菜素混
合对照品溶液 1 ～ 6。
2. 2 供试品溶液的制备
2. 2. 1 复方鹅绒藤供试品溶液 精密称取复方鹅
绒藤提取物 29. 42mg于 50mL容量瓶中，用甲醇定
容，即得。
2. 2. 2 药材供试品溶液 参照复方鹅绒藤提取物
相应工艺进行制备。分别精密称定鹅绒藤药材
9. 94g、白花菜籽药材 11. 48g，各用 75 % 乙醇
100mL加热回流提取两次，提取液合并，减压浓缩
至约 40mL，上样于 AB －8 大孔树脂柱，依次用水
200mL、70 %乙醇 100mL 洗脱，收集 70%乙醇洗
脱液、减压浓缩至约 25mL，转移至 50mL 容量瓶
中，用甲醇定容，得储备液;分别精密量取该储
备液 2mL置 25mL容量瓶中，用甲醇定容，即得到
相应鹅绒藤、白花菜籽供试品溶液。
2. 3 色谱条件 色谱柱:Cosmosil 5C18 － AＲ －Ⅱ
(4. 6mm ×250mm，5μm);流动相:0. 1 %乙酸溶液
(A) －乙腈 (B)，梯度洗脱 (0 ～ 15min，18% ～
25% B;15 ～ 16min，25% ～ 45% B;16 ～ 25min，
45% B ～ 60% B;25 ～ 30min，60% ～ 80% B);流
速:1. 0mL /min;检测波长:330nm;柱温:30℃;
进样量:20μL。在此色谱条件下，各相邻色谱峰之
间分离度均大于 1. 5。见图 1。
2. 4 线性关系考察 分别精密吸取 “2. 1”项下 6
个不同质量浓度的混合对照品溶液 1 － 6，分别进
样 20μL，以峰面积积分值 (y)为纵坐标，进样
质量 (x)为横坐标，进行线性回归，测得小麦黄
素 － 7 － O － β － D －葡萄糖醛酸苷和芹菜素的线性
方程分别为 y = 17. 72x + 9. 062，Ｒ2 = 0. 9996;y =
29. 37x － 23. 52，Ｒ2 = 0. 9990。结果表明小麦黄素
－ 7 － O － β － D － 葡萄糖醛酸苷、芹菜素分别在
4. 004 ～ 40. 04μg、1. 996 ～ 19. 96μg 范围呈线性
关系。
2. 5 精密度实验 分别精密吸取对照品溶液 3
号 20μL，连续进样 6 次，计算小麦黄素 － 7 － O
－ β － D －葡萄糖醛酸苷、芹菜素峰面积的 ＲSD，
分别为 1. 54 %、2. 32%。结果表明仪器精密度
良好。
2. 6 稳定性实验 分别精密吸取同一复方鹅绒藤
供试品溶液 20μL，分别于 0、2、4、6、8h 进样测
定，结果小麦黄素 － 7 － O － β － D －葡萄糖醛酸苷、
芹菜素的峰面积 ＲSD 分别为 1. 37%、1. 58%，表
明稳定性良好。
2. 7 重复性实验 取同一批次复方鹅绒藤样品
6 份，精密称定，按 “2. 2”项下方法制备复方
鹅绒藤供试品溶液，进样 20μL，计算小麦黄素
－ 7 － O － β － D － 葡 萄 糖 醛 酸 苷 含 量 为
39. 68mg /g，峰面积 ＲSD 为 2. 12%;芹菜素含
量为 6. 532mg /g，峰面积 ＲSD 为 2. 24%，结果
表明重复性良好。
2. 8 加样回收实验 精密称取 “2. 7”项下已知
含量的同一批次复方鹅绒藤样品 6 份于 50mL 容量
瓶中，每份约 15mg，精密加入 1mL 混合对照品溶
液 (其中含小麦黄素 － 7 － O － β － D －葡萄糖醛酸
苷 0. 5005mg /mL，芹菜素 0. 0998mg /mL)，用甲醇
定容，进样 20 μL 测定，计算两种成分回收率
(表 1)。测得平均回收率分别为 98. 1%、98. 4%，
ＲSD值分别为 0. 51%、0. 58 %。
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表 1 加样回收率试验结果 (n = 6)
组分 样品中含量 /mg 加入量 /mg 测得量 /mg 回收率 /% 平均值 /% ＲSD /%
小麦黄素 － 7 －
O － β － D －葡萄
糖醛酸苷
0. 6051 0. 5005 1. 093 97. 54
0. 6206 0. 5005 1. 112 98. 20
0. 6158 0. 5005 1. 106 97. 92
0. 6135 0. 5005 1. 107 98. 63
0. 6262 0. 5005 1. 115 97. 63
0. 6150 0. 5005 1. 109 98. 77
98. 1 0. 51
芹菜素
0. 0996 0. 0998 0. 1982 98. 78
0. 1022 0. 0998 0. 1997 97. 73
0. 1014 0. 0998 0. 2003 99. 12
0. 1010 0. 0998 0. 1985 97. 71
0. 1031 0. 0998 0. 2014 98. 52
0. 1012 0. 0998 0. 1997 98. 65
98. 4 0. 58
2. 9 样品测定 将 “2. 2”项下三种供试品溶液
按照以上条件进样，记录芹菜素和小麦黄素 － 7 －
O － β － D －葡萄糖醛酸苷的峰面积，计算样品质量
分数。实验结果见表 2。
表 2 样品测定结果 (mg /g，n = 3)
样品
小麦黄素 － 7 － O － β － D －
葡萄糖醛酸苷
芹菜素
复方鹅绒藤 39. 7 6. 53
鹅绒藤 1. 24 －
白菜籽 － 0. 104
3 讨论
复方鹅绒藤是由鹅绒藤、白花菜籽等药物组
成的在研新药。方中鹅绒藤作为该方主药，主产
于甘肃、内蒙、宁夏、新疆等西北地区，药用根
及新鲜茎的乳汁，乳汁外敷可治疗疣赘［3］，其茎
叶及其中的黄酮苷类成分具有抗氧化［4］、抗肿
瘤［5 － 6］等活性。本课题前期已对鹅绒藤茎叶中的黄
酮类成分进行了分离鉴定［1］，对其中的小麦黄素
－ 7 － O － β － D －葡萄糖醛酸苷等主成分进行含量
分析［2］。白花菜籽中主要含有黄酮、生物碱等成
分，具有抗炎镇痛、抗菌等作用［7］，但未见相关
含量测定报道。通过对白花菜籽中的主要成分进
行液相分析和分离纯化，经 NMＲ 鉴定并与相关文
献数据［1］对照确证为芹菜素。在此基础上，根据
复方鹅绒藤的药味组成及其制备工艺，本文采用
高效液相色谱首次建立了该方中两种黄酮类成分
的含量测定方法 (图 1)。该方法操作简便，结果
准确，方法学评价可行，可为复方鹅绒藤及其中
的鹅绒藤、白花菜籽两种药材的质量控制标准提
供参考。
参考文献
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(编辑:程鹏飞)
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