全 文 ：龙须藤 Bauhinia championii （Benth.） Benth.是
畲医治疗痹证的特色药，其性平、苦涩，无毒，具有
祛风除湿、活血止痛、健脾理气的功效 ［1］。 我们通
过实验观察龙须藤乙酸乙酯提取物对胶原诱导性
关节炎大鼠足趾肿胀和滑膜组织中 TNF-α、IL-6
和 IL-8 的含量的影响，探讨其防治类风湿性关节
炎的作用机制。
1 材料与仪器
1.1 实验动物 Wistar 大鼠，SPF 级，雄性，体质
量（200±20） g，由福建中医药大学实验动物中心
提供，合格证号：200700518360。
1.2 药品与试剂 龙须藤 2011 年 4 月采于福州
市永泰县， 经福建中医药大学药学院中药鉴定教
研室卢伟教授鉴定为龙须藤 Bauhinia championii
（benth.） Benth。 药材样本存放于福建中医药大学
药学院。 雷公藤多苷片（黄石飞云制药有限公司，
批号：20110501）；完全弗氏佐剂（CFA，美国 Sigma
公司，批号：F-5503）；牛Ⅱ型胶原（美国 Sigma 公
司，批号：C-20022）；IL-6、IL-8、TNF-α 一抗体（美
国 Cell Signaling Technology 公司）；二抗及相应试
剂（厦门鹭隆生物有限公司）。
1.3 仪器 SE202F 电子天平［奥豪斯仪器（上海）
有限公司］；YLS-7B 足趾容积测量仪（济南益延科
技发展有限公司）。
2 方 法
2.1 供试样品的制备 取龙须藤藤茎 7.8 kg，粉
碎成粗粉后，用 80％乙醇回流提取 3 次，每次 2 h，
合并提取液，回收乙醇，得到乙醇提取物。 提取物
加水混悬后，依次用石油醚、三氯甲烷、乙酸乙酯、
水饱和正丁醇萃取， 回收溶剂后得到石油醚部位
3 g，三氯甲烷部位 30.8 g，乙酸乙酯部位 236.5 g，
正丁醇部位 503 g。 灌胃前分别用 0.5% CMC-Na
溶液配成实验用药浓度。
2.2 CIA 模型大鼠的建立与给药方法 将 70 只
Wistar 大鼠随机分为 7 组：正常组、模型组、阳性
对照组（雷公藤多苷片）、石油醚组、三氯甲烷组、
乙酸乙酯组、水饱和正丁醇组，每组 10 只。将完全
弗氏佐剂（CFA）与 2 mg ／mL 的牛Ⅱ型胶原乳液等
体积混合，制成胶原乳剂。 除正常组外，每只大鼠
尾根部皮内注射胶原蛋白 0.2 mg。 第 7 天进行第
2 次免疫，除正常组外，每只大鼠尾根部皮内注射
胶原乳剂 0.1 mg（不完全弗氏佐剂与 2 mg ／mL 的
牛Ⅱ型胶原乳液等体积混合，制成胶原乳剂）。 初
次免疫后第 1 天开始分组给药， 每日灌胃给药 1
次。 正常组、模型组每日给予 9 g ／ L 氯化钠注射液
10 mL ／ kg； 高剂量组 500 mg ／ kg 灌胃， 中剂量组
250 mg ／ kg 灌胃，低剂量组 125 mg ／ kg 灌胃，雷公
藤多苷组 6 mg ／ （kg ／ d）灌胃。 连续给药 28 d。
龙须藤提取物对胶原诱导性关节炎模型大鼠的影响
郑海音 1，徐 伟 2，李 煌 2，褚克丹 2，陈立典 3，张玉琴 2
（1. 福建中医药大学中西医结合学院，福建 福州 350122；2. 福建中医药大学药学院，福建 福州 350122；
3. 福建中医药大学，福建 福州 350122）
摘要： 目的 研究龙须藤乙酸乙酯提取物对胶原诱导性关节炎模型大鼠滑膜组织中肿瘤坏死
因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）和白细胞介素-8（IL-8）的影响，探讨其作用机理。 方法
建立胶原诱导性关节炎（CIA）大鼠模型，观察大鼠足趾肿胀度的变化，用免疫组化法检测大鼠踝关节
滑膜组织中 TNF-α、IL-6、IL-8 的含量。 结果 龙须藤乙酸乙酯提取物能抑制大鼠足趾肿胀及
滑膜组织中 TNF-α、IL-6 及 IL-8 的表达。 结论 龙须藤乙酸乙酯提取物对类风湿性关节炎有
一定的治疗作用，其作用机理是降低滑膜组织中 TNF-α、IL-6、IL-8 的表达水平。
关键词：龙须藤；胶原诱导性关节炎；肿瘤坏死因子-α；白细胞介素-6；白细胞介素-8
中图分类号：R285.5 文献标志码：A 文章编号：1004-5627（2013）01-0031-04
收稿日期：2012-10-11
基金项目：国家自然科学基金资助课题（81001624），福建省科技厅重大专项（2009YZ0001-1-1），福建省科技厅科技创新平台项目
（2010Y2004）
作者简介：郑海音（1977—），女，讲师，主要从事病理生理学研究。
Journal of Fujian University of TCM February 2013，23（1）
福建中医药大学学报 2013 年 2 月 第 23 卷 第 1 期
31
DOI:10.13261/j.cnki.jfutcm.002756
2.3 足跖容积的变化 采用容积法测量大鼠造
模前后足容积并记录。 致炎后每 4 天对大鼠右后
足容积进行测量，记录容积值。
肿胀程度 ／mL＝造模后容积－造模前容积
2.4 免疫组化法测定 IL-6、IL-8、TNF-α 的表达
取材后，多聚甲醛固定，EDTA 脱钙，酒精逐级脱
水，二甲苯透明，石蜡包埋切片。 免疫组化法按试
剂盒操作。 图像分析：每个标本取 1 张切片，每张
切片在显微镜下放大 100 倍，随即取 5 个视野，用
细胞图像分析软件， 测定每个视野中 IL-6、IL-8、
TNF-α 的阳性细胞数 （A）和阳性细胞显色强度
（B），根据文献［3］方法进行评分：A 为阳性细胞数
分级 ：0～1%为 0，1%～10%为 1，10%～50%为
2，50%～80%为 3，80%～100%为 4。B 为阳性细胞
显色强度分级：0（阴性）、1（弱阳性）、2（阳性）、3
（强阳性），免疫组化得分（IHS）为：
IHS＝A×B。
2.5 统计学处理 数据用 x±s 表示，用 SPSS 18.0
统计软件进行统计分析， 组间两两比较采用 t 检
验，P＜0.05 为差异具有统计学意义。
3 结 果
3.1 对 CIA 模型大鼠一般症状的影响 模型组
大鼠经胶原乳化液致敏，加强免疫后，精神状态、
饮食情况、活动能力均有所降低，初次免疫后尾部
出现溃烂，7 d 后逐渐结痂。在 2 次免疫后第 3 天，
大鼠开始发病， 模型组大鼠足趾和踝关节开始出
现肿胀，并日渐加重，体质量下降，部分大鼠右后
足出现足趾变形，无死亡情况。雷公藤多苷组及给
药组大鼠治疗后上述症状均有所缓解。
3.2 对 CIA 模型大鼠肿胀度的影响 见表 1。
表 1 6 组对 CIA 模型大鼠足肿胀度的影响（x±s）
组 别
空 白 组
模 型 组
雷 公 藤 多 苷 组
乙酸乙酯低剂量组
乙酸乙酯中剂量组
乙酸乙酯高剂量组
大鼠 ／只
10
10
10
10
10
10
致炎前足
容积 ／mL
1.61±0.07
1.62±0.05
1.66±0.03
1.63±0.08
1.65±0.15
1.65±0.05
注：与空白组比较，1） P＜0.05，2） P＜0.01；与模型组比较，3） P＜0.05，4） P＜0.01。
10 d
0.05±0.06
0.67±0.152）
0.63±0.23
0.56±0.13
0.48±0.16
0.35±0.194）
14 d
0.06±0.06
1.44±0.552）
1.27±0.16
1.17±0.213）
1.00±0.283）
0.97±0.233）
18 d
0.07±0.04
1.37±0.552）
1.13±0.533）
1.29±0.143）
1.08±0.093）
0.97±0.214）
22 d
0.10±0.07
1.14±0.482）
0.65±0.464）
1.04±0.16
0.99±0.204）
0.79±0.174）
26 d
0.11±0.05
1.14±0.51##
0.64±0.504）
0.95±0.223）
0.88±0.104）
0.67±0.144）
致炎后足跖肿胀度 ／mL
3.3 6 组大鼠踝关节滑膜组织中 IL -6、IL -8、 TNF-α 表达的变化 见图 1、表 2。
福建中医药大学学报 第 23卷32
滑膜阳性细胞胞浆呈棕黄色或棕褐色，如图 1
所示。 本实验用阳性细胞的比率和染色强度进行
半定量评分，结果见表 2。模型组 IL-6、IL-8、TNF-
α 阳性面积与正常组相比显著扩大， 差异有统计
学意义（P＜0.01）。 龙须藤乙酸乙酯提取物低、中、
高剂量组 IL-6、IL-8、TNF-α 阳性表达与模型组
比较为弱（P＜0.01），而且随剂量的增高而变弱，
即剂量与表达呈负相关。
4 讨 论
4.1 有研究表明细胞因子在激活滑膜细胞引起
关节受损及诱导炎症过程中起着重要作用， 其中
多种细胞因子关联构成一个网络系统，具有促炎、
抑炎或刺激、抑制的正负反馈免疫调节作用 ［4-5］。
TNF-α 是由单核巨噬细胞产生的内源性细胞因
子，与机体的炎症和免疫反应有十分密切的关系，
在 RA 病程中主要是以激活内皮细胞、 促进炎性
因子合成和释放等方式参与 ［6］，刺激软骨内蛋白
多糖的吸收并抑制其合成，使软骨降解。IL-6 是一
种多克隆 B 细胞激活剂， 由单核细胞、T 细胞、成
纤维细胞或滑膜细胞产生， 能促进活化 B 细胞增
殖并分化为抗体产生细胞； 参与 T 淋巴细胞的分
化和活化，诱导效应 T 细胞而引起组织损伤；又能
增强 TNF-α 的效应， 故被认为是 TNF-α 的某些
效应的放大因子。 当滑膜巨噬细胞被激活过度表
达 IL-1β、TNF-α 等炎症因子时， 可促使滑膜细
胞、巨噬细胞、成纤维细胞和软骨细胞产生 IL-6、
IL-8 等细胞因子而加重组织损伤。 又 RA 患者的
炎性滑膜可释放一些细胞因子， 这些细胞因子可
刺激破骨细胞释放出一些酸性蛋白水解酶， 从而
导致骨吸收和软骨钙化增加 ［7］。
4.2 本实验结果表明，龙须藤乙酸乙酯提取物能
有效的调控大鼠踝关节滑膜组织 IL -6、IL -8、
TNF-α 的表达， 说明龙须藤乙酸乙酯提取物可能
是通过降低组织中 IL-6、IL-8、TNF-α 的等细胞
因子的表达来发挥其抗炎作用。 龙须藤乙酸乙酯
提取物对 CIA 模型大鼠有明显的防治作用， 其作
用机制是通过调节 IL-6、IL-8、TNF-α 等细胞因
子的表达来发挥其抗炎抗风湿作用。 但是细胞因
子及各种炎症介质不是单独发挥作用的， 而是呈
网络形式相互影响着的，在这个网络中，龙须藤乙
酸乙酯提取物是如何发挥其抗炎作用， 还有待进
一步研究。
参考文献：
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leukin-6 receptor antibody therapy reduces vascular endothe-
lial growth factor production in rheumatoid arthritis［J］. Arthri-
tis Rheum，2003，48（6）：1521-1529.
表 2 6 组滑膜组织中 IL-6、IL-8、TNF-α 免疫组化等级评分比较
组 别
正 常 组
模 型 组
雷 公 藤 多 苷 组
龙须藤乙酸乙酯低组
龙须藤乙酸乙酯中组
龙须藤乙酸乙酯高组
大鼠 ／只
10
10
10
10
10
10
IL-6
0
5.87±2.021）
3.10±1.304）
5.24±1.053）
4.90±1.303）
3.51±1.614）
注：与正常组比较，1）P＜0.05，2）P＜0.01；与模型组比较，3）P＜0.05，4）P＜0.01。
IL-8
0
6.53±1.872）
3.26±1.424）
4.95±2.033）
4.87±1.563）
4.24±1.404）
TNF-α
0
6.20±2.582）
4.46±0.614）
5.78±2.343）
5.27±2.303）
4.17±2.784）
第 1期 郑海音等：龙须藤提取物对胶原诱导性关节炎模型大鼠的影响 33
Effects of Ethyl Acetate Extracts from Bauhinia championii
(Benth.) Benth. on Rats with Collagen-induced Arthritis
ZHENG Haiyin1, XU Wei2, LI Huang2, et al
(1. College of Integrative Medicine, FUTCM, Fuzhou, Fujian 350122, China;
2. College of Pharmacy, FUTCM, Fuzhou, Fujian 350122, China)
ABSTRACT: Objective To investigate the effect of ethyl acetate extracts from Bauhinia championii
(Benth.) Benth. on levels of tumor necrosis factor-α (TNF-α), interleukin-6 (IL-6) and interleukin-8 (IL-8)
in synovial tissue of rats with collagen-induced arthritis, and and explore the mechanism. Methods Rats
model of collagen-induced arthritis was builded, swelling degree of toes was observed and the levels of TNF-
α, IL-6 and IL-8 in synovial tissue of rat ankle joint were detected by immunohistochemistry analysis. Re-
sults The ethyl acetate extracts from Bauhinia championii (Benth.) Benth. could inhibit rat toe swelling, and
decrease the levels of TNF-α, IL-6 and IL-8. Conclusion The ethyl acetate extracts from Bauhinia cham-
pionii (Benth.) Benth. has certain effect on polyarthritis destruens, and the mechanism is probably related with
the effect of decreasing the levels of TNF-α, IL-6 and IL-8.
KEY WORDS: Bauhinia championii (Benth.) Benth.; collagen-induced arthritis; TNF-α; IL-6; IL-8
乌药为樟科山胡椒属植物乌药 Lindera ag-
gregata （Sims） Kosterm.的干燥块根 ，是重要的温
胃理气止痛药之一 ［1］。 化学成分研究表明乌药含
有挥发油、倍半萜、黄酮类化合物和异喹啉类生物
碱 ［2-3］。 现代药理研究发现乌药总生物碱口服给药
能显著抑制小鼠胶原关节炎、大鼠佐剂性关节炎，
并能显著抑制刀豆蛋白 A 引起的小鼠脾淋巴细胞
增殖， 脂多糖所致小鼠腹腔巨噬细胞释放 NO 和
IL-1［4-5］。 其中去甲异波尔定是乌药总生物碱的主
要活性成分之一， 具有与乌药总生物碱类似的药
理作用 ［6］。 我们选择去甲异波尔定作为含量测定
的指标成分，采用高效液相色谱法（HPLC）建立乌
药中去甲异波尔定含量的测定方法 ［7］。 目前该方
法已被收录在《中国药典》2010 年版一部中，作为
法定检测方法。 近年来超高效液相色谱技术（U-
PLC）凭借快速、灵敏、高效的优势，越来越受到广
泛的关注。 在中药领域主要应用于中药成分定性
鉴别、含量测定、指纹图谱、中药限量成分、违禁添
超高效液相色谱法测定乌药中去甲异波尔定的含量
肖建平 1，李 彧 2，侴桂新 3，陈建忠 2
（1. 福建中医药大学附属康复医院，福建 福州 350003；2. 福建中医药大学药学院，福建 福州 350122；
3. 上海中药标准化研究中心，上海 201203）
摘要： 目的 建立乌药中去甲异波尔定含量测定的超高效液相色谱分析方法，为改进现行《中
国药典》标准中乌药质控方法奠定基础。 方法 采用 ACQUITY UPLC BEH C18 column （50 mm×
2.1 mm，1.7 μm）色谱柱，以乙腈-甲酸溶液（0.5%，v ／ v，加三乙胺调节 pH 至 2.25）为流动相，梯度洗
脱，检测波长为 280 nm，柱温 30℃。 结果 去甲异波尔定在 0.3130～313.0 ng 峰面积与进样量呈
良好的线性关系，r 为 0.999 8；平均回收率为 97.68％，相对标准偏差为 2.13％。 结论 本方法简便、
快捷、准确，可作为一种替代方法用于日常样品的高通量检测。
关键词：乌药；去甲异波尔定；超高效液相色谱法；方法改进
中图分类号：R284.3 文献标志码：B 文章编号：1004-5627（2013）01-0034-03
收稿日期：2012-09-20
基金项目：国家自然科学基金资助课题（81102882）
作者简介：肖建平（1967—），男，主管药师，主要从事中药鉴定与质量标准研究。
!!!!!!!!!!!!!!!!!
Journal of Fujian University of TCM February 2013，23（1）
福建中医药大学学报 2013 年 2 月 第 23 卷 第 1 期
34