全 文 ：中国现代应用药学杂志 2009 年 9 月第 26 卷第 9 期 Chin JMAP, 2009 September, Vol.26 No.9 ·763·

REFERENCES

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Appendix 82.
收稿日期：2009-04-07



RP-HPLC 测定龙须藤中 4 种黄酮类成分的含量

徐伟 a，郑海音 b，洪振丰 b*，汤须崇 a (福建中医学院, a.药学系; b.中西医结合系，福州 350108)

摘要：目的 用 HPLC梯度洗脱法测定龙须藤中 4种黄酮类成分的含量，考察了杨梅素、槲皮素、表儿茶素和 5，6，7，3，
4，5-六甲氧基黄酮 4种成分在不同产地药材中的含量。方法 采用 RP-HPLC测定，以 Shimadzu C18 (4.6 mm× 250 mm，5 µm)
为色谱柱；流动相为乙腈-0.05%磷酸溶液，梯度洗脱(0 min，乙腈-0.05%磷酸比例为 20∶80，5 min比例为 30∶70；10 min，
比例为 50∶50；30 min，比例为 50∶50)；流速 1.0 mL·min-1，检测波长 370 nm。结果 杨梅素在 0.071 6~0.716 µg、槲皮素
在 0.122 8~1.228 µg、表儿茶素在 0.102 4～1.024μg、5,6,7,3,4,5-六甲氧基黄酮在 0.090 2~0.902 µg内呈良好的线性关系；
重复性的 RSD分别为 1.32％，0.93％，1.02％，1.17％。不同产地中黄酮成分含量大小依次为福建青云山地区、广西隆安、
江西安福、湖北宜昌、浙江缙云地区样品。结论 本方法精密度、重复性和分离效果好，分析快速，适合于该药材的含量
测定，不同产地中成分存在一定的差异。
关键词：反相高效液相色谱法；龙须藤；杨梅素；槲皮素；表儿茶素；5,6,7,3,4,5-六甲氧基黄酮
中图分类号：R284.1; R917.101 文献标志码：B 文章编号：1007-7693(2009)09-0763-04

RP-HPLC Determination of Four Flavonols in Bauhinia championii Benth.

XU Weia, ZHENG Haiyinb，HONG Zhenfengb*, TANG Xuchonga(Fujian College of Traditional Chinese Medicine，a.
Department of Pharmacy; b.Department of Integrative Medicine, Fuzhou 350108, China)

ABSTRACT: OBJECTIVE To determine myricetin, quercetin, (-)-epicatechin, 5,6,7,3,4,5-hexamethoxy flavone in Bauhinia
championii Benth., several samples from different areas were examined, by HPLC using gradint elution. METHODS The
determination was performed on a Shimadzu C18 column (4.6 mm×250 mm, 5 µm). The mobile phase consisted of acetonitrile-water,
gradint elution (0 min, CH3CN-water 20∶80, 5 min, CH3CN-water 30∶70, 10 min, CH3CN-water 50∶50). The flow rate was 1.0
mL·min-1. The detection wavelength was set at 370 nm. RESULTS The line response range from 0.0716-0.716 μg of myricetin;
0.122 8-1.228 μg of quercetin; 0.102 4-1.024 μg of (-)-epicatechin; 0.090 2 -0.902 μg of 5,6,7,3,4,5-hexamethoxy flavone. Their
contents were highest in Qungyunshan, Fujian. CONCLUSION The RP-HPLC method shows a good separation，reproducity and
accuracy. It will be used for determining flavones in herbs and extracts．The contents of four flavones are different in Bauhinia
championii Benth. from different places.
KEY WORDS：RP-HPLC；Bauhinia championii Benth.；myricetin；quercetin；(-)-epicatechin；5,6,7,3,4,5-hexamethoxy flavone

龙须藤为豆科羊蹄甲属植物龙须藤 Bauhinia
championii Benth.的藤，主要分布福建、江西、广西、
浙江等，具有祛风湿、行血气的功效 [1]。现代药理
学研究证明，龙须藤的有效成分具有祛风除湿、活
血止痛、健脾理气的作用，用于治疗风湿性关节炎、
腰腿疼、跌打损伤、胃痛、小儿疳积。龙须藤药材
基金项目：福建省科技厅重点项目(2004I005)
作者简介：徐伟，男，讲师 *通信作者：洪振丰，男，教授 Tel: (0591)22861661 E-mail: zfhong1953@163.com
DOI:10.13748/j.cnki.issn1007-7693.2009.09.017
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的化学成分主要为黄酮类、氰苷、没食子酸等[2]。
龙须藤中黄酮类成分具有镇痛抗炎[3-4]等作用，是其
重要活性成分，而其含量情况还尚未见报道。本实
验采用反相高效液相色谱梯度洗脱法对龙须藤的 4
种水 解 黄酮 苷 元杨梅素 (myricetin) 、 槲皮 素
(quercetin)、表儿茶素[(-)-epicatechin]、5,6,7,3,4,5-
六甲氧基黄酮(5,6,7,3,4,5-hexamethoxy flavone；以
下简称六甲氧基黄酮)的含量进行考察，并对不同产
地的龙须藤所含黄酮成分进行了基础研究，以控制
和评价其质量。
1 仪器与试药
1.1 仪器
美国 Waters 600E 高效液相色谱仪，包括二极
管阵列检测器、四元泵、在线真空脱气机、
Millennium32 色谱工作站；Sartoious BT 25S 型电子
分析天平(北京赛多利斯仪器有限公司)。
1.2 试药
槲皮素对照品(中国药品生物制品检定所，批
号：110861-200304，纯度：≥98%)；表儿茶素对照
品(中国药品生物制品检定所，批号：878-200102，
纯度：≥98%)；杨梅素对照品 (Fluka 公司，批号：
70050，纯度：≥96%)；5，6，7，3，4，5-六甲
氧基黄酮(江苏药物研究所提供，经 HPLC 检测，面
积归一化法计算纯度大于 98%)；药材由江苏药物研
究所提供，经福建中医学院药学系中药鉴定教研室
杨成梓副教授鉴定为豆科羊蹄甲属植物龙须藤
Bauhinia championii Benth.的藤；乙腈为色谱纯；屈
臣氏纯净水；其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件及系统适应性试验
色谱柱：Shimadzu C18 柱(4.6 mm×250 mm，5
µm)；流动相：乙腈-0.05%磷酸溶液，梯度洗脱(0
min，乙腈-0.05%磷酸比例为 20∶80，5 min 比例
为 30∶70；10 min，比例为 50∶50；30 min，比
例为 50∶50)；灵敏度 0.02 AUFS；柱温：室温；
流速：1.0 mL·min-1；检测波长：370 nm；进样量：
10 µL。在此色谱条件下，各对照品及样品的色谱
图如图 1。在上述色谱条件下，杨梅素、槲皮素、
表儿茶素和六甲氧基黄酮 4 种成分色谱峰理论板
数不低于 18 000，峰间分离度良好。
2.2 溶液的制备
2.2.1 对照品溶液的制备 精确称取杨梅素 3.58
mg、槲皮素 6.14 mg、表儿茶素 5.12 mg、六甲氧基

图 1 对照品及样品的高效液相色谱图谱
A-对照品; B-福建青云山产龙须藤；1-杨梅素; 2-槲皮素; 3-表儿茶素;
4- 5,6,7,3,4,5-六甲氧基黄酮
Fig 1 HPLC chromatograms of reference substances and
samples
A-reference substances; B-Bauhinia championii Benth.in Qingyunshan,
Fujian; 1-myricetin; 2-quercetin; 3-(-)-epicatechin; 4-5,6,7,3,4,5-
hexamethoxy flavone
黄酮 4.51 mg，精密称定，置于 5 mL 量瓶中，甲醇
定容至刻度，溶液浓度分别为杨梅素 0.716
mg·mL-1、槲皮素 1.228 mg·mL-1、表儿茶素 1.024
mg·mL-1、六甲氧基黄酮 0.902 mg·mL-1。
2.2.2 供试品溶液的配制 样品于 60 ℃下烘 2 h，
粉碎过 40 目筛，精确称取约 2 g，加入甲醇 20 mL
及 25%盐酸 10 mL，沸水浴中加热回流 1.5 h，冷却，
用甲醇定量转入 50 mL 的量瓶中，稀释至刻度，摇
匀，用 0.45 µm 微孔滤膜过滤。精密量取续滤液 1
mL，用甲醇定容于 100 mL 量瓶中。取上述溶液注
入高效液相色谱仪，测定，即得。
2.3 线性关系的考察
精确吸取对照品储备液 0.1，0.3，0.5，0.7，0.9，
1.0 mL 置于 10 mL 量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻
度，摇匀。精密吸取各对照品液 10 µL 进样，按“2.1”
项下的色谱条件测定峰面积，以对照品的进样量(µg)
为横坐标(X)，峰面积为纵坐标(Y)进行回归分析，得
杨梅素回归方程为 Y=578 952 X + 6 874 (r =0.999 8)；
槲皮素回归方程为 Y=798 592 X-7 548 (r =0.999 9)，
表儿茶素回归方程为 Y=473 217 X＋9 122 (r =0.999 9)，
六甲氧基黄酮回归方程为 Y = 489 219 X＋4 548 (r=
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0.999 8)。线性范围分别为 0.071 6～0.716 µg，0.122 8～
1.228 µg，0.102 4～1.024 µg，0.090 2～0.902 µg。
2.4 核实精密度试验
分别精密吸取同一对照品溶液，在“2.1”项下
色谱条件，连续进样 6 次，测定峰面积，结果杨梅
素、槲皮素、表儿茶素、六甲氧基黄酮的 4 种成分
RSD 分别为 1.16%，1.33%，0.98%，1.07%，符合
要求。
2.5 重复性试验
称取福建永泰产龙须藤样品 6 份，按“2.2.2”
项下方法操作，在“2.1”项下色谱条件，各取 10 µL
进样，测定峰面积，计算得杨梅素、槲皮素、表儿
茶素、六甲氧基黄酮的 4 种成分的平均含量分别为
1.732，2.469，1.217，0.759 mg·g-1；RSD 分别为
1.32%，0.93%，1.02%，1.17%，符合要求。
2.6 稳定性试验
精确称取样品，按“2.2.2”项下方法操作，在
“2.1”项下色谱条件，分别在 0，4，8，16，24 h
内注入高效液相色谱仪，测定峰面积，计算得杨梅
素、槲皮素、表儿茶素、六甲氧基黄酮 4 种成分的
RSD 分别为 1.22%，1.38%，1.42%，1.14%。结果
表明，溶液在 24 h 内稳定。其中表儿茶素对照品溶
液放置时间超过 24 h，溶液由无色变为黄色，且含
量降低，所以最好临用前配制。
2.7 加样回收率试验
取福建永泰产龙须藤样品粉末约 1 g，精确称
定，按表 1 所示，分别精确加入与药材中含量等量
的对照品，按“2.2.2”项下方法操作，在“2.1”项
下色谱条件，注入高效液相色谱仪测定，计算 4 种
成分的平均回收率，结果见表 1。
表 1 加样回收率试验结果(n=6)
Tab 1 Average recovery of samples(n=6)
2.8 不同产地龙须藤样品测定
取各产地样品，按“2.2.2”项下方法操作，在
“2.1”项下色谱条件，注入高效液相色谱仪测定，
计算含量，结果见表 2。
3 讨论
供试样品溶液的配制为对龙须藤中 4 种黄酮醇
苷元的提取，实验曾采用超声提取、热回流提取、
浸渍法 3 种方法，结果超声提取、浸渍法提取效果
表 2 不同产地龙须藤中黄酮类成分的平均含量(mg·g-1, n=3)
Tab 2 The content of flavones in Bauhinia championii Benth.
(mg·g-1, n=3)
产 地 杨梅素 槲皮素 表儿茶素 5,6,7,3,4,5- 六甲氧基黄酮
福建青云山 1.731 2.467 1.214 0.757
湖北宜昌 1.024 2.181 0.828 0.524
浙江缙云 0.957 1.753 1.241 0.214
广西隆安 1.592 2.654 1.157 0.536
江西安福 1.175 1.946 1.321 0.414
成分 药材取样量/g 药材原有量/mg 加入量/mg 测得总量/mg 回收率/% 平均回收率/% RSD/%
1.003 4 1.737 9 1.700 0 3.435 0 99.83
1.008 5 1.746 7 1.700 0 3.433 1 99.20
1.002 6 1.736 5 1.700 0 3.406 6 98.24
1.004 9 1.740 5 1.700 0 3.412 3 98.34
1.004 8 1.740 3 1.700 0 3.406 0 97.98

杨梅素
1.003 7 1.738 4 1.700 0 3.393 9 97.38

98.50

0.89
1.002 1 2.474 2 2.500 0 4.939 9 98.63
1.003 5 2.477 6 2.500 0 4.918 9 97.65
1.006 5 2.485 0 2.500 0 4.914 3 97.17
1.008 9 2.491 0 2.500 0 4.932 7 97.67
1.004 8 2.480 9 2.500 0 4.934 6 98.15

槲皮素
1.002 1 2.474 2 2.500 0 4.903 7 97.18

97.74

0.58
1.003 5 1.221 3 1.200 0 2.407 9 98.89
1.006 9 1.225 4 1.200 0 2.415 1 99.14
1.004 9 1.223 0 1.200 0 2.405 9 98.58
1.005 7 1.223 9 1.200 0 2.414 9 99.25
1.003 5 1.221 3 1.200 0 2.392 2 97.58

表儿茶素
1.004 1 1.222 0 1.200 0 2.409 5 98.96

98.73

0.62
1.005 9 0.763 5 0.750 0 1.505 8 98.97
1.006 7 0.764 1 0.750 0 1.498 8 97.96
1.006 7 0.764 1 0.750 0 1.496 7 97.68
1.005 8 0.763 4 0.750 0 1.502 3 98.52
1.003 4 0.761 6 0.750 0 1.508 4 99.57

六甲氧基
黄酮
1.006 8 0.764 2 0.750 0 1.512 5 99.78

98.75

0.86
·766· Chin JMAP, 2009 September, Vol.26 No.9 中国现代应用药学杂志 2009 年 9 月第 26 卷第 9 期
作者简介：陈爱瑛，女，高级实验师 Tel: (0571)88215618 E-mail: chay-01@163.com *通信作者：姜丽霞，女，硕士生导师
Tel: (0571) 88215618 E-mail: jlx33@163.com
较差，热回流提取效果较好。本实验采用酸水解法，
考虑到黄酮苷水解时不同加热回流水解时间对提
取效率影响较大，盐酸浓度参考中国药典方法[5]采
用 25％盐酸，将药材分别水解 0.5，1.0，1.5，2.0 h，
表明随着水解时间的增长，4 种黄酮醇苷元的含量
逐渐增加，而水解 1.5，2.0 h 含量相当，故最终选
择水解时间为 1.5 h。
本实验采用梯度洗脱法对不同产地的龙须藤
中杨梅素、槲皮素、表儿茶素、六甲氧基黄酮的 4
种成分进行测定。由表 2 可知，采自福建青云山的
样品杨梅素、槲皮素、表儿茶素、六甲氧基黄酮的
4 种成分的平均含量较高；其次依次为广西隆安、
江西安福、湖北宜昌、浙江缙云地区样品；不同产
地龙须藤中 4 种黄酮的含量存在一定的差异，其含
量与生长环境、采集时间等因素有关，这为龙须藤
药材的选择以及质量标准的建立和进一步开发利
用提供了科学依据。

REFERENCES

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收稿日期：2008-10-21



RP-HPLC 测定延胡索酸泰妙菌素含量

陈爱瑛 1，管晨 2，徐世芳 1，姜丽霞 1*(1.浙江省医学科学院药物研究所，杭州 310013；2.浙江大学阳光营养技术有限公司, 杭州 310007)

摘要：目的 建立高效液相色谱法测定延胡索酸泰妙菌素含量。方法 采用 Agilent C18 (150 mm×4.6 mm , 5 µm), 流动相为
0.1 mol·mL-1碳酸铵缓冲液(取碳酸铵 10 g，加水 800 mL使溶解，加 24 mL 6%的高氯酸水溶液，加水至 1 000 mL)-乙腈-甲
醇(27∶23∶50)；检测波长为 212 nm。结果 线性范围为 0.25~0.75 mg·mL-1 (r=0.999 4)；平均回收率为 99.3% (RSD=1.2%)。
结论 方法快捷，准确，重复性好。
关键词：延胡索酸泰妙菌素；高效液相色谱法；含量
中图分类号：R917.101; R927.2 文献标志码：B 文章编号：1007-7693(2009)09-0766-03

Determination the Content of Tiamulin Fumarate by RP-HPLC

CHEN Aiying1, GUAN Chen2，XU Shifang1，JIANG Lixia1* (1.Institute of Medica Materia, Zhejiang Academy of
Medicine, Hangzhou 310013, China; 2.Zhejiang University Sunny Nutrition Technology Co., LTD., Hangzhou 310007, China)

ABSTRACT: OBJECTIVE To establish a method for determination the content of tiamulin fumarate. METHODS RP-HPLC
was adopted, the column was Agilent C18 (150 mm×4.6 mm, 5 µm), the mobile phase was 0.1 mol·mL-1 ammonium carbonate buffer
(add 10 g ammonium carbonate to a 1 000 mL volumetric flask and dissolve in about 800 mL of water. Add 24 mL 6% of perchloric
acid and dilute with water to volume) -acetonitril-methanol (27∶23∶50). UV dector wavelength was 212 nm. RESULTS The
calibration is linear between 0.25-0.75 mg·mL-1. The mean recovery was 99.3%, RSD%=1.2%. CONCLUSION This method
inspecting tiamulin fumarate is rapid, accurate and reproducible.
KEY WORDS: tiamulin fumarate; HPLC; content

延胡索酸泰妙菌素是一种半发酵半合成双萜类动
物专用抗生素。它通过干扰微生物核蛋白体抑制微生
物蛋白的合成，从而达到抗菌作用。主要用于抗支原
体、螺旋体、放线杆菌病原体和赤痢菌，用于预防和