全 文 ：即在中医药理论整体观的指导下，在实验动物体内
药动学水平上，以单味药和复方药物中单一成分研
究为主，对指标性成分体内动态过程进行研究，再将
中药复方多成分体系中各单个成分的药动学参数整
合，从而构成复方总量药动学参数体系［４］。旨在为
临床应用选择合适的给药途径和剂型、确定合理剂
量和用法提供科学依据。
通过试验摸索［５－７］，最终采取醋酸乙酯液－液萃
取的方法，去除血浆中的蛋白质；选择不受内源性物
质干扰、保留时间适中的对羟基苯甲酸作为内标物；
以甲醇－１％冰醋酸（２０∶８０）为流动相，建立了丹参素
血浆样品反相高效液相色谱法测定方法。本实验所
用方法线性关系良好，回收率、日内及日间精密度
高、专一性强，完全符合生物样本分析的要求。
单剂量给予家兔乳洁安后丹参素的体内过程符
合单室模型，药动学参数计算结果表明，仅从丹参素
考虑，知乳洁安对增加冠状动脉血流量，减轻炎症，
治疗乳腺增生病能够起到一定的疗效。且乳洁安中
丹参素进入兔体内后，吸收迅速、消除快，达峰时间
短、分布容积大、平均驻留时间短。因此，如要在动
物体内维持有效治疗浓度，就需频繁给药。通过研
究丹参素在生物体内的行为，为乳洁安缓释制剂的
研制提供了科学依据。
本试验得出的药动学参数与文献［８－９］有一定差
别。这些差别提示：（１）复方制剂中各种成分或其代
谢产物在体内可能影响丹参素的吸收和代谢；（２）由
于本实验所使用的方法和剂量与文献中的不一致所
造成了差别。因此，有待统一方法，对丹参素进行单
剂和复方制剂的单次与多次不同剂量给药的研究，
并对其在体内分布、代谢、排泄规律作进一步探讨。
参考文献：
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动学［Ｊ］．中国医院药学杂志，２００５，５（３）：２５１－２５３．
［收稿日期］２０１２－０５－２０
［基金项目］国家自然基金资助项目（Ｎｏ．３０９７３８６４）　［作者简介］黄晓华，女，博士，主任医师，副教授　　［通讯作者］阮金兰，教授，博士生
导师，电话：０２７－８３６９２７６２，Ｅ－ｍａｉｌ：ｊｉｎｌａｎ８１５２＠１６３．ｃｏｍ
普通针毛蕨总黄酮包合物的制备及其生物利用度研究
黄晓华１，陈静２，吴双英１，阮金兰２　（１．呼伦贝尔职业技术学院，内蒙古 呼伦贝尔０２１０００；２．华中科技大学同济医学院
药学院，湖北 武汉４３００３０）
［摘要］　目的：了解普通针毛蕨总黄酮及其包合物的活性成分在人工胃、肠液中的稳定性及其生物利用度。方法：以人工胃、
肠液将普通针毛蕨总黄酮０．５％ＣＭＣ－Ｎａ混悬剂及 ＨＰ－β－ＣＤ包合物制成高、中、低３个浓度样品，在温孵箱内３７℃恒温、振荡
５０ｒ·ｍｉｎ－１，于０、４、８、１２、２０、２４ｈ取样品进行 ＨＰＬＣ检测，检测其活性成分代表原芹菜素的峰面积进行比较；高、中、低３种
相等剂量（按体质量分别以１００，２００，３００ｍｇ·ｋｇ－１给药）的普通针毛蕨总黄酮混悬剂及其包合物进行动物灌胃血液吸收动力
学实验，采用Ｄａｓ　２．０软件对各组血药浓度进行房室模型分析。结果：普通针毛蕨总黄酮及其包合物的所有样品在０～２４ｈ
内，同一样品间所含的原芹菜素峰面积差异无显著性（Ｐ＞０．０５），相同浓度的样品组与阳性组、阴性组比较所含的原芹菜素峰
面积无显著性差异（Ｐ＞０．０５），说明原芹菜素在胃肠液中比较稳定，不易破坏；普通针毛蕨总黄酮混悬剂及其包合物的大鼠灌
胃血液吸收动力学试验，表现出明显的线性动力学特征，显示包合物延长了半衰期、血药浓度达峰时间变短，峰浓度有所提
高，消除半衰期相对延长，ＡＵＣ相对加大，说明包合处理可提高总黄酮口服吸收的生物利用度。结论：普通针毛蕨总黄酮中的
活性成分在人工胃肠液稳定性强，不易破坏；包合物的生物利用度显著提高。
［关键词］　普通针毛蕨总黄酮；包合物；人工胃液；人工肠液；生物利用度
［中图分类号］Ｒ９４５　　［文献标识码］Ａ　　［文章编号］１００１－５２１３（２０１３）０３－０１８１－０７
·１８１·中国医院药学杂志２０１３年第３３卷第３期Ｃｈｉｎ　Ｈｏｓｐ　Ｐｈａｒｍ　Ｊ，２０１３Ｆｅｂ，Ｖｏｌ　３３，Ｎｏ．０３
DOI:10.13286/j.cnki.chinhosppharmacyj.2013.03.005
Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｉｎｃｌｕｓｉｏｎ　ｃｏｍｐｏｕｎｄ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｅｓ　ｏｆ　Ｍａｃｒｏｔｈｅｌｙｐｔｅｒｉｓ　ｔｏｒｒｅｓｉａｎａ，ａｎｄ　ｔｈｅ
ｓｔｕｄｙ　ｏｆ　ｉｔｓ　ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ
ＨＵＡＮＧ　Ｘｉａｏ－ｈｕａ１，ＣＨＥＮ　Ｊｉｎｇ２，ＷＵ　Ｓｈｕａｎｇ－ｙｉｎｇ１，ＲＵＡＮ　Ｊｉｎ－ｌａｎ２（１．Ｈｕｌｕｎｂｅｉｅｒ　Ｖｏｃａｔｉｏｎａｌ　Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ　Ｃｏｌ－
ｌｅｇｅ，Ｉｎｎｅｒ　Ｍｏｎｇｏｌｉａ　Ｈｕｌｕｎｂｅｉｅｒ　０２１０００，Ｃｈｉｎａ；２．Ｃｏｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｔｏｎｇｊｉ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｃｅｎｔｅｒ　ｏｆ　Ｈｕａｎｚｈｏｎｇ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ
Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｈｕｂｅｉ　Ｗｕｈａｎ　４３００３０，Ｃｈｉｎａ）
ＡＢＳＴＲＡＣＴ：ＯＢＪＥＣＴＩＶＥ　Ｔｏ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ　ｔｈｅ　ｓｔａｂｉｌｉｔｙ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｅｓ　ｏｆ　Ｍａｃｒｏｔｈｅｌｙｐｔｅｒｉｓ　ｔｏｒｒｅｓｉａｎａ　ｉｎ　ｔｈｅ　ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ　ｇａｓｔｒｉｃ
ｊｕｉｃｅ（ＡＧＪ）ａｎｄ　ｔｈｅ　ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ　ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ　ｊｕｉｃｅ（ＡＩＪ）ａｎｄ　ｉｔｓ　ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ．ＭＥＴＨＯＤＳ　０．５％ ＣＭＣ－Ｎａ　ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ　ａｎｄ　ＨＰ－β－
ＣＤ　ｉｎｃｌｕｓｉｏｎ　ｃｏｍｐｏｕｎｄ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｅｓ　ｏｆ　Ｍａｃｒｏｔｈｅｌｙｐｔｅｒｉｓ　ｔｏｒｒｅｓｉａｎａ　ｗｅｒｅ　ｄｉｓｓｏｌｖｅｄ　ｂｙ　ＡＧＪ　ａｎｄ　ＡＩＪ　ｔｏ　ｏｂｔａｉｎ　ｔｈｒｅｅ　ｃｏｎｃｅｎ－
ｔｒａｔｉｏｎｓ　ｓａｍｐｌｅｓ　ａｔ　ｌｏｗ，ｍｉｄｄｌｅ　ａｎｄ　ｈｉｇｈ　ｌｅｖｅｌｓ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅ　ｓａｍｐｌｅｓ　ｗｅｒｅ　ｉｎｃｕｂａｔｅｄ　ａｔ　３７℃，ａｎｄ　ｖｉｂｒａｔｅｄ　ａｔ　ｔｈｅ　ｒａｔｅ　ｏｆ
５０ｒ·ｍｉｎ－１．Ｔｈｅｎ，ｔｈｅ　ｐｅａｋ　ａｒｅａｓ　ｏｆ　ｐｒｏｔｏａｐｉｇｅｎｏｎｅ　ｉｎ　ａｌ　ｓａｍｐｌｅｓ，ｗｈｉｃｈ　ｉｓ　ｔｈｅ　ｍａｉｎ　ｆｌａｖｏｎｅ　ｉｎ　Ｍａｃｒｏｔｈｅｌｙｐｔｅｒｉｓ　ｔｏｒｒｅｓｉａｎａ，
ｗｅｒｅ　ｄｅｔｅｃｔｅｄ　ｂｙ　ＨＰＬＣ　ｍｅｔｈｏｄ　ａｆｔｅｒ　ｖｉｂｒａｔｅｄ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｉｎｃｕｂａｔｏｒ　ｆｏｒ　０，４，８，１２，１６，２０ｈ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｒｅｅ　ｄｏｓｅｓ　ｏｆ　ｓｕｓｐｅｎ－
ｓｉｏｎ　ａｎｄ　ｉｎｃｌｕｓｉｏｎ　ｃｏｍｐｏｕｎｄ（ａｔ　ｔｈｅ　ｄｏｓｅｓ　ｏｆ　１００，２００ｍｇ·ｋｇ－１，ａｎｄ　３００ｍｇ·ｋｇ－１，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ）ｗｅｒｅ　ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｅｄ　ｂｙ　ｇａｓ－
ｔｒｉｃ　ｇａｖａｇｅ　ｔｏ　ｒａｔｓ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｂｌｏｏｄ　ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ　ｋｉｎｅｔｉｃｓ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ，ｔｈｅｎ　ｔｈｅ　ｂｌｏｏｄ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ　ｉｎ　ｅａｃｈ　ｇｒｏｕｐ　ｗｅｒｅ　ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ　ｂｙ
ＤＡＳ　２．０ｐｒｏｇｒａｍ　ｔｏ　ａｎａｌｙｚｅ　ｐｒｏｔｏａｐｉｇｅｎｏｎｅ＇ｓ　ｃｏｍｐａｒｔｍｅｎｔａｌ　ｍｏｄｅｌ．ＲＥＳＵＬＴＳ　Ｆｏｒ　ａｌ　ｓａｍｐｌｅｓ，ｉｎ　ｔｈｅ　ｔｉｍｅ　ｒａｎｇｅ　ｏｆ　０－２４ｈ，
ｔｈｅ　ｐｅａｋ　ａｒｅａ　ｏｆ　ｐｒｏｔｏａｐｉｇｅｎｏｎｅ　ｉｎ　ｏｎｅ　ｓａｍｐｌｅ　ｓｈｏｗｅｄ　ｎｏ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ（Ｐ＞０．０５）．Ｆｏｒ　ｓａｍｐｌｅｓ　ａｔ　ｔｈｅ　ｓａｍｅ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａ－
ｔｉｏｎ，ｔｈｅ　ｐｅａｋ　ａｒｅａ　ｏｆ　ｐｒｏｔｏａｐｉｇｅｎｏｎｅ　ｓｈｏｗｅｄ　ｎｏ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ　ｗｈｅｎ　ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｎｅｇａｔｉｖｅ　ｇｒｏｕｐ　ａｎｄ　ｐｏｓｉｔｉｖｅ
ｇｒｏｕｐ（Ｐ＞０．０５）．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｏｆ　ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ　ｓｔｕｄｙ　ｉｎｄｉｃａｔｅｄ　ｔｈａｔ　ｂｌｏｏｄ　ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ　ｏｆ　ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ　ａｎｄ　ｉｎｃｌｕｓｉｏｎ　ｃｏｍｐｏｕｎｄ
ｓｈｏｗｅｄ　ｃｌｅａｒ　ｌｉｎｅａｒ　ａｂｓｏｒｐｔｉｖｅ　ｃｈａｒａｃｔｅｒ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｉｎｃｌｕｓｉｏｎ　ｃｏｍｐｏｕｎｄ　ｃｏｕｌｄ　ｉｍｐｒｏｖｅ　ｔｈｅ　ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ　ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｓｕｓ－
ｐｅｎｓｉｏｎ，ｗｈｉｃｈ　ｉｔ　ｃｏｕｌｄ　ｐｒｏｌｏｎｇ　ｔｈｅ　ｈａｌｆ　ｔｉｍｅ，ｓｈｏｒｔｅｎ　ｔｈｅ　ｐｅａｋ　ｐｌａｓｍａ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｔｉｍｅ，ｉｎｃｒｅａｓｅ　ｔｈｅ　ｐｅａｋ　ｐｌａｓｍａ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａ－
ｔｉｏｎ，ｐｒｏｌｏｎｇ　ｔｈｅ　ｅｌｉｍｉｎａｔｉｏｎ　ｈａｌｆ　ｔｉｍｅ，ａｎｄ　ｉｎｃｒｅａｓｅ　ｔｈｅ　ＡＵＣ．ＣＯＮＣＬＵＳＩＯＮ　Ｔｈｅ　ａｃｔｉｖｅ　ｆｌａｖｏｎｅ　ｃｏｍｐｏｕｎｄ　ｉｎ　Ｍａｃｒｏｔｈｅｌｙｐ－
ｔｅｒｉｓ　ｔｏｒｒｅｓｉａｎａ　ｉｓ　ｓｔａｂｌｅ　ｉｎ　ＡＧＪ　ａｎｄ　ＡＩＪ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｉｎｃｌｕｓｉｏｎ　ｃｏｍｐｏｕｎｄ　ｃａｎ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ｉｍｐｒｏｖｅ　ｔｈｅ　ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ（Ｐ＜０．０５）．
ＫＥＹ　ＷＯＲＤＳ：ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｅｓ　ｏｆ　Ｍａｃｒｏｔｈｅｌｙｐｔｅｒｉｓ　ｔｏｒｒｅｓｉａｎａ；ｉｎｃｌｕｓｉｏｎ　ｃｏｍｐｏｕｎｄ；ｔｈｅ　ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ　ｇａｓｔｒｉｃ　ｊｕｉｃｅ；ｔｈｅ　ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ　ｉｎｔｅｓ－
ｔｉｎａｌ　ｊｕｉｃｅ；ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ
　　普通针毛蕨系金星蕨科针毛蕨属植物，在中国
广泛分布于长江以南各省，向西可至云南东北部（绥
江）和四川（峨眉山）。该药在民间被用以治疗外伤
出血和水肿，具有去瘰散结、清热解毒等功效［１］。最
新资料还显示，普通针毛蕨中所含有的总黄酮中原
芹菜素具有良好的抗肿瘤活性［２］。目前尚未见普通
针毛蕨总黄酮及原芹菜素 ＨＰ－β－ＣＤ－包含物的报道。
胃肠道是口服药物的主要吸收代谢场所，但胃肠道
不同ｐＨ环境或内容物会导致药物的不稳定性，从
而使生物利用度降低。普通针毛蕨总黄酮及其包合
物在胃肠液中的稳定性尚待深入研究。本文介绍了
普通针毛蕨总黄酮包合物的制备，并研究了其在胃
肠液中得稳定性，为提高其生物利用度提供参考。
１　材料
１．１　仪器　ＨＩＴＡＣＨＩ高效液相色谱仪、Ｔ２０００Ｐ
色谱工作站、ＴＯ－２Ａ 型柱温箱（日本岛津）；ＵＶ－
７５６ＭＣ紫外可见分光广度计（上海精密科学仪器有
限公司）；Ｄｅｌｔａ３２０酸度计（Ｍｅｔｔｌｅｒ　Ｔｏｌｅｄｏ　Ｉｎｓｔｒｕ－
ｍｅｎｔｓ　Ｃｏ．Ｌｔｄ．，Ｓｈａｎｇｈａｉ，Ｃｈｉｎａ）；仪器Ｘ射线衍
射仪（荷兰帕纳科公司ＰＡＮａｌｙｔｉｃａｌ　Ｂ．Ｖ．）；差示扫
描量热仪 ［铂金－埃尔默仪器 （上海）有限公司
（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ　Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）］；傅立叶拉曼光谱仪
（德国Ｂｒｕｋｅｒ公司）。
１．２　药品试剂　胃蛋白酶（北京鼎国生物技术有限
责任公司，批号９４Ｇ１０２２８）；胰酶（北京鼎国生物技
术有限责任公司，批号９ＡＣ１０３６０）；对照品原芹菜
素由本实验室自普通针毛蕨中分离纯化获得，经
ＵＶ、ＩＲ、１Ｄ－ＮＭＲ、２Ｄ－ＮＭＲ、ＬＣ－ＭＳ检测原芹菜素
化合物与文献报道一致，ＨＰＬＣ－ＵＶ 测其纯度＞
９８％。自制普通针毛蕨总黄酮中原芹菜素含量为
４６．４５％，自制普通针毛蕨总黄酮的 ＨＰ－β－ＣＤ包合
物，以原芹菜素计算包合率８２．２０％。甲醇和乙腈
（天津市科密欧化学试剂有限公司）为色谱纯，其他
试剂均为分析纯。
１．３　样品试液配制
１．３．１　对照品试液　精密称取原芹菜素２．０ｍｇ，
用甲醇稀释成０、０．２５、０．５、２．５、５．０、１０．０、２０．０μｇ
·ｍＬ－１标准系列溶液，备用。
１．３．２　人工胃液　取稀盐酸４．１ｍＬ，加水约２００
ｍＬ与胃蛋白酶２．５ｇ，摇匀后，加水稀释至２５０ｍＬ，
即得［３］。
１．３．３　人工肠液　取磷酸二氢钾１．７ｇ，加水１２５
·２８１· 中国医院药学杂志２０１３年第３３卷第３期Ｃｈｉｎ　Ｈｏｓｐ　Ｐｈａｒｍ　Ｊ，２０１３Ｆｅｂ，Ｖｏｌ　３３，Ｎｏ．０３
ｍＬ使溶解，用０．１ｍｏｌ·Ｌ－１氢氧化钠溶液调节ｐＨ
值至６．８，取胰酶２．５ｇ，加适量水溶解，将两液混合
后，加水稀释至２５０ｍＬ，即得［３］。
１．３．４　普通针毛蕨总黄酮的人工胃肠试液　取
０．５％羧甲基纤维素钠（ＣＭＣ－Ｎａ）普通针毛蕨总黄
酮加入人工胃液、人工肠液配制成质量浓度为４．０、
２．０、１．０μｇ·ｍＬ
－１系列的总黄酮样品溶液，备用。
另配制质量浓度为４．０、２．０、１．０μｇ·ｍＬ
－１总黄酮甲
醇溶液做阳性对照。
１．３．５　普通针毛蕨总黄酮包合物的人工胃肠试液
　取普通针毛蕨总黄酮包合物加入人工胃液、人工
肠液配制质量浓度为４．０、２．０、１．０μｇ·ｍＬ
－１总黄酮
包合物样品溶液，备用。另配制质量浓度为４．０、
２．０、１．０μｇ·ｍＬ
－１总黄酮包合物水溶液做阳性对
照。
１．３．６　普通针毛蕨原芹菜素的人工胃肠试液　取
原芹菜素加入人工胃液、人工肠液配制成质量浓度
为２．０、１．０、０．５μｇ·ｍＬ
－１的对照品溶液，备用。另
配制质量浓度为２．０、１．０、０．５μｇ·ｍＬ
－１原芹菜素甲
醇溶液做阳性对照。
１．３．７　普通针毛蕨总黄酮混悬剂的吸收动力学实
验试液配制（以下简称混悬剂）　精密称取ＣＭＣ－Ｎａ
１ｇ置入２００ｍＬ纯化水中，配成０．５％ ＣＭＣ－Ｎａ溶
剂，精密称取普通针毛蕨总黄酮２００ｍｇ加０．５％
ＣＭＣ－Ｎａ至１０ｍＬ，配成２０ｍｇ·ｍＬ－１储备液，备
用，用前涡旋混匀。
１．３．８　普通针毛蕨总黄酮包合物的吸收动力学实
验试液配制（以下简称包合物）　 取包封率为
８２．２０％普通针毛蕨总黄酮包合物相当于２００ｍｇ
普通针毛蕨总黄酮，加纯化水１０ｍＬ，涡旋，３　０００ｒ·
ｍｉｎ－１离心５ｍｉｎ，弃沉淀、取上清配成２０ｍｇ·ｍＬ－１
储备液，备用。
１．４　动物　ＳＤ大鼠，体质量（２００±１０）ｇ，雌雄各
半，华中科技大学同济医学院实验动物学中心提供，
合格证号：Ｎｏ．００００２８８２。在恒温２２℃、光照周期
１２ｈ环境中饲养４８ｈ后用于实验，实验前禁食１４
ｈ，任意饮水。
２　方法
２．１　对照品原芹菜素的 ＨＰＬＣ检测方法
２．１．１　色谱条件　色谱柱：Ｌｉｃｈｒｏｓｐｈｅｒ　Ｃ１８（４．６×
２５０ｍｍ，５μｍ）；流动相：甲醇－乙腈－０．２％磷酸水溶
液（１∶２∶７，ｐＨ　３．５）；流速：１．０ｍＬ·ｍｉｎ－１；柱温：
２５℃；测定波长：２４８ｎｍ；进样量：２０μＬ。
２．１．２　对照品原芹菜素标准曲线　以原芹菜素的
质量浓度Ｘ（μｇ·ｍＬ
－１）为横坐标，ＨＰＬＣ检测所得
的原芹菜素的峰面积Ｙ 为纵坐标，进行线性回归分
析，即得各样品中原芹菜素的标准曲线，实验数据表
明，本方法原芹菜素在０．２５～２０μｇ·ｍＬ
－１范围内有
良好的线性关系。标准曲线方程：Ｙ＝７１　３３２　Ｘ－
３２３，ｒ２＝０．９９９　９［４－５］。按原芹菜素峰计算色谱柱的
理论塔板数为１０　０６７。所有生物样品中的内源性物
质与原芹菜素的分离度均大于２．５，对原芹菜素的检
测不产生干扰，因此，本法具有良好的专属性，符合
测定要求。原芹菜素的最低检测限为５μｇ·Ｌ
－１。
（１）标准品原芹菜素的稳定性试验：取一定量原
芹菜素对照品溶液配制成高、中、低（２０、１０、０．５μｇ·
ｍＬ－１）３种不同质量浓度的溶液，样品置于２０℃、
－２０℃、－８０℃冰箱中放置１４ｄ后进行 ＨＰＬＣ－
ＵＶ测定，由表１可见，该方法表现出良好的重现性
和标准品的稳定性。
表１　稳定性试验的检测结果的相对标准偏差
Ｔａｂ　１　Ｔｈｅ　ｒｅｌａｔｉｖｅ　ｓｔａｎｄａｒｄ　ｄｅｖｉａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｒｅ－
ｓｕｌｔｓ　ｏｆ　ｓｔａｂｉｌｉｔｙ　ｔｅｓｔ
放置温度／℃
不同浓度对照品溶液ＲＳＤ／％
２０　 １０　 ２
２０　 ２．３５　 ２．４７　 ２．５１
－２０　 ３７９　 ３．５２　 ３．３８
－８０　 ４．２１　 ３．８１　 ３．４２
　　（２）标准品原芹菜素的精密度试验：精密吸取取
一定量原芹菜素对照溶液配制成高、中、低（２０．０、
１０．０、２．０、０．５μｇ·ｍＬ
－１）３种不同质量浓度溶液，
在常温２０℃下放置，于一天内５次和１０ｄ内隔２ｄ
一次，用 ＨＰＬＣ－ＵＶ进行测定分析，计算日内和日
间精密度。由表２可见，该方法的日内和日间精密
度均小于５％，由此表明，该方法表现出良好的重复
性。
表２　精密度试验结果（ｎ＝５）
Ｔａｂ　２　Ｒｅｓｕｌｔｓ　ｏｆ　ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ　ｔｅｓｔ（ｎ＝５）
样品质量浓度
／μｇ·ｍＬ－１
日内精密度／％ 日间精密度／％
２．００　 １．４５　 ２．７７
１０．００　 ２．５３　 ３．１８
２０．００　 ２．７４　 ３．４２
２．２　血浆样品中原芹菜素的 ＨＰＬＣ检测方法
２．２．１　血浆样品的处理　取血浆样品１００μＬ，加
入２００μＬ　５０％磷酸和４００μＬ醋酸乙酯，涡旋１
ｍｉｎ，静置１ｍｉｎ，取上清液２００μＬ，加醋酸乙酯２００
μＬ，涡旋１ｍｉｎ，静置１ｍｉｎ，取上层清液２００μＬ，再
重复提取２次，共６００μＬ上清液于ＥＰ管内，在６５
℃水浴中恒温蒸干，加入４０μＬ乙腈，涡旋２ｍｉｎ，
１２　０００ｒ·ｍｉｎ－１离心２０ｍｉｎ，取上清液２０μＬ进行
ＨＰＬＣ分析。
２．２．２　血浆样品中原芹菜素的标准曲线　精密吸
·３８１·中国医院药学杂志２０１３年第３３卷第３期Ｃｈｉｎ　Ｈｏｓｐ　Ｐｈａｒｍ　Ｊ，２０１３Ｆｅｂ，Ｖｏｌ　３３，Ｎｏ．０３
取不同量的原芹菜素对照溶液，用大鼠空白血浆配
制成原芹菜素质量浓度为０、０．２５、０．５、２．５、５．０、
１０．０、２０．０μｇ·ｍＬ
－１生物样品。按“２．２．１”项下处
理，按照“２．１．１”项下色谱条件进行 ＨＰＬＣ－ＵＶ分
析。得回归方程：Ｙ＝５３　９６４　Ｘ－１７９，ｒ２＝０．９９９　９，
结果显示此方法对原芹菜素血浆样品具有良好的专
属性，符合测定要求。
（１）回收率试验：取空白血浆分别加入原芹菜素
标准溶液，配成高、中、低３种质量不同质量浓度
（２０、１０、０．５μｇ·ｍＬ
－１）的生物样品，按“２．２．１”项下
方法处理，用 ＨＰＬＣ－ＵＶ进行分析，结果平均回收
率为（９５．３±３．６）％。
（２）精密度试验：取空白血浆分别加入一定量原
芹菜素标准溶液配成原芹菜素生物样品，按“２．２．１”
项下方法处理，样品分别于一天内多次和七日内隔
日用 ＨＰＬＣ－ＵＶ进行测定分析，计算日内和日间精
密度。结果日内精密度（５．８±１．３）％、日间精密度
（７．３±１．１）％，表明检测方法符合要求。
（３）稳定性试验：取空白血浆分别加入一定量原
芹菜素对照溶液配成配制高、中、低３种不同浓度的
生物样品，按“２．２．１”项下方法处理，样品置于
－２０℃冰箱中放置１４ｄ后进行测定，分析样品的
稳定性，结果回收率为（９３．１±４．７）％，表明生物样
品稳定性良好及检测方法符合要求。
（４）最低检测限：配制一定浓度的血浆样品溶
液，按照“２．２．１”项下处理，用 ＨＰＬＣ－ＵＶ分析，原
芹菜素峰与基线的信噪比Ｓ／Ｎ＝３时的浓度为原芹
菜素的最低检测限，血浆样品的检测都可达到５
ｎｇ·ｍＬ－１水平，因此，该方法可用于生物样品的实际
分析。
２．３　普通针毛蕨总黄酮的紫外检测及载药量计算
方法
２．３．１　普通针毛蕨总黄酮的紫外检测方法　普通
针毛蕨总黄酮含量测定方法参照中国药典２０１０年
版一部附录所载紫外－可见分光光度法，对照品原芹
菜素与总黄酮样品的最大吸收波长相同（图１），均
为２４８ｎｍ，故采用对照品测定法，按以下公式计算
样品中总黄酮的含量。
Ｃ样＝（Ａ样／Ａ对）×Ｇ对
其中Ｃ样 为总黄酮或其包合物浓度，Ａ样 总黄酮
或其包合物的吸光度、Ｇ对为原芹菜素的浓度，Ａ对为
原芹菜素的吸光度。
精密量取对照品溶液（０．２ｍｇ·ｍＬ－１）适量，用
甲醇溶液梯度稀释成２０．０、１０．０、５．０、４．０、２．０μｇ·
ｍＬ－１标准系列溶液。分别在２４８ｎｍ测定紫外吸光
度，以质量浓度（μｇ·ｍＬ
－１）对吸光度值进行回归处
理，得线性回归曲线方程为：Ｙ＝９０．５８　Ｘ－０．０４，ｒ２
＝０．９９９　９，检测范围为２．０～２０．０μｇ·ｍＬ
－１。
图１　普通针毛蕨总黄酮及其包合物的紫外扫描图
ａ．包合物；ｂ．原芹菜素；ｃ．总黄酮；ｄ．ＨＰ－β－ＣＤ
Ｆｉｇ　１　ＵＶ　ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｅｓ　ｏｆ　Ｍａｃｒｏｔｈｅｌｙｐｔｅｒｉｓ
ｔｏｒｒｅｓｉａｎａ　ａｎｄ　ｉｔｓ　ｉｎｃｌｕｓｉｏｎ　ｃｏｍｐｏｕｎｄ
ａ．ｉｎｃｌｕｓｉｏｎ　ｃｏｍｐｏｕｎｄ；ｂ．ｐｒｏｔｏａｐｉｇｅｎｏｎｅ；Ｃ．ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｅｓ；
ｄ．ＨＰ－β－ＣＤ
　　（１）重复性试验：取供试品溶液适当稀释，按
２４８ｎｍ波长，连续测定吸光度５次，结果 ＲＳＤ为
０．１６％，表明精密度良好。
（２）准确度试验：精确称取供试品溶液适当稀
释，加入一定量对照品溶液，在２４８ｎｍ处测定其吸
光度５次，计算回收率。实验测得平均回收率为
９８．１％，ＲＳＤ为２．１％。结果表明，测定方法准确度
较高，可实现样品的准确测定。
（３）稳定性试验：取供试品溶液适当稀释，室温
下分别在０、２、３、４、６ｈ测定其吸光度，计算含量，
ＲＳＤ为２．１２％，实验表明，所建立紫外检测方法稳
定性良好。
２．３．２　载药量的检测方法　精密称取包合物８ｍｇ
至１０ｍＬ量瓶中，加２ｍＬ无水乙醇溶解，超声振荡
１０ｍｉｎ，纯化水稀释到刻度，稀释数倍后，在２４８ｎｍ
处测定其吸光度，按下列公式计算载药量：
载药量（％）＝包合物中原芹菜素（总黄酮）含
量／包合物的重量
２．４　总黄酮包合物的制备方法
２．４．１　正交法筛选包合物的制备方法　由于普通
针毛蕨总黄酮提取物水溶性较差，本实验拟采取
ＨＰ－β－ＣＤ包合总黄酮提取物的方法，以期提高其溶
解度和生物利用度［６－８］及稳定性［９］。
预试验中发现总黄酮以原芹菜素计算，与 ＨＰ－
β－ＣＤ接近１∶２的摩尔比（总黄酮与ＨＰ－β－ＣＤ的质量
比１∶５）时包合率较高。包合物制备方法为：精密称
取总黄酮，加入一定体积的无水乙醇中溶解，将溶解
后的总黄酮溶液滴加到恒温、恒速（２　０００ｒ·ｍｉｎ－１）
搅拌的 ＨＰ－β－ＣＤ水溶液中，过滤、冻干即得包合物。
·４８１· 中国医院药学杂志２０１３年第３３卷第３期Ｃｈｉｎ　Ｈｏｓｐ　Ｐｈａｒｍ　Ｊ，２０１３Ｆｅｂ，Ｖｏｌ　３３，Ｎｏ．０３
２．４．２　包合物的验证方法　分别取总黄酮提取物、
ＨＰ－β－ＣＤ、二者物理混合物（１∶２）、总黄酮－ＨＰ－β－ＣＤ
包合物进行红外光谱、差示扫描量热法ＤＳＣ图、Ｘ－
射线衍射法检测，验证包合物的形成与否。
２．５　总黄酮及其包合物在人工胃、肠液中的稳定性
试验方法　将“１．３”项的对照品原芹菜素、样品总黄
酮及其包合物试液，每个浓度取５个样品，各取２
ｍＬ装入ＥＰ管中，另加未加药液的空白人工胃、肠
液做阴性对照，在温孵箱内３７℃恒温振荡５０ｒ·
ｍｉｎ－１。于恒温振荡前后０、４、８、１２、２０、２４ｈ取０．１
ｍＬ样品液于４　０００ｒ·ｍｉｎ－１离心１０ｍｉｎ，取上清液
２０μＬ进样，记录峰面积的变化，进行 ＨＰＬＣ分析。
２．６　总黄酮及其包合物的生物利用度比较　取ＳＤ
大鼠随机分组，每个采血时间点６只，实验前禁食
１２ｈ，实验过程中自由饮水，采血过程中适量补充生
理盐水。结合药效学剂量设低、中、高剂量组，总黄
酮按体质量分别以１００、２００、３００ｍｇ·ｋｇ－１给药，总
黄酮混悬剂于给药前和给药后０、０．２５、０．５、１、１．５、
２、３、４、６、８、１０、１４ｈ眼眶采血，总黄酮包合剂于给
药前和给药后０、０．２５、０．５、１、２、４、８、１２、１６、２０、
２４ｈ眼眶采血，血液用肝素抗凝，４　０００ｒ·ｍｉｎ－１离心
１０ｍｉｎ，分离血浆并置于－２０℃冷冻保存。
３　结果
３．１　正交法筛选包合物的制备及包合物验证　采
用正交助手分析本次实验，设计因素和水平见表３，
方差分析结果见表４。依据“２．１．１”项和“２．１．２”项
及“２．３”项下内容，以原芹菜素为计算指标，普通针
毛蕨总黄酮包合正交试验结果见表５。
表３　正交设计因素与水平表
Ｔａｂ　３　Ｆａｃｔｏｒｓ　ａｎｄ　ｌｅｖｅｌｓ　ｏｆ　ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ　ｄｅｓｉｇｎ
因素Ａ 因素Ｂ 因素Ｃ 因素Ｄ
总黄酮／ＨＰ－β－ＣＤ量／ｇ 加水量／ｍＬ 温度／℃ 搅拌时间／ｈ
１∶５　 ２００　 ５５　 ２
１∶１０　 ３００　 ６５　 ４
１∶１５　 ４００　 ７５　 ８
表４　方差分析表
Ｔａｂ　４　Ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｖａｒｉａｎｃｅ
误差来源 方差平方和 自由度（Ｓ） 方差比（Ｆ） 显著性（Ｐ）
Ａ　 ４８８．９７１　 ２　 ７３．６８５ ＜０．０５
Ｂ　 ２３４．７０２　 ２　 ３５．３６８ ＜０．０５
Ｃ　 １２２．８８４　 ２　 １８．５１８
Ｄ　 ６．６３６　 ２　 １．００
误差 ６．６４　 ２
注：各因素的Ｆ临界值均为１９
　　由表３、４、５可以看出，以原芹菜素的载药量和
包合率为评价指标，实验考察了 ＨＰ－β－ＣＤ量、加水
量、搅拌时间及搅拌温度等因素，在不同水平时对载
药量和包合率（以原芹菜素）的影响。各因素对包合
率的影响程度为 Ａ＞Ｂ＞Ｃ＞Ｄ，因素 ＨＰ－β－ＣＤ量
（Ａ）和加水量（Ｂ）对包合率的影响显著（Ｐ＜０．０５）。
试验结果表明，工艺条件Ａ２Ｂ１Ｃ２Ｄ３包合效果最佳，
但从试验结果可知，搅拌时间在不同水平情况下对
包合率的影响并不显著，因此，为了提高实验效率，
本试验采用搅拌时间最短的 Ａ２Ｂ１Ｃ２Ｄ１组合，其包
合率到８２．２０％。
表５　正交设计试验结果
Ｔａｂ　５　Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　ｅｓｕｌｔｓ　ｏｆ　ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ　ｄｅｓｉｇｎ
序号 Ａ　 Ｂ　 Ｃ　 Ｄ 载药量／％ 包合率／％
１　 １　 １　 １　 １　 ３．４５　 ６８．３６
２　 １　 ２　 ２　 ２　 ３．６２　 ７２．４９
３　 １　 ３　 ３　 ３　 ３．１５　 ６３．１２
４　 ２　 １　 ２　 ３　 ４．８７　 ９７．４７
５　 ２　 ２　 ３　 １　 ４．１５　 ８３．６６
６　 ２　 ３　 １　 ２　 ３．７０　 ７４．８１
７　 ３　 １　 ３　 ２　 ４．０５　 ８１．９２
８　 ３　 ２　 １　 ３　 ３．５２　 ７０．３８
９　 ３　 ３　 ２　 １　 ３．６５　 ７２．６８
Ｋ１ ６７．３２　 ８２．５８　 ７１．１８　 ７４．９０
Ｋ２ ８５．３１　 ７４．４８　 ８０．２１　 ７５．７４
Ｋ３ ７４．９９　 ７０．２０　 ７６．２３　 ７６．９９
Ｒ　 １７．９９　 １２．３８　 ９．０３　 ２．０９
　　对总黄酮－ＨＰ－β－ＣＤ包合物进行红外光谱ＩＲ
图（图３）、差示扫描量热法ＤＳＣ图（图４）、Ｘ－射线衍
射法检测ＸＲＤ图（图５）。（１　６５４．９５ｃｍ－１）与总黄
酮的－Ｃ＝Ｏ（１　６５４．４７ｃｍ－１）峰位一致；而包合物
的ＩＲ 特征与总黄酮的ＩＲ 图谱相比，－Ｃ＝Ｏ
（１　６５４．４７ｃｍ－１）、苯环（１　５６２．７３、１　５０２．２２ｃｍ－１）
及不知名的１　３９３．８２、１　３４７．１９ｃｍ－１等峰均已消
失，次要峰（１　３０２．６０、１　２６０．２５ｃｍ－１）虽然未见消
失，但有了明显的位移，表明客分子已完全进入
ＨＰ－β－ＣＤ空腔内，说明总黄酮的主要成分原芹菜素
与 ＨＰ－β－ＣＤ发生了包合作用，可以推断 ＨＰ－β－ＣＤ
实现了总黄酮的比较理想的包合。
图２　普通针毛蕨总黄酮及其包合物的红外光谱（ＩＲ）图
ａ．普通针毛蕨总黄酮与 ＨＰ－β－ＣＤ物理混合物；ｂ．总黄酮；ｃ．包合
物；ｄ．ＨＰ－β－ＣＤ
Ｆｉｇ　２　Ｉｎｆｒａｒｅｄ　ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ（ＩＲ）ｄｉａｇｒａｍ　ｏｆ　Ｍａｃｒｏｔｈｅｂｙｐｔｅｒｉｓ　ｔｏｒ－
ｒｅｓｉａｎａｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｅｓ　ａｎｄ　ｉｔｓ　ｉｎｃｌｕｓｉｏｎ　ｃｏｍｐｏｕｎｄ
ａ．ｍｉｘｔｕｒｅ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｅｓ　ａｎｄ　ＨＰ－β－ＣＤ；ｂ．ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｅｓ；ｃ．ｉｎ－
ｃｌｕｓｉｏｎ　ｃｏｍｐｏｕｎｄ；ｄ．ＨＰ－β－ＣＤ
　　由图４可知，在测试条件：升温速率为０．０１～
·５８１·中国医院药学杂志２０１３年第３３卷第３期Ｃｈｉｎ　Ｈｏｓｐ　Ｐｈａｒｍ　Ｊ，２０１３Ｆｅｂ，Ｖｏｌ　３３，Ｎｏ．０３
５００℃·ｍｉｎ－１，升温范围为－１７０℃～＋７３０℃内，
总黄酮原料在８８．３℃时出现一吸热峰；ＨＰ－β－ＣＤ在
７９．４１℃出现吸热峰；物理混合物在８７．２８℃出现
吸热峰，表明为机械混合；而包合物的吸热峰位置发
生显著变化，冷冻干燥法制备的包合物的主要峰完
全消失，在１０５．６１℃出现吸热，表明主药被完全包
封在分子腔内。
图３　普通针毛蕨总黄酮及其包合物的差示扫描量热分析（ＤＳＣ）图
ａ．包合物；ｂ．总黄酮；ｃ．总黄酮与 ＨＰ－β－ＣＤ物理混合物；ｄ．ＨＰ－β－
ＣＤ
Ｆｉｇ　３　Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ　ｓｃａｎｎｉｎｇ　ｃａｌｏｒｉｍｅｔｒｙ（ＤＳＣ）ｄｉａｇｒａｍ　ｏｆ　Ｍａｃｒｏｔｈｅ－
ｂｙｐｔｅｒｉｓ　ｔｏｒｒｅｓｉａｎａｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｅｓ　ａｎｄ　ｉｔｓ　ｉｎｃｌｕｓｉｏｎ　ｃｏｍｐｏｕｎｄ
ａ．ｉｎｃｌｕｓｉｏｎ　ｃｏｍｐｏｕｎｄ；ｂ．ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｅｓ；ｃ．ｍｉｘｔｕｒｅ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ｆｌａ－
ｖｏｎｅｓ；ｄ．ＨＰ－β－ＣＤ
　　由图５可知，普通针毛蕨总黄酮ＸＲＤ图为晶态
成分，在１０～４０℃之间呈现诸多晶体衍射峰，而
ＨＰ－β－ＣＤ的衍射峰平滑显示２个特征峰；总黄酮与
ＨＰ－β－ＣＤ的物理混合物的衍射峰表现为总黄酮与
ＨＰ－β－ＣＤ的叠加，显示总黄酮的衍射峰少量消失，
更多的衍射峰不规则现象，说明没有完全包合，而总
黄酮与 ＨＰ－β－ＣＤ包合物的衍射峰已经没有总黄酮
特征，基本显示类似 ＨＰ－β－ＣＤ的衍射峰，上述实验
结果表明包合物的形成。
图４　普通针毛蕨总黄酮及其包合物的Ｘ－射线衍射图谱（ＸＲＤ）
ａ．包合物；ｂ．ＨＰ－β－ＣＤ；ｃ．总黄酮；ｄ．总黄酮与 ＨＰ－β－ＣＤ物理混合
物
Ｆｉｇ　４　Ｘ－ｒａｙ　ｄｉｆｆｒａｃｔｉｏｎ（ＸＲＤ）ｄｉａｇｒａｍ　ｏｆ　Ｍａｃｒｏｔｈｅｂｙｐｔｅｒｉｓ　ｔｏｒｒｅｓ－
ｉａｎａｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｅｓ　ａｎｄ　ｉｔｓ　ＨＰ－β－ＣＤ　ｍｉｘｔｕｒｅ
ａ．ｉｎｃｌｕｓｉｏｎ　ｃｏｍｐｏｕｎｄ；ｂ．ＨＰ－β－ＣＤ；ｃ．ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｅｓ；ｄ．ｍｉｘｔｕｒｅ　ｏｆ
ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｅｓ　ａｎｄ　ＨＰ－β－ＣＤ
３．２　各样品在人工胃液中不同时间内的原芹菜素
的检测结果　依据“２．１”项的对照品原芹菜素的
ＨＰＬＣ检测标准曲线方法，对照品原芹菜素、样品总
黄酮及其包合物在人工胃肠液中的检测结果见表
６、表７。表明总黄酮及其包合物在人工胃肠液中恒
温振荡后，所得的原芹菜素峰面积与阳性组比较，误
差不超过５％，说明原芹菜素在胃肠液中比较稳定，
不易破坏。
表６　各样品在人工胃液中不同时间内的原芹菜素的检测
结果（ｎ＝５）
Ｔａｂ　６　Ｒｅｓｕｌｔｓ　ｏｆ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｐｒｏｔｏａｐｉｇｅｎｏｎｅ　ｏｆ　ｖａｒｉ－
ｏｕｓ　ｓａｍｐｌｅｓ　ｉｎ　ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ　ｇａｓｔｒｉｃ　ｊｕｉｃｅ　ａｔ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｔｉｍｅｓ（ｎ＝５）
时间／ｈ
原芹菜素 总黄酮混悬剂 总黄酮包合物
２．０　 １．０　０．５　 ４．０　 ２．０　１．０　 ４．０　 ２．０　 １．０
阳性对照 ２　８２８　７０１　３８２　１　２７８　６１４　２８１　１　３７２　６２４　 ３４１
０　 ２　９０６　６５６　３６０　 １２７１　 ６２６　２８６　１　３２９　６７４　 ３３６
４　 ２　７２６　６３６　３６３　 １２７３　 ６４６　２７６　１　３３２　６９７　 ３２１
８　 ２　８３８　６４４　３５２　 １２６９　 ６５５　２５６　１　４０１　６８１　 ３１６
１２　 ２　９０５　６３７　３６１　 １１９９　 ６３７　２４９　１　３３５　６７９　 ３４９
２０　 ２　９１６　６４５　３４６　 １２４７　 ６２６　２６５　１　２９１　６０１　 ３０７
２４　 ２　８７６　６４２　３６５　 １２０８　 ６３８　２２６　１　２８３　６７６　 ３２４
ＲＳＤ／％ ４．３６　２．５１　１．６４　２．８３　２．２５　２．１６　２．４２　４．２５　３．６８
表７　各样品在人工肠液中不同时间内的原芹菜素的检测
结果（ｎ＝５）
Ｔａｂ　７　Ｒｅｓｕｌｔｓ　ｏｆ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｐｒｏｔｏａｐｉｇｅｎｏｎｅ　ｏｆ　ｖａｒｉ－
ｏｕｓ　ｓａｍｐｌｅｓ　ｉｎ　ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ　ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ　ｊｕｉｃｅ　ａｔ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｔｉｍｅｓ（ｎ＝
５）
时间／ｈ
原芹菜素
／μｇ·ｍＬ
－１
混悬剂组别
／μｇ·ｍＬ
－１
包合物组别
／μｇ·ｍＬ
－１
２．０　 １．０　０．５　 ４．０　 ２．０　１．０　 ４．０　 ２．０　 １．０
阳性对照 ２　８２８　７５１　３８２　１　２７８　６７４　２８１　１　３７２　６７４　 ３４１
０　 ２　８３６　７２６　３２７　 １２７７　 ６８４　２９６　１　３７９　６６９　 ３３３
４　 ２　８３９　７４４　３９６　 １２３７　 ６９８　２９９　１　３５５　６３５　 ３４６
８　 ２　８８５　７２７　３８６　 １２９６　 ６４８　２７４　１　３７２　６４３　 ３２８
１２　 ２　８８３　７６５　３９８　 １２６８　 ６６６　２８７　１　３４６　６８２　 ３１７
２０　 ２　８７７　７６６　３８５　 １２３４　 ６３８　２８２　１　３５７　６９８　 ３２３
２４　 ２　８３６　７４６　３９２　 １２５９　 ６７８　２８９　１　３３６　６６１　 ３４９
ＲＳＤ／％ ２．２９　３．４６　２．６１　４．０５　２．７３　２．５８　３．２６　２．７３　４．２１
３．３　总黄酮及其包合物的生物利用度　按照
“２．２．１”项下处理，依据“２．２”计算原芹菜素血药浓
度，采用ＤＡＸ　２．０软件对各组血药浓度进行二室模
型分析，权重系数为１，主要参数分析见表８。
表８　混悬剂和包合剂药动学主要参数及均值表
Ｔａｂ　８　Ｔｈｅ　ｍａｉｎ　ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ　ａｎｄ　ｍｅａｎ　ｖａｌｕｅｓ　ｏｆ　ｐｈａｒｍａｃｏ－
ｋｉｎｅｔｉｃｓ　ｏｆ　ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ　ａｎｄ　ｉｎｃｌｕｓｉｏｎ　ｃｏｍｐｏｕｎｄ
参数
混悬剂剂量组别／ｍｇ·ｋｇ－１
１００　 ２００　 ３００
参数
均值
包合剂剂量组别／ｍｇ·ｋｇ－１
１００　 ２００　 ３００
参数
均值
ｔ１／２ ２．９８３　 ４．６０１　 ４．６８９　 ４．０９６　 ６．６８８　 ６．６１１　 ７．４１５　 ６．９０５
ＡＵＣ　 １．１４６　 ２．１９８　 ３．５８７　 ２．３１０　 ５．４０７　１２．１２２　１６．８３４　 １１．４５７
Ｖ１ １６９．３１１　２５２．２９２　２７６．９０８　１９９．５０４　２８０．２０３　１３９．８９３　１５４．８５３　１９１．６４９
ＣＬ　 ７９．９３０　８４．６７４　７５．０７６　７９．８９３　３４．７９４　１５．５０５　１６．７６５　 ２２．３５５
ｔ１／２ ２．５８４　 ４．４４０　 ４．３８６　 ３．８０３　 ５．８０８　 ５．５７９　 ５．９０３　 ５．７６３
ＡＵＣ　 １．１４４　 ２．２１７　 ３．５６７　 ２．３０９　 ５．７０２　１２．５４０　１７．１００　 １１．７８１
ＣＬｚ／Ｆ　８１．２３３　８４．０６４　７５．６６４　８０．３２０　３２．８７２　１５．１００　１６．７０１　 ２１．５５７
Ｖｚ／Ｆ　 ２９９．３８７　５１０．４７８　４８１．４４９　４３０．４３８　２７４．４２６　１２１．３２０　１３９．０２１　１７８．２５６
ｔｍａｘ　 ０．８８９　 ０．９７２　 １．０２８　 ０．９６３　 ０．５８３　 ０．６６７　 ０．５８３　 ０．６６１
Ｃｍａｘ　 ０．３０６　 ０．４６９　 ０．７３２　 ０．５０２　 ０．５８２　 １．３２３　 １．７１０　 １．２０５
·６８１· 中国医院药学杂志２０１３年第３３卷第３期Ｃｈｉｎ　Ｈｏｓｐ　Ｐｈａｒｍ　Ｊ，２０１３Ｆｅｂ，Ｖｏｌ　３３，Ｎｏ．０３
　　由表８的主要参数结果可知，混悬剂低、中、高
剂量组的半衰期均值为４．０９１ｈ，包合剂低、中、高
剂量组的半衰期均值为６．９０５ｈ。说明包合剂延长
了半衰期，统计矩法显示包合剂的达峰时间变短，峰
浓度有所提高。而且本试验中经混悬剂与包合剂灌
胃给药后，在大鼠体内均表现出明显的线性动力学
特征，ＡＵＣ与剂量成正比、消除半衰期与剂量无关，
动力学过程基本一致；但总黄酮经包合处理后消除
半衰期相对延长，ＡＵＣ相对加大，Ｖ相对变小，说明
包合处理可提高总黄酮口服吸收的生物利用度，延
长体内作用时间，增强疗效。
４　讨论
采用冷冻干燥法制备了总黄酮－ＨＰ－β－ＣＤ包合
物，正交法优化了制备条件，但正交试验的水平数太
少，无法全面了解包合过程的影响。因本次试验用
总黄酮含有多种成分，而我们仅以确定抗肿瘤活性
的原芹菜素为检测指标，虽然总黄酮包合物载药量
和生物利用度明显提高。但是还有很多问题需要解
释，比如 ＨＰ－β－ＣＤ除了包合原芹菜素，还包合了总
黄酮中哪些成分？哪些成分没有包合？这是中药基
础研究面临的重大难题之一。
因为总黄酮不容易被胃肠吸收，也不能制成注
射剂，所以为了提高生物利用度我们采用了包合物
制剂办法，实验发现包合物在胃肠液中稳定性良好。
因为没有参比试剂，我们采用了相等剂量的总黄酮
及其包合物的生物利用度比较。动物灌胃血液吸收
动力学实验结果表明，包合物的生物利用度显著提
高。
参考文献：
［１］　定恒山．中国药用孢子植物［Ｍ］．上海：上海科学技术出版
社，１９８２：２５６．
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ｔｈｅｓｉｓ　ｏｆ　ｐｒｏｔｏａｐｉｇｅｎｏｎｅ　ａｎｄ　ｉｔｓ　ａｎａｌｏｇｕｅｓ　ａｓ　ｐｏｔｅｎｔ　ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ
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［收稿日期］２０１２－０５－１４
［基金项目］北京大学人民医院研究与发展基金资助课题（编号：ＲＤＢ－２０１０－２８）　［作者简介］刘一，女，硕士，主管药师，研究方向：临床药理学
及药物分析学，电话：０１０－８８３２５９８９，Ｅ－ｍａｉｌ：ｌｙｉ１２６７＠１２６．ｃｏｍ　［通讯作者］赵立波，男，博士，副主任药师，研究方向：临床药理学及药物分
析学，电话：０１０－８８３２５７５４，Ｅ－ｍａｉｌ：ｌｉｂｏ．ｚｈａｏ＠１６３．ｃｏｍ
液－质联用测定人血浆中己烯雌酚浓度的不确定度分析
刘一１，杨静１，李娜２，马丽萍２，赵立波１，荆珊３，方翼１，冯婉玉１　（１．北京大学人民医院药剂科，北京１０００４４；２．北京
大学人民医院中心实验室，北京１０００４４；３．北京大学人民医院心内科，北京１０００４４）
［摘要］　目的：研究高效液相色谱－串联质谱法（ＨＰＬＣ－ＭＳ／ＭＳ）测定人血浆中己烯雌酚浓度的不确定度评定方法。方法：对
ＨＰＬＣ－ＭＳ／ＭＳ法测定血浆中己烯雌酚浓度的全过程进行分析，确定不确定度来源，最后根据各分量计算出合成不确定度并
进行了扩展。结果：置信概率为９５％时，血浆低（０．２０ｎｇ·ｍＬ－１）、中（１．９６ｎｇ·ｍＬ－１）、高（５０．４１ｎｇ·ｍＬ－１）质量浓度己烯雌酚
的扩展不确定度分别为０．１６、０．１８、２．４８ｎｇ·ｍＬ－１。结论：本法适用于评价 ＨＰＬＣ－ＭＳ／ＭＳ法测定血浆中己烯雌酚浓度的不
确定度研究，对于血药浓度的测定具有重要参考意义。
［关键词］　己烯雌酚；ＨＰＬＣ－ＭＳ／ＭＳ；血浆；不确定度
［中图分类号］Ｒ９６９　　［文献标识码］Ａ　　［文章编号］１００１－５２１３（２０１３）０３－０１８７－０６
Ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｕｎｃｅｒｔａｉｎｔｙ　ｏｆ　ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ　ｆｏｒ　ｄｉｅｔｈｙｌｓｔｉｌｂｅｓｔｒｏｌ　ｉｎ　ｈｕｍａｎ　ｐｌａｓｍａ　ｂｙ　ＨＰＬＣ－
ＭＳ／ＭＳ
·７８１·中国医院药学杂志２０１３年第３３卷第３期Ｃｈｉｎ　Ｈｏｓｐ　Ｐｈａｒｍ　Ｊ，２０１３Ｆｅｂ，Ｖｏｌ　３３，Ｎｏ．０３