全 文 ：162 食品与药品 Food and Drug 2012年第 14卷第05期
[2] Burgos F J, Salva M, Villegas V, et al. Analysis of the activation
process of porcine pro-carboxypeptidase B and determination of the
sequence of its activation segment[J]. Biochemistry, 1991,30:4082–
4089.
[3] 李素霞，张晓彦，张映新，等.羧肽酶B研究进展[J].药物生物
技术，2006，13（4）：302-305.
[4] Jonasson P, Nilsson J, Samuelsson E, et al. Single-step trypsin
cleavage of a fusion protein to obtain human insulin and its C
peptide[J]. Eur J Biochem,1996,236:656–661.
[5] Folk J E, Gladner J A. Carboxypeptidase B:I.Purification
of the zymogen and specificity of the enzyme[J]. J Biol
Chem,1958,231:379–391.
[6] Li S X, Zhang Y J, Tian L P, et al. Cloning and expression of a new
procarboxypeptidase B gene in Escherichia coli and purification
of recombination carboxypeptidase B[J]. Protein Pept Lett, 2003,
10(6): 581-590.
[7] Folk J E, Piez K A, Carroll W R, et al. Carboxypeptidase B:IV.
purifi cation and characterization of the porcine enzyme[J] . J Biol
Chem , 1960 ,235(2) :2272-2277.
[8] Bradford M．A rapid and sensitive method for the quantifi cation
of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-
dye binding [J]．Anal Biochem,1976,72(2): 248-254.
山香圆叶化学成分研究
孙敬勇1，孙 洁2，武海艳1，刘 珂3
（1. 山东省医学科学院药物研究所 山东省罕少见病重点实验室，山东 济南 250062；2. 山东省济南市天桥人
民医院，山东 济南 250031；3. 烟台大学药学院，山东 烟台 264005）
摘 要：目的 研究山香圆叶的化学成分。方法 采用色谱技术进行分离、纯化，通过理化常数和波谱分析鉴定化合物结
构。结果 从山香圆叶中分离出10个化合物，分别为芹菜素(1)，芹菜素-7-O-β-D-葡糖苷(2)，芹菜素-7-新橙皮糖苷(3)，芹
菜素-7-(2′-α-L-鼠李糖基)芸香糖苷(4)，对羟基桂皮酸(5)，没食子酸乙酯(6)，没食子酸(7)，eucomic acid(8)，β-谷甾醇
(9)，胡萝卜苷(10)。结论 化合物4~6，8，9为首次从该属植物中分离得到。
关键词：山香圆叶；化学成分；结构鉴定
中图分类号：S576.2 文献标识码：A 文章编号：1672-979X（2012）05-0162-04
收稿日期：2011-10-15
作者简介：孙敬勇( 1970-)，男，博士，副研究员，主要从事天然药物研究，Tel: 0531-82919963
E-mail: sunjingyong@tom.com
Studies on the Chemical Constituents of Turpiniae Folium
SUN Jing-yong1 , SUN Jie2, WU Hai-yan1, LIU Ke3
(1.Key Laboratory of Rare and Uncommon Diseases, Institute of Materia Medica, Shandong Academy of Medical
Sciences, Jinan 250062, China; 2. Jinan Tianqiao Hospital, Jinan 250031, China; 3. School of Pharmacy, Yantai
University, Yantai 264005, China)
Abstract: Objective To study the chemical constituents of Turpiniae Folium. Methods The compounds were
isolated and purifi ed by column chromatography and their structures were identifi ed on the basis of physicochemical
properties and spectral analyses. Results Ten compounds were isolated and their structures were identifi ed as apigenin(
1), apigenin 7-O-β-D-glucoside( 2), apigenin 7-neohesperidoside( 3), apigenin 7-(2′-rhamnosyl) rotinoside( 4),
p-hydroxycinnamic acid( 5), galic acid ethyl ester( 6), galic acid( 7), eucomic acid( 8), β-sitosterol( 9), daucostero(
10). Conclusion The compounds 4~6, 8, 9 were isolated and identifi ed from this genus for the fi rst time.
Key Words: Turpiniae Folium; chemical constituents; structure identifi cation
山香圆(Turpinia arguta Seem)为省沽油科山香圆
属植物，性味辛、温，盛产于江西省赣南地区。民间
用鲜叶水煎内服治疗扁桃体炎、咽喉炎，预防感冒，
或鲜叶捣烂外敷治疗疮疥，均有显著疗效[1]。单味药
材制剂山香圆含片具有清热解毒、利咽消肿的功效，
用于治疗咽喉炎、扁桃体炎[2]。该属作为药用的主要
有山香圆( Turpinia arguta Seem.)等。
山香圆叶（Turpiniae Folium）作为中国药典2010
食品与药品 Food and Drug 2012年第 14卷第05期 163
年版新收载的药材，目前对其研究不多。为深入研究
山香圆叶药理活性的物质基础，本实验系统研究了
山香圆叶的化学成分，分离并鉴定了10个化合物，
分别为芹菜素(apigenin, 1)，芹菜素-7-O-β-D-葡糖苷
(apigenin-7-O-β-D-glucoside, 2)，芹菜素-7-新橙皮糖
苷(apigenin-7-neohesperidoside, 3)，芹菜素-7-(2′-
α-L-鼠李糖基)芸香糖苷(apigenin-7-(2′-rhamnosyl)
rotinoside, 4)，对羟基桂皮酸(p-hydroxycinnamic acid,
5)，没食子酸乙酯(galic acid ethyl ester, 6)，没食子酸
(galic acid, 7)，eucomic acid (8)，β-谷甾醇(β-sitosterol,
9)，胡萝卜苷( daucosterol, 10)，其中化合物4~6，8，
9为首次从该属中分离得到。
1 仪器与材料
XT-4数字显示显微熔点测定仪(温度计未校正)；
Perkin-elmer 683 红外光谱仪( KBr压片)；Bruker AV-
400型核磁共振仪( TMS为内标)；色谱用硅胶（青岛
海洋化工）；所用试剂均为分析纯；Sephadex LH-20
（北京金欧亚分装）。
山香圆叶药材为省沽油科(Staphyleaceae)山香圆
属植物山香圆(Turpinia arguta Seem)的叶，购自安徽
亳州，由山东省中医药研究院孙立立研究员鉴定。
2 提取与分离
山香圆叶20.0 kg粉碎，用乙醇渗漉提取10 d，浓
缩得流浸膏1.1 kg。取流浸膏置于分液漏斗，用石油
醚、乙醚、氯仿、醋酸乙酯和正丁醇提取，分别得
到石油醚提取物(20 g)、乙醚提取物( 250 g)、氯仿提
取物(140 g)、醋酸乙酯提取物(120 g)和正丁醇提取
物(290 g)。氯仿和醋酸乙酯部位经反复硅胶柱色谱
（环己烷-丙酮，环己烷-丙酮-甲醇，氯仿-甲醇）、
Sephedax-LH 20凝胶柱色谱(氯仿-甲醇、甲醇)和制备
薄层色谱进行分离纯化，得到化合物1～10。
3 结构鉴定
化合物1：淡黄色粉末状结晶，mp：346~347 ℃
（丙酮）。Mg-HCl反应显红色。1H-NMR( DMSO-
d6，400MHz) δ：6.78 ( H-3，1H，s)，6.20（H-6，
1H，d，J =2.0Hz)，6.49 ( H-8，1H，d，J =2.0Hz)，
6.94 ( H-3，5，2H，d，J=8.8Hz)，7.93 ( H-2，6，
2H，d，J=8.8Hz)，12.98( 5-OH，1H，s)，10.73 (
7-OH，1H，br s)，10.51 ( C4-OH，1H，br s)。13C-
NMR( DMSO-d6，100MHz) δ：163.7( C-2)，102.8(
C-3)，181.7( C-4)，161.4( C-5)，98.8( C-6)，164.1(
C-7)，93.9( C-8)，157.4( C-9)，103.7( C-10)，121.2(
C-1)，128.4( C-2，6)，115.9( C-3，5)，161.1(
C-4)。以上波谱数据与文献报道[3]基本一致，故鉴定
为5,7,4- 三羟基黄酮(芹菜素, apigenin)。
化合物2：黄色粉末，mp：240~242 ℃（无水乙
醇）。与Mg-HCl反应显红色；与Molish试剂反应呈
阳性，推测化合物2为黄酮苷。1H-NMR( DMSO-d6，
400MHz) δ：6.88( H-3，1H，s)，6.45( H-6，1H，
d，J =2.1Hz)，6.83( H-8，1H，d，J =2.1Hz)，6.94(
H-3，5，2H，d，J=8.8Hz)，7.96( H-2，6，2H，
d，J=8.8Hz)，12.98( 5-OH，1H，s)，10.43( 4-OH，
1H，br s)，5.08( H-1，1H，d，J=7.4Hz)。13C-NMR(
DMSO-d6，100MHz) δ：164.2( C-2)，103.1( C-3)，
182.0( C-4)，161.3( C-5)，99.5( C-6)，162.9( C-7)，
94.8( C-8)，156.9( C-9)，105.3( C-10)，121.0( C-1)，
128.6( C-2, 6)，116.0( C-3，5)，161.1( C-4)，99.9(
C-1)，73.1( C-2)，77.2( C-3)，69.5( C-4)，76.4(
C-5)，60.6( C-6)。以上波谱数据与文献报道[4]基本
一致，故鉴定为芹菜素-7-O-β-D-葡糖苷(apigenin-7-O-
β-glucoside)。
化合物3：淡黄色粉末，mp：215~217 ℃（无水
乙醇）。与Mg-HCl反应显红色；与Molish试剂反应
呈阳性，推测化合物3为黄酮苷。1H-NMR( DMSO-
d6，400MHz) δ：6.87( H-3，1H，s)，6.37( H-6，
1H，d，J =2.0Hz)，6.80( H-8，1H，d，J =2.1Hz)，
6.95( H-3，5，2H，d，J=8.8Hz)，7.94( H-2，6，
2H，d，J=8.8Hz), 12.98( 5-OH，1H, s)，10.43( 4-
OH，1H，br s)，5.24( H-1，1H，d，J=7.2Hz)，
5.15( H-1，1H, s)。13C-NMR( DMSO-d6，100MHz)
δ：164.2( C-2)，103.2( C-3)，181.9( C-4)，161.3(
C-5)，99.3( C-6)，162.5( C-7)，94.5( C-8)，156.9(
C-9)，105.4( C-10)，121.0( C-1)，128.5( C-2, 6)，
116.0( C-3, 5)，161.1( C-4)，97.8( C-1)，77.2(
C-2)，77.0( C-3)，69.6( C-4)，76.3( C-5)，60.5(
C-6)，100.4( C-1)，70.4( C-2)，70.5( C-3)，
71.9( C-4)，68.3( C-5)，18.0( C-6)。13C-NMR(
100MHz，DMSO-d6) δ：97.8( C-1)，77.2( C-2)，
77.0( C-3)，69.7( C-4)，76.3( C-5)，60.5( C-6)，
100.4( C-1 )，70.4( C-2 )，70.5( C-3 )，71.9(
164 食品与药品 Food and Drug 2012年第 14卷第05期
C-4)，68.3( C-5)，18.0( C-6)。以上波谱数据与文
献报道[5]基本一致，故鉴定为芹菜素-7-新橙皮糖苷(
apigenin-7-neohesperidoside)。
化合物4：黄色结晶性粉末，mp：189~191℃
（无水乙醇）。Mg-HCl反应显红色；Molish试剂反
应呈阳性，推测化合物4为黄酮苷。1H-NMR( DMSO-
d6，400MHz) δ：6.86( H-3，1H，s)，6.39( H-6，
1H，d，J =2.0Hz)，6.71( H-8，1H，d，J =2.0Hz)，
6.97( H-3，5，2H，d，J=8.8Hz)，7.93( H-2，6，
2H，d，J=8.8Hz)，12.98( 5-OH，1H，s)，5.24(
H-1，1H，d，J=7.3Hz)，5.13( H-1，1H，s)，4.55(
H-1，1H，d，J=0.8Hz)。13C-NMR(DMSO-d6，
100MHz) δ：164.4( C-2)，103.2( C-3)，181.9( C-4)，
161.4( C-5)，99.3( C-6)，162.4( C-7)，94.4( C-8)，
156.9( C-9)，105.5( C-10)，120.9( C-1)，128.5( C-2,
6)，116.1( C-3, 5)，161.2( C-4)，97.8( C-1)，77.0(
C-2)，76.3( C-3)，69.7( C-4)，75.4( C-5)，66.0(
C-6)，100.5( C-1)，70.3( C-2)，70.5( C-3)，71.9(
C-4)，68.3( C-5)，18.0( C-6)，100.5( C-1)，
70.3( C-2)，70.7( C-3)，72.0( C-4)，68.3(
C-5)，17.7( C-6)。以上波谱数据与文献报道[6]基
本一致，故鉴定为芹菜素-7-(2′-α-L-鼠李糖基)芸香
糖苷( apigenin-7-(2′-rhamnosyl) rotinoside)。
化合物5：土褐色粉末；1H NMR( CD3OD，400
MHz) δ：6.90( 2H，d，J=8.6 Hz)，7.54( 2H，d，
J=8.6Hz)，6.28( 1H，d，J=16.0 Hz)，7.60( 1H，d，
J=18.0 Hz)。13C-NMR ( CD3OD，100 MHz) δ：127.3(
C-1)，131.1( C-2, 6)，116.8( C-3, 5)，161.1( C-4)，
146.7 (C-7)，115.6( C-8)，171.0( C-9)。以上波谱数据
与文献报道[7]的基本一致，故鉴定为对羟基桂皮酸。
化合物6：土褐色粉末；1H NMR( CD3OD，400
MHz) δ：7.05( 2H，s)，1.34( 3H，t，J=7.0 Hz)，
4.27( 1H，q，J=7.0 Hz)。13C NMR( CD3OD，100
MHz) δ：121.8( C-1)，110.0( C-2, 6)，146.5( C-3, 5)，
139.7( C-4)，168.6( C-7)，61.7( OCH2)，14.6( CH3)。
以上波谱数据与文献报道[8]的基本一致，故鉴定为没
食子酸乙酯。
化合物7：土褐色粉末；1H NMR( DMSO-d6，400
MHz) δ：6.93( 2H，s)，12.24( 1H，s)，9.19( 2H，
s)，8.83( 1H，s)。13C-NMR ( DMSO-d6，100 MHz)
δ：120.5( C-1)，108.7( C-2, 6)，145.4( C-3, 5)，138.0(
C-4)，167.4( C-7)。以上波谱数据与文献报道[8-9]基本
一致，故鉴定为没食子酸。
化合物8：白色粉末(乙醇)，mp：171~173 ℃。
1H NMR( CD3OD，400 MHz) δ：6.68( 2H，d，
J=8.5 Hz)，7.06( 2H，d，J=8.5Hz)为四个邻位偶合
(AX系统)的芳氢信号；2.95( 1H，d，J=16.4 Hz)，
2.56( 1H，d，J=16.4 Hz)和2.94( 1H，d，J=13.3 Hz),
2.86( 1H，d，J=13.3 Hz)为两组AX系统偶合的氢信
号。13C-NMR( CD3OD，100 MHz) δ: 177.7和δ 174.2
为两个羧酸的羰基碳信号；δ157.4为一个连氧的芳
香碳信号；δ132.6和δ115.8为两组磁等同的芳香叔
碳信号，δ127.6为一个芳香季碳信号，δ76.8为一个
连氧的碳信号，δ45.4和δ43.6为两个脂肪碳信号。
综合上述数据，确定该化合物为文献报道 [10](R)2-(
4-hydroxybenzyl)malic acid，即eucomic acid。
化合物9：白色针状结晶（醋酸乙酯），mp：
136~138℃；Liebermann-Burchard反应呈阳性，TCL
用体积分数为10 %的硫酸乙醇溶液显色为紫红色，经
与β-sitosterol标准品在3种展开剂系统条件下分别共薄
层色谱，两者的Rf值完全相同，且混合熔点不下降，
故鉴定该化合物为β-sitosterol。
化合物10：白色粉末( 80 %E tOH)，mp>300℃，
Liebermann-Burchard反应呈阳性，Molish反应呈阳
性，TCL用体积分数为10%的硫酸乙醇溶液显色为紫
红色，经与胡萝卜苷daucosterol标准品在3种展开剂
系统条件下分别共薄层色谱，Rf值一致，且混合熔点
不下降，故鉴定化合物为daucosterol。
参考文献
[1] 张磊，李俊，余世春，等．山香圆总黄酮对免疫功能低下小鼠
免疫功能的影响[J]．安徽医科大学学报，2006，41( 5)：539-
543．
[2] 詹怡飞，张建军，毛友昌，等．山香圆含片的抗菌作用的试验
研究[J]．江西中医学院学报，2005，17( 2)：55．
[3] 马卡姆．黄酮类化合物结构鉴定技术[M]．北京：科学出版社
．1990：98．
[4] 肖崇厚，杨松松，洪筱坤．中药化学[M]．上海：科学技术出
版社．1996：309．
[5] 唐人九．人字草黄酮类化学成分研究[J]．华西药学杂志，
1996，11(1)：5-7．
[6] Pieroni A, Pachaly P. Isolation and structure elucidation of
食品与药品 Food and Drug 2012年第 14卷第05期 165
ligustroflavone, a new apigenin triglycoside from the leaves of
Ligustrum vulgare L[J]. Pharmazie，2000, 55( 1): 78-80.
[7] 魏健，杨小生，朱海燕，等．短尾越橘化学成分研究[J]．广
西植物，2008，28( 4)：558- 560．
[8] 尚小雅，李帅，王映红，等．红绒毛羊蹄甲的化学成分研究
[J]．中国中药杂志，2006，31( 23)：1953-1955．
[9] 陈金瑞，邱林刚，连敏，等．长鞭红景天化学成分研究[J]．
植物学报，1991，33(1)：61．
[10] Harris T M, Hay J V. Isolation of 2-(4-hydroxybenzyl) malic acid
from Petalostemon gattingeri [J]. J. Org. Chem. 1973, 38( 26):
4457-4459.
收稿日期：2011-10-31
基金项目：国家“重大新药创制”科技重大专项“山东省重大新药创制中心”2009ZX09301-013
作者简介：盛华刚（1979-），男，讲师，博士，从事中药新制剂的研究，Tel:(0531)89628590 shenghuagang@sina.com
正交试验法优选仙鹤草的提取工艺
盛华刚
（山东中医药大学药学院，山东 济南 250355 ）
摘 要：目的 优选仙鹤草的提取工艺。方法 采用正交试验设计，以仙鹤草中总黄酮和总多酚含量为指标优选其提取工
艺。结果 优选提取工艺条件为仙鹤草加8倍量50 %乙醇，回流提取3次，每次1 h。结论 确定的工艺合理，有效成分提出
率高。
关键词：仙鹤草；提取工艺；总黄酮；总多酚
中图分类号：R576.2 文献标识码：A 文章编号：1672-979X（2012）05-0165-04
Optimization on Extraction Technology of Agrimoniae Herba by Orthogonal Experiment
SHENG Hua-gang
(School of Pharmacy, Shandong University of Traditional Chinese Medicine, Jinan 250355, China)
Abstract: Objective To optimize the extraction technology of Agrimoniae Herba. Methods Using the contents of
total fl avonoids, total polyphenol as the indexes, the extraction technology was investigated by the orthogonal design.
Results The best extraction technology was as follows: adding 8-fold amount of 50% alcohol, extracting 3 time, 1 h
each time. Conclusion The optimum extraction technology can be rational and result in high extraction rate of active
constituents.
Key Words: Agrimoniae Herba; extraction technology; total fl avonoids; total polyphenol
仙鹤草（Agrimoniae Herba）为蔷薇科植物龙牙
草Agrimonia pilosa Ledeb．的干燥地上部分，具有收
敛止血，截疟，止痢，解毒，补虚之功效。多用于治
疗咯血，吐血，崩漏下血，疟疾，血痢，痈肿疮毒，
阴痒带下，脱力劳伤等[1]。仙鹤草对多种肿瘤都有较
好的疗效，在抑制瘤体增殖，增强放化疗敏感性，减
轻放化疗毒副作用，阻止癌前病变，及提高机体免疫
功能等方面效果尤为明显 [2]，仙鹤草提取物还具有明
显的降血糖[3]、抗菌[4]、抗氧化[5]等作用。仙鹤草主要
含有鞣酸类、间苯三酚缩合体、黄酮类、有机酸、内
酯和香豆素类成分[6-7]。现以仙鹤草中的活性成分总
黄酮和总多酚含量为指标研究仙鹤草的提取工艺。
1 仪器与材料
1.1 仪器
UV－2201型分光光度计（日本岛津）；AE240S
电子天平（瑞士梅特勒）；KQ-250E型医用超声波清
洗机（昆山超声仪器）；501型超级恒温水浴器（上
海实验仪器厂）。
1.2 药材与试药
仙鹤草购于济南建联中药店，经山东中医药大
学周凤琴教授鉴定。固蓝B盐（日本进口）；芦丁
对照品（中国药品生物制品检定所，批号：0080-