全 文 ：第 29卷 ,第 2期 光　谱　实　验　室 Vol . 2 9 , No . 2
2 0 1 2年 3月 Chinese Journal of Spectroscopy Laboratory March , 2 0 1 2
RP-HPLC测定八角枫药材中的水杨苷①
① 安徽省教育厅自然科学研究项目 ( KJ2011B182) ;宿州学院特色种植业苗种生产工程技术研究中心开放课题 ( 2011YKF19) ;宿
州学院产学研合作项目 ( 2011cx y01) ;安徽省高等学校省级忧秀青年人才基金 ( 2012SQRL200)
② 联系人 ,手机: ( 0) 18955786366;电话: ( 0557) 2871067; E-mail: szxydh@ 163. com
作者简介:段红 ( 1981— ) ,女 ,安徽省宿州市人 ,讲师 ,硕士 ,主要从事生化分离技术与质量控制研究工作。
收稿日期: 2011-04-02;接受日期: 2011-08-24
段 红②　翟科峰　高贵珍a　曹稳根a　薛国辉a
(宿州学院特色种植业苗种生产工程技术研究中心　安徽省宿州市汴河中路 71号　 234000)
a (宿州学院化学与生命科学学院　安徽省宿州市汴河中路 71号　 234000)
摘　要　建立反相高效液相色谱法测定八角枫药材中水杨苷含量。 采用 Shim-pack vp-ODS C18
( 150mm× 4. 6m m, 5μm) ,柱温为 25℃ ;以乙腈 -水 ( 7∶ 93, V /V )为流动相 ,流速为 1. 0m L· min- 1;检测波
长为 269nm。 水杨苷在 16. 02— 80. 10μg· mL- 1范围内线性关系良好 ,线性方程为 y= 5070. 1x+ 4069. 1,
r= 0. 9994,平均回收率为 99. 53% , RSD= 1. 19% 。该方法快速简单 ,可用于八角枫药材的质量控制。
关键词　八角枫 ;水杨苷 ;反相高效液相色谱法
中图分类号: O657. 7+ 2　　　文献标识码: B　　　文章编号: 1004-8138( 2012) 02-1065-04
1　引言
中药八角枫来源于八角枫科八角枫 [Alangium Chinese ( Lour. ) Harms ] ,也有文献 [1 ]报道同科
植物瓜木 ( Alangium platanifolium )的根也作八角枫用。八角枫是一种落叶灌木或乔木 ,在珠江流域
及长江流域各省区均有分布 ,东南亚及非洲东部也有分布。 具有祛风除湿、舒筋活络、散瘀止痛功
效 ,主治风湿瘫痪 [2 ]。研究发现其化学成分有生物碱、氨基酸、有机酸及其苷类 [3 ]等。其中以水杨苷
为代表的苷类化合物为其主要药用成分 ,具有解热、镇痛等功效 [4 ] ,用于退热和治疗关节炎等疾
病 [5 ] ,药用价值较高。同时水杨苷类成分还可用作香料和添加剂等。为此 ,近年来天然水杨苷成分的
提取及其应用越来越受到人们关注 ,国内外的需求量也越来越大。但目前尚未见文献报道八角枫药
材中水杨苷的测定方法 ,本实验室采用 HPLC对其含量进行测定 ,操作简便、快速、重复性好 ,为八
角枫药材开发和利用奠定了重要基础。
2　实验部分
2. 1　仪器、试剂与材料
LC-20AT型高效液相色谱仪 (日本岛津公司 ) ; U-3310型研究级紫外可见光谱仪 (日本 Hitachi
公司 ) ; Shim-pack vp-ODS型 C18色谱柱 (日本岛津公司 ) ; BP211 D型电子天平 (德国赛多利斯公
司 ) ; Millipore simplicity-185型超纯水器 (美国密理博公司 ) ; KQ5200 DB型数控超声波清洗器 (昆
山超声仪器有限公司 )。
水杨苷对照品 (含量 99% ,美国 Sigma公司 ) ;甲醇、乙腈为色谱纯 (美国 Fisher公司 ) ;其他试
剂均为分析纯。实验用水为超纯水。
八角枫药材采自黄山 ,由安徽师范大学周守标教授鉴定为八角枫。
2. 2　样品溶液制备
供试品溶液:准确称取八角枫粉末 12. 0032g ,置于 250mL平底烧瓶中 ,准确加入 100mL水 ,称
定质量 ,回流提取 1. 5h,放冷 ,称定质量 ,用水补足减失的质量 ,摇匀 ,过滤 ,取续滤液 ,过 0. 45μm滤
膜 ,即得。
对照品溶液: 准确称取对照品水杨苷 0. 0267g置于烧杯中 ,加甲醇溶解 ,并定量转移至 10mL
容量瓶中 ,用甲醇定容后摇匀 ,制成母液。 准确移取 1. 5mL母液于 50mL容量瓶中 ,甲醇定容并制
成浓度为 80. 10μg· mL- 1的对照品储备液 ,摇匀备用。
2. 3　色谱条件
色谱柱: Shim-pack vp-ODS型 C18 ( 150mm× 4. 6mm, 5μm) ,流动相:乙腈 -水 ( 7∶ 93, V /V ) ,检
测波长 269nm,流速: 1. 0mL· min- 1 ,柱温: 25℃ ,进样量: 20μL。在此条件下 ,样品中水杨苷与其对
照品峰的保留时间基本一致 ,且分离效果良好 ,无其他干扰 ,见图 1。
图 1　 269nm处对照品水杨苷 (A)和样品 (B )的色谱图
1—— 水杨苷。
3　结果与讨论
3. 1　线性范围与最低检出浓度
分别准确吸取浓度为 80. 10μg· mL- 1水杨苷对照品储备液 2、 4、 6、 8、 10m L于 10mL容量瓶
中 ,加入甲醇定容 ,制成浓度分别为 16. 02、 32. 04、 48. 06、 64. 08、 80. 10μg· mL- 1的溶液 ,即得水杨
苷系列对照品溶液。准确吸取该系列对照品溶液 20μL,分别注入高效液相色谱仪中 ,以对照品浓度
x (μg· mL- 1 )为横坐标 ,峰面积 y为纵坐标 ,得到水杨苷的回归方程为 y= 5 070. 1x+ 4 069. 1,
r= 0. 9994。结果表明 ,水杨苷浓度在 16. 02— 80. 10μg· mL- 1范围内呈良好的线性关系。 同时以信
噪比 ( S /N )为 10时对应的质量浓度换算成在样品中的含量确定方法的最低检出浓度为 4ng· g- 1。
3. 2　精密度实验
将 “ 3. 1节”中水杨苷对照品溶液 (浓度为 32. 04μg· mL- 1 )连续进样 5次 ,每次进样量为
20μL,测定峰面积 ,结果水杨苷峰面积的 RSD值为 1. 4% (n= 5) ,表明仪器精密度良好。
3. 3　稳定性实验
按“ 2. 2节”方法制备供试品溶液 ,分别在 0、 2、 6、 8、 12h准确吸取该溶液 20μL,进样测定并计
算浓度 ,结果供试品溶液中水杨苷浓度的 RSD为 0. 93% (n= 5) ,说明供试品溶液在 12h内基本稳
定。
1066 光谱实验室 第 29卷
3. 4　重复性实验
按“ 2. 2节”方法制备供试品溶液 5份 ,进样测定并计算浓度。结果八角枫中水杨苷含量的平均
值为 0. 191mg· g- 1 , RSD值为 1. 2%。 表明该方法重复性良好。
3. 5　加标回收实验
准确称取已测知含量的八角枫样品 5份 ,分别准确加入浓度为 80. 10μg· mL- 1的水杨苷对照
品溶液 3mL,按“ 2. 2节”方法制备供试品溶液 ,进样 20μL,进行测定 ,结果见表 1,水杨苷的回收率
为 99. 53% ( RSD= 1. 19% )。
表 1　回收率试验结果 (n= 5)
取样量
( g )
样品含量
( mg)
加入量
( mg)
测得量
(mg )
回收率
(% )
平均回收率
(% )
RSD
(% )
6. 0002 0. 5100 0. 2403 0. 7528 101. 04
5. 9995 0. 5100 0. 2403 0. 7488 99. 38
6. 0009 0. 5101 0. 2403 0. 7454 97. 92 99. 53 1. 19
6. 0010 0. 5101 0. 2403 0. 7481 99. 04
5. 9992 0. 5099 0. 2403 0. 7508 100. 25
3. 6　样品含量测定
将各八角枫样品分别按“ 2. 2节”方法制备供试品溶液后进样分析 ,记录水杨苷的峰面积 ,代入
回归方程 ,计算样品的含量 ,结果见表 2,八角枫各部位水杨苷的含量并不相同 ,以茎中含量最高。
表 2　八角枫样品中水杨苷含量测定结果 ( mg· g- 1 ,n= 3)
样品编号 部位 水杨苷
1 根 0. 082
2 茎 0. 229
3 皮 0. 071
4 根、茎、皮混合物 0. 190
　　注:根、茎、皮混合物是全株混合粉碎的产物。
3. 7　讨论
取水杨苷对照品溶液 ,在 190— 700nm范围内经紫外仪扫描 ,最大吸收波长为 269nm,故选择
269nm作为检测波长。
文献 [6]报道使用乙腈∶水 ( 5∶ 95, V /V )时可以较好分离水杨苷 ,为此本文尝试乙腈∶水
( 5∶ 95、 7∶ 93、 8∶ 92,等 ) ,乙腈∶ 0. 025%磷酸水 ( 7∶ 93, V /V )作为流动相 ,发现乙腈∶水= 7∶ 93
时分离效果良好 ,分析时间较短。比较简单、快捷和方便。
文献 [5 ]报道可采用超声提取水杨苷 ,于是考察 3种提取溶剂:水、甲醇和 50%乙醇 , 3种提取
溶剂的结果均为峰面积较小 ,峰形不好 ,分离效果不好。 因此尝试采用回流提取的方法 ,比较水和
50%乙醇提 ,结果水提取峰面积较大 ,峰形较锐 ,分离效果较好。于是本实验采取水回流提取法处理
八角枫样品。
研究中发现水杨苷对照品甲醇溶液放置一个月后 ,其峰形微变宽 ,可能是由于水杨苷异构化所
致 ,因此建议溶液应尽早检测与使用 ,最好固体保存。
4　结论
本文采用水回流提取方法将八角枫药用有效成分水杨苷提取出来 ,并对其不同部位水杨苷的
含量进行测定 ,结果表明 ,不同部位八角枫药材中水杨苷的含量存在一定的差异 ,其中茎部位含量
最高 ,皮中含量最低。 该方法灵敏、准确可靠 ,可以作为八角枫中水杨苷含量测定的方法。
1067第 2期 段红等: RP-HPLC测定八角枫药材中的水杨苷
参考文献
[1 ]江苏新医学院 .中药大辞典 [M ] .上海:科学技术出版社 , 1977. 24.
[2 ]蒋媛媛 ,伍卫红 ,彭荣珍等 .中药八角枫生药学的初步研究 [ J] .广东药学 , 2004, 14( 5): 8— 10.
[3 ]苏爱诚 .八角枫临床应用简述 [ J] .中国民族医药杂志 , 2004, ( S1): 160— 161.
[4 ] Akao T, Yoshino T, Kobashi K et al . Evaluation of Salicin as an Antipy retic Prod rug that does not Cause Gast ric Injury [ J ] .
Plantamed , 2002, 68( 8): 714— 718.
[5 ]赵厚民 ,徐慧 ,汤伟 .反相高效液相色谱法测定柳枝皮提取物中水杨苷的含量 [ J] .中国野生植物资源 , 2005, 24( 2): 40— 58.
[6 ]惠玉虎 ,王让成 . RP-HPLC法测定白柳皮提取物中水杨苷的含量 [ J] .中草药 , 2004, 35( 5): 524— 525.
Determination of Sal icin in Alangium Chinese( Lour. ) Harms
Medicinal Materials by RP-HPLC
DUAN Hong　 ZHAI Ke-Feng　 GAO Gui-Zhena　 CAO Wen-Gena　 XU E Guo-Huia
( Engineering Research Center of Special Farm Seed Production , Suzhou University, Suzhou , Anhui 234000,P . R.China )
a(College of Chemist ry& Li fe Science,Suzhou University, Suzhou , Anhui 234000, P. R.China)
Abstract　 The method for the determination of salicin in Alangium Chinese ( Lour. ) Harms
medicinal materials was established by high performance liquid ch romatog raphy ( HPLC ) . The
determination was carried out ov er a Shim-pack vp-ODS C18 column( 150mm× 4. 6mm, 5μm) at the
column temperature of 25℃ . The mobile phase was consisted of acetonit rile ( 7% ) -water( 93% ) wi th
f low rate of 1. 0mL· min- 1 , and detection wavelength w as 269 nm. There w as a good linear relation
for salicin in the range of 16. 02— 80. 10μg· mL- 1 . The linear equation w as y= 5070. 1x+ 4069. 1
w ith correlation coef ficient of 0. 9994, and the average recovery w as 99. 53% with RSD of 1. 19% .
The method is fast and simple, that can be applied to controlling quali ty of Alangium Chinese ( Lour. )
Harms medicinal materials.
Key words　 Alangium Chinese ( Lour. ) Harms; Salicin; RP-HPLC
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《光谱实验室》编辑部
1068 光谱实验室 第 29卷