全 文 ：第３７卷第３期
２０１４年９月 　　　　　
辽宁师范大学学报（自然科学版）
Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｌｉａｏｎｉｎｇ　Ｎｏｒｍａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ｎａｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　Ｅｄｉｔｉｏｎ）
　　　　　
Ｖｏｌ．３７　Ｎｏ．３
Ｓｅｐ．　２０１４
　　收稿日期：２０１４－０４－１５
基金项目：大连大学大学生创新创业训练计划项目（２０１３１１５）
作者简介：杨春光（１９７１－ ），男，湖北黄陂人，大连大学讲师，博士．
　　文章编号：１０００－１７３５（２０１４）０３－０４０２－０４
　　ｄｏｉ：１０．１１６７９／ｌｓｘｂｌｋ２０１４０３０４０２
扁担杆乙酸乙酯部位镇痛作用及作用机制研究
杨春光，　高　松，　赵　阳，　李志祥
（大连大学 医学院，辽宁 大连　１１６６２２）
摘　要：观察扁担杆乙酸乙酯部位的镇痛作用并探讨其镇痛机制．采用化学分离法制备
扁担杆乙酸乙酯部位．采用小鼠热刺激疼痛模型和甲醛致痛模型观察其镇痛作用，采用
酶联免疫吸附法检测小鼠血清ＰＥＧ２和 ＭＤＡ的含量以及ＳＯＤ活性．与对照组比较，低
质量分数扁担杆乙酸乙酯部位能明显提高小鼠痛域，低质量分数和中质量分数乙酸乙酯
部位可降低甲醛致痛第２时相反应评分值，并能降低血清ＰＥＧ２和 ＭＤＡ的含量，增强
ＳＯＤ活性．扁担杆乙酸乙酯部位具有一定镇痛作用，镇痛机制可能与降低血清ＰＥＧ２和
ＭＤＡ的含量，促进ＮＯ合成有关．
关键词：扁担杆；乙酸乙酯；镇痛
中图分类号：Ｒ２８５．５　　　文献标志码：Ａ
扁担杆（Ｇｒｅｗｉａ　ｂｉｌｏｂａ　Ｇ．Ｄｏｎ）为椴树科扁担杆属植物，别名娃娃拳．该属共有约１５０种，分布于
东半球热带地区，我国有３０种，广布于西南、西北、东部至东北，但主产地为西南部［１］．在原产地常自生
于平原或丘陵，低山山坡或山沟边灌丛中及疏林下，性强健，耐寒，耐干旱，耐瘠薄．扁担杆以干燥的根、
枝、叶或全株入药，味辛、甘、苦，性温，归肝、脾、胃经［２］．《新旧本草》记载扁担杆变种小花扁担杆枝叶煮
汁可治小儿蛔虫病；《开宝本草》称其可“主三虫，下气消谷”［３］；《中药大辞典》记载其全株和枝叶能祛风
除湿、理气消痞，可治小儿因虫疳积、大人气痞、脾虚食少、妇女崩带、风湿［４］．扁担杆的根皮在部分国家
或地区民间用来治疗皮肤脓疱疮等细菌感染［５－６］．现代药理实验表明，扁担杆提取物具有抗菌、抗疟疾、
抗炎等作用，但对扁担杆提取物镇痛作用及机制的研究不多［７］．本研究采用物理致痛及化学致痛动物
模型，探讨扁担杆乙酸乙酯部位（ｅｔｈｙｌ　ａｃｅｔａｔｅ　ｆｒａｃｔｉｏｎ　ｆｒｏｍＧｒｅｗｉａ　ｂｉｌｏｂａ，ＥＦＧ）的镇痛作用及可能的
作用机制．
１　材料与方法
１．１　试剂与仪器
扁担杆药材全株采自大连大黑山山区（由大连大学医学院中药教研室高松鉴定）；石油醚（国药集
团化学试剂有限公司，批号：Ｆ２０１２０７２０）、乙酸乙酯（沈阳市新光化工厂，批号：２０１２００３１０）；盐酸吗啡
注射液（东北制药集团沈阳第一制药厂，批号：１１０６０４）；甲醛溶液（沈阳天罡化学试剂厂，分析纯）；
ＰＥＧ２试剂盒、ＳＯＤ试剂盒、ＭＤＡ试剂盒均由南京建成生物工程研究所提供；ＹＬＳ－６Ｂ智能热板仪（淮
北正华生物仪器设备有限公司）；ＬＡＢＯＲＯＴＡ－４０００型旋转蒸发仪（德国Ｈｅｉｄｏｌｐｈ）；ＳＨＺ－９５型循环水
第３期 杨春光等：　扁担杆乙酸乙酯部位镇痛作用及作用机制研究 ４０３　
式多用真空泵（河南省巩义市英峪予华仪器厂）；ＨＨ数显恒温水浴锅（江苏金坛市宏华仪器厂）；其余
试剂均为分析纯．
１．２　药材的提取与分离
取扁担杆药材干燥枝１ｋｇ，室温下用体积分数为７５％乙醇浸泡２４ｈ后，用体积分数为８５％乙醇
分批次回流提取３次，浓缩成浸膏，得乙醇初提物．加适量水溶解后，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯萃
取，至有机相无色，所得提取液抽滤，旋转蒸发仪浓缩，最后干燥得浸膏粉，密封，置４℃冰箱备用．用前
以体积分数为１％吐温－８０溶液溶解，用蒸馏水配制成高质量分数（２５％）、中质量分数（１２．５％）和低质
量分数（５％）药液．
１．３　扁担杆乙酸乙酯部位（ＥＦＧ）对小鼠热刺激性疼痛的影响
选体重在（２０±２）ｇ昆明种雌性小鼠，实验前将小鼠放置于（５５±０．５）℃的热板仪上，以小鼠舔后
足的时间作为痛阈值，每只测２次，均值为实验前正常痛阈值．剔除３０ｓ不舔后足者及跳跃者，共筛选
得到６０只合格小鼠．将合格小鼠随机分５组，每组１０只，分别为对照（生理盐水）组、吗啡组、ＥＦＧ低
质量分数组、ＥＦＧ中质量分数组和ＥＦＧ高质量分数组．对照组和ＥＦＧ给药组分别灌胃给予生理盐水
和不同质量分数扁担杆乙酸乙酯部位，给药体积为０．２ｍＬ／１０ｇ，每天１次，连续给药３ｄ．吗啡组实验
前腹腔注射０．１５ｍＬ／１０ｇ．末次给药后，分别在３０，６０，９０ｍｉｎ用热板测痛仪检测小鼠舔后足时间，超
过６０ｓ不舔后足者按照６０ｓ记．比较给药前后各组小鼠舔后足时间．实验结束后，快速摘小鼠眼球取
血，加入柠檬酸钠混合后，３　５００ｒ／ｍｉｎ离心１５ｍｉｎ，仔细收集上清．将血清置－２０℃中保存待测．
１．４　扁担杆乙酸乙酯部位（ＥＦＧ）对甲醛致痛模型的影响
分组及给药同１．３，参照文献［８］方法，末次给药３０ｍｉｎ后，用质量分数为２．５％的甲醛溶液，在每
只鼠右后足跖皮下注射１０μＬ致痛，观察注射后０～５ｍｉｎ（第１时相）和１５～３０ｍｉｎ（第２时相）动物的
行为反应．并对小鼠的痛反应作如下评分（每次观察时间为３ｍｉｎ）：０分：行走自如；１分：跛行、不动时
足撑地；２分：抬足；３分：舔足、咬或抖足．
１．５　小鼠血清ＰＥＧ２和 ＭＤＡ的含量以及ＳＯＤ活性的检测
取１．３留存的上清液，以酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ）分别测定ＰＥＧ２和 ＭＤＡ的含量及ＳＯＤ活性，
均严格按照试剂盒说明书及仪器操作规程进行．
１．６　统计分析
采用ＳＰＳＳ１０．０统计软件进行分析，所有数据以ｘ±ｓ表示，多组间均数比较采用单因素方差分
析，组间比较采用独立样本ｔ检验，Ｐ＜０．０５认为在统计学上有显著性差异．
２　结果
２．１　ＥＦＧ对热板法致小鼠疼痛的影响
实验结果显示，低质量分数ＥＦＧ组在给药后３０，６０ｍｉｎ的痛阈提高值与对照组相比有显著性差
异，具有统计学意义（表１）．
表１　ＥＦＧ对小鼠痛阈值的影响
Ｔａｂｌｅ　１　Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ＥＦＧ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｐａｉｎ　ｔｈｒｅｓｈｏｌｄｓ　ｉｎ　ｍｉｃｅ
组　别 动物数／只 给药前痛阈值／ｓ
给药后不同时间痛阈提高值／ｓ
３０ｍｉｎ　 ６０ｍｉｎ　 ９０ｍｉｎ
对照组 １０　 １７．２±５．２　 １．４±２．０　 ２．８４±１．５　 １．９±３．２
吗啡组 １０　 １４．８±４．３　 １０．３±５．２＊＊ １３．０±２．４＊＊ １４．２±４．３＊＊
低质量分数组 １０　 １８．０±４．１　 ５．８６±３．９＊ ６．８±３．２＊ ７．８±３．７＊
中质量分数组 １０　 １５．４±５．６　 ３．１±３．４　 ２．８±２．７　 ３．２±５．１
高质量分数组 １０　 １６．１±３．６　 １．４±２．１　 ２．８±３．２　 ２．３±２．７
　　　注：与对照组比较＊Ｐ＜０．０５，＊＊Ｐ＜０．０１
４０４　 辽宁师范大学学报（自然科学版） 第３７卷
２．２　ＥＦＧ对甲醛诱发小鼠疼痛的影响
表２中的实验结果显示，ＥＦＧ对甲醛致痛效应的第１时相（即０～５ｍｉｎ时）的疼痛反应无明显影响，
但低质量分数ＥＦＧ组和中质量分数ＥＦＧ组可降低第２时相（即１５～３０ｍｉｎ）的疼痛反应评分值．
表２　ＥＦＧ对甲醛诱发小鼠疼痛的影响
Ｔａｂｌｅ　２　Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ＥＦＧ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｐａｉｎ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｂｙ　ｆｏｒｍａｌｉｎ　ｉｎ　ｍｉｃｅ
组　别 动物数／只
疼痛评分
５ｍｉｎ后 １５ｍｉｎ后 ３０ｍｉｎ后
对照组 １０　 ２．８±０．４　 ２．２±０．５　 ２．５±０．８
吗啡组 １０　 ０．５±０．３＊＊ ０．７±０．６＊＊ １．０±０．７＊＊
低质量分数组 １０　 ３．０±０．０　 ２．０±０．８　 １．６±１．１＊
中质量分数组 １０　 ３．０±０．０　 ２．１±０．７　 １．５±１．２＊
高质量分数组 １０　 ３．０±０．０　 １．９±０．８　 ２．２±１．４
　　注：与对照组比较＊Ｐ＜０．０５，＊＊Ｐ＜０．０１
２．３　ＥＦＧ对小鼠血清ＰＥＧ２和 ＭＤＡ的含量以及ＳＯＤ活性的影响
与对照组比较，低质量分数组和中质量分数组小鼠血清ＰＥＧ２和 ＭＤＡ的含量降低，ＳＯＤ活性增
强（表３）．
表３　ＥＦＧ对小鼠血清ＰＥＧ２和 ＭＤＡ的含量以及ＳＯＤ活性的影响
Ｔａｂｌｅ　３　Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ＥＦＧ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ＰＥＧ２ａｎｄ　ＭＤＡ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ＳＯＤ
组别 动物数／只 ＰＥＧ２／ＯＤ　 ＭＤＡ／（ｎｍｏｌ·ｍＬ－１） ＳＯＤ／（Ｕ·ｍＬ－１）
对照组 １０　 ０．８３２±０．１５４　 ３．５２±０．４６　 ３５．７８±７．３４
吗啡组 １０　 ０．８５６±０．１７４　 ３．５９±０．６２　 ３８．２４±８．２０
低质量分数组 １０　 ０．５９８±０．１３２＊ ２．５４±０．４８＊ ５１．６０±１０．４３＊
中质量分数组 １０　 ０．６９２±０．２１５＊ ２．８７±０．３５＊ ４８．４５±９．６０＊
高质量分数组 １０　 ０．７８４±０．１５９　 ３．２４±０．７５　 ４０．３４±１１．５７
　　注：与对照组比较＊Ｐ＜０．０５
３　讨论
疼痛是人体一种复杂的生理心理活动，往往伴有不愉快的情绪，多数是由各种伤害或疾病引起．全
身皮肤和有关组织中存在神经末梢痛觉感受器，可以将伤害性刺激转换成神经冲动，沿神经纤维传导
到中枢大脑皮层［９］．疼痛是临床上最常见的症状之一，常常给患者带来极大的痛苦．一方面，疼痛的感
觉常提示有病灶的存在，疼痛的性质也可以间接说明伤害的病理类型；另一方面，在不影响对病情观察
的情况下，解除疼痛也是医学研究的一个重要课题．
疼痛发生的机制较复杂，包括自由基以及前列腺素和组织胺等炎性介质都参与到疼痛反应过程
中．生理状态下机体可以产生少量氧自由基，发挥作用后迅速被抗氧化物酶代谢．过量的氧自由基会对
机体造成损伤，并形成脂质过氧化物 ＭＤＡ．体内 ＭＤＡ含量可以反映细胞受攻击程度，机体清除氧自
由基主要依靠超氧化物歧化酶ＳＯＤ的活性．在热板致痛或化学物质致痛动物模型中，都观察到血浆和
脑组织中 ＭＤＡ和ＳＯＤ的含量明显增多，而吗啡可抑制 ＭＤＡ及ＳＯＤ含量的升高［１０］．ＰＥＧ２是重要的
疼痛介质之一，主要在外周发挥致痛作用，可以提高疼痛感受器对伤害性刺激的敏感性．本实验观察到
低质量分数的ＥＦＧ能明显延长热刺激致小鼠疼痛的痛阈值．通过对小鼠血清检测发现，低质量分数
ＥＦＧ组和中质量分数ＥＦＧ组小鼠血清ＰＥＧ２和 ＭＤＡ的含量降低，ＳＯＤ活性增强．提示ＥＦＧ的镇痛
第３期 杨春光等：　扁担杆乙酸乙酯部位镇痛作用及作用机制研究 ４０５　
作用可能与抑制ＰＧＥ２合成，降低 ＭＤＡ含量，促进ＮＯ合成有关．甲醛致痛模型可以模拟急性组织损
伤所致的持续性疼痛，是目前公认的一种较好的研究药物镇痛作用的模型，其特点是疼痛分为两个时
相，Ⅰ相是由于直接刺激外周神经末梢所致，Ⅱ相则主要由炎症介质的产生、释放所引起［１１］．本研究发
现，ＥＦＧ对甲醛致痛效应的第１时相的疼痛反应无明显影响，但低质量分数ＥＦＧ和中质量分数ＥＦＧ
可降低第２时相的疼痛反应评分值，说明ＥＦＧ对于炎症介质参与的疼痛反应具有一定的镇痛作用．本
实验中，高质量分数ＥＦＧ没有发现镇痛作用，只有低质量分数和中质量分数ＥＦＧ具有一定的镇痛作
用，可能是由于乙酸乙酯部位所含化学成分复杂导致相互影响所致．
综上所述，本研究发现扁担杆乙酸乙酯部位在热刺激疼痛模型和甲醛致痛模型中均表现出一定的
镇痛作用，其镇痛作用可能与抑制ＰＧＥ２合成，降低 ＭＤＡ含量，促进ＮＯ合成有关．关于扁担杆属植物
的化学成分研究较少，对于ＥＦＧ镇痛作用的物质基础及确切的镇痛机制还需进一步研究．
参考文献：
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ｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｃｕｒｒ　Ｔｈｅｒ　Ｒｅｓ　Ｃｌｉｎ　Ｅｘｐ，２０１３，７５：７１－７６．
Ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　ｔｈｅ　ａｎａｌｇｅｓｉｃ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ａｎｄ　ｉｔｓ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ　ｏｆ
ｅｔｈｙｌ　ａｃｅｔａｔｅ　ｆｒａｃｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｇｒｅｗｉａ　ｂｉｌｏｂａｉｎ　ｍｉｃｅ
ＹＡＮＧ　Ｃｈｕｎｇｕａｎｇ，　ＧＡＯ　Ｓｏｎｇ，　ＺＨＡＯ　Ｙａｎｇ，　ＬＩ　Ｚｈｉｘｉａｎｇ
（Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｃｏｌｅｇｅ，Ｄａｌｉａｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｄａｌｉａｎ　１１６６２２，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｏ　ｓｔｕｄｙ　ｔｈｅ　ａｎａｌｇｅｓｉｃ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ａｎｄ　ｉｔｓ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ　ｏｆ　ｅｔｈｙｌ　ａｃｅｔａｔｅ　ｆｒａｃｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｇｒｅｗｉａ　ｂｉｌｏｂａ．
Ｔｈｅ　ｅｔｈｙｌ　ａｃｅｔａｔｅ　ｆｒａｃｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｇｒｅｗｉａ　ｂｉｌｏｂａ　ｗａｓ　ｐｒｅｐａｒｅｄ．Ｔｈｅ　ａｎａｌｇｅｓｉｃ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｅｔｈｙｌ　ａｃｅｔａｔｅ　ｆｒａｃ－
ｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｇｒｅｗｉａ　ｂｉｌｏｂａ　ｗｅｒｅ　ｏｂｓｅｒｖｅｄ　ｂｙ　ｆｏｒｍａｌｉｎ　ｔｅｓｔ　ａｎｄ　ｈｏｔ－ｐｌａｔｅ　ｔｅｓｔ．Ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ＰＥＧ２ａｎｄ
ＭＤＡ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ＳＯＤ　ｗｅｒｅ　ｍｅａｓｕｒｅｄ　ｂｙ　ＥＬＩＳＡ．Ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ，ｔｈｅ　ｌｏｗ
ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｅｔｈｙｌ　ａｃｅｔａｔｅ　ｆｒａｃｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｇｒｅｗｉａ　ｂｉｌｏｂａ　ｃｏｕｌｄ　ｉｎｃｒｅａｓｅ　ｔｈｅ　ｐａｉｎ　ｔｈｒｅｓｈｏｌｄｓ．Ｔｈｅ　ｌｏｗ
ａｎｄ　ｍｅｄｉｕｍ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｅｔｈｙｌ　ａｃｅｔａｔｅ　ｆｒａｃｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｇｒｅｗｉａ　ｂｉｌｏｂａｉｎｈｉｂｉｔｅｄ　ｔｈｅ　ｐａｉｎ　ｏｆ　ｍｉｃｅ　ｉｎ　ｔｈｅ
ｆｏｒｍａｌｉｎ　ｔｅｓｔ　ａｎｄ　ｒｅｄｕｃｅｄ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ＰＥＧ２ａｎｄ　ＭＤＡ，ｗｈｅｒｅａｓ　ｒａｉｓｅｄ　ｔｈｅ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ＳＯＤ．Ｔｈｅ　ｅｔｈ－
ｙｌ　ａｃｅｔａｔｅ　ｆｒａｃｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｇｒｅｗｉａ　ｂｉｌｏｂａ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈｅ　ａｎａｌｇｅｓｉｃ　ｅｆｆｅｃｔｓ，ｗｈｉｃｈ　ｍｉｇｈｔ　ｂｅ　ｒｅｌａｔｅｄ　ｔｏ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ
ＰＧＥ２ａｎｄ　ＭＤＡ，ａｓ　ｗｅｌ　ａｓ　ｐｒｏｍｏｔｉｎｇ　ｔｈｅ　ｒｅｌｅａｓｅ　ｏｆ　ｎｉｔｒｉｃ　ｏｘｉｄｅ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｇｒｅｗｉａ　ｂｉｌｏｂａ；ｅｔｈｙｌ　ａｃｅｔａｔｅ；ａｎａｌｇｅｓｉａ