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楮头红保肝护肝活性部位筛选



全 文 :楮头红保肝护肝活性部位筛选
廖 梅 1, 2 ,张锦文 3 ,张勇慧 2, 4
(1.嘉应学院医学院 ,广东梅州 514031;2.华中科技大学同济医学院药学院 ,武汉 430030;3.华中科技大学
同济医学院附属同济医院 ,武汉 430030;4.湖北省天然药物化学与资源评价重点实验室 ,武汉 430030)
[摘 要 ]  目的 研究楮头红保肝护肝活性部位。方法 对楮头红乙醇提取物采用系统溶剂法进行萃取分离 ,分
成 4个极性部位 , 用小鼠四氯化碳急性肝损伤模型筛选楮头红保肝护肝活性部位。结果 小鼠灌胃给予楮头红正丁醇
部位可明显抑制血清丙氨酸氨基转移酶 、天冬氨酸氨基转移酶升高(均 P<0.05), 与阳性对照药水飞蓟素比较差异无显
著性。结论 正丁醇部位为楮头红保肝护肝活性部位。
[关键词 ]  楮头红;保肝护肝;活性部位
[中图分类号 ]  R286;R965   [文献标识码 ]  A   [文章编号 ]  1004-0781(2010)05-0571-02
ScreeningontheHepatoprotectiveFractionsofSarcopyramisnepalensis
LIAOMei1, 2 , ZHANGJin-wen3 , ZHANGYong-hui2, 4 (1.MedicalColegeofJiayingUniversity, Meizhou
514031, China;2 .SchoolofPharmacy, TongjiMedicalColege, HuazhongUniversityofScienceand
Technology, Wuhan430030, China;3.TongjiHospitalAfiliatedwiththeTongjiMedicalColege, Huazhong
UniversityofScienceandTechnology, Wuhan430030, China;4.KeyLaboratoryofNaturalMedicinalChemistry
andResourceEvaluation, HubeiProvince, Wuhan430030, China)
ABSTRACT Objective TostudythehepatoprotectivefractionsofSarcopyramisnepalensisWal. Methods The
ethanolpartswereisolatedandextractedbyusingsystemicsolventsandfourpolaritieswereobtained.Theacuteliverinjury
modelonmicewasinducedbyCCl4 , onwhichefectivefractionswerescreenedandidentified. Results n-BuOHfractionbyintragastricadministrationinmicesignificantlydecreasedsurumALTandAST(bothP<0.05), comparedwiththemodel
control, andhadnosignificantdiferencefrom silybin, thepositivecontrol.  Conclusion  n-BuOH fractionisthe
hepatoprotectivepartofSarcopyramisnepalensisWal.
KEYWORDS Sarcopyramisnepalensis;Hepatoprotective;Activefraction
  楮头红 (SarcopyramisnepalensisWal.)又名风柜
斗草 ,系野牡丹科肉穗草属植物 ,主要分布于东南亚和
我国四川 、云南 、湖北 、广西 、广东 、江西 、台湾 、福建等
地 。据 《中药大辞典 》记载 ,楮头红全草可药用 ,具有
清热解毒 、清肝泻火之效 ,是治疗急性肝炎 、肺热咳嗽 、
蛇头疔 、无名肿毒 、胃肠炎等疾病的珍稀名贵中草
药 [ 1] 。对甲型肝炎 、乙型肝炎急性期疗效佳 , 对慢性
肝炎及乙肝病毒携带者有效 ,在福建 、湖北等民间广为
使用 ,是一种极有价值的天然药用植物和中草药资
源 [ 2, 3] 。为追踪分离该药保肝护肝的活性成分 ,笔者
在本实验中对楮头红乙醇提取物进行萃取分离 ,分成
[收稿日期 ]  2009-11-02
[基金项目 ]  *教育部新世纪优秀人才支持计划资助项
目(基金编号:NCET-08-0224)
[作者简介 ]  廖 梅(1981-), 女 , 江西宁都人 , 硕士 , 助
教 , 研究方向:天然生物活性物质和创新药物。 电话:(0)
15016269891, E-mail:tryh2@yahoo.com.cn。
[通迅作者 ]  张勇慧 ,男 , 教授 ,博士生导师 , 主要研究方
向:天然药物化学。电话:027 -83666300, E-mail:zhangyh@
mails.tjmu.edu.cn。
4个极性部位 ,对 4个极性部位进行保肝护肝药效学
实验 ,从中筛选药效学活性部位 ,以期为楮头红的应用
开发提供科学依据。
1 材料 
楮头红(福建省漳州市南靖县和溪镇供销社提供 ,
华中科技大学同济医学院药学院陈家春教授鉴定为野
牡丹科肉穗草属植物楮头红 Sarcopyramisnepalensis
Wal.),昆明种小鼠(普通级 ,雄性 ,体质量 22 ~ 25g,华
中科技大学同济医学院实验动物中心提供)。四氯化碳
[ CCl4 ,分析纯 ,北京化学试剂公司生产 ,实验时以大豆
油稀释成 0.2%(V/V)油溶液 ,充分振摇混匀 ] ,水飞蓟
素(江苏中兴药业有限公司 ,批号:070503),丙氨酸氨基
转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)试剂盒(购
自南 京建 成生 物工 程研 究所 , 批号:20070809,
20070418)。 756PC紫外可见分光光度计(上海光谱仪
器厂), CanonEOS350DDIGITAL, JAPANOLYMPUS
BX51光学显微及数码成像设备;肝脏病理组织学检查 ,
常规制片 ,苏木精 -伊红(HE)染色 ,镜检 。
2 方法与结果 
楮头红全草粉碎 , 95%乙醇渗漉提取 6次(乙醇与
·571·医药导报 2010年 5月第 29卷第 5期
样品比例为 10:1, 0.05mL· s-1),每次 1周 ,提取液颜
色变浅判定为渗漉终点。过滤 ,回收溶剂 ,粗提物加水
适量悬浮 ,依次用石油醚 、乙酸乙酯 、正丁醇萃取 ,萃取
液浓缩成浸膏得石油醚部位 、乙酸乙酯部位 、正丁醇部
位和水部位浸膏。取雄性小鼠 80只 ,随机分成正常对
照组 、病理模型对照组 、水飞蓟素组 、石油醚部位组 、乙
酸乙酯部位组 、正丁醇部位组 、水部位组 、总浸膏组 ,每
组 10只 。正常对照组和病理模型对照组每天灌胃给予
等体积 0.5%吐温-80溶液;水飞蓟素组灌胃给予水飞
蓟素 , 200mg·kg-1·d-1;其他组给药剂量折算成生药
材 ,均 10 g· kg-1·d-1。均连续给药 10 d。第 10天给药
后 1h,正常对照组腹腔注射等体积大豆油 ,其他组腹腔
注射 0.2%四氯化碳(CCl4)油溶液 , 采血前禁食不禁水
12h,腹腔注射 24 h后眼眶取血 ,静置 2 h, 3 000 r·
min-1离心 15 min,取上层血清。赖氏法 [ 4] 测定血清
ALT和 AST活性。摘取肝脏 , 10%甲醛溶液固定 , HE
染色 ,病理切片检查。结果见表 1。
由表 1可知 ,病理模型对照组 ALT与 AST均明显
高于正常对照组(均 P<0.05),提示模型制备成功。
与病理模型对照组比较 ,水飞蓟素组 ALT与 AST显著
降低(均 P<0.05)。与病理模型组比较 ,小鼠灌胃给
予楮头红正丁醇部位后 ,血清 ALT、AST明显降低(均
P<0.05),且其作用与阳性对照药差异无显著性。因
此判定 ,正丁醇部位为楮头红抑制 CCl4所致肝损伤转
氨酶升高的药效活性部位 。
光镜下观察 ,病理模型组肝小叶结构破坏 ,肝细胞
索状排列不明显 ,可见明显淤血 。肝细胞明显肿胀 ,脂
肪变性多见 。水飞蓟素组和正丁醇部位组可见病变较
病理模型组明显减轻 ,肝小叶结构基本正常 ,细胞索状
排列较整齐 ,肝内淤血及细胞肿胀明显减轻 ,可见少量
点灶状坏死 。病理检查结果亦表明小鼠灌胃给予楮头
红正丁醇部位对肝损伤小鼠肝脏有一定修复作用。
3 讨论 
肝损伤是多因素参与的复杂病理过程 ,在其病变
过程中多种酶 、自由基和脂质过氧化反应均发生较大
变化。 CCl4经肝微粒体细胞色素 P450酶激活后产生自
表 1 8组小鼠 AST与 ALT测定结果 
Tab.1TheserumlevelsofASTandALTinmice
U· L-1 , x±s, n=10
组别 AST ALT
总浸膏组 734.06±339.38*1 323.89±247.52*1
石油醚部位组 1 026.25±192.96 839.50±302.42
乙酸乙酯部位组 1 089.57±48.09 904.17±555.30
正丁醇部位组 791.38±360.89*1 766.94±659.14*1
水部位组 1 156.16±93.18 1 111.56±424.67
水飞蓟素组 685.32±213.21*1 542.45±245.61*1
病理模型对照组 1 866.55±251.15*2 1 419.00±202.02*2
正常对照组 112.36±6.79 33.52±3.47
  与病理模型对照组比较 , *1 P<0.05;与正常对照组比
较 , *2P<0.05
Comparedwithnormalcontrolgroup, *1 P<0.05;Compared
withmodelcontrolgroup, *2P<0.05
由基 ,引发脂质过氧化反应 ,导致能量代谢障碍 ,
使肝细胞膜通透性增加 ,细胞内转氨酶因巨大的浓度
梯度而释放入血液 [ 5] 。临床及药理实验结果表明 ,楮
头红能有效降低血清转氨酶 ,对肝细胞有一定保护作
用 。本实验结果表明 ,正丁醇部位为楮头红抑制 CCl4
所致肝损伤所引起的转氨酶升高药效活性部位 。
[ DOI]  10.3870/yydb.2010.05.006
[参考文献 ]
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·572· HeraldofMedicineVol.29No.5 May2010