全 文 ：第 28卷
Vol.28 　
第 4期
No.4
西华 师 范 大 学 学 报 (自 然 科 学 版 )
JournalofChinaWestNormalUniversity(NaturalSciences)
2007年 12月
Dec.2007
文章编号:1673-5072(2007)04-0311-03
　　收稿日期:2007-09-05
基金项目:四川省重点学科建设项目(SZD0420)
作者简介:粟　君(1970-), 女 ,四川南充人 , 西华师范大学生命科学学院硕士研究生 , 主要从事植物组织培养的研究.
半边莲生物碱的提取及其对胃癌细胞的抑制作用
粟　君 ,谭　兴 ,李劲涛 ,杨　军
(西华师范大学生命科学学院 ,四川 南充　637002)
摘　要:以半边莲为材料 , 对全草中的生物碱进行了粗提 , 并对胃癌细胞 BG-38生长抑制作用进行了测定.结果
表明:半边莲生物碱对胃癌细胞 BG-38有一定的抑制作用 ,随着生物碱浓度的升高 , 抑制作用加强;当药液浓度为
300mg· L-1时 ,对胃癌细胞的抑制率最高 , 达 85.6%.随着作用时间的延长 , 总体趋势是抑制作用也加强 , 当作用时
间达 16h时 , 达到最大值(90.3%),但时间再延长抑制率反而略有下降.
关键词:半边莲;生物碱;胃癌细胞;抑制作用
中图分类号:Q946.8　　　文献标识码:B
半边莲(LobeliachinensisLour),属桔梗科半边莲属植物 ,全草入药 [ 1] .半边莲主要化学成分含生物碱 、黄
酮甙 、皂甙和氨基酸等 [ 2] .其中生物碱主要为山梗菜碱 、山梗菜酮碱 、山梗菜醇碱和去甲山梗菜酮碱 ,具有利
尿消肿 、清热解毒的功效 [ 3] .也可用于治疗水肿 ,痈肿疔疮 ,蛇虫咬伤 ,晚期血吸虫病腹水 ,癌症 、动脉粥样硬
化等[ 4, 5] .目前用半边莲对肿瘤细胞的生理学效应研究主要有对 Hela细胞 、肺癌细胞 ,肝癌细胞等的抑制作
用 [ 6, 7] ,尚未有半边莲对常见的胃癌细胞的抑制作用的相关报道.本实验对半边莲生物碱的提取 ,及其对胃
癌细胞 BG-38抑制效应进行了初步分析 ,结果如下.
1　材料和方法
1.1　半边莲生物碱的提取
1.1.1　生物碱提取与分离
半边莲植物采自重庆市忠县.生物碱提取参照范秀珍 ,韦星 ,俞志明等人的方法[ 6, 9, 10] ,适当改进 ,采用
95%乙醇 ,索氏提取法提取生物碱.浸膏加入 3%HCl充分溶解 ,调节 pH值至 3-4.用乙醚萃取后 ,加入碳酸
氢钠碱化至 pH值为 10-11,再用氯仿萃取 ,蒸馏得生物碱粗品 ,冷冻干燥生物碱粗品粉末.
1.1.2　半边莲生物碱药液的配制
取生物碱粗品 10mg,溶于 100μL二甲基亚砜(DMSO),吸取该溶液 50μL,用 4 950μLDMEM培养基稀
释 ,过滤除菌 , 4℃保存备用.
1.2　半边莲生物碱对胃癌细胞抑制效应分析
1.2.1　细胞培养
胃癌细胞 BG-38,由川北医学院提供.癌细胞用含 10%胎牛血清的 DMEM培养基培养至对数生长期 ,
0.25%的胰蛋白酶消化 ,加入 DMEM制成单细胞悬浮液 ,以 4×104个 /mL的密度接种于 96孔板内.每孔
200μL细胞悬液 ,培养 24h,待细胞培养至完全贴壁 ,并铺满孔底 70%时分组.
1.2.2　药物处理
各组加半边莲生物碱最终浓度为 300mg/L;250mg/L;200mg/L;150mg/L;100mg/L;50mg/L,观测不
同浓度药物处理效果 ,每组设 4个平行.分别培养 24h, 48h, 72h和 96h对比不同处理时间的抑制效果.
DOI :10.16246/j.issn.1673-5072.2007.04.018
312　 西华师范大学学报(自然科学版) 2007年
1.2.3　对胃癌生长抑制效果检测
采用 MTT法检测半边莲生物碱对胃癌细胞抑制效应 [ 10] .到终止培养前 4h,每孔加入 MTT(5mg/mL)
20μL,培养结束后弃去上清液 ,每孔加入 DMSO150μL,震荡 10min,使结晶充分溶解.用酶标仪在 490nm处
测定光吸收值(OD值).实验重复 3次.按公式计算抑制率:[ 11]
抑制率 =[ 1-(OD实验组 -OD空白组)(OD对照组 -OD空白组)] ×100%.
以半边莲生物碱各浓度作横坐标 、抑制率作为纵坐标绘制曲线.
2　结　果
2.1　不同浓度对 BG-38细胞生长的影响
观察发现 ,半边莲生物碱对胃癌细胞 BG
-38的生长具有一定的抑制作用.并且这种抑
制作用的程度与药物的浓度呈正相关.药物处
理 48h后 ,随着药液浓度的上升吸光率呈现出
下降趋势 ,抑制率呈上升趋势.当药液浓度为
300mg· L-1时的效果平均吸光率(492nm)最
低 ,对 BG-38细胞的抑制低 ,对 BG-38细胞
的抑制率最高达 85.6%(图 1).
观察细胞生长情况 ,在低浓度药物处理情
况下 ,细胞生长情况与对照组差异不明显:随
着药物浓度的增加 ,贴壁生长细胞数量减少 ,
而悬浮生长的数量逐渐增多;当药物量达到
300mg· L-1时 ,细胞形态有较大的变化 ,悬浮
细胞较多 ,贴底细胞较少(见图 2).相比而言 ,对照细胞长满整个孔底 ,细胞间隙较小.
2.2　不同作用时间对 BG-38细胞生长的影响
　　半边莲生物碱对 BG-38细胞生长的抑制作用也与药物处理的时间相关.作用 4h抑制率最低
(32.3%).随着作用时间的延长 ,抑制率逐渐增大 ,当作用时间达 16h时 ,达到最大值(90.3%).但时间再延
长抑制率反而略有下降.
3　讨　论
3.1　生物碱的提取
以往半边莲生物碱的提取 ,常用全草浸醇提取[ 12] ,在干品量大时较为实用.本实验的原材料量较小 ,故
　第 28卷第 4期　　　　　粟　君 ,等:半边莲生物碱的提取及其对胃癌细胞的抑制作用 313　
将半边莲干草粉碎成粉末 ,采用索氏提取器回流提取 ,提取效率高而且操作方便 [ 13] .
3.2　半边莲生物碱对 BG-38细胞生长的抑
制作用
本研究采用 MTT法对不同浓度的半边莲
生物碱粗品作用下细胞 48h的生长情况进行
了观察 ,结果表明半边莲生物碱粗品对 BG-
38细胞生长的抑制成一定浓度的依赖性.当药
物浓度较低时 ,细胞吸光度值无明显变化.最
佳药物浓度在 300mg· L-1 ,对 BG-38细胞有
一定杀伤作用 ,其抑制率达到 85.6%.本研究
还显示半边莲对细胞生长的抑制成一定时间
的依赖性:半边莲对细胞作用 16h抑制作用最
强 ,其后至 24h抑制率下降 , 48h回升至 83.
2%.
半边莲对 BG-38细胞有较强的抑制作用 ,抑制率的曲线上升 ,然后下降 ,又上升 ,提示半边莲对 BG-
38细胞的抑制作用 ,除了直接杀伤细胞外 ,还有可能随时间的延续诱导细胞凋亡 ,因此 ,半边莲对胃癌细胞
的抑制作用 ,可能是直接杀伤和诱导细胞凋亡的双重作用 ,有待实验进一步证实 [ 14] .
据高永琳等报道 ,半边莲对 Hela细胞增殖的直接抑制作用不明显;但可通过促进细胞内储藏钙的释放
和细胞外钙离子的内流 ,显著提高细胞内游离钙的浓度 [ 6] .而在对诱导肝癌细胞凋亡的实验中 ,发现半边莲
可以游离细胞钙离子的浓度 [ 8] .本文分析半边莲的生物碱粗品对胃癌细胞 BG-38的直接抑制作用 ,发现其
抑制率很高.这可能与肿瘤细胞来源的组织特异性有关.本文实验结果为进一步分析半边莲生物碱对胃癌细
胞抑制的细胞和分子生物学机理奠定了基础.
参考文献:
[ 1] 　中国植物志编写组.中国植物志(第一卷)[ M] .北京:科学出版社 , 2004.468-469.
[ 2] 　黄泰康.常用中药成分与药理手册 [ M] .北京:中国医药科技出版社 , 1994.775.
[ 3] 　南京药学院中草药学编写组.中草药学(下册)[ M] .南京:江苏科学技术出版社 , 1980.1114.
[ 4] 　彭振声.中医治疗血管瘤 1例 [ J] .中西医结合肝病杂志 , 1994, 4(2):36.
[ 5] 　季宇彬.抗癌中药药理与应用 [ M] .哈尔滨:黑龙江科学技术出版社 , 1999.510-512.
[ 6] 　高永琳 , 高　冬 ,林德馨 ,等.半边莲对 Hela细胞钙信号系统的影响 [ J] .福建中医学院学报 , 2002, 12(3):23-26.
[ 7] 　高　冬 , 刘如玉 ,张振林.半边莲通过钙信号诱导肝癌细胞凋亡的实验研究 [ J] .福建中医学院学报 , 2006, 16(6):32 -
34.
[ 8] 　范秀珍.半边莲生物碱和山梗菜碱对人血管内皮细胞保护作用的机制研究 [ D] .山东大学博士学位论文 google网站 ,
2005, 10.
[ 9] 　范秀珍 , 王婧婧 ,任冬梅 ,等.半边莲生物碱对内皮素诱导损伤的人血管内皮细胞纤溶系统的影响 [ J] .山东大学学报(医
学版), 2005, 43(10):898-901.
[ 10] 　李　杰 ,刘玉琴.MTT法在肿瘤研究中的改良及应用进展 [ J] .中国肿瘤临床 , 1998, 25(4):312-313.
[ 11] 　司徒镇强 ,吴军征.细胞培养 [ M] .西安:世界图书出版西安公司 , 1996.
[ 12] 　李　昊 ,杨惠萍 , 杨　凡 ,等.藤梨根对胃癌细胞的抑制作用的实验研究 [ J] .河北中医 , 2004(4):314-314.
[ 13] 　李建萍 ,邸丽芝 , 许　和.粉防己中非酚性生物碱的提取与分离 [ J] .中草药 , 2002, 5:402.
[ 14] 　宝　鸾.动物细胞培养技术 [ M] .广州:华南理工大学出版社 , 2003.
(下转第 332页)
332　 西华师范大学学报(自然科学版) 2007年
[ 4] 　数据挖掘讨论组.数据挖掘资料汇编 [ Z] .htp://www.dmgroup.org.cn/zs20.htm.
[ 5] 　杨新武.遗传归纳逻辑程序设计技术研究 [ D] .北京工业大学博士论文 , 2003, 5-6.
[ 6] 　黄明新 , 刘椿年.基于归纳逻辑程序设计的特异规则挖掘 [ J] .北京工业大学学报 , 2003.
[ 7] 　陆建江.加权关联规则挖掘算法的研究 [ J] .计算机研究与发展 , 2002, 39(1):81-86.
[ 8] 　毛国君 , 刘椿年.基于项目序列集操作的关联规则挖掘算法 [ J] .计算机学报 , 2002.25(4):17-22.
MethodofUpdatedAsociationRules
YANGMei-juan1 , CHENYa-jun2 , CHENXiao-juan1
(1.CollegeofComputer, ChinaWestNormalUniversity, Nanchong637002, China;
2.ColegeofPhysicsandElectronicInformation, ChinaWestNormalUniversity, Nanchong637002, China)
Abstract:Indatamining, IUAalgorithmhasaproblemthatthefrequentitemsetsarenotmininedcompletely, so
thatsomessociationrulesarenotgenerated.Afteranalyzinganddiscussingthereasonforit, animprovedalgorithm
HIUAisproposed.
Keywords:associationrules;updatingalgorithm;datamining
(上接第 313页)
ExtractionofAlkaloidsfromLobeliachinensisLourandTheirInhibitory
EfectsonGrowthofStomachCancerCels
SUJun, TANXing, LIJin-tao, YANGJun
(ColegeofLifeSciences, ChinaWestNormalUniversity, Nanchong, 637002, China)
Abstract:RoughalkalidswereextractedfromLobeliachinensisLout, andtheirinhibitoryefectsweretestedonthe
growthofcancercels.TheresultsshowedthatthealkaloidsofL.chinensishadtheinhibitoryefectsonthegrowth
ofcancercelBG-380.Theinhibitionaggravatedwiththeincreaseofalkaloidconcentration.Asthe300mg·L-1
ofalkaloidsaddedintotheculturedcelBG-38, theinhibitoryrateraisedto85.6%.Itwasfoundthattheinhibi-
toryrateincreasedwiththeprolongofalkaloidtreated, andtheratewasrecordedas90.3%on16 hsoftreatment,
howevertheratedecreasedtosomeextentwithfurthertreatement.
Keywords:LobeliachinensisLour;alkaloid;stomachcancercels;inhibitoryefects