全 文 ：Chinese Journal of New Drugs 2015，24(24)
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中国新药杂志 2015 年第 24 卷第 24 期
［基金项目］ 国家药典委员会 2015 年版《中华人民共和国药典》资
助项目;国家工信部中药材扶持资助项目
［作者简介］ 苏聪，男，硕士研究生，主要从事中药活性成分研究与
新药开发。联系电话:15210690249，E-mail:suerzong@ 163． com。
［通讯作者］ 史社坡，男，副研究员，硕士生导师，主要从事中药活性
成分生物合成和中药质量控制研究。联系电话: (010)64286350，E-
mail:shishepo@ 163． com。
·实验研究·
HPLC法测定地桃花中银锻苷的含量
苏 聪1，2，杨万青1，2，李 彬1，2，张 旭1，2，高博闻1，2，屠鹏飞1，史社坡1
(1 北京中医药大学中药现代研究中心，北京 100029;2 北京中医药大学中药学院，北京 100102)
［摘要］ 目的:建立高效液相色谱(HPLC)法测定地桃花中银锻苷的含量。方法:采用 Agilent Eclipse
XDB C18色谱柱(250 mm ×4． 6 mm，5 μm);流动相为乙腈-水，梯度洗脱;流速为 1． 0 mL·min
－1;柱温为 25 ℃;
检测波长为 320 nm。结果:银锻苷在进样量为 0． 02 ～ 1． 00 μg 范围内，进样量与峰面积线性关系良好(r =
0. 999 5);最低检出限为 0． 74 ng;平均回收率为 98． 87%(相对标准偏差 ＲSD 为 1． 48%，n = 6)。结论:本方
法简便准确、快速可靠，对地桃花药材的质量控制具有参考价值。
［关键词］ 地桃花;银锻苷;高效液相色谱法;含量测定
［中图分类号］ Ｒ927． 2 ［文献标志码］ A ［文章编号］ 1003 － 3734(2015)24 － 2865 － 03
Quantification of tiliroside in Urena lobata L． by HPLC
SU Cong1，2，YANG Wan-qing1，2，LI Bin1，2，ZHANG Xu1，2，
GAO Bo-wen1，2，TU Peng-fei1，SHI She-po1
(1 Modern Ｒesearch Center for Traditional Chinese Medicine，Beijing University of Chinese Medicine，Beijing 100029，
China;2 School of Chinese Materia Medica，Beijing University of Chinese Medicine，Beijing 100102，China)
［Abstract］ Objective:To establish an HPLC method for quantification of tiliroside in Urena lobata L．
Methods:The separation was performed on an Agilent Eclipse XDB C18 column (250 mm ×4． 6 mm，5 μm)with a
gradient elution of acetonitrile and water as mobile phase． The column temperature was 25 ℃ and the detection
wavelength was set at 320 nm． Ｒesults:A good linear correlation was observed within the range of 0． 02 ～ 1． 00 μg
for tiliroside (r = 0． 999 5) ，the minimum detection limit was 0． 74 ng，and the average recovery was 98． 87%
(ＲSD =1． 48%，n = 6)． Conclusion:The method is simple，accurate and rapid． It could be used for the quality
control of Urena lobata L．
［Key words］ Urena lobata L．;tiliroside;HPLC;content quantification
地桃花为锦葵科植物肖梵天花 Urena lobata L．
的干燥地上部分，具有祛风利湿、清热解毒的功效，
民间用于感冒发热、风湿痹痛、水肿、淋病、白带、吐
血、外伤出血等［1］。现代药理学研究表明，地桃花
具有显著的抗菌、抗氧化等作用［2 － 4］。地桃花中含
有黄酮、香豆素、木脂素等，其中以黄酮类成分为
主［5 － 10］。地桃花在民间使用广泛，亦为 2010 年版
《中华人民共和国药典》新增成方制剂花红片、花红
颗粒的主要组成之一。但其目前没有完善的质量标
准，不利于该药材及其成药的质量控制。
黄酮及黄酮苷为地桃花的主要化学成分，其中
银锻苷为地桃花中黄酮类成分的代表，在地桃花中
含量相对较高，稳定性良好。同时，银锻苷具有显著
的降血糖、抗氧化等药理作用［11］，因此，本研究选用
银锻苷作为定量指标，用 HPLC 法对不同产地地桃
花药材进行分析与评价，为地桃花药材质量控制提
供参考。
仪器与试药
Agilent 1260 高效液相色谱仪(美国 Agilent 公
司);Agilent Eclipse XDB C18色谱柱(250 mm ×4． 6 mm，
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5 μm) ;UP500H超声波清洗器(南京垒君达超声电
子设备有限公司) ;METTLEＲ XS105 十万分之一天
平(梅特勒-托利多仪器有限公司) ;Milli Q超纯水
机(Millipore 公司) ;AF 60A 粉碎机(天津市泰斯
特仪器有限公司) ;GB /T600 药典筛(新乡市同心机
械有限责任公司)。
10 批地桃花药材采自广西地区，经北京中医药
大学屠鹏飞教授鉴定为地桃花 Urena lobata L．干燥
地上部位;对照品银锻苷(批号:20316-62-5，上海月
旭材料科技有限公司，纯度 ＞ 98%)。乙腈(色谱
纯，美国 Fisher公司) ;甲醇(分析纯，北京化工厂) ;
水为超纯水。
方法与结果
1 对照品溶液的制备
取银锻苷对照品适量，精密称定，加 70%甲醇
溶解，制成浓度为 1． 0 mg·mL －1的溶液，即得。
2 供试品溶液的制备
称取地桃花粉末(过 60 目筛)1． 0 g，精密称定，
置 100 mL 具塞锥形瓶中，精密加入 70% 甲醇
25 mL，称定重量，85 ℃回流提取 90 min，放冷，再次
称定重量，70%甲醇补足失重，摇匀，滤过，取续滤
液，用 0． 22 μm的微孔滤膜滤过，即得。
3 色谱条件
色谱柱:Agilent Eclipse XDB C18 (250 mm ×
4． 6 mm，5 μm) ;流动相:乙腈-水，梯度洗脱，0 ～
5 min，15%→22%乙腈;5 ～ 8 min，22%→27%乙腈，
8 ～ 25 min，27% →40% 乙腈，25 ～ 30 min，40% →
50%乙腈;流速:1． 0 mL·min －1，检测波长:320 nm，
柱温:25 ℃;进样量:20 μL。在上述色谱条件下，供
试品及对照品的 HPLC色谱图见图 1 和图 2。
图 1 地桃花(编号:DTH1 广西梧州)HPLC图谱
图 2 银锻苷 HPLC图谱
4 线性关系的考察
精密量取银锻苷对照品溶液适量，加 70%甲醇
分别制成浓度为 0． 050，0． 040，0． 030，0． 020，0. 015，
0． 010，0． 001 mg·mL －1的溶液，按“3”项色谱条件进
行测定，记录峰面积，以峰面积(A)为纵坐标，对照
品浓度(C，mg·mL －1)为横坐标，绘制标准曲线，并
进行线性回归，结果银锻苷在浓度为 0． 001 ～ 0． 050
mg·mL －1(即进样量为 0． 02 ～ 1． 00 μg)的范围内线
性关系良好，回归方程为:A = 49 401C + 22． 87(r =
0． 999 5)。
5 检测限与定量限
将对照品溶液逐步稀释后按“3”项色谱条件进
行测定，以色谱图中信噪比(S /N)为 3 时的进样量
为最低检测限(limit of detection，LOD) ，信噪比
(S /N)为 10 时的进样量为最低定量限(limit of
quantitation，LOQ)。结果表明，银锻苷的检测限为
0． 74 ng，定量限为 3． 70 ng。
6 精密度
6． 1 日内精密度 吸取供试品溶液(编号:DTH1)
20 μL，连续进样 6 次，按“3”项色谱条件进行测定，
记录色谱峰面积，结果银锻苷峰面积的 ＲSD 值为
0. 26%，仪器日内精密度良好。
6． 2 日间精密度 精密吸取供试品溶液(编号:
DTH1)20 μL，按“3”项下色谱条件进行测定，每日
进样 6 次，连续测试 3 d，记录色谱峰的峰面积，结果
银锻苷的峰面积 ＲSD值为 0． 65%，仪器日间精密度
良好。
7 重复性
取药材粉末(编号:DTH1)共 6 份，按“2”项下
方法制备，按“3”项下色谱条件进行测定，记录色谱
峰面积，根据色谱峰面积计算出银锻苷的含量，结果
银锻苷含量的 ＲSD值为 1． 68%，重复性良好。
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8 稳定性
取药材粉末(编号:DTH1)1 份，按“2”项下方法
制备，分别于 0，2，4，8，12，24 h 进样，按“3”项下色
谱条件进行测定，记录色谱峰的峰面积，银锻苷峰面
积的 ＲSD值为 0． 50%，供试品溶液在 24 h 内稳定
性良好。
9 加样回收率
取已知含量的药材粉末(编号:DTH1，银锻苷含
量:0． 518 mg·g －1)约 0． 5 g 共 6 份，精密称定，分别
加入银锻苷对照品约 0． 259 0 mg，按“2”项下方法制
备，按“3”项下色谱条件进行测定，计算银锻苷的加
样回收率，结果见表 1。
表 1 银锻苷加样回收率测定结果 n = 6
加入量
/mg
样品含量
/mg
测定值
/mg
回收率
/%
平均回收
率 /%
ＲSD
/%
0． 259 6 0． 259 1 0． 518 1 100． 16 98． 87 1． 48
0． 261 7 0． 259 3 0． 540 8 96． 34
0． 259 2 0． 259 1 0． 522 9 99． 12
0． 261 8 0． 259 2 0． 527 6 98． 75
0． 258 2 0． 259 2 0． 525 5 98． 45
0． 259 0 0． 259 0 0． 515 9 100． 41
10 含量测定
取地桃花药材粉末，按“2”项下方法制备样品
溶液，按“3”项下色谱条件进行测定，计算各供试品
中银锻苷的含量，结果见表 2。
表 2 不同批次地桃花中银锻苷的含量测定结果
n = 3
药材编号 来源 银锻苷含量 /%
DTH1 广西梧州 0． 052
DTH2 广西梧州 0． 059
DTH3 广西苍梧 0． 023
DTH4 广东茂名 0． 064
DTH5 广西南宁 0． 045
DTH6 广西梧州 0． 021
DTH7 广西平埌 0． 029
DTH8 广西岑溪 0． 016
DTH9 广西藤县 0． 009 6
DTH10 广西南宁 0． 011
讨 论
1 分析方法的选择
通过对供试品的提取方法(超声、加热回流) ，
提取溶剂(50%甲醇、70%甲醇、90%甲醇、100%甲
醇) ，提取时间(60，90，120，180 min)等因素的考察，
确定 70%甲醇 25 mL，加热回流提取 90 min，对目标
化合物的提取效果最好。通过对色谱柱、流动相及
柱温等色谱条件的考察，确定最佳色谱条件。
2 不同批次地桃花中银锻苷的含量
从测定结果来看，不同批次地桃花药材中银锻
苷的含量差别较大，如从广西藤县和南宁的两批药
材中，银锻苷的含量仅为 0． 01%，而广东茂名的地
桃花药材中，银锻苷的含量高达 0． 06%。造成这种
结果的原因可能是由于地桃花药材以地上部分入
药，不同批次药材地上部分的茎叶比不同，造成银锻
苷的含量差别较大。因此，对于地桃花叶子及茎枝
的化学成分及药理活性进行分别研究，比较二者之
间的差异，进一步明确地桃花的入药部位，对于其临
床用药可能更有意义。
［ 参 考 文 献 ］
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中国医药科技出版社，1998:1949．
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编辑:周卓 /接受日期:2015 － 09 － 18