全 文 ：白簕叶不同极性部位的体外抗氧化活性分析
杨慧文1，张旭红1，陈健媚1，潘育方1，*，钱婧2
（1.广东药学院药科学院，广东广州 510006；2.扬州工业职业技术学院文理系，江苏扬州 225000）
摘 要：利用不同溶剂对白簕叶各极性部位进行提取、显色鉴定和薄层色谱分析，并考察其中乙酸乙酯、正丁醇和水
3个不同极性部位提取液的体外抗氧化活性，通过测定其铁还原力、对 DPPH·的清除率、总抗氧化力，筛选出主要的
抗氧化活性部位。结果表明，白簕叶 3个不同极性部位的成分的种类和含量差别均较大，体外抗氧化结果显示各部分
体外抗氧化活性也存在较大差异，其中正丁醇部位抗氧化活性最高。
关键词：白簕叶；黄酮；抗氧化活性
Research on Antioxidant Activity of Different Fractions of Acanthopanax trifoliatus Leaves in Vitro
YANG Hui-wen1，ZHANG Xu-hong1，CHEN Jian-mei1，PAN Yu-fang1，*，QIAN Jing2
（1. College of Pharmacy，Guangdong Pharmaceutical University，Guangzhou 510006，Guangdong，China；
2. Department of Arts and Science，Yangzhou Polytechnic Institute，Yangzhou 225000，Jiangsu，China）
Abstract：To study the antioxidant activity of different fractions from Acanthopanax trifoliatus leaves in vitro，
the leaves were extracted and separated into three parts with different polarity. Three methods including 2，2-
diphenyl-1-picrylhyd-razyl radical scavenging assay， ferric reducing power and total antioxidant power were
performed to detect the antioxidant activity. The results showed that among the three fractions， n-butanol layer
exhitbited the strongest antioxidant activitie comparing with ethyl acetate， and water layer.
Key words：Acanthopanax trifoliatus leaves； flavonoid； antioxidant activity
作者简介：杨慧文（1983—），女（汉），实验师，硕士，主要从事药学及
新药开发的研究
*通信作者：潘育方（1966—），男，教授，主要从事药物新剂型及安全
性评价的研究。
DOI：10.3969/j.issn.1005-6521.2015.03.004
白簕 Acanthopanax trifoliatus（Linn.）Merr.，为五
加科（Araliaceae）五加属（Acanthopanan）攀援状灌木，
又称鹅掌簕、刺三加、白刺尖，分布于两广、福建、云南、
贵州等地，东南亚如泰国、越南等也有分布[1]。白簕味
苦、辛、凉，具有清热解毒、祛风利湿、止咳平喘、散瘀止
痛之功效[2-3]，其主要化学成分为槲皮甙、黄酮、多糖、
咖啡酰奎宁酸等[4-6]。经研究，白簕具有消炎抑菌、防龋
固齿、治疗新生儿湿疹等作用[7-9]。五加属植物多有抗
氧化作用，刺五加可抑制鼠巨噬细胞中一氧化氮的产
生[10]，其茎提取物在四氯化碳中毒大鼠模型中具有抗
氧化功效[11]。而白簕同为刺五加属，其抗氧化功效，尤
其是关于其活性部位的筛选，少有研究。
因此，本实验通过测定铁还原力、对 DPPH 的清
除率、总抗氧化力[12-14]，将测定结果与维生素 C进行对
比，从三个方面研究白簕叶不同极性部位的抗氧化活
性，筛选抗氧化活性部位，为进一步研究开发白簕提
取物的抗氧化功效提供理论基础。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 主要试剂
白簕茎购自恩平响山簕菜茶厂（经广东药学院中
药学院中药资源系刘基柱副教授鉴定为五加属植物
白簕，标本保存于广东药学院中药学院标本室）、镁粉
（40目~90目）：鹤壁市江浪金属有限公司；DPPH.（分
析纯）：美国 Sigma公司；维生素 C（VC）（分析纯）：天津
市石英钟厂霸州市化工分厂；三氯化铝、磷酸三钠、钼
酸铵、香草醛、三氯化铁、硫酸、无水乙醇、正丁醇等均
为分析纯。
1.1.2 主要仪器
KQ5200超声仪：东莞市科桥超声波设备有限公
司；XW-80A微型漩涡混合仪：上海沪西分析仪器厂；
食品研究与开发
Food Research And Development
2015年 2月
第 36卷第 3期 基础研究
14
HH-2恒温水浴锅：常州澳华仪器有限公司；RE-52AA
旋转蒸发仪：上海亚荣生化仪器厂；SHZD-DⅢ循环式
水泵：巩义市予华仪器有限责任公司；LD4-2A低速离
心机：北京医用离心机厂；UV-1200紫外可见光分光
光度计：上海美谱达仪器有限公司；万分之一天平：
FA2104A上海精天电子仪器有限公司。
1.2 方法
1.2.1 样品的制备
40 g白簕叶粉碎，过 60目筛。200 mL石油醚在
50 ℃下搅拌提取 1 h，抽滤，反复提取，直至提取液近
于无色，将叶渣自然风干；再用 200 mL氯仿在 40 ℃下
提取 1 h，更换提取溶剂，共提 8次，直至提取液近于无
色，将叶渣自然风干。
用 200 mL 乙酸乙酯在 50 ℃下搅拌提取该叶渣
1 h，收集提取液，重复数次直至乙酸乙酯提取液颜色
很浅，合并提取液，在 40 ℃下减压旋蒸，得白簕叶乙酸
乙酯部位 50 mL。
自然风干叶渣后，200 mL 95 %乙醇超声提取
60 min，每次超声 20 min，过滤，重复操作，至乙醇提取
液近于无色，合并提取液，40 ℃下减压旋蒸浓缩，用蒸
馏水少量多次复溶，得白簕叶水提部位 100 mL。
用 50 mL水饱和正丁醇对上述水溶液进行萃取，
萃取 3次，合并萃取液，得正丁醇部位 150 mL。
将上述 3个不同极性部位提取液在 4 ℃下密封保
存，备用。
1.2.2 显色反应
采用显色反应的方法，对 1.2.1项下 3个不同极
性部位提取液进行定性鉴定。
1.2.2.1 盐酸-镁粉反应
分别取白簕叶各极性部位提取液 2 mL于不同试
管中，各加入适量乙醇、少许镁粉振摇，滴加几滴浓盐
酸，观察颜色反应。
1.2.2.2 碱性试剂显色反应
取两张滤纸，均点上白簕叶各极性部位提取液，
其中一张用浓氨水熏，与另外一张对比观察颜色变
化，于空气中放置一段时间后，再观察颜色变化。
1.2.2.3 铝盐反应
分别取白簕叶各极性部位提取液 2 mL于不同试
管中，各加入 2滴 1 %AlCl3醇溶液，与对照管对比观
察颜色变化。用毛细管取样点于硅胶板上，于紫外灯
下观察荧光。
1.2.2.4 Molish反应
分别取白簕叶各极性部位提取液 2 mL于不同试
管中，各加入适量乙醇，2滴 α萘酚溶液，斜置试管，沿
管壁加入浓硫酸约 1 mL，静置，观察二层溶液界面的
变化。
1.2.2.5 三氯化铁反应
分别取白簕叶各极性部位提取液 4 mL于不同试
管中，各加入 1滴 5 %三氯化铁溶液，与对照管对比观
察颜色变化。
1.2.2.6 三氯甲烷-浓硫酸检验（Salkowski反应）
分别取白簕叶各极性部位提取液 1 mL于不同试
管中，各加入 1 mL三氯甲烷混匀，沿管壁加入等体积
浓硫酸，与对照管对比观察颜色的变化。
1.2.3 聚酰胺薄层色谱
取乙酸乙酯、正丁醇和水这 3个部位的浓缩液于
相同的聚酰胺薄膜上点样，每个样品点两个点。使用
正丁醇-乙酸-水-石油醚（4 ∶ 1 ∶ 1 ∶ 2）系统进行展开，
于紫外灯下观察展开效果。用浓氨水作为显色剂，同
样在紫外灯下观察荧光效果。
1.2.4 体外抗氧化活性的测定
取一定体积白簕叶 3个不同极性部位提取液各
自减压旋干后，用 5 mL 70 %乙醇复溶，分别得到乙酸
乙酯部位待测液（32、80、160、240、320 mg/mL）5个浓
度梯度，水部位待测液（13、17、24、40、60 mg/mL）5 个
浓度梯度，以及正丁醇部位待测液（3.0、3.9、5.4、9.0、
13.5 mg/mL）5个浓度梯度。其中浓度代表每毫升提取
液相当于原药材的质量（mg）。
按照以下操作评价各部分样品的总抗氧化力和
铁还原力、对 DPPH·自由基清除率。制备浓度为 20、
30、40、50、60 mg/mL的 VC溶液作对比试验。
1.2.4.1 铁还原力的测定
取待测液 1 mL置于试管中，加入 2.5 mL磷酸缓
冲液（0.2 mol/L，pH=6.6）和 2.5 mL 1 %铁氰化钾，放入
50℃水浴锅中 20 min后取出急速冷却，加入 10 %三氯
乙酸溶液 2.5 mL。将上述溶液离心 10 min（3 000 r/min），
取上清液 5 mL。再加入 4 mL蒸馏水及 1 mL 0.1 %FeCl3
混匀，静置 10 min后测定吸光值（λ=700 nm），吸光度
值越大表明还原力越强[12]。
1.2.4.2 总抗氧化能力测定
取待测液 1mL置于试管中，依次滴加 1mL0.6mol/L
硫酸溶液、1.5 mL 28 mmol/L 磷酸钠、1.5 mL 4 mmol/L
钼酸铵，随后向试管中加入 0.6 mL蒸馏水，摇匀。95 ℃
水浴 90 min，取出急速冷却。另取一支试管，加入除待
测液外的上述溶液，作为空白对照。在 λ=695 nm测定
吸光度值。
1.2.4.3 对 DPPH．自由基清除率的测定
取 2.0 mL待测液、2 mL 0.15 mmol/L的 DPPH·乙
杨慧文，等：白簕叶不同极性部位的体外抗氧化活性分析基础研究
15
醇溶液加入试管，充分混匀后静置 30 min。以 70 %乙
醇作为空白对照，在 517 nm下测定样品吸光度。根据
公式计算出 3个不同极性部位提取液对 DPPH·的清
除率[13]。
DPPH·自由基的清除率=[1－（A－A1）/A0]×100 %
式中：A0为 2.0 mL DPPH·溶液+2.0 mL 70 %乙醇
吸光度值；A 为样品吸光度值；A1为 2.0 mL 待测液+
2.0 mL 70 %乙醇吸光度值。
1.2.5 数据处理
各组实验结果以 x ± s表示，采用 SPSS17.0软件对
数据进行处理，采用方差分析及相关性分析比较组间
差异，P<0.05为显著性差异，P<0.01为极显著性差异。
2 结果
2.1 显色反应
对白簕叶不同极性部位提取液进行七个显色反
应，从而定性鉴定不同部位中所含的物质种类，其结
果如表 1所示。
盐酸-镁粉反应是检查样品中是否含有黄酮类化
合物的最常用方法之一。由于黄酮具有邻酚羟基，可
与镁离子形成红色或橙色络合物。表中结果显示除正
丁醇部位提取液显现红色现象外，其余无明显反应，
说明正丁醇部位很可能含有黄酮类物质。
碱液反应是在日光及紫外光下，通过纸斑反应，
观察样品用碱性试剂处理后的颜色变化情况，对于鉴
别黄酮类化合物有一定意义。其结果显示，正丁醇部
位斑点颜色由淡黄色变为黄色，在空气中放置，黄色
逐渐褪去，进一步验证了正丁醇部位黄酮类化合物的
存在。
同样，铝盐反应也是较为经典的黄酮鉴别反应，
结果显示正丁醇部位具有黄色荧光，说明该部位黄酮
类化合物的存在。
Molish反应常用于糖类和苷的检测反应。实验结
果发现，正丁醇部位和水提部位液在两层溶液交界面
均出现棕色环，乙酸乙酯部位不存在此现象，说明正
丁醇部位和水提部位可能含有苷类物质。
三氯化铁反应常用来判断酚羟基的有无，酚羟基
可与三氯化铁中 Fe3+形成配合物，显蓝紫色。香豆素类
常含有酚羟基，可与三氯化铁形成绿色或墨绿色沉
淀。实验现象显示，经三氯化铁试验，正丁醇部位显深
蓝色，水提部位显浅墨绿色，乙酸乙酯部位显浅绿色，
说明正丁醇部位、水提部位和乙酸乙酯部位可能均含
有不同浓度的酚羟基。
Salkowski反应用于鉴别甾体、三萜类化合物阳性
现象为硫酸层呈现红色或者蓝色，氯仿层有绿色荧
光。经 Salkowski反应后，正丁醇部位的氯仿层有绿色
荧光出现，而两层溶液的交接出呈红色；水提部位的
氯仿层和两溶液交界处分别出现浅绿色荧光和浅红
色，可初步判断正丁醇部位和水提部位可能均含有不
同浓度的三萜类或甾体类化合物。
2.2 聚酰胺薄层色谱
为进一步验证乙酸乙酯、正丁醇和水这 3个不同
极性部位的成分，对 3个部位进行薄层鉴定，结果如下
图 1。
由图可见，3个部位荧光的位置和颜色都有所不
同，同一区段不同部位的荧光强弱也不同，说明 3个部
位所含的成分有明显区别，但也存在一定的交叉。
2.3 白簕叶各极性部位的铁还原力分析
还原力大小常作为评价抗氧化性强弱的指标之
一，具有较强还原力的样品可使 Fe3+还原为 Fe2+。本实
验测定不同极性部位提取液的还原力，与 VC进行比
较，结果见图 2。
样品还原铁氰化钾后，与 Fe3+反应生成普鲁士蓝，
生成量越多，吸光度越大，说明样品还原力越强。由图
表 1 白簕叶不同极性部位提取液显色反应结果
Table 1 Chromogenic reaction of different fractions from
Acanthopanax trifoliatus（Linn.）Merr. leaves
显色反应类型 正丁醇部位 水提部位 乙酸乙酯部位
盐酸-镁粉反应 + - -
碱性试剂显色反应 + - -
铝盐反应 + - -
Molish反应 + + -
三氯化铁反应 + + +
Salkowski反应 + + -
图 1 聚酰胺薄层色谱结果
Fig.1 Result of polyamide TLC chromatogram of different
fractions from Acanthopanax trifoliatus（Linn.）Merr. leaves
注：图中从左往右分别为乙酸乙酯部位，正丁醇部位和水部位。
注：“+”代表阳性；“-”代表阴性。
杨慧文，等：白簕叶不同极性部位的体外抗氧化活性分析 基础研究
16
2-A可知，白簕叶各极性部位和 VC均表现出不同程度
的铁还原力，比较图 2-A各曲线可得，相同浓度下，正
丁醇部位的铁还原力最强，水提部位次之，乙酸乙酯
部位的铁还原力并不显著。在吸光度为 0.33~0.37之
间时，正丁醇、水提、乙酸乙酯部位和 VC的样品浓度分
别为 3、13、320、40 mg/mL。同样铁还原力强度对应的
白簕叶不同极性部位提取液浓度差异较大，该现象可
能是因为各部位所含具有铁还原力的物质种类不同
或含量不同造成的。
将正丁醇、水提部位以及 VC三种样品的铁还原
力比较得图 2-B，从图中可见，随着浓度的增加，正丁
醇和水提部位样品的吸光度均随之增加，表明样品的
铁还原力与浓度在试验范围内存在较好的相关性，铁
还原力具有明显的量效关系。正丁醇和水提部位的铁
还原力在试验范围内均高于 VC。
2.4 白簕叶各部位的总抗氧化力
采用改良后的 Prieto法测定白簕叶各部位抗氧化
力，其原理是磷钼酸铵被具有抗氧化性的物质还原，
得到最大吸收波长为 695 nm的磷钼络合物。物质还原
活性越强，即抗氧化性越强，生成物吸光度越大[15]，测
定结果如图 3。
图 3结果显示，白簕叶不同极性部位对磷钼酸铵
均具有较好的还原能力。随着样品浓度的增加，各产
物吸光度均逐渐增大，说明浓度增加该还原能力逐渐
增强，各极性部位的抗氧化力呈现了良好的量效关
系。与经典抗氧化剂 VC相比，各极性部位对磷钼酸铵
的还原能力均强于 VC。在浓度为 40 mg/mL以上时，3个
极性部位的抗氧化能力强弱依次为，正丁醇部位＞水
提部位＞乙酸乙酯部位＞VC。
2.5 白簕叶各部位对 DPPH·自由基的清除率测定
DPPH·在是一种稳定的以氮为中心的自由基，
具有孤对电子，易自行结合成为稳定的分子；其醇溶
液呈紫色，最大吸收波为 517 nm。当加入抗氧化剂
时，其单电子被配对，溶液颜色变浅，导致其吸光值下
降。根据吸光度值的降低计算清除率，清除率越大，
抗氧化性越强，从而评价样品的抗氧化能力[16]，结果
如图 4。
由图 4-A可得，白簕叶各极性部位对 DPPH·均具
有较好的清除能力，对 DPPH·的清除率随着浓度的增
加而逐渐增大，但当浓度升高到一定值时，清除率上
升明显缓慢或不再上升。由图 4-B可得，在浓度低于
9 mg/mL时，正丁醇部位对 DPPH·的清除具有较好的
量效关系。当浓度到达试验范围最高值时，正丁醇、水
和乙酸乙酯三个部位对DPPH·的清除率分别为 97.40 %、
86.05 %和 90.10 %，与 VC的最高清除率 92.43 %均较
为接近。其中正丁醇部位对 DPPH·的清除能力，无论
是最佳清除效果还是低浓度时的清除率，均高于经典
抗氧化物 VC。而乙酸乙酯和水提部位在低浓度时的清
除能力和最佳清除效果均低于 VC。总体来说，各样品
的清除能力依次为，正丁醇部位＞VC＞水提部位＞乙酸
乙酯部位。该现象可能由于正丁醇部位中对 DPPH·有
清除能力的物质活性较强或含量较高。
图 2 白簕叶不同极性部位样品铁还原力的测定结果
Fig.2 Reducing power of Fe3+ of different polarity fractions from
Acanthopanax trifoliatus（Linn.）Merr. leaves
2.0
1.8
1.6
1.4
1.2
1.0
0.8
0.6
0.4
0.2
0
吸
光
度
0 100 400
浓度/（mg/mL）
200 300
VC
乙酸乙酯
正丁醇
水
2.0
1.8
1.6
1.4
1.2
1.0
0.8
0.6
0.4
0.2
0
吸
光
度
0 20 80
浓度/（mg/mL）
40 60
VC
正丁醇
水
A
B
2.0
1.8
1.6
1.4
1.2
1.0
0.8
0.6
0.4
0.2
0
吸
光
度
0 50 350
浓度/（mg/mL）
100 150
VC
乙酸乙酯
正丁醇
水
200 250 300
图 3 白簕叶各极性部位的总抗氧化力
Fig.3 Total antioxidant activity of different polarity fractions from
Acanthopanax trifoliatus（Linn.）Merr. leaves
杨慧文，等：白簕叶不同极性部位的体外抗氧化活性分析基础研究
17
110
100
90
80
70
60
50
40
30
20
吸
光
度
0 100 400
浓度/（mg/mL）
200 300
VC
乙酸乙酯
正丁醇
水
A
注：图 4-B为图 4-A中左半部三条曲线的放大图。
3 讨论
五加属（Acanthopanan）植物是一类药用价值较高
的植物，大多分布在亚洲，其中的刺五加更是有“木本
人参”的称号，临床上具有益气健脾、补肾安神等功
效[17]。白簕是五加属中的一种，由于其兼具营养价值和
药用价值，在产地已成为日常生活的特色蔬菜之一。本
文利用溶剂萃取法对白簕叶不同极性部位做初步分
离，并对不同部位的成分及抗氧化功效进行了研究。
本实验分离得到白簕叶的乙酸乙酯、正丁醇，及
水提部位，对 3个部位进行显色鉴定和聚酰胺薄层色
谱鉴定结果表明，3个部位中所含成分种类和含量均
有不同，在成分种类上有少许交叉。
对 3个部位体外抗氧化实验结果表明，3个部位
均具有不同程度的体外抗氧化活性，且三者的铁还原
力和总抗氧化力均与浓度之间存在较好的相关性，有
量效关系。正丁醇部位对 DPPH·清除率在低浓度时具
有量效关系，随着浓度的逐渐升高，到达 9 mg/mL以上
时，清除率不再增加。3个部位的体外抗氧化活性强弱
依次为：正丁醇部位＞水提部位＞乙酸乙酯部位，说明
正丁醇部位具有体外抗氧化力的物质活性较强或含
量较高。VC是一种公认的经典抗氧化物质，具有很强
的抗氧化能力，实验中取 VC进行相比，发现正丁醇部
位的总抗氧化力、铁还原力以及对 DPPH·清除率均明
显高于 VC；而水提部位除 DPPH·清除率与 VC接近，其
铁还原力和总抗氧化力均高于 VC。结果提示正丁醇部
位和水提部位是白簕叶中抗氧化活性的主要部位，值
得重点进一步研究，可通过进一步分离分析，确定白
簕叶抗氧化活性的主要物质基础。
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收稿日期：2013-12-28
100
95
90
85
80
75
70
65
60
吸
光
度
0 20 80
浓度/（mg/mL）
40 60
VC
正丁醇
水
图 4 白簕叶不同极性部位样品对 DPPH·清除率的测定结果
Fig.4 Scavenging capacities for DPPH·of different polarity
fractions from Acanthopanax trifoliatus（Linn.）Merr. Leaves
B
杨慧文，等：白簕叶不同极性部位的体外抗氧化活性分析 基础研究
18