全 文 ：收稿日期:2005-03-14;　修订日期:2005-11-26
作者简介:付　明(1966-),女(汉族),湖北荆门人 ,现任怀化学院系生物
工程系高级讲师 ,主要从事药用植物的开发与利用研究.
苍耳与灰白毛莓的体外抑菌作用对比研究
付　明 , 刘胜贵 , 伍贤进
(怀化学院 ,湖南 怀化　418008)
摘要:目的 比较苍耳和灰白毛莓的体外抑菌作用以及二者配伍制剂的抑菌效果。方法 采用滤纸片法测定抑菌圈直
径 , 二倍稀释法测定最低抑菌浓度。结果 灰白毛莓的抑菌范围较苍耳广 ,且灰白毛莓全株对金黄色葡萄球菌 、鸡沙门氏
菌的抑制作用较苍耳强 , 苍耳的茎叶对铜绿假单胞菌的抑制作用较灰白毛莓强。结论 灰白毛莓的抑菌范围比苍耳的抑
菌范围更广 , 二者的配伍制剂有协同作用。
关键词:苍耳;　灰白毛莓;　体外抑菌作用
中图分类号:R285.5　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2006)02-0200-02
BacteriostasticComparisonofX.sibiricumPatrinandR.tephrodesHanceinVitro
FUMing, LIUSheng-gui, WUXian-jin
(DepartmentofBioengineering, HuaihuaUniversity, Huaihua418008, China)
Abstract:ObjectiveTheexperimentteststhebacteriostasticactivityofdifferentorgansofXanthiumsibiricumpatrin, RubustephrodesHanceandtheirorgansdiferentcompatibilityofmedicines.MethodsOneistodeterminetheinhibitionzonediameters
withfilterpaper.Theotherisminimuminhibitoryconcentrationbythedoubledilutionmethod.ResultsR.tephrodesHancehasa
widerantimicrobialspectrum, whileastrongerefectagainstStaphylococcusaureusandSalmonellagalinarum.X.sibiricumPatrin
sstemandleafcouldproducebacteriostasisstrongerthanR.tephrodesHanceagainstPseudomonasaeruginosa.ConclusionR.
tephrodesHancehasawiderantimicrobialspectrumthanX.sibiricumPatrin.Thecompatibilityofbothmedicineshaveacoopera-
tiveinteraction.
Keywords:XanthiumsibiricumPatrin;　RubustephrodesHance;　Bacteriostasisinvitro
　　菊科苍耳属植物 , 在我国有 3种 1变种 , 其中分布最广的是
苍耳(XanthiumsibiricumPatrin), 我国大部分省区都有 , 生长于山
野 、路边 、田边 、农舍附近 , 俗称野棉花 、常思菜 、痴头婆 、粘粘子
等。苍耳叶苦辛 , 性微寒 ,具祛风清热 、解毒镇痛等多种功效 [ 1] ,
临床上用来治疗慢性鼻炎 、麻风病 、肠伤寒 、皮肤癌 、功能性子宫
出血等 [ 2] 。苍耳果实为常用的中药材———苍耳子 , 具有消炎镇
痛之功效 , 用于治疗风寒头痛 、风疹瘙痒 、湿痹拘挛等 [ 3];苍耳根
主要治疗疔疮 、痈疽 、痢疾 、丹毒等 [ 2] 。
蔷薇科悬钩子属的灰白毛莓(RubustephrodesHance), 俗称
乌泡。 分布于两湖 、两广 、安徽 、福建等省 , 生长在海拔 330 ～
2 280 m的路旁 、溪边 、灌木丛和山间坡地等光线较强的地方 [ 4] 。
其叶可止血解毒 , 主治外伤出血 、痈疖疮疡;其根能祛风除湿 ,活
血调经 , 主治风湿疼痛 、慢性肝炎 、月经不调 、痢疾 、跌打损伤;其
种子入药为强壮剂。在湘西一带的少数民族地区 ,常常取灰白毛
莓的叶汁治疗痢疾。
苍耳和灰白毛莓都是生命力较强的野生植物 , 具有很多功
效。现在对苍耳的研究已经比较广泛和深入 ,但对苍耳抑菌作用
的报道较少;而对灰白毛莓的研究还非常少 , 对它的抑菌作用的
研究尚未见报道。我们用滤纸片法和二倍稀释法对这两种植株
不同器官提取液 、以及它们不同器官提取液的配伍制剂的体外抑
菌作用进行了实验 , 旨在比较两种植物的抑菌效果和协同用药的
功效 , 为药用植物的开发利用做一些基础工作。
1　实验材料
1.1　供试菌种 铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa);普通变
形杆菌(ProteusvulgarisCCTCCAB91103);大肠埃希氏菌(Esche-
richiacoliCVCC249);产气肠杆菌(Enterobacteraerogenes);鸡沙
门氏菌(Salmonellagalinarum);金黄色葡萄球菌(Staphylococcus
aureusCCTCCAB91053);以上菌种均由怀化学院微生物学实验
室提供。
1.2　实验植株 实验所用植株于 2004-06、苍耳子于 2004 -11
采自湖南省怀化市。
1.3　培养基 实验所用培养基为 LB(Luria-Bertani)液体培养基
和 LB固体培养基。
2　实验方法
2.1　中草药的煎制 将灰白毛莓的根 、茎 、叶和苍耳的根 、茎叶 、
苍耳子分别洗净切碎 ,于 60℃下干燥 16 ～ 18 h后 ,用蒸馏水煎煮
2次 , 60min/次。合并滤液 , 于 8 000 r/min离心 15 min, 取滤液
浓缩至每毫升含生药 1g(1 g/ml)。灭菌后冰箱保存备用。
2.2　菌液的制备 分别取 6种供试菌种的新鲜营养琼脂斜面培
养物适量 , 接种于 LB液体培养基内于 37℃、160 r/min下培养 16～ 18 h。然后稀释至 10-4备用(约为 106 cfu/ml)。
2.3　体外抑菌实验
2.3.1　滤纸片法测定抑菌效果 取直径为 6mm的圆形滤纸片
570片于 121℃下湿热灭菌备用。 90片为 1组 , 分别放入浓度为
1g/ml的两种植株的不同器官提取液中浸泡 3min。将 10-4供试
菌液各取 0.1 ml涂布在固体培养基上 , 制成含菌平板 , 然后取含
药液浸出汁的滤纸片贴在平板上 ,每皿贴 5片 , 每菌做 3份平行。
另外 , 每个菌种用未浸泡的滤纸片做 1份空白对照。 10 min后倒
置于 37℃下培养 24 h, 测定滤纸片的抑菌圈大小(含滤纸片大
小),比较抑菌效果。
2.3.2　二倍稀释法测最低抑菌浓度(MIC)将灭菌试管分成 6
大组 ,每组 36支。 36支试管再分成 6小组 ,每组 6支。第 1支试
管中加入 1ml2倍浓度的LB液体培养基 , 第 2 ～ 5支试管中各加
入 1mlLB液体培养基 ,向第 1支试管中加入 1ml药液后按二倍
稀释法 ,使各管药液浓度分别为 0.5, 0.25, 0.125, 0.062 5, 0.031
25 g/ml, 然后向每组试管中加入 0.1 ml不同菌种的 10-4菌液 , 第
6支试管中加 2 mlLB液体培养基 , 不加药液作为对照。将培养
物置于 37℃培养 16 ～ 18h。
从以上培养物中分别取 0.1 ml涂布于固体 LB培养基平板
上 , 每份平行做 3次。于 37℃培养 16 ～ 18 h后观察。
同样采用二倍稀释法测定苍耳和灰白毛莓提取液的两种不
同配伍制剂的最低抑菌浓度。
3　实验结果
3.1　滤纸片法测定抑菌圈大小
3.1.1　苍耳提取液的抑菌效果 苍耳子提取液对铜绿假单胞菌 、
普通变形杆菌 、大肠埃希氏菌 、产气肠杆菌 、鸡沙门氏菌 、金黄色
葡萄球菌的抑菌圈大小分别为 6.1, 6.0, 6.1, 6.0, 6.5, 6.4 mm;
苍耳根对铜绿假单胞菌 、普通变形杆菌 、大肠埃希氏菌 、产气肠杆
菌 、鸡沙门氏菌 、金黄色葡萄球菌的抑菌圈大小分别为 6.3, 6.1,
6.0, 6.1, 6.0, 6.1mm;苍耳茎叶对上述 6种供试菌种的抑菌圈大
小分别为 9.0, 6.0, 6.4, 6.3, 6.3, 6.4mm。见表 1。
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时珍国医国药 2006年第 17卷第 2期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2006VOL.17NO.2　
表 1　苍耳提取液对供试菌种的抑制效果 mm
供试菌种 抑菌圈直径苍耳子 根 茎叶
铜绿假单胞菌 6.1 6.3 9.0
普通变形杆菌 6.0 6.1 6.0
大肠埃希氏菌 6.1 6.0 6.4
产气肠杆菌 6.0 6.1 6.3
鸡沙门氏菌 6.5 6.0 6.3
金黄色葡萄球菌 6.4 6.1 6.4
3.1.2　灰白毛莓提取液的抑菌效果 白毛莓根对铜绿假单胞菌 、
普通变形杆菌 、大肠埃希氏菌 、产气肠杆菌 、鸡沙门氏菌 、金黄色
葡萄球菌的抑菌圈大小分别为 6.6, 6.2, 6.1, 6.0, 8.3, 8.5 mm;
灰白毛莓茎对上述六种供试菌种的抑菌圈大小分别为 6.3, 6.7,
6.3, 6.5, 6.2, 8.9mm;灰白毛莓叶对上述 6种供试菌种的抑菌圈
大小分别为 7.0, 6.0, 6.4, 6.9, 6.9, 9.8 mm。见表 2。
表 2　灰白毛莓提取液对供试菌种的抑制效果 mm
供试菌种 抑菌圈直径苍耳子 根 茎叶
铜绿假单胞菌 6.6 6.3 7.0
普通变形杆菌 6.2 6.7 6.0
大肠埃希氏菌 6.1 6.3 6.4
产气肠杆菌 6.0 6.5 6.9
鸡沙门氏菌 8.3 6.2 6.9
金黄色葡萄球菌 8.5 8.9 9.8
3.2　最低抑菌浓度(MIC)的测定
3.2.1　苍耳提取液的 MIC苍耳茎叶对铜绿假单胞菌的抑制作
用最强 , 其 MIC为 0.062 5 g/ml,对大肠埃希氏菌 、金黄色葡萄球
菌 、产气肠杆菌和鸡沙门氏菌的 MIC均为 0.5 g/ml, 对普通变形
杆菌无抑制作用;苍耳根对铜绿假单胞菌的 MIC为 0.5 g/ml,对
其它五种供试菌种均无抑制作用;苍耳子对金黄色葡萄球菌 、鸡
沙门氏菌的 MIC为 0.5 g/ml, 对其它 4种供试菌种均无抑制作
用。见表 3。
表 3　苍耳提取液对供试菌种的 MIC g· ml-1
供试菌种 最低抑菌浓度 MIC苍耳子 根 茎叶
铜绿假单胞菌 无抑制 0.5 0.062 5
普通变形杆菌 无抑制 无抑制 无抑制
大肠埃希氏菌 无抑制 无抑制 0.5
产气肠杆菌 无抑制 无抑制 0.5
鸡沙门氏菌 0.5 无抑制 0.5
金黄色葡萄球菌 0.5 无抑制 0.5
从表 3可知 , 苍耳茎叶对除普通变形杆菌以外的 5种供试菌
种均有抑制作用 , 抑菌范围最广;苍耳子对金黄色葡萄球菌和鸡
沙门氏菌有抑制作用;苍耳根只对铜绿假单胞菌有抑制作用 ,抑
菌范围最窄。苍耳茎叶对铜绿假单胞菌的抑制作用最强。
3.2.2　灰白毛莓提取液的 MIC灰白毛莓叶对金黄色葡萄球菌
的抑制作用最强 , 其 MIC为 0.031 25 g/ml, 对铜绿假单胞菌 、产
气肠杆菌和鸡沙门氏菌的 MIC为 0.25 g/ml, 对大肠埃希氏菌的
MIC为 0.5g/ml,对普通变形杆菌无抑制作用;灰白毛莓茎对金
黄色葡萄球菌的 MIC为 0.125 g/ml, 对大肠埃希氏菌 、铜绿假单
胞菌 、普通变形杆菌 、产气肠杆菌和鸡沙门氏菌的 MIC均为 0.5
g/ml;灰白毛莓根对金黄色葡萄球菌 、鸡沙门氏菌的 MIC为 0.125
g/ml,对铜绿假单胞菌的 MIC为 0.25 g/ml, 对普通变形杆菌的
MIC为 0.5g/ml,对大肠埃希氏菌 、产气肠杆菌均无抑制作用。
见表 4。
表 4　灰白毛莓提取液对供试菌种的 MIC g· ml-1
供试菌种 最低抑菌浓度 MIC根 茎 叶
铜绿假单胞菌 0.25 0.5 0.25
普通变形杆菌 0.5 0.5 无抑制
大肠埃希氏菌 无抑制 0.5 0.5
产气肠杆菌 无抑制 0.5 0.25
鸡沙门氏菌 0.125 0.5 0.25
金黄色葡萄球菌 0.125 0.125 0.031 25
从表 4可知 , 灰白毛莓茎对 6种供试菌种均有抑制作用 , 抑
菌范围最广;灰白毛莓根只对 4种供试菌种有抑制作用 , 抑菌范
围最窄;灰白毛莓叶对五种供菌种有抑制作用。灰白毛莓的各器
官都是对金黄色葡萄球菌的抑制作用最强 , 另外 , 灰白毛莓根对
鸡沙门氏菌的抑制作用是最强的。
3.2.3　苍耳和灰白毛莓提取液配伍制剂的 MIC苍耳根 +灰白
毛莓茎叶的配伍制剂对 6种供试菌种的 MIC均为 0.25 g/ml;苍
耳茎叶 +灰白毛莓根的配伍制剂对铜绿假单胞菌的 MIC为
0.125g/ml,对其余 5种供方式菌种的 MIC均为 0.25 g/ml, 见
表 5。
　表 5　苍耳和灰白毛莓不同配伍制剂对供试菌种的 MIC　　g· ml-1
供试菌种 最低抑菌浓度 MIC苍耳根 +毛莓茎叶 苍耳茎叶 +毛莓根
铜绿假单胞菌 0.25 0.125
普通变形杆菌 0.25 0.25
大肠埃希氏菌 0.25 0.25
产气肠杆菌 0.25 0.25
鸡沙门氏菌 0.25 0.25
金黄色葡萄球菌 0.25 0.25
从表 5可知 , 苍耳和灰白毛莓联合使用时对 6种供试菌种均
有抑制作用 , 而且对大肠埃希氏菌 、普通变形杆菌和产气肠杆菌
的抑菌作用增强 ,比单独使用灰白毛莓和苍耳的任何一种器官的
MIC都要小。
4　讨论
4.1　 灰白毛莓根 、茎 、叶都是对金黄色葡萄球菌的抑制效果最
强 , 抑菌圈直径分别为 8.5, 8.9, 9.8 mm;苍耳茎叶对铜绿假单胞
菌的抑制效果最强 ,抑菌圈直径为 9.0 mm, 苍耳提取液对其余 5
种供试菌种的抑制圈直径均比灰白毛莓小。
4.2　 灰白毛莓的抑菌范围比苍耳的抑菌范围广。灰白毛莓全
株对金黄色葡萄球菌 、鸡沙门氏菌的抑制作用较苍耳强 , 苍耳的
茎叶对铜绿假单胞菌的抑制作用较灰白毛莓强。
4.3　 实验所用的抑菌物质是煎煮的中草药制剂 , 颜色较深 , 若
采用试管法会因为颜色深而导致观察不准确;若采用打洞法则
会因为中草药扩散慢 、抑菌弱 , 也无法得到准确的抑菌浓度;我
们采用了滤纸片法 、二倍稀释法 , 它具有显示稳定的优点 , 很适
合比较中草药的抑菌效果和测定中草药的抑菌浓度。
4.4　 灰白毛莓和苍耳的配伍制剂有协同作用。对大肠埃希氏
菌 、普通变形杆菌和产气肠杆菌 , 二者的不同器官交叉联合用药
抑菌效果较好。但对铜绿假单胞菌 ,单独使用苍耳的茎叶抑菌效
果好;对金黄色葡萄球菌 ,单独使用灰白毛莓的根 、茎 、叶抑菌效
果均好;对鸡沙门氏菌 , 单独使用灰白毛莓的根抑菌效果较好。
4.5　 实验结果表明 , 灰白毛莓的抑菌范围比苍耳的抑菌范围更
广 , 灰白毛莓全株对金黄色葡萄球菌 、鸡沙门氏菌的抑制作用比
苍耳更强。但是 ,动物体内的免疫系统非常复杂 , 一种药物在机
体内的杀菌效果与体外实验会有差异 ,灰白毛莓在机体内的杀菌
效果是否比苍耳强 ,还有待进一步验证。 另据报道 ,蔷薇科悬钩
子属是一类重要的小浆果果树资源 ,国外早就培育出许多栽培品
种 , 并已开始大面积栽培 [ 5] 。灰白毛莓鲜果中色素(总花色苷)
含量比同属色素植物中的色素含量最高者还要高 ,而且该色素耐
热性强 , 是一种高含量的色素资源植物 , 具有很好的开发应用前
景 [ 6] 。因此 , 对灰白毛莓的研究刚刚起步 , 具有很好的研究
前景。
参考文献:
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[ J]解放军药学学报 , 2003, 19(2):122.
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AdvancesinFruitBreeding[ M] .Beijing:AgriculturePres, 1989(in
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LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2006VOL.17NO.2 时珍国医国药 2006年第 17卷第 2期