全 文 ：范树国 ,胡永昌 ,邱　璐 ,等.鹅掌柴中总黄酮含量的测定 [ J] .江苏农业科学 , 2010(4):280-282.
鹅掌柴中总黄酮含量的测定
范树国 1, 2 , 胡永昌 1 , 邱　璐 1, 2 , 李国树 1, 2 , 李天星 1 , 杨海艳1 , 周丽娟 1 , 陈安林 1
(1.楚雄师范学院化学与生命科学系 ,云南楚雄 675000;2.滇中高原生物资源开发与利用研究所 ,云南楚雄 675000)
　　摘要:采用 50%稀乙醇冷浸法 、 70%乙醇热回流法和 95%乙醇超声波提取法提取鹅掌柴中总黄酮 , 以芸香苷为
对照品 ,在 λ=510nm处分别测定鹅掌柴根 、茎 、叶中总黄酮类化合物的含量。结果表明 ,芸香苷在 0 ～ 0.05mg/mL范
围内峰吸光度与浓度线性关系良好(r=0.999 9, n=6),仪器精密度 RSD=0.31%(n=6)。 50%稀乙醇冷浸法中鹅掌
柴根 、茎 、叶总黄酮含量分别为 3.54%、 2.01%、 6.11%;70%乙醇热回流法中鹅掌柴根 、茎 、叶总黄酮含量分别为
4.48%、3.81%、7.14%;95%乙醇超声波提取法中鹅掌柴根 、茎 、叶中总黄酮含量分别为 4.60%、3.95%、7.26%。
　　关键词:鹅掌柴;总黄酮;可见分光光度法
　　中图分类号:S567.901　　文献标志码:A　　文章编号:1002-1302(2010)04-0280-03
　　鹅掌柴 [ Schefleraoctophyla(Lour.)Harms] ,别称鸭脚
木 ,五加科鹅掌柴属 ,研究表明 ,鹅掌柴属植物具有抗肿瘤 、抗
病毒等活性 [1 ] 。鹅掌柴以根茎入药 ,性温 ,味甘 ,具有祛风
湿 、活血脉之功效 [ 2 ] 。一些学者曾对鹅掌柴根提取物进行定
收稿日期:2009-11-03
基金项目:云南省中青年学术技术带头人后备人才培养计划(编号:
2006PY01-61);楚雄师范学院重点学科建设项目 (编号:
05YJJSXK03);楚雄师范学院学术带头人专项资助项目(编号:
05YJDTR08)。
作者简介:范树国(1965—),男 ,河北青县人 ,博士 ,教授 ,主要从事植
物生理生化及分子生物学研究。 Tel:(0878)3101953;E-mail:
fansg@cxtc.edu.cn。
通信作者:邱璐 ,教授, 主要从事植物组织培养及转基因研究。 Tel:
(0878)3100507;E-mail:qiulu@cxtc.edu.cn。
性检测其化学成分 ,发现含有挥发油 、内酯 、黄酮 、生物碱 、油
脂 、皂苷 、有机酸 、鞣质 、糖 、氨基酸等 [ 3 ] 。黄酮类化合物具有
降血脂 、止血 、抑制血小板聚集等作用 。近年来 ,有文献报道 ,
天然的黄酮类化合物对蛋白激酶的活性具有抑制作用 [ 4 ] ,从
而干预细胞信号转导 ,诱导细胞凋亡 ,抗肿瘤作用机制与它们
能抑制各种细胞信号转导途径中的蛋白激酶有关 。一些具有
明显抗肿瘤作用的黄酮类化合物已达到临床 2期研究阶
段 [ 5 -6] 。目前 ,有关鹅掌柴总黄酮含量的研究尚未见报道 。
本研究分别采用 50%稀乙醇冷浸法 、70%乙醇热回流法和
95%乙醇超声波提取法对鹅掌柴总黄酮进行提取 ,采用可见
光分光光度法测定提取物的吸光度 ,计算鹅掌柴总黄酮的质
量分数 ,并比较 3种方法下鹅掌柴总黄酮的提取效率 ,旨在为
鹅掌柴的开发利用及进一步深入研究提供指导 。
(上接第 279页)
法具有很好的准确度 。
2.4　方法的稳定性试验结果
将对照品溶液及样品溶液在显色后每隔 20 min测定 1
次吸光度 ,结果见表 2。由表 2可知 ,样品溶液和对照品溶液
在显色后 2h内吸光度变化都不大 , RSD值都较小 ,说明该方
法的稳定性较好 。
2.5　重复性试验结果
从同一竹节参多糖样品溶液中取相同体积的溶液 5份 ,
分别测定其吸光度 ,分别为 0.423、0.426、0.428、0.426及
0.425, RSD值为 0.43%。由此可见 ,该方法的重复性较好 。
表 2　稳定性试验结果
溶液 吸光度
20 min 40min 60min 80min 100min 120min
RSD
(%)
对照品 0.328 0.328 0.326 0.327 0.323 0.322 0.79
样品 0.546 0.545 0.545 0.543 0.542 0.540 0.42
2.6　竹节参多糖含量的测定结果
称取一定量的竹节参样品 , 3次重复 ,按样品溶液的制
备方法制备样品 ,多糖的质量分数分别为 17.2%、16.8%和
16.5%,平均值为 16.83%。
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—280— 江苏农业科学　2010年第 4期DOI :10.15889/j.issn.1002-1302.2010.04.063
1　材料与方法
1.1　材料
鹅掌柴取自楚雄师范学院 。标准品芸香苷购自科翔生物
有限公司(HPLC级 ,纯度 >98%)。
1.2　方法
1.2.1　标准品溶液的制备　精确称取芸香苷标准品 5 mg,
70%乙醇溶解 ,于 50 mL容量瓶中定容 ,配制得芸香苷标准品
溶液 。
1.2.2　样品初处理　取鹅掌柴根、茎 、叶洗净 , 105℃下烘干
至恒重 ,粉碎过 40目 [ 7] 。
1.2.3　50%稀乙醇冷浸法　称取 5.0 g干鹅掌柴根 、茎 、叶
粗粉 ,浸泡在 75mL50%乙醇中 ,室温下放置 24 h后抽滤 ,滤
渣再用 75 mL50%乙醇浸泡 ,室温下再放置 24 h后抽滤除
渣 ,合并 2次滤液 ,水浴上浓缩至原体积的一半 ,然后用石油
醚(60 ～ 90℃)脱脂 2次 ,水液在水浴上蒸至浆液状 ,控制在
60 ℃以下干燥可得提取物 。
1.2.4　70%乙醇热回流法　称取 5.0 g干鹅掌柴根 、茎 、叶
粉碎 ,浸泡在 75mL70%乙醇中 ,在水浴上(85 ℃)热回流提
取 2次 ,每次 3 h,抽滤 ,合并 2次滤液 ,在水浴上蒸馏 ,除去溶
剂 ,用石油醚脱脂 2次 ,水液在水浴上蒸至浆液状 ,控制在
60 ℃以下干燥可得提取物 [ 8 ] 。
1.2.5　95%乙醇超声波提取法　称取 5.0 g干鹅掌柴根 、
茎 、叶粗粉 ,浸泡在 75 mL95%乙醇中 ,超声波 (功率 200 W)
提取 2.5h后抽滤 ,滤渣再浸泡在 75 mL95%乙醇中 ,超声波
提取 2.5h后抽滤除渣 ,合并 2次滤液 ,在水浴上浓缩至原体
积的一半 ,然后用石油醚(60 ～ 90 ℃)脱脂 2次 ,水液在水浴
上蒸至浆液状 ,控制在 60 ℃以下干燥可得提取物 [ 8 -9] 。
1.2.6　植物样品中总黄酮质量分数计算　植物样品中总黄
酮质量分数(以芸香苷计 , %)=[ (m1 ×m3 ×V1)/(m2 ×m4 ×
V2 )] ×100%。式中:m1为所测样品液中总黄酮量(mg);m2
为配制样品使用液时所称粗提浸膏质量 (mg);m3为粗提浸
膏总量(g);m4为植物样品总干重(g);V1为配制的样品溶液
总体积(mL);V2为测量时所取样品溶液体积(mL)[ 10] 。
1.2.7　精密度试验　精确吸取浓度为 0.1mg/mL的芸香苷
标准溶液 5 mL,具体操作见 “ 1.2.8”,连续测量 6次 ,测定吸
光度值 ,结果表明 , RSD值为 0.31%,说明该方法仪器精密度
良好 ,结果见表 1。
表 1　精密度试验结果
编号 1 2 3 4 5 6
吸光度 0.473 0.472 0.474 0.472 0.471 0.475
1.2.8　标准曲线的绘制　分别取 0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、
5.0mL的 0.1 mg/mL芸香苷标准溶液于 6支比色管中 ,分别
加入 0.3mL5%的亚硝酸钠溶液 ,放置 6min,加入 0.3mL的
10%硝酸铝溶液放置 6 min,再加 1.0 mol/LNaOH溶液
4.0mL,定容至 10 mL,摇匀 。以空白溶液作参比 ,在 λ=510
nm处测吸光度 。得到标准液浓度 C与吸光度 D之间的回归
方程 。
1.2.9　测定液的制备及测定　精确称取 5 mg提取样品用
70%乙醇溶解 , 并用 50 mL容量瓶定容 , 获得浓度为
0.1mg/mL的溶解液 。分别取 0.1mg/mL的鹅掌柴根 、茎 、叶
溶解液 5.0mL于比色管中 ,分别加入 5%亚硝酸钠 0.3 mL,
摇匀 ,放置 6min,加 10%硝酸铝 0.3mL,摇匀 ,放置 6 min,再
加 1mol/LNaOH溶液 4.00 mL,加蒸馏水至刻度 10 mL,摇
匀 ,放置 12min,得测定液 。在 λ=510nm处测定其吸光度 。
2　结果与分析
2.1　芸香苷标准曲线
以吸光度 D为纵坐标 ,浓度 C为横坐标 ,绘制芸香苷标
准曲线 ,回归方程为 D=8.823C-0.015 , r=0.999 9,结果表
明 ,浓度在 0 ～ 0.05mg/mL浓度范围内线性关系良好 。
2.2　总黄酮含量测定
采用 3种不同方法提取总黄酮 ,结果见表 2、表 3和表 4。
表 2　50%稀乙醇冷浸法提取总黄酮测定结果
样品 吸光度 提取浸膏总黄酮含量(%)
样品总黄酮含量
(%)
根 0.009 0.054 3.54
茎 0.011 0.059 2.01
叶 0.016 0.070 6.11
　　由表 2可知 ,采用 50%稀乙醇冷浸法 ,鹅掌柴根 、茎、叶
总黄酮含量分别为 3.54%、2.01%、6.11%。叶片中含量最
高 ,茎中含量最低 。
表 3　70%乙醇热回流法提取总黄酮测定结果
样品 吸光度 提取浸膏总黄酮含量(%)
样品总黄酮含量
(%)
根 0.011 0.059 4.48
茎 0.015 0.068 3.81
叶 0.020 0.079 7.14
　　由表 3可知 ,采用 70%乙醇热回流法 ,鹅掌柴的根 、茎 、
叶的总黄酮含量分别为 4.48%、3.81%、7.14%。叶片中含
量最高 ,茎中含量最低 ,与采用 50%稀乙醇冷浸法得到的结
果相似 。
　　由表 4可知 ,采用 95%乙醇超声波提取法 ,鹅掌柴的根 、
茎 、叶的总黄酮含量分别为 4.60%、3.95%、7.26%。叶片中
含量最高 ,茎中含量最低 ,与采用 50%稀乙醇冷浸法和 70%
乙醇热回流法得到的结果相似 。
表 4　95%乙醇超声波提取法提取总黄酮测定结果
样品 吸光度 提取浸膏总黄酮含量(%)
样品总黄酮含量
(%)
根 0.010 0.057 4.60
茎 0.011 0.059 3.95
叶 0.016 0.070 7.26
2.3　方差分析
方差分析结果表明 , 50%稀乙醇冷浸法 、70%乙醇热回流
法 、95%乙醇超声波提取法 3种处理方法对根 、茎 、叶中总黄
酮含量的影响极显著(P<0.01)。
2.4　多重比较结果
3种不同提取方法和不同样品中总黄酮含量的多重性比
较结果见表 5和表 6。
　　由表 5可知 , 50%稀乙醇冷浸法与 70%乙醇热回流法差
—281—范树国等:鹅掌柴中总黄酮含量的测定
表 5　 3种提取方法的 LSD法多重比较结果分析
(I)提取方法 (J)提取方法 P
50%稀乙醇冷浸法 70%乙醇热回流法 0.000
95%乙醇超声波提取法 0.000
70%乙醇热回流法 95%乙醇超声波提取法 0.207
表 6　不同样品中总黄酮含量的 LSD法多重比较结果分析
(I)提取方法 (J)样品 P
根 茎 0.000
叶 0.000
茎 叶 0.000
异极显著 (P<0.01), 50%稀乙醇冷浸法与 95%乙醇超声波
提取法差异极显著(P<0.01), 70%乙醇热回流法与 95%乙
醇超声波提取法差异不显著(P>0.05)。
　　由表 6可知 ,鹅掌柴根和茎中总黄酮含量差异极显著
(P<0.01),茎和叶中总黄酮含量差异极显著(P<0.01),根
和叶中总黄酮含量差异极显著(P<0.01)。
2.5　估计边缘均值比较
表 7显示了提取方法不同水平的平均值 ,各因素水平对
结果影响的强弱顺序是:95%乙醇超声波提取法 >70%乙醇
热回流法 >50%稀乙醇冷浸法 。根据多重比较结果 , 95%乙
醇超声波提取法与 70%乙醇热回流法差异不显著 , 95%乙醇
超声波提取法与 50%稀乙醇冷浸法的差异极显著 。
表 7　不同提取方法的估计边缘均值比较结果
提取方法 均值 标准误差
50%稀乙醇冷浸法 3.887 0.069
70%乙醇热回流法 5.143 0.069
95%乙醇超声波提取法 5.270 0.069
　　表 8显示了样品不同水平的平均值 ,各因素水平对结果
影响的强弱顺序是:叶 >根 >茎 。根据多重比较结果 ,叶和
根 、叶和茎的差异均极显著 。
表 8　不同样品的估计边缘均值比较结果
样品 均值 标准误差
根 4.207 0.069
茎 3.257 0.069
叶 6.837 0.069
　　不同材料中总黄酮含量估计边缘均值比较结果表明:鹅
掌柴根 、茎、叶中 ,叶中总黄酮平均含量最高 ,茎中含量最少 。
叶的总黄酮含量显著高于根和茎 。不同提取方法得到的总黄
酮估计边缘均值比较结果表明:3种提取方法中 ,提取方法较
好的是 95%乙醇超声波提取法和 70%乙醇热回流法 ,提取效
果显著高于 50%稀乙醇冷浸法 。
3　结论与讨论
本研究表明 ,鹅掌柴叶中总黄酮的含量最高 , 95%乙醇超
声波提取法下叶中总黄酮含量达到 7.26%,茎中含量最低 ,
为 3.95%。 95%乙醇超声波提取法提取效果较好 , 50%稀乙
醇冷浸法的效果最差 。植物中总黄酮的含量差异很大 ,如磷
毛蕨总黄酮含量为 1.79%,欧亚水龙骨营养叶总黄酮含量为
0.9%,蹄盖蕨的总黄酮含量为 7.14%[ 11 -12] 。黄酮类化合物
在银杏叶中质量分数为 1.9%左右 ,在银杏梗中的质量分数
为 0.5% ～ 0.7%, 在外种皮中的质量分数为 0.1% ～
0.8%[13] 。大豆是黄酮含量较高的一种植物 ,如大豆提取物
中大豆总异黄酮的含量为 38.1%[ 14 ] 。鹅掌柴中总黄酮含量
处于中间水平 ,有一定的提取价值 。
目前 ,鹅掌柴中黄酮种类及各自含量还没有相关的文献
报道 ,本研究也未涉及 ,因此 ,鹅掌柴总黄酮种类的分离有待
进一步研究 。
超声波提取法中 ,提取时间对提取效果有一定的影响 ,本
研究是依照参考文献 [ 9]的提取方法进行的 ,而大多参考文
献选择的提取时间是 30min[ 15 ] ,鹅掌柴叶中总黄酮的提取及
测定条件有待进一步完善。
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