全 文 ：第 26卷第 2期
2 00 9年 2月
精 细 化 工
FINECHEMICALS
Vol.26, No.2
Feb.2 0 0 9
中药现代化技术
帽蕊木抗氧化活性研究＊
宋艳丽 1, 2 ,康文艺 1, 2＊
(1.河南大学 天然药物研究所 , 河南 开封　475004;2.河南大学 药学院 ,河南 开封　475004)
摘要:用二苯代苦味肼基自由基(DPPH)、铁离子还原 /抗氧化力测定法(FRAP)和 2, 2′-连氨-(3-乙基苯并噻唑
啉-6-磺酸)二氨盐(ABTS)3种体外抗氧化活性分析方法 , 与阳性对照没食子酸丙酯(PG)、丁基羟基茴香醚
(BHA)和二丁基羟基甲苯(BHT)比较 , 对帽蕊木进行了抗氧化活性评价。在帽蕊木叶和皮的 6个提取物中 , 叶
乙酸乙酯提取物清除 DPPH和 ABTS自由基的能力最强(IC50 =2.24 mg/L和 IC50 =1.165 mg/L),强于阳性对照
BHA(IC50 =3.43mg/L和 IC50 =1.675mg/L)和 BHT(IC50 =18.79 mg/L和 IC50 =4.555 mg/L), 弱于阳性对照
PG(IC50 =0.94 mg/L和 IC50 =0.885 mg/L);叶正丁醇提取物还原 Fe3+能力最强(FRAP值 =1 395.94μmolTE/
g),皮正丁醇提取物次之(FRAP值 =1 275.43μmolTE/g), 都强于阳性对照 BHT(FRAP值 =238.11 μmolTE/
g),弱于阳性对照 PG(5 159.97μmolTE/g)、BHA(2 573.96μmolTE/g)。结果表明 , 帽蕊木叶和皮的乙酸乙酯
和正丁醇提取物都有很好的抗氧化活性 ,并且帽蕊木叶的活性强于茎皮。该文报道工作的新颖性已为河南大学
图书馆 2008年 8月 25日出具的第 CX2008007号《科技查新报告》所证实。
关键词:帽蕊木;抗氧化活性;DPPH方法;ABTS方法;FRAP方法;中药现代化技术
中图分类号:R284　　文献标识码:A　　文章编号:1003-5214(2009)02-0150-04
AntioxidantactivityofMitragynarotundifolia
SONGYan-li1, 2 , KANGWen-yi1, 2＊
(1.InstituteofNaturalProducts, HenanUniversity, Kaifeng475004, Henan, China;2.PharmaceuticalColegeofHenan
University, Kaifeng475004, Henan, China)
Abstract:AntioxidantactivitiesofdiferentextractsofMitragynarotundifoliaKuntzewereevaluatedby
DPPH, FRAPandABTSassay.TheresultswerecomparedwiththoseofpositivecontrolsPG, BHAand
BHT.Insixextractsoftheleavesandbarks, ethylacetateextractfromleaveshadthehighestDPPH
andABTSfreeradicalscavengingactivity(IC50 =2.24 mg/LandIC50 =1.165 mg/Lrespectively)
whichwashigherthanthatofBHA(IC50 =3.43mg/LandIC50 =1.675mg/Lrespectively)andBHT
(IC50 =18.79mg/LandIC50 =4.555mg/Lrespectively);Then-butanolextractfromleavesexhibited
thehighestfericreducingantioxidantpowerwithFRAPvalueof1 395.94 μmolTE/g, then-butanol
extractfrombarks(FRAPvalue=1 275.43μmolTE/g)wasslightlylowerthanthatofthen-butanol
extractfromleaves, andbothofthemhadfericreducingantioxidantpowerhigherthanthatofBHT
(theFRAPvalue=238.11μmolTE/g), loweredthanthatofPG(FRAPvalue=5 159.97μmolTE/
g)andBHA(FRAPvalue=2 573.96μmolTE/g).Resultsshowedthatethylacetateextractandthe
n-butanolextractfromleavesandbarksofM.rotundifoliahadhighantioxidantactivities, andthe
antioxidantactivitiesofextractfromleaveswashigherthanthatfrombarks.Thenoveltyofthisworkhas
beenconfirmedinTechnologyNoveltySearchReportNo.CX2008007 providedbythelibraryof
HenanUniversityonAugust25, 2008.
＊ 收稿日期:2008-08-25;定用日期:2008-09-02
基金项目:河南省教育厅基础研究计划(2008A360002)
作者简介:宋艳丽(1983-),女 ,河南郑州人 ,河南大学药学院硕士研究生 ,师从康文艺副教授 , 主要从事天然药物安全性评价 ,电话:
15890933493, E-mail:happyyanlisong@yahoo.cn。
联系人:康文艺 ,副教授 ,研究方向为中药活性成分及新药研究 , E-mail:kangweny@hotmail.com,电话:0378-3880680。
DOI :10.13550/j.jxhg.2009.02.024
Keywords:Mitragynarotundifolia;antioxidantactivity;DPPHassay;ABTSassay;FRAPassay;
modernizedtechnologyoftraditionalChinesemedicines
Foundationitem:SupportedbyFoundationResearchPlanofHenanprovinceEducationCommision
(2008A360002)
　　帽蕊木(MitragynarotundifoliaKuntze.)为茜草
科帽蕊木属植物 。本属植物约有 10种 ,非洲分布 4
种 ,亚洲 6种 ,分布在印度 ,孟加拉 ,缅甸 ,泰国和老
挝等国家[ 1 ～ 3] 。我国仅有 1种 ,产于云南南部 [ 4, 5] 。
该属的植物民间用途广泛 ,可用于发热 、疝气 、肌肉
疼痛的治疗 [ 6, 7] ,抗疟 [ 8] ,并可驱虫 [ 9] 。文献研究表
明 ,帽蕊木属植物化学研究主要集中在吲哚类生物
碱成分上[ 10, 11] ,药理研究也非常明确 ,主要集中在
抗肿瘤 、心血管疾病和抗菌活性 。
作者对产于云南西双版纳的帽蕊木进行了持续
系统的化学研究 [ 12 ～ 15] ,但国内外尚未见帽蕊木抗
氧化活性的研究报道 。作者采用清除二苯代苦味肼
基自由基(DPPH·)、清除 2, 2′-连氨-(3-乙基苯并
噻唑啉 -6-磺酸)二氨盐(ABTS)自由基方法 、铁离子
还原 /抗氧化力测定法 (fericreducing/antioxidant
powerasay, FRAP法),对帽蕊木的总抗氧化能力进
行了研究。本文报道工作的新颖性 ,已为河南大学
图书馆 2008年 8月 25日出具的第 CX2008007号
《科技查新报告》所证实。
1　材料与方法
1.1　材料与试剂
帽蕊木于 2006年 10月采集于云南西双版纳地区 ,
经中国科学院西双版纳植物园崔景云高级工程师鉴定
为茜草科帽蕊木属植物帽蕊木 M.rotundifoliaKuntze,
标本存于河南大学天然药物研究所(No.0610221)。
DPPH(日本东京化成工业株式会社), ABTS(Fluka),
Fe3+-三吡啶三哑嗪(tripyridyl-triazine, TPTZ)、没食子
酸丙酯(propylgalate, PG)、丁基羟基茴香醚(Butylated
hydroxyanisole, BHA)、二丁基羟基甲苯 (Butylated
hydroxytoluene或 2, 6-Di-tert-butyl-4-methylphenol,
BHT)(Acrosorganics), 6-羟基-2, 5, 7, 8-四甲基苯并二
氢 吡 喃-2-羧 酸 (6-hydroloxy-2, 5, 7, 8-tetramethyl-
chroman-2-carboxylicacid, Trolox)(Aldrich)。
1.2　主要仪器
UV-2000型紫外可见分光光度计(中国 Unico
公司);电子天平(美国 Metler-Toledo公司)。
1.3　帽蕊木浸膏的提取
帽蕊木茎皮和叶干燥 、粉碎后 ,分别用 V(丙酮)
∶V(水)=7∶3室温下冷浸 3次 ,每次 7 d。回收溶剂后
分别得到帽蕊木茎皮浸膏和叶浸膏。分别将浸膏悬
浮于水中 ,依次向悬浮液中加入石油醚 、乙酸乙酯和
正丁醇 ,振摇萃取。萃取液真空减压干燥 ,分别得到
帽蕊木皮和叶的石油醚 、乙酸乙酯和正丁醇提取物。
1.4　抗氧化活性测定方法
1.4.1　DPPH法
按照文献 [ 16]的方法 ,利用 DPPH甲醇溶液在
515 nm处有紫红色团的特征吸收峰 ,以分光光度法
测定加入样品提取物后吸光度的变化 ,在 515nm处
吸光度的下降表示其对 DPPH自由基的清除能力。
1.4.2　ABTS法
按照文献 [ 16]的方法 ,配制 ABTS自由基工作
液 ,并利用 ABTS自由基甲醇溶液在 734 nm处有最
大吸收 ,以分光光度法测定加入样品提取物后 ,在
734 nm处吸光度的下降表示了其对 DPPH自由基
的清除能力。
1.4.3　FRAP法
按照文献 [ 16]的方法配制 TPTZ工作液 ,利用
在低 pH的溶液中 , TPTZ可被抗氧化剂还原为二价
铁 ,呈现出明显的蓝色 ,并在 593nm处有最大吸收 ,
测定样品及阳性对照品在 593 nm处的吸光度 ,结果
以 c(Trolox)表示 。当 c(Trolox)=25 ～ 400 μmol/L
时 ,有很好的线性关系(r2 =0.9990)。
1.4.4　统计学处理
实验结果用 SPSS13.0软件处理 ,得 IC50。
2　结果与讨论
2.1　DPPH法
结果见表 1和图 1。
表 1　帽蕊木不同提取物的抗氧化活性
Table1　Antioxidantactivityofthedifferentextractsfrom
MitragynarotundifoliaKuntze.
帽蕊木 提取物 DPPH法IC
50
/(mg/L) ABTS法IC
50
/(mg/L) FRAP法/(μmolTE/g)
叶 石油醚 NA 75.8 139.69
乙酸乙酯 2.24 1.165 801.61
正丁醇 4.00 1.61 1395.94
皮 石油醚 NA 91.73 159.81
乙酸乙酯 4.90 2.33 784.74
正丁醇 3.02 1.685 1275.43
阳性对照 PG① 0.94 0.885 5159.97
BHA① 3.43 1.675 2573.96
BHT① 18.79 4.555 238.11
　　①:PG、BHA、BHT为阳性对照品;NA:无活性。
·151·第 2期 宋艳丽 ,等:帽蕊木抗氧化活性研究
图 1　抗氧化剂质量浓度对 DPPH自由基的影响
Fig.1　EfectofmassconcentrationofantioxidantonDPPHfree
radical
　　图 1显示 ,帽蕊木叶和皮的乙酸乙酯与正丁醇提
取物清除 DPPH自由基的能力与阳性对照 BHA相
近 ,但都弱于阳性对照 PG,强于阳性对照 BHT。在实
验浓度范围内 ,当帽蕊木叶乙酸乙酯提取物和皮正丁
醇提取物质量浓度分别在 5.56mg/L、6.94mg/L以
下时 , DPPH自由基清除率随质量浓度增大几乎呈线
性增加 ,当质量浓度分别在 5.56mg/L和 6.94 mg/L
以上时 ,清除率几乎不变;帽蕊木叶正丁醇提取物和
皮乙酸乙酯提取物清除 DPPH自由基的能力与其浓
度呈线性关系(相关系数分别为 0.9689和 0.9873)。
表 1显示 ,在帽蕊木 6个提取物中 ,叶乙酸乙酯提
取物清除 DPPH自由基的能力最强(IC50 =2.24 mg/
L),皮正丁醇提取物次之(IC50 =3.02mg/L),两者清除
DPPH自由基的能力都强于阳性对照 BHA、BHT,弱于
阳性对照 PG。帽蕊木叶和皮的提取物与阳性对照
PG、BHA、BHT对 DPPH自由基的清除能力顺序为:PG
>叶乙酸乙酯提取物 >皮正丁醇提取物 >BHA>叶正
丁醇提取物 >皮乙酸乙酯提取物 >BHT。
2.2　ABTS法
结果见表 1和图 2。
图 2　抗氧化剂质量浓度对 ABTS自由基的影响
Fig.2　EfectofmassconcentrationofantioxidantonABTSfree
radical
　　图 2显示 ,在实验浓度范围内 ,叶乙酸乙酯提取
物在帽蕊木提取物中清除 ABTS自由基的能力最
强 , 在质量浓度为 3.75 mg/L时 , 清除率已达到
100%,且清除 ABTS自由基的能力与其浓度呈正量
效关系(r=0.953 3);在相同质量浓度下 ,叶和皮的
正丁醇提取物清除 ABTS自由基的能力相近 ,在质
量浓度为 6.25 mg/L时 ,清除率分别达到 100%、
99.87%,并且与其浓度呈线性关系(相关系数分别
为0.975 8和0.984 3);皮乙酸乙酯提取物在质量浓
度为 6.25 mg/L以下时 , ABTS自由基清除率随质量
浓度增大几乎呈线性增加 (r=0.997 9),在 6.25
mg/L以上时 ,清除率趋于平缓 。
叶和皮石油醚提取物清除 ABTS自由基的能力
较弱 ,在质量浓度为 100 mg/L时 ,清除率才分别达
到 62.2%和 53.4%,因此未在图 2中显示 。
表 1显示 ,帽蕊木叶乙酸乙酯提取物清除 ABTS
自由基的能力最强(IC50 =1.165mg/L),强于阳性对
照 BHA和 BHT,弱于阳性对照 PG。帽蕊木叶和皮的
提取物与阳性对照 PG、BHA、BHT对 ABTS自由基的
清除能力顺序为:PG>叶乙酸乙酯提取物 >叶正丁
醇提取物 >BHA>皮正丁醇提取物 >皮乙酸乙酯提
取物 >BHT>叶石油醚提取物 >皮石油醚提取物 。
由此可见 ,帽蕊木叶提取物比皮提取物清除
ABTS自由基的能力好 。
2.3　FRAP(铁离子还原能力)法
表 1显示 ,帽蕊木叶和皮的提取物与阳性对照
PG、BHA、BHT还原 Fe3+能力顺序为:PG>BHA>
叶正丁醇提取物 >皮正丁醇提取物 >叶乙酸乙酯提
取物 >皮乙酸乙酯提取物 >BHT>皮石油醚提取物
>叶石油醚提取物。由此看出 ,帽蕊木叶正丁醇提
取物在 6个提取物中还原 Fe3+的能力最强 (FRAP
值 =1 395.94 μmolTE/g), 强于阳性对照 BHT
(FRAP值 =238.11 μmolTE/g),弱于阳性对照 PG
(FRAP值 =5 159.97 μmolTE/g)和 BHA(FRAP值
=2 573.96μmolTE/g)。
3种方法对帽蕊木叶和皮提取物研究结果显
示 ,帽蕊木叶提取物的抗氧化活性好于皮提取物的
活性;同一部位中 ,极性较大的乙酸乙酯和正丁醇提
取物的抗氧化活性比极性较小的石油醚提取物的抗
氧化活性高。
3　结论
本文国内外首次采用 DPPH、ABTS和 FRAP3
种方法对帽蕊木提取物进行了体外抗氧化活性考
察 ,发现在帽蕊木叶和皮提取物中 ,叶乙酸乙酯提取
物清除 DPPH、ABTS自由基的能力最强;叶正丁醇
提取物还原 Fe3+能力最强 ,皮正丁醇提取物次之 ,
都强于阳性对照 BHT,弱于阳性对照 PG、BHA;帽蕊
木叶抗氧化活性好于皮 。 (下转第 181页)
·152· 精 细 化 工　FINECHEMICALS　　　　　　　　　　　　　　第 26卷　
性 。(2)用对甲苯磺酸作催化剂 ,乙酸为溶剂改进
了 Diels-Alder反应。在烷基化反应时采用有机碱
叔丁醇钾作为催化剂 ,反应条件经多次优化 ,总收率
明显提高。
3　结论
本文以甲萘醌为起始原料 ,对甲苯磺酸为催化
剂 ,与环戊二烯发生 Diels-Alder反应 ,再与香叶基
香叶基溴发生烷基化反应 ,后经过逆 Diels-Alder反
应合成出维生素 K2 (20)。中间体及目标化合物经
IR, 1HNMR, 13CNMR, MS鉴定并确定了结构 。与传
统的直接烷基化法和格氏试剂法相比 ,本全合成方
法收率高 、容易操作 、反应条件温和 ,有一定工业应
用价值 。
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(上接第 152页)
　　研究结果表明 ,帽蕊木叶和皮的乙酸乙酯提取
物和正丁醇提取物都具有很好的抗氧化能力 ,可以
作为天然抗氧化剂进行研究开发。
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·181·第 2期 陈　洪 ,等:维生素 K2(20)的全合成