免费文献传递   相关文献

鸡肉参中总三萜含量的测定



全 文 :鸡肉参为民族民间常用中药,植物名为滇川角
蒿 Incarvillea mairei(H. Léveillé)Grierson,俗名土地
黄、波罗花、红花角蒿(丽江)、山洋参等〔1〕。云南主
产滇西北及东部地区,生长在海拔 2 400~3 655 m
高山石砾堆、山坡路旁向阳处〔2〕。具有滋补强壮功效,
用于治疗产后少乳、久病虚弱、头晕、贫血等证〔3〕。
目前,国内对角蒿属植物进行了生药学、化学成分
及药理活性的研究,其化学成分主要有单萜生物
碱、大环精胺类生物碱、三萜类、环烯醚萜苷类、黄
酮类和甾醇类等〔4〕。萜类化合物是鸡肉参的主要
有效化学成分之一,具有抗感受伤害和抗炎镇痛作
用〔4〕。经查阅相关文献,未见对鸡肉参中三萜类化
合物含量测定的报道。为此,本实验以鸡肉参的根
为原料,采用超声波提取法提取三萜类化合物〔5〕,
用 5%香草醛-冰醋酸、高氯酸比色法测定鸡肉参中
总三萜含量〔6-8〕。
1 仪器与试药
1.1 仪器 TU-1901双光束紫外可见分光光度计
(北京普析通用仪器);KQ5200DB型数控超声波清
洗仪(昆山市超声仪器公司);F120中药粉碎机(北
京中兴伟业仪器有限公司);SSY4电热恒温水浴锅
(北京泰仪器有限公司);DHG-9123A 电热鼓风干
燥箱(上海一恒科技有限公司)。
1.2 试药 甲醇、乙酸乙酯、高氯酸、冰醋酸、香草
醛均为分析纯;齐墩果酸对照品购买于中国药品生
物制品检定所(批号:110709-200505);鸡肉参药材
采自大理苍山花甸坝东山,准确鉴定,其根自然干
燥粉碎,过四号筛。
2 方法及结果
2.1 对照品溶液的制备 精密称取齐墩果酸对照品
[摘要]目的:采用紫外分光光度法对鸡肉参中总三萜成分的含量进行测定。方法:以齐墩果酸为对照品,以 5%香草醛-冰醋酸
溶液、高氯酸为显色系统,在 480 nm波长处测定样品吸光度。结果:齐墩果酸在 0.04~0.24 mg/mL范围内吸光度与含量成良好
的线性关系,其回归方程为:A=0.001 5 C+0.002 3,r=0.999 9,平均回收率为 99.37%,RSD =1.075%(n= 6),所测鸡肉参中总三萜
含量以齐墩果酸计为 1.41%。结论:该方法操作简便、快速,灵敏度高和重现性好,测定结果准确可靠,可用于鸡肉参的质量控
制。
[关键词]鸡肉参;总三萜;紫外分光光度法;质量控制
[中图分类号]R284.2 [文献标志码]A [文章编号]1672-2345(2011)12-0021-03
Determination of Triterpenoid in Incarvillea Mairei by Ultraviolet Spectrophotometry
ZHANG Shimei, YANG Yan, CHEN Ping, MA Lijun, DENG Yongming, YANG Yuee*
(School of Pharmacy and Chemistry, Dali University, Dali, Yunnan 671000, China)
〔Abstract〕Objective: To establish a method for measurement of total triterpene in Jirousheng (Incarvillea mairei) by Ultraviolet
spectrophotometry (UV). Methods: Using oleanolic acid as object, and 5% vanillin-glacial acetic acid solution and perchloric acid as
color-developing agent, total triterpenes was measured by spectrophotometry at 480 nm wavelength. Results: The oleanolic acid con-
tent showed a good linear relationship with absorbance (r=0.999 9) in the range of 0.04-0.24 mg/mL, and the regression equation was
A=0.001 5 C+0.002 3. The average recovery was 99.37% and RSD was 1.075%(n=6), Incarvillea mairei contained 1.41% of total
triterpene according to the calculation of oleanolic acid content. Conclusion: The method was simple, rapid, high sensitivity, repro-
ducible and reliable for the quality control of Incarvillea mairei.
〔Key words〕Incarvillea mairei; total triterpene; ultraviolet spectrophotometry; quality control
鸡肉参中总三萜含量的测定
张世梅,杨 艳,陈 萍,马丽军,邓咏铭,杨月娥 *
(大理学院药学与化学学院,云南大理 671000)
大理学院学报
JOURNALOF DALI UNIVERSITY
第10卷 第12期 2011年12月
Vol.10 No.12 Dec. 2011
21
20 mg置 100 mL量瓶中用甲醇定容,摇匀,即得对
照品溶液。
2.2 供试品溶液的制备 取鸡肉参粉末 0.5 g,精
密称定,置 50 mL具塞锥形瓶中,加甲醇 20 mL,超
声处理 90 min,滤过,放冷,滤液置 50 mL量瓶中,
甲醇定容,摇匀,精密量取 0.5 mL至 10 mL量瓶
中,甲醇定容,即得供试品溶液。
2.3 波长的选择 取齐墩果酸对照品溶液 1.0 mL
(空白对照为不加对照品溶液用乙酸乙酯稀释至刻
度的混合溶液),置具塞试管中,水浴挥干,加入
5%香草醛-冰醋酸溶液 0.4 mL,高氯酸 1.6 mL,70
℃水浴加热 15 min,冰水中冷却后,移至 10 mL量
瓶中加乙酸乙酯稀释至刻度,摇匀,于紫外可见分
光光度计上扫描。结果表明,对照品溶液在 480 nm
处有最大吸收峰,故确定测定波长为 480 nm,(见
图 1)。
图 1 齐墩果酸的吸收光谱图
2.4 显色剂的条件及用量选择
2.4.1 5%香草醛-冰醋酸溶液用量的选择 取齐墩
果酸对照品溶液 1.0 mL 5份,水浴挥干,分别加入
5%香草醛-冰醋酸 0.2、0.3、0.4、0.5、0.6 mL,各加入
高氯酸 1.4 mL,70 ℃水浴加热 15 min,冰水中冷却
后,移至 10 mL量瓶中加乙酸乙酯稀释至刻度,摇
匀,在 480 nm波长处测定吸收值,结果见表 1。实验
结果显示,5%香草醛-冰醋酸用量为 0.4 mL 时最
佳。
表 1 5%香草醛-冰醋酸用量结果
2.4.2 高氯酸用量的选择 取齐墩果酸对照品溶
液 1.0 mL 5份,水浴挥干,分别加入 5%香草醛-冰
醋酸 0.4 mL,高氯酸 1.0、1.2、1.4、1.6、1.8 mL,70 ℃
水浴加热 15 min,冰水中冷却后,移至 10 mL量瓶
中加乙酸乙酯稀释至刻度,摇匀,在 480 nm波长处
测定吸收值,结果见表 2。实验结果显示,高氯酸用
量为 1.6 mL时最佳。
表 2 高氯酸用量结果
2.5 标准曲线的制备 精密吸取齐墩果酸对照品
溶液 0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2 mL,分别置具塞试管
中,按“2.3”项下方法在 480 nm波长处测定吸收值,
以不加对照品溶液而直接加 5%香草醛-冰醋酸溶
液 0.4 mL,高氯酸 1.6 mL,用乙酸乙酯稀释至刻度
的混合溶液为空白对照,并以吸光度 A为纵坐标,
浓度 C(mg/mL)为横坐标绘制标准曲线,得回归方
程:A=0.001 5 C+0.002 3,r=0.999 9,齐墩果酸在
0.04~0.24 mg/mL范围内线性关系良好。
2.6 精密度试验 取鸡肉参粉末 0.5 g 5份,精密
称定,按“2.2”项下方法制备,按“2.3”项下方法操
作,测得吸光度的 RSD=1.86%,表明仪器精密度良
好。
2.7 稳定性试验 取鸡肉参粉末 0.5 g 5份,精密
称定,按“2.2”项下方法制备,按“2.3”项下方法操
作,每隔 0.5 h测定 1次,共测 6次,测得 RSD为
3.53%。结果说明显色反应在 3 h内基本稳定。
2.8 重复性试验 取鸡肉参粉末 0.5 g 5份,精密
称定,按“2.2”项下方法制备,各准确移取 1.0 mL,按
“2.3”项下方法操作,计算含量,得供试品的平均质
量分数的 RSD为 1.62%。
2.9 回收率试验 取鸡肉参粉末 0.25 g 6份,精密
称定,加入齐墩果酸对照品 0.5 mg,按“2.2”项下方
法制备,按“2.3”项下方法操作,在 480 nm波长处测
定吸收值,并计算回收率,所得平均回收率为
99.37%,RSD=1.075%。结果见表 3。
5%香草醛-冰醋酸溶液用量/mL 吸收值/A
0.2 0.248 5
0.3 0.301 2
0.4 0.398 1
0.5 0.325 7
0.6 0.287 2
高氯酸用量/mL 吸收值/A
1.0 0.276 1
1.2 0.333 0
1.4 0.384 7
1.8 0.372 3
1.6 0.398 6
大理学院学报总第 96期 医学
22
(上接第 11页)
中国药学杂志,2007,42(17):1299-1301.
〔7〕蔡乐,王曙,李涛,等. 印度獐牙菜的化学成分研究
〔J〕,华西药学杂志,2006,21(2):111-113.
〔8〕徐康平,徐平声,刘巍,等. 川东獐牙菜的化学成分研
究〔J〕. 天然产物研究与开发,2002,14(6):18-19.
〔9〕杨红澎,刘霞,师彦平. 流苏龙胆中的 酮类成分研究
〔J〕. 中草药,2007,38(3):344-366.
〔10〕王建农,侯翠英. 抱茎獐牙菜化学成分的研究〔J〕. 中草
药,1994,25(8):401-403.
[基金项目]云南省自然科学基金项目(2009ZC122M);云南
省教育厅重点项目(09Z0079)
[收稿日期]2011-08-23 [修回日期]2011-09-05
[作者简介]康绍龙,硕士研究生.
*通信作者:肖怀,副教授.
(责任编辑 毛本勇)
表 3 回收率测定结果
2.10 样品的含量测定 取鸡肉参粉末 0.5 g 5份,
精密称定,按“2.2”项下方法制备,按“2.3”项下方法
操作,在 480 nm波长处测定吸收值,代入标准曲线
方程,计算含量。结果总三萜类成分平均含量为
1.41%,RSD=1.62%(n=5)。
3 讨论
本实验采用香草醛-冰醋酸、高氯酸比色法测
定鸡肉参中总三萜类含量,测定过程中影响因素较
多,受反应时间、反应温度、各种试剂用量等因素影
响较为显著。通过实验探索了显色剂使用量及反应
后的放置时间,结果表明以 0.4 mL 新配制的 5%香
草醛-冰醋酸,1.6 mL高氯酸的显色剂配比为宜。显
色剂过多或过少会导致反应不完全,在测定过程中
不稳定,或不在适宜的范围内,误差比较大。反应温
度为 70 ℃,反应时间以 15 min为宜,反应时间过长
空白颜色加深,过短则反应不完全,加大误差。在操
作过程中,恒温水浴结束后应立即放入冰水中,保
证反应及时终止。反应后的放置时间在 3 h内基本
稳定。得到的标准曲线具有良好的线性关系。该实
验方法操作简便、快速,灵敏度高,测定结果稳定、
准确、重现性好,可作为鸡肉参中总三萜成分含量
测定的有效方法,为鸡肉参的质量控制和进一步开
发利用提供了科学依据。
(志谢:本课题研究过程中,大理学院生药教研
室的全体老师给予了悉心指导,综合实验室的杨永
寿老师给予大力支持和帮助,在此一并致谢。)
[参考文献]
〔1〕杨月娥,段宝忠. 白族药鸡肉参的生药学研究〔J〕. 时珍
国医国药,2009,20(1):181-182.
〔2〕中国科学院植物研究所. 中国高等植物:(第 10卷)〔M〕.
青岛:青岛出版社,2004:433.
〔3〕江苏新医学院. 中药大辞典:(上册)〔M〕. 上海:上海科
学技术出版社,1977:12050.
〔4〕吉腾飞,冯孝章. 角篙属植物化学成分和药理活性〔J〕.
国外医药·植物药分册,2003,18(4):154-157.
〔5〕周俐斐,芦柏震,侯桂兰. 中药三萜类化合物的提取分离
及测定方法研究进展〔J〕. 海峡药学,2007,19(3):62-64.
〔6〕薛璟,贾晓斌,谭晓斌,等. 雷公藤制剂中雷公藤红素及
雷公藤总三萜的测定〔J〕.中华中医药杂志,2010,25(7):
1105-1108.
〔7〕侯敏娜,刘剑. 灵芝三萜的提取分离及总三萜的含量测
定〔J〕. 现代中药研究与实践,2010,24(5):70-71.
〔8〕季春,张融,胡晨,等. 比色法测定南蛇藤中总三萜类成
分的含量〔J〕. 时珍国医国药,2009,20(4):909-910.
[基金项目]大理学院大学生科研基金资助项目
(DXSKYY201019)
[收稿日期]2011-06-01 [修回日期]2011-07-21
[作者简介]张世梅,2008级药学专业本科生.
*通信作者:杨月娥,高级实验师.
(责任编辑 毛本勇)
取原药
材量/g
折合成
齐墩果
酸量/mg
加入齐
墩果酸
量/mg
测定齐
墩果酸
量/mg
回收率/
%
平均回
收率/% RSD/%
0.250 0 0.352 5 0.500 0 0.852 7 100.04
99.37 1.075
0.250 0 0.352 5 0.500 0 0.852 7 100.04
0.250 5 0.353 2 0.500 0 0.839 5 97.26
0.250 3 0.352 9 0.500 0 0.846 1 98.64
0.250 0 0.352 5 0.500 0 0.852 7 100.04
0.250 2 0.352 8 0.500 0 0.853 9 100.22
张世梅,杨 艳,陈 萍,等 鸡肉参中总三萜含量的测定 第 10卷总第 96期
23