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及模式识别研究［Ｊ］．中国实验方剂学杂志，２０１１，１７
（１１）：５９－６１．
［５］　张志清，山学祥，李东明，等．珠子参、羽叶三七规范
化栽培生物学研究［Ｊ］．云南中医药杂志，２０１１，３２（９）：
３４－３６．
［６］　张志清，曹蕾，宋亮，等．珠子参类药物历史沿革与应
用展望［Ｊ］．云南中医中药杂志，２０１２，３３（９）：６８－７１．
［７］　宋小妹，李渊源，宋蓓．珠子参不同药用部位微量元素
分析［Ｊ］．西北药学杂志，２０１１，２６（２）：７９－８１．
［８］　Ｚｉｅｔｋｉｅｗｉｃｚ　Ｅ，Ｒａｆａｌｓｋｉ　Ａ，Ｌａｂｕｄａ　Ｄ．Ｇｅｎｏｍｅ　ｆｉｎｇｅｒ－
ｐｒｉｎｔｉｎｇ　ｂｙ　ｓｉｍｐｌｅ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｒｅｐｅａｔ（ＩＳＳＲ）ａｎｃｈｏｒｅｄ
ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎ　ｒｅａｃｔｉｏｎ　ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｇｅｎｏｍｉｃｓ，
１９９４，２０：１７６－１８３．
［９］　Ｐｒａｄｅｅｐ　Ｒｅｄｄｙ　Ｍ，Ｓａｒｌａ　Ｎ，Ｓｉｄｄｉｑ　Ｅ　Ａ．Ｉｎｔｅｒ－ｓｉｍｐｌｅ　ｓｅ－
ｑｕｅｎｃｅ　ｒｅｐｅａｔ（ＩＳＳＲ）ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ　ａｎｄ　ｉｔｓ　ａｐｐｌｉｃａ－
ｔｉｏｎ　ｉｎ　ｐｌａｎｔ　ｂｒｅｅｄｉｎｇ［Ｊ］．Ｅｕｐｈｙｔｉｃａ，２００２，１２８：９－１７．
［１０］杨翠芳，陈伯伦，黄诚梅，等．大果油茶基因组ＤＮＡ提
取及ＩＳＳＲ反应体系建立［Ｊ］．南方农业学报，２０１１，４２
（３）：２３３－２３５．
［１１］汪琛颖，赵建成．真藓科植物ＩＳＳＲ－ＰＣＲ反应体系的
优化及ＩＳＳＲ指纹图谱的初步构建［Ｊ］．安徽农业科
学，２０１１，３９（２７）：１６４９０－１６４９３．
［１２］王文峰，李毅，马彦军，等．青海云杉ＩＳＳＲ－ＰＣＲ反应
体系的建立与优化［Ｊ］．安徽农业科学，２００９，７（２１）：
９８６８－９８７１．
［１３］庞赫，郭太君，胡志军，等．大花君子兰ＩＳＳＲ－ＰＣＲ反
应体系的建立与优化［Ｊ］．吉林农业大学学报，２０１０，３２
（２）：１６７－１７１．
［１４］刘峰，顾志敏，陈析丰，等．长春花ＩＳＳＲ－ＰＣＲ反应体
系的正交优化［Ｊ］．安徽农业科学，２０１０，３８（５）：２２６１－
２２６２，２２６７．
［１５］黄晓丹，张云贵，应铁进．高质量植物基因组ＤＮＡ的
提取［Ｊ］．植物生理学通讯，２００６，４２（２）：３１１－３１４．
（收稿日期：２０１４－０５－２６）
紫外可见分光光度法测定苣荬菜根部总三萜皂苷的含量
刘伟锐＃，张　霞＃，姜　蕊，杨　悦，谢　梦，颜　承，折改梅＊（北京中医药大学中药学院，北京　１００１０２）
摘要：目的　用紫外可见分光光度法测定苣荬菜根部总三萜皂苷的含量。方法　采用ＡＢ－８、Ｄ－１０１、Ｄ－４０２０、ＨＰＤ－４００和ＮＫＡ－９
５种大孔树脂对苣荬菜根部总三萜皂苷进行纯化，以齐墩果酸为对照品，５０ｇ·Ｌ－１香草醛－冰醋酸、高氯酸为显色系统，在５４６ｎｍ
波长处测定总三萜皂苷含量。结果　在ＡＢ－８、Ｄ－１０１、Ｄ－４０２０、ＨＰＤ－４００和ＮＫＡ－９　５种树脂中，Ｄ－１０１对苣荬菜根部总三萜皂苷
纯化效果最好；齐墩果酸质量浓度在０．０３４　２～０．１０６　５ｍｇ·ｍＬ－１范围内，吸光度与含量呈良好的线性关系，回归方程Ｙ＝
８．２９８　２　Ｘ－０．０８４　９（ｒ＝０．９９９　６），平均加样回收率为９５．３％，ＲＳＤ＝１．５％（ｎ＝５），苣荬菜根部总三萜皂苷含量为０．２０２％，ＲＳＤ
＝２．６％。结论　该方法操作简单，快速灵敏，准确可靠，对设备要求不高，适用于苣荬菜根部总三萜皂苷的含量测定。
关键词：苣荬菜；总三萜皂苷；含量测定；紫外可见分光光度法
ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００４－２４０７．２０１４．０６．００２
中图分类号：Ｒ２８２　　　文献标志码：Ａ　　　文章编号：１００４－２４０７（２０１４）０６－０５５４－０４
Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ｔｒｉｔｅｒｐｅｎｅｓ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ｒｏｏｔｓ　ｏｆ　Ｓｏｎｃｈｕｓ　ａｒｖｅｎｓｉｓ　Ｌ．ｂｙ　ｓｐｅｃｔｒｏ－
ｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ
ＬＩＵ　Ｗｅｉｒｕｉ＃，ＺＨＡＮＧ　Ｘｉａ＃，ＪＩＡＮＧ　Ｒｕｉ，ＹＡＮＧ　Ｙｕｅ，ＸＩＥ　Ｍｅｎｇ，ＹＡＮ　Ｃｈｅｎｇ，ＳＨＥ　Ｇａｉｍｅｉ＊（Ｓｃｈｏｏｌ　ｏｆ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｐｈａｒｍａｃｙ，
Ｂｅｉｊｉｎｇ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｂｅｉｊｉｎｇ　１００１０２，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈ　ａ　ｎｅｗ　ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ｔｒｉｔｅｒｐｅｎｅｓ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ｒｏｏｔｓ　ｏｆ　Ｓｏｎｃｈｕｓ　ａｒｖｅｎｓｉｓ　Ｌ．ｂｙ
ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｂｙ　ｕｓｉｎｇ　ＡＢ－８，Ｄ－１０１，Ｄ－４０２０，ＨＰＤ－４００ａｎｄ　ＮＫＡ－９ｆｉｖｅ　ｋｉｎｄｓ　ｏｆ　ｍａｃｒｏｐｏｒｏｕｓ　ｒｅｓｉｎｓ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｐｕｒ－
ｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ｔｒｉｔｅｒｐｅｎｅｓ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ｒｏｏｔｓ　ｏｆ　Ｓ．ａｒｖｅｎｓｉｓ　Ｌ．，ｗｉｔｈ　ｏｌｅａｎｏｌｉｃ　ａｃｉｄ　ａｓ　ｓｔａｎｄａｒｄ，５０ｇ·Ｌ－１　ｖａｎｉｌｉｎ－ａｃｅｔｉｃ　ａｃｉｄ，ｐｅｒ－
ｃｈｌｏｒｉｃ　ａｃｉｄ　ａｓ　ｃｏｌｏｒｉｎｇ　ｓｙｓｔｅｍｓ，ｔｒｉｔｅｒｐｅｎｅｓ　ｗａｓ　ｍｅａｓｕｒｅｄ　ｂｙ　ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ　ａｎｄ　ｄｅｔｅｃｔｅｄ　ａｔ　５４６ｎｍ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｄ－１０１ｍａｃｒｏ－
ｐｏｒｏｕｓ　ｒｅｓｉｎ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈｅ　ｂｅｓｔ　ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｔｏｔａｌ　ｔｒｉｔｅｒｐｅｎｅｓ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ｒｏｏｔｓ　ｏｆ　Ｓ．ａｒｖｅｎｓｉｓ　Ｌ．．Ａｂｓｏｒｂａｎｃｅ
ａｎｄ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ｏｌｅａｎｏｌｉｃ　ａｃｉｄ　ｓｈｏｗｅｄ　ａ　ｇｏｏｄ　ｌｉｎｅａｒ　ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｒａｎｇｅ　ｏｆ　０．０３４　２－０．１０６　５ｍｇ·ｍＬ－１．Ｔｈｅ　ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ　ｅｑｕａｔｉｏｎ
ｗａｓ　Ｙ＝８．２９８　２Ｘ－０．０８４　９（ｒ＝０．９９９　６），ａｎｄ　ｔｈｅ　ａｖｅｒａｇｅ　ｒｅｃｏｖｅｒｙ　ｒａｔｅ　ｗａｓ　９５．３％，ＲＳＤ＝１．５％（ｎ＝５）．Ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ｔｒｉｔｅｒ－
ｐｅｎｅｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｒｏｏｔｓ　ｏｆ　Ｓ．ａｒｖｅｎｓｉｓ　Ｌ．ｗａｓ　０．２０２％，ＲＳＤ＝２．６％．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　Ｔｈｉｓ　ｍｅｔｈｏｄ　ｉｓ　ｓｉｍｐｌｅ，ｆａｓｔ　ａｎｄ　ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ，ａｃｃｕｒａｔｅ　ａｎｄ　ｒｅ－
ｌｉａｂｌｅ，ｌｅｓｓ　ｄｅｍａｎｄｉｎｇ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｄｅｖｉｃｅ，ａｎｄ　ｃａｎ　ｂｅ　ｕｓｅｄ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ｔｒｉｔｅｒｐｅｎｅｓ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ｒｏｏｔｓ　ｏｆ　Ｓ．ａｒｖｅｎｓｉｓ　Ｌ．．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｓｏｎｃｈｕｓ　ａｒｖｅｎｓｉｓ　Ｌ．；ｔｏｔａｌ　ｔｒｉｔｅｒｐｅｎｅｓ；ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ；ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ
基金项目：教育部大学生创新性实验计划（编号：２０１３１００２６０６８）；
陕北地区苦菜汁开发研究（横向课题）
＃共同第一作者：刘伟锐，男，在读硕士研究生；
张霞，女，在读硕士研究生
＊通信作者：折改梅，女，博士，副教授，博士生导师
　　苣荬菜为菊科（Ｃｏｍｐｏｓｉｔａｅ）苦苣菜属（Ｓｏｎｃｈｕｓ）
植物苣荬菜（Ｓ．ａｒｖｅｎｓｉｓ　Ｌ．）的干燥全草，又名苦菜、
苦荬菜、取麻菜等。苣荬菜性寒、味苦，具有清热解
４５５ 西北药学杂志　２０１４年１１月　第２９卷　第６期
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毒、消肿排脓、凉血利湿等功效，临床上常用于治疗急
性痢疾、阑尾炎、产后出血等症［１－２］。陕北人民认为长
期服用苦菜能够降低血糖，且有关苦菜的降血糖药效
研究已有报道［３］。苣荬菜含有丰富的三萜皂苷、黄
酮、香豆素等成分［４－５］。其中三萜皂苷具有降血糖、保
肝、抗炎、抗肿瘤等作用，认为可能是苣荬菜发挥降血
糖作用的活性成分［６－７］。苣荬菜三萜皂苷集中于根
部，地上部分则多为黄酮类成分。迄今为止，苣荬菜
根部三萜皂苷的含量测定却未有报道。因此，本实验
采用紫外可见分光光度法测定苣荬菜根部三萜皂苷
的含量［８］。
本课题组预实验发现，对体积分数８０％甲醇提
取的苣荬菜根部总三萜皂苷显色后进行全波段扫描，
影响因素太多，未发现最大吸收。故而本实验采用大
孔树脂纯化苣荬菜根部总三萜皂苷，并对最佳树脂进
行了筛选。以齐墩果酸为对照品，优化测定和显色方
法，选出最佳波长，并进行方法学考察，首次建立了以
５０ｇ·Ｌ－１香草醛－冰醋酸、高氯酸为显色系统［９］，用
紫外可见分光光度法测定苣荬菜根部总三萜皂苷含
量的方法，为进一步利用和开发苣荬菜资源奠定
基础。
１　仪器与试药
１．１　仪器　ＴＵ－１８１０紫外可见分光光度计（北京普
析通用仪器有限责任公司）；ＤＫ－Ｓ２４型电热恒温水
浴锅（上海精宏实验设备有限公司）；Ｓａｒｔｏｒｉｏｕｓ　ＢＴ
２５Ｓ１／１０　０００和Ｓａｒｔｏｒｉｏｕｓ　ＢＳ　１２４Ｓ１／１０　０００电子
分析天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司）；ＫＱ－
１００ＤＥ型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限
公司）；旋转蒸发仪ＲＥ－５２Ａ（上海亚荣生化仪器厂）。
１．２　试药　苣荬菜（采自陕西省榆林市米脂县，经北
京中医药大学张媛副教援鉴定为苣荬菜Ｓｏｎｃｈｕｓ　ａｒ－
ｖｅｎｓｉｓ　Ｌ．）；齐墩果酸对照品（中国食品药品检定研究
院，质量分数以９４．９％计，批号：１１０７０９－２０１２０６）；大
孔树脂 ＡＢ－８、Ｄ－１０１、Ｄ－４０２０、ＨＰＤ－４００、ＮＫＡ－９（南
开大学化工厂）；甲醇、冰醋酸、香草醛和高氯酸等均
为分析纯。
２　方法与结果
２．１　供试品溶液制备　预实验中，用体积分数８０％
甲醇回流提取苣荬菜根部，２次滤液合并，抽滤，减压
浓缩后用１００ｍＬ甲醇定容，作为供试品溶液。但供
试品显色后全波段扫描时，并未发现最大波长。故本
实验采用大孔树脂纯化供试品溶液，并对最优树脂进
行了筛选。
２．１．１　树脂筛选　将ＡＢ－８、Ｄ－１０１、Ｄ－４０２０、ＨＰＤ－４００
和ＮＫＡ－９　５类大孔树脂进行预处理，精密称取上述树
脂各１ｇ，置于１００ｍＬ的锥形瓶中，移取２０ｍＬ体积
分数８０％甲醇回流提取的苣荬菜根部水溶液，每
１０ｍｉｎ振摇２０ｓ，持续６ｈ使其充分吸附，过滤，得吸
附后溶液。将５种树脂置于１００ｍＬ锥形瓶中，分别
加２０ｍＬ甲醇，每１０ｍｉｎ振摇２０ｓ，持续６ｈ使其充
分解吸附，过滤，得解吸附液。
分别精密移取１ｍＬ吸附后溶液和解吸附液，按
２．５项中所示方法显色并测定吸光度值。结果 ＡＢ－
８、ＨＰＤ－４００、Ｄ－１０１和Ｄ－４０２０和ＮＫＡ－９的洗脱率分
别为 ５２．４８％，４０．８１％，５６．６８％，４１．５１％ 和
３８．４８％。结果显示，在相同条件下，Ｄ－１０１大孔树脂
对苣荬菜根部总三萜皂苷纯化效果最佳。
２．１．２　最佳洗脱溶剂考察　取体积分数８０％的甲
醇回流提取的苣荬菜根部提取物少量，用２０ｍＬ水
溶解，离心，取其上清液湿法上Ｄ－１０１柱（２．０ｃｍ×
１３．０ｃｍ），用４０ｍＬ水洗脱，再以１０％梯度变化，用
体积分数１０％～１００％甲醇洗脱，收集各梯度洗脱
液，按２．５项中所示方法显色测定吸光度值，并对各
梯度显色后进行全波段扫描。结合薄层色谱分析表
明，体积分数６０％～１００％洗脱液中含三萜皂苷，最
终确定用体积分数为５０％的甲醇除杂，弃之，收集甲
醇洗脱液。
２．１．３　供试品溶液的制备　精密称取苣荬菜根部粉
末１０．０３０　４ｇ，用体积分数８０％甲醇按料液比１∶１０
回流提取３次，每次２ｈ，３次滤液合并，过滤，减压浓
缩，浓缩液用４０ｍＬ水溶解，上Ｄ－１０１树脂柱，上柱
后依次用１个柱体积的水、体积分数为５０％的甲醇
除杂，用１个柱体积的甲醇洗脱，收集洗脱液，减压浓
缩，得苣荬菜供试品粉末。精密称取供试品粉末
０．１２４　９ｇ，置于１００ｍＬ量瓶中，加甲醇溶解并定容
至刻度，得供试品溶液。
２．２　对照品溶液的制备　精密称取齐墩果酸对照品
５．１４ｍｇ，置于５０ｍＬ的量瓶中，加甲醇溶解并定容
至刻度，摇匀，得质量浓度为０．１０２　８ｍｇ·ｍＬ－１的对
照品溶液。
２．３　测定波长的选择　精密吸取１ｍＬ对照品溶液
和１ｍＬ供试品溶液，水浴挥干溶剂，分别准确加入
０．２ｍＬ的５０ｇ·Ｌ－１香草醛－冰醋酸和０．８ｍＬ的高
氯酸，置于６０℃水浴１５ｍｉｎ，取出，立刻用流水冷却
至室温，再分别加５ｍＬ冰醋酸，摇匀，静置３０ｍｉｎ。
在２００～８００ｎｍ全波长扫描，结果对照品和供试品
均在５４６ｎｍ处有最大吸收。因此，确定最大吸收波
长为５４６ｎｍ。
２．４　显色条件的选择
２．４．１　显色剂５０ｇ·Ｌ－１香草醛－冰醋酸用量的考
察　精密移取供试品溶液５份，每份１ｍＬ，按２．５项
的方法操作，５０ｇ·Ｌ－１香草醛－冰醋酸的加入量分别
５５５西北药学杂志　２０１４年１１月　第２９卷　第６期
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为０．１，０．２，０．３，０．４和０．５ｍＬ。在５４６ｎｍ处测定吸
光度，结果依次为０．６５５，０．６７３，０．６６２，０．６７０和０．６５２。
故５０ｇ·Ｌ－１香草醛－冰醋酸的最佳用量为０．２ｍＬ。
２．４．２　显色剂高氯酸用量的考察　精密移取供试品
溶液５份，每份１ｍＬ，按２．５项的方法操作，高氯酸
的加入量分别为０．６，０．８，１．０，１．２和１．４ｍＬ。在
５４６ｎｍ处测定吸光度。结果依次为０．５８９，０．６４３，
０．６３３，０．６２６和０．５７９。故高氯酸的最佳用量为０．８ｍＬ。
２．４．３　显色温度的考察　精密移取供试品溶液
５份，每份１ｍＬ，按２．５项的方法操作，水浴温度分
别为５０，６０，７０和８０℃。在５４６ｎｍ处测定吸光度。
结果依次为０．５２８，０．６７０，０．９４４和１．２３５。随温度
升高，吸光度逐渐增大。但当水浴温度超过７０℃后，
空白溶液开始变黄，且在２００～８００ｎｍ全波段扫描，
发现在５４６ｎｍ左右无最大吸收，故选择最佳水浴温
度为６０℃。
２．４．４　显色时间的考察　精密移取供试品溶液
５份，每份１ｍＬ，按２．５项的方法操作，水浴时间分
别为１０，１５，２０和２５ｍｉｎ。在５４６ｎｍ处测定吸光度。
结果依次为０．６３２，０．７４７，０．６８５和０．６８１。故最佳水
浴时间为１５ｍｉｎ。
２．５　标准曲线的制作　精密吸取０．３，０．４，０．５，０．６，
０．８，１．０和１．２ｍＬ质量浓度为０．１０２　８ｍｇ·ｍＬ－１
的齐墩果酸对照品溶液，水浴挥干溶剂，再分别加入
５０ｇ·Ｌ－１香草醛－冰醋酸０．２ｍＬ和高氯酸０．８ｍＬ，
于６０℃水浴加热１５ｍｉｎ，取出，流水冷却至室温，再
分别加入５ｍＬ冰醋酸，摇匀，静置３０ｍｉｎ，在５４６ｎｍ
处测定吸光度，设空白对照。以吸光度为纵坐标、齐
墩果酸的质量浓度为横坐标，做标准曲线，回归方程：
Ｙ＝８．２９８　２　Ｘ－０．０８４　９，ｒ＝０．９９９　６（ｎ＝６），线性范
围为０．０３４　３～０．１０６　６ｍｇ·ｍＬ－１。
２．６　精密度　精密移取供试品溶液５份，每份
１ｍＬ，按２．５项的方法操作，在５４６ｎｍ处测定吸光
度，其值依次为０．５３１，０．５２９，０．５２８，０．５２８和０．５２７，
ＲＳＤ为０．２９％（ｎ＝５），说明精密度良好。
２．７　显色稳定性　精密移取供试品溶液１ｍＬ，按２．５
项的方法操作，在显色后０～１５０ｍｉｎ内每隔１０ｍｉｎ
测定吸光度值。结果表明，供试品在显色后的３０～
１５０ｍｉｎ内稳定，ＲＳＤ＝２．６８％。因此，选择在显色
后静置３０ｍｉｎ测定吸光度值。
２．８　重复性　精密称取苣荬菜根部粉末５份，每份
约１０．０ｇ，按２．１．３项方法制备供试品溶液，再按２．５
项方法操作，在５４６ｎｍ波长处测定吸光度，其值依
次为０．６６２，０．６７７，０．６７５，０．６６９，０．６９９和０．６５４，
ＲＳＤ＝２．３０％（ｎ＝６），说明重复性良好。
２．９　加样回收率　精密移取５份已知含量的供试品
溶液，每份０．５ｍＬ，再分别加入０．５ｍＬ质量浓度为
０．１０２　８ｍｇ·ｍＬ－１的齐墩果酸对照品溶液，按２．５项
方法操作，在５４６ｎｍ波长处测定吸光度。结果显示，
该方法的平均加样回收率为９５．３％，ＲＳＤ为１．５％
（ｎ＝５）。表明该方法测定结果准确可靠。结果见表１。
表１　加样回收率实验结果
Ｔａｂ．１Ｒｅｓｕｌｔｓ　ｏｆ　ｒｅｃｏｖｅｒｙ　ｔｅｓｔ
编号 吸光度
对照品加
入量／ｍｇ
测得量
／ｍｇ
理论量
／ｍｇ
加样回收
率／％
平均回收
率／％
ＲＳＤ
／％
１　 ０．６８８　 ５１．４　 ５５８．８　 ５３８．０　 ９４．３３
２　 ０．６９８　 ５１．４　 ５６６．１　 ５３８．０　 ９５．６７
３　 ０．７０９　 ５１．４　 ５７４．０　 ５３８．０　 ９７．１５　 ９５．３　 １．５
４　 ０．６８２　 ５１．４　 ５５４．５　 ５３８．０　 ９３．５２
５　 ０．７００　 ５１．４　 ５６７．５　 ５３８．０　 ９５．９４
２．１０　样品含量测定　精密称取５份供试品粉末，每
份１０ｍｇ，用甲醇溶解并定容至１０ｍＬ，再分别从每
份中吸取１ｍＬ，按２．５项方法操作，在５４６ｎｍ波长
处测定吸光度，测得纯化后药材中的总三萜皂苷含量
为７．９６％。原药中总三萜皂苷含量为０．２０２％，ＲＳＤ
为２．６％。结果见表２。
表２　样品含量测定结果
Ｔａｂ．２Ｒｅｓｕｌｔｓ　ｏｆ　ｓａｍｐｌｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ
编号
样品质量
／ｍｇ
吸光度
三萜皂苷
含量／％
平均含量
／％
ＲＳＤ
／％
１　 １０．２　 ０．５９１　 ０．２００
２　 １０．２　 ０．５８９　 ０．２００
３　 １０．５　 ０．５７７　 ０．１９６　 ０．２０２　 ２．６
４　 １０．４　 ０．６１３　 ０．２０７
５　 １０．４　 ０．６１８　 ０．２０８
３　讨论
①样品纯化及树脂筛选　本课题前期直接提取
苣荬菜根部总三萜皂苷，显色后全波段扫描未发现最
大吸收波长，故采用大孔树脂进行纯化，并对极性
ＮＫＡ－９、非极性Ｄ－１０１和Ｄ－４０２０及弱极性 ＡＢ－８和
ＨＰＤ－４００大孔树脂进行了筛选，得出Ｄ－１０１树脂对
三萜皂苷的纯化作用最好。此方法精确可靠，为以后
含量测定的供试品溶液制备提供了可行性依据。
②定容溶剂的筛选　有关三萜皂苷含量测定的
定容溶剂多用乙酸乙酯和冰醋酸，但本课题前期对纯
化后的供试品显色后用乙酸乙酯定容，在加样回收率
实验时始终不理想。通过比较冰醋酸定容和加５ｍＬ
冰醋酸，最终决定采用加５ｍＬ冰醋酸，达到了理想
结果［１０－１２］。这为三萜皂苷的含量测定提供了更准确
的方法。
③本实验首次采用５０ｇ·Ｌ－１香草醛－冰醋酸、高氯
酸法测定苣荬菜根部总三萜皂苷的含量，并对所有显色
６５５ 西北药学杂志　２０１４年１１月　第２９卷　第６期
ｈｔｔｐ：／／ＸＢＹＺ．ｃｂｐｔ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ
条件进行了考察，确定出最佳显色条件为５０ｇ·Ｌ－１
的香草醛－冰醋酸用量为０．２ｍＬ，高氯酸用量为
０．８ｍＬ，加热温度６０℃，加热时间为１５ｍｉｎ。且此
方法在显色后３０～１５０ｍｉｎ稳定，ＲＳＤ为２．６８％，重
复性好，方法简便可靠，为进一步开发和利用苣荬菜
根部这一丰富的自然资源提供了依据。
参考文献：
［１］　江苏新医学院．中药大词典：上册［Ｍ］．２版．上海：
上海科学技术出版社，１９８５：１０５４．
［２］　中国中医研究院中药研究所．全国中草药名鉴［Ｍ］．
北京：人民卫生出版社，１９９６：７９７．
［３］　杨光，李记争，马琳，等．苦苣菜对糖尿病小鼠血糖血脂
及抗氧化酶的影响［Ｊ］．中药材，２０１０，３３（７）：１１３２－１１３５．
［４］　武斌，张朝凤，张勉．苣荬菜全草中的三萜类成分
［Ｊ］．药学与临床研究，２０１０，１８（３）：２７６－２７７．
［５］　霍碧姗，秦民坚．苦苣菜属植物化学成分与药理作用
［Ｊ］．国外医药植物药分册，２００８，２３（５）：２０３－２０７．
［６］　张云峰，魏东，邓雁如，等．三萜皂苷的生物活性研究
新进展［Ｊ］．中成药，２００６，２８（９）：１３４９－１３５３．
［７］　柴瑞华，肖春莹，关健，等．苦瓜总皂苷降血糖作用的
研究［Ｊ］．中草药，２００８，３９（５）：７４６－７４７．
［８］　张彦丽，韩艳春，阿依吐伦·斯马义．分光光度法测
定维吾尔药昆仑雪菊中总皂苷的含量［Ｊ］．西北药学
杂志，２０１１，２６（２）：８７－８８．
［９］　邸金明，刘彬彬，赵婧，等．齐墩果酸５种含量测定方
法的比较研究［Ｊ］．西北药学杂志，２０１３，２８（５）：
４８３－４８６．
［１０］季春，张融，胡晨．比色法测定南蛇藤中总三萜类成
分的含量［Ｊ］．时珍国医国药，２００９，２０（４）：９０９－９１０．
［１１］郭辉，张玲，崔桂华，等．分光光度法测定乳香中总
三萜类有机酸成分的含量［Ｊ］．中国医院药学杂志，
２００８，２８（１８）：１６１９－１６２０．
［１２］王志平，段妖娆，刘占云，等．比色法测定朱砂根中
三萜类成分的含量［Ｊ］．武警后勤学院学报，２０１２，２１
（３）：１５８－１６０．
（收稿日期：２０１４－０５－２８）
甘草不同粒级对重金属形态提取的影响
潘　兰１，刘海涛１，２，石明辉１，贾新岳１＊，邱殿光１（１．新疆维吾尔自治区中药民族药研究所，乌鲁木齐　８３０００２；２．中国医
学科学院药用植物研究所，北京　１００１９３）
摘要：目的　了解不同粒级甘草中的重金属的形态分布，探讨不同粒级对甘草重金属形态提取的影响。方法　通过连续提取法
对不同粒级甘草中重金属的形态进行提取，用原子吸收光谱法测定Ｃｕ、Ｐｂ、Ｃｄ、Ｈｇ和Ａｓ的含量。结果　Ｃｕ碳酸盐结合态比例
最高，其余各态含量也较高；Ｃｄ以水溶态、离子交换态、铁锰氧化物结合态、残渣态为主；Ｐｂ以水溶态、有机态、残渣态含量所占
比例较高；Ａｓ以水溶态、铁锰氧化物结合态及残渣态为主，其余各形态的含量差异较小；Ｈｇ以水溶态、离子交换态为主。Ａｓ、Ｃｄ
可利用态与药材的粉碎粒级呈正相关关系，Ｃｕ、Ｐｂ、Ｈｇ可利用态与药材的粉碎粒级呈显著的负相关关系。结论　粒级对各重金
属各个形态的提取有一定的影响，但并不一致。
关键词：甘草；重金属形态；粒级
ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００４－２４０７．２０１４．０６．００３
中图分类号：Ｒ２８２　　　文献标志码：Ａ　　　文章编号：１００４－２４０７（２０１４）０６－０５５７－０４
Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｇｒａｎｕｌａｒｉｔｙ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｈｅａｖｙ　ｍｅｔａｌ　ｓｐｅｃｉａｔｉｏｎ　ｉｎ　Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａｅ
ｒａｄｉｘ　ｅｔ　ｒｈｉｚｏｍａ
ＰＡＮ　Ｌａｎ１，ＬＩＵ　Ｈａｉｔａｏ１，２，ＳＨＩ　Ｍｉｎｇｈｕｉ　１，ＪＩＡ　Ｘｉｎｙｕｅ１＊，ＱＩＵ　Ｄｉａｎｇｕａｎｇ１（１．Ｘｉｎｊｉａｎｇ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｍａｔｅｒｉａ　Ｍａｄｉｃａ　ａｎｄ
Ｅｔｈｎｏｄｒｕｇ，Ｕｒｕｍｑｉ　８３０００２，Ｃｈｉｎａ；２．Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆ　Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ　Ｐｌａｎｔ　Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ａｃａｄｅｍｙ　ｏｆ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｂｅｉｊｉｎｇ
１００１９３，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｈｉｓ　ｓｔｕｄｙ　ｗａｓ　ｄｅｓｉｇｎｅｄ　ｔｏ　ａｎａｌｙｚｅ　ｔｈｅ　ｓｐｅｃｉａｔｉｏｎ　ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ　ｏｆ　ｈｅａｖｙ　ｍｅｔａｌｓ（ｌｅａｄ，ｃａｄｍｉｕｍ，
ｃｏｐｐｅｒ，ａｒｓｅｎｉｃ，ｍｅｒｃｕｒｙ）ｉｎ　Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａｅｒａｄｉｘ　ｅｔ　ｒｈｉｚｏｍａ　ｗｉｔｈ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｇｒａｎｕｌａｒｉｔｙ　ｒａｎｇｅ，ａｎｄ　ｔｏ　ｓｔｕｄｙ　ｔｈｅ　ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ
ｇｒａｎｕｌａｒｉｔｙ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｈｅａｖｙ　ｍｅｔａｌ　ｓｐｅｃｉａｔｉｏｎ　ｉｎ　Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａｅｒａｄｉｘ　ｅｔ　ｒｈｉｚｏｍａ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｓｅｑｕｅｎｔｉａｌ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ
ｗａｓ　ｕｓｅｄ　ｔｏ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｔｈｅ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｆｒａｃｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ｈｅａｖｙ　ｍｅｔａｌｓ（ｗａｔｅｒ　ｓｏｌｕｂｌｅ　ｆｒａｃｔｉｏｎ，ｉｏｎ　ｅｘｃｈａｎｇｅ　ｆｒａｃｔｉｏｎ，ｃａｂｏｎａｔｅ　ｂｏｕｎｄ　ｆｒａｃｔｉｏｎ，
Ｆｅ－Ｍｎ　ｏｘｉｄｅ　ｆｒａｃｔｉｏｎ，ｏｒｇａｎｉｃ　ｆｒａｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｒｅｓｉｄｕａｌ　ｆｒａｃｔｉｏｎ）ｉｎ　Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａｅ　ｒａｄｉｘ　ｅｔ　ｒｈｉｚｏｍａ．Ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ（ｍａｓｓ　ｆｒａｃｔｉｏｎ）ｏｆ
Ｐｂ，Ｃｕ，Ａｓ，Ｈｇ　ａｎｄ　Ｃｄ　ｗｅｒｅ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ　ｂｙ　ａｔｏｍｉｃ　ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ　ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ（ＡＡＳ）．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｔｈｅ　ｌａｒｇｅｓｔ　ｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｃｕ　ｗａｓ
ｃａｒｂｏｎａｔｅ－ｂｏｕｎｄ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｒｅｓｔ　ｓｔａｔｅ　ｗｅｒｅ　ａｌｓｏ　ｈｉｇｈ．Ｃｄ　ｗａｓ　ｍａｉｎｌｙ　ｅｘｉｓｔｅｄ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｗａｔｅｒ　ｓｏｌｕｂｌｅ，ｉｏｎ　ｅｘｃｈａｎｇｅ，ｉｒｏｎ－ｍａｎｇａｎｅｓｅ　ｏｘ－
ｉｄｅｓ　ａｎｄ　ｒｅｓｉｄｕａｌ　ｆｒａｃｔｉｏｎ．Ｐｂ　ｗａｓ　ｉｎ　ｗａｔｅｒ　ｓｏｌｕｂｌｅ，ｏｒｇａｎｉｃ　ａｎｄ　ｒｅｓｉｄｕａｌ　ｆｒａｃｔｉｏｎ，ｂｕｔ　ｔｈｅ　ｏｔｈｅｒｓ　ｗｅｒｅ　ｐｏｏｒ．Ａｓ　ｗａｓ　ｍａｉｎｌｙ　ｅｘｉｓｔｅｄ
ｉｎ　ｗａｔｅｒ　ｓｏｌｕｂｌｅ，ｉｒｏｎ－ｍａｎｇａｎｅｓｅ　ｏｘｉｄｅｓ　ａｎｄ　ｒｅｓｉｄｕａｌ　ｆｒａｃｔｉｏｎ．Ｈｇ　ｗａｓ　ｍａｉｎｌｙ　ｅｘｉｓｔｅｄ　ｉｎ　ｓｏｌｕｂｌｅ　ａｎｄ　ｉｏｎ　ｅｘｃｈａｎｇｅ　ｆｒａｃｔｉｏｎ．Ｔｈｅ
７５５西北药学杂志　２０１４年１１月　第２９卷　第６期