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鸡肉参多糖的含量测定研究



全 文 :— 21 —现代中药研究与实践2012年第26卷第1期Chin Med J Res Prac,2012 Jan.,Vol.26 No.1
鸡肉参为紫葳科植物滇川角蒿 Incarvillea mairei
(le’vl) Grierson的干燥根,俗名土地黄、波罗花、红
花角蒿 (丽江 )、土生地、山羊参等 [1,2]。产于滇西北
及东部地区(丽江、中甸、永胜、鹤庆、洱源、盐丰),
生长于海拔 2 400~3 655 m高山草坡,为民间常用药
物之一。根入药,具有补血、调经、健胃功效。用于
治疗骨折肿痛、贫血、消化不良。丽江地区民间代替
生地用,亦治产后少乳、体虚、久病虚弱、头晕等症。
近年来的研究表明,鸡肉参有明显的抗应激作用 [3]。
本品资源丰富,疗效较好。目前尚未见对鸡肉参多糖
提取及含量测定研究的相关报道,我们以大理花甸坝
的鸡肉参为原料,采用超声提取多糖 [4-7],并按文献
报道的最佳提取工艺进行前处理 [8],用苯酚 -硫酸法
测定其多糖含量。
1 仪器与材料
1.1 仪器
收稿日期:2011-03-15
基金项目:大理市科技局科研基金资助项目资助(编号:2008FS11)
作者简介:杨永寿(1972-), 高级实验师,主要从事天然药物化学成分研
究。
鸡肉参多糖的含量测定研究
杨永寿,肖培云,杨月娥,赵艳香
( 大理学院药学院,云南 大理 671000)
摘要:目的 研究鸡肉参中多糖含量的测定方法。方法 利用超声水提法对鸡肉参中有效成分多糖进
行提取,并用苯酚 -硫酸显色法对其含量进行测定。结果 鸡肉参中的多糖含量测定的最佳色谱条件为测
量波长 490 nm,水浴加热显色时间为 25 min;鸡肉参中的多糖含量为 13.83%。结论 该方法简便、快速、
准确、灵敏度高、可为鸡肉参质量控制提供依据。
关键词:鸡肉参;多糖;硫酸 -苯酚法
中图分类号:R927.2 文献标识码:A 文章编号:1673-6427(2012)01-0021-03
Determination Polysaccharide Content From Incarvillea mairei (le’vl) Grierson by
Ultraviolet Spectromtry
YANG Yong-shou, XIAO Pei-Yun, YANG Yue-e, ZHAO Yan- xiang
(College of pharmacy, Dali University, Dali 671000, China)
Abstract: Objective To study the methods of determination polysaccharide content from Incarvillea
mairei(le’vl) Grierson. Methods Polysaccharide in Incarvillea mairei(le’vl) Grierson were extracted by
ultrasonic wave water formulation, and its contents were determined by the phenol-sulfuric acid method.
Results The best conditions of determination polysaccharide content in the Incarvillea mairei (le’vl) Grierson
were chromatograph (490 nm) and the warm-water bath time (25 min). Polysaccharide content in the Incarvillea
mairei(le’vl) Grierson was 13.83%. Conclusion This method showed such advantages as high sensitivity, simple
and fast determination procedure, and accurate and reliable measuring result and it could be used as the quality
control of the Incarvillea mairei (le’vl) Grierson.
Key words: Incarvillea mairei (le’vl) Grierson; lentinan; phenol-sulfuric acid method
中药万能粉碎机(天津方泰斯特仪器有限公
司);UV2500紫外分光光度计(日本岛津制作所);
SK-3200H超声波清洗器 (上海科导超声仪器有限公
司 ) ;HH-S2恒温水浴锅 (金坛市大地自动化仪器
厂 )。
1.2 材料
鸡肉参采自云南大理苍山花甸坝,经大理学院
药学院杨月娥老师鉴定为紫葳科植物滇川角蒿鸡肉
参。葡萄糖标准品 (中国药品生物制品检定所,批号:
0892-200716);其它试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 溶液的配制
2.1.1 供试品溶液制备 称取过 80目筛的鸡肉参粉
末 1 g置 100 mL茄形瓶中,加水 40 mL,称重,超声
(60 Hz)提取 2 h,取出,补重,3 000 r/min离心
10 min,取上清液 1.0 mL置离心管中,加 4倍体积
的 95%的乙醇沉淀,于 3 000 r/min离心 10 min,除
去上清液,加水溶解,转移至 10 mL量瓶中,定容,
摇匀即得。
2.1.2 对照品溶液的配制 称取干燥至恒重的葡萄糖
DOI:10.13728/j.1673-6427.2012.01.016
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标准品 100 mg于 100 mL的量瓶中,加水溶解,稀
释至刻度,摇匀。精密吸取上述溶液 1 mL于 100 mL
量瓶中加水至刻度,摇匀,即得 10 μg⁄mL的标准溶
液。
2.1.3 苯酚溶液的配制 取精制苯酚 20 g,加水 400
mL,配制成 5%的苯酚溶液。
2.2 测量条件的选择
2.2.1 测定波长考察 分别取葡萄糖对照品溶液、供
试品溶液、蒸馏水各 2 mL于量瓶中,再加 1 mL 5%
精制苯酚,5 mL浓硫酸,摇匀,置沸水中加热显色
15 min,迅速冷却至室温,定容,混匀,在紫外 -可
见分光光度计中进行波长扫描,结果显示对照品溶
液和供试品溶液在 490 nm处均有最大吸收 [9],光谱
图见图 1。因此,确定本实验的最佳测定波长为 490
nm。
2.2.2 加热时间考查 取10 mL具塞试管6支,编号,
分别吸取供试品溶液 1.0 mL置于试管中,加水至 2.0
mL摇匀,精密加入 1.0 mL 5%苯酚溶液,5.0 mL浓
流酸;另精密吸取 2.0 mL蒸馏水于试管中作为空白
管,重复上述操作,然后置沸水浴中加热,加热时间
分别为 10、15、20、25、30 min,取出,冷却至室温,
定容至 8.0 mL,于 490 nm处测定吸光度,结果表明
加热时间 25 min吸光度值最大,继续加热则吸光度
值反而减小,因此确定加热显色时间为 25 min。
2.2.3 校正因子测定 称取 100 mg精制鸡肉参多糖
置于 100 mL的量瓶中,加水适量使其溶解,稀释至
刻度,摇匀。精密吸取上述溶液 1 mL于 100 mL量
瓶中加水至刻度 ,摇匀 ,即得 10 ug⁄mL鸡肉参多糖溶
液,按上述最佳条件测得吸光度,代入葡萄糖标准曲
线,计算校正因子 f=W/(C×D)。式中W为多糖的质
量,C为多糖稀释液中葡萄糖浓度,D为的稀释倍数。
测得校正因子 f为 1.05。

2.3 方法学考查
2.3.1 线性关系考查 取10 mL具塞试管6支,编号,
精密吸葡萄糖标准溶液 0.0、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4
mL置于具塞试管中,加水至 2.0 mL,摇匀。分别向
上述试管中加入 1.0 mL 5%苯酚溶液,5.0 mL浓流
酸,摇匀,置水浴中加热 25 min后取出,冷却至室温,
于 490 nm处测定吸收值。以葡萄糖标准溶液的浓度
为横坐标,对应的吸光度为纵坐标,绘制标准曲线,
得回归方程为 Y=0.052 4 X-0.119 5,r=0.999 5。结果
表明,鸡肉参多糖在 0.75~1.75 μg 范围内具有良好的
线性关系。
2.3.2 精密度试验 取对照品溶液,在相同条件下显
色后重复测定 6次,记录吸光度 A值,结果吸光度
的 RSD为 1.74%(n=6),表明仪器精密度良好。
2.3.2 稳定性试验 取编号为 20080601的样品,按
“2.1.1”制备,显色,分别于 10,20,30,40,50,
60 min 时测定,记录吸光度 A值,结果吸光度的
RSD为 1.01%(n=6)。表明样品溶液中鸡肉参多糖在
1 h内稳定性良好。
2.3.4 重现性试验 取编号为 20080601的样品 6
份,按 “2.1.1”制备,显色测定,记录吸光度 A值,
计算多糖的含量分别为:14.07 mg/g、14.17 mg/g、
13.97 mg/g、14.07 mg/g、14.02 mg/g、14.06 mg/g,
RSD为 2.88%,结果表明本实验重复性良好。
2.3.5 回收率试验 取已知含量(14.06 mg/g)的
鸡肉参药材样品粉末(编号为 20080601),加入 1.0
mg/mL的葡萄糖标准品溶液,按 “2.1.1”中的方法处
理,测定,结果见表 1。结果表明,本实验确立的方
法回收率较好。
2.4 样品含量测定
2.4.2 样品测定 采用上述供试品溶液制备方法及
测定条件,对 4批样品中的多糖含量进行测定,结果
见表 2。
图1 鸡肉参多糖与葡萄糖的吸收光谱图
Fig.1 Absorption spectrum of the sample and control
表1 回收率试验
Tab. 1 Test of recovery
序号
1
2
3
4
5
6
7
8
9
称样量
(g)
0.7001
0.7009
0.7006
0.8005
0.8005
0.8007
0.9005
0.9000
0.9001
样品含量
(mg)
9.84
9.85
9.85
11.26
11.26
11.26
12.66
12.65
12.65
加入量
(mg)
4.00
4.00
4.00
3.00
3.00
3.00
2.00
2.00
2.00
测得值
(mg)
14.03
14.14
14.14
14.29
14.29
14.28
14.87
14.76
14.87
回收率
(%)
90.8
91.1
92.3
93.7
94.7
93.2
94.3
91.5
93.1
平均回收率
(%)
104.05
RSD
(%)
2.63
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3 讨论
多糖的提取方法较多,有热水浸提、稀碱液浸
提、稀酸液浸提、酶解法、超声提取法、超滤法等 [10-14],
其中超声水提法提取率高,方法稳定,简化了提取操
作步骤,缩短了提取时间。超声提取一般在常温条件
下进行,避免有效成分在高温下被破坏。
本实验利用超声提取法从鸡肉参中提取出多
糖,并对 4批样品中的多糖含量进行了测定,样品中
多糖的含量均超过 13%,表明鸡肉参中多糖的含量
较高,具有一定的开发利用价值。
本实验初步建立了鸡肉参多糖的含量测定方法,
该测定方法用乙醇除去单糖、低聚糖、苷类及生物碱
等成分,再用水溶解多糖成分,多糖在硫酸的作用下,
先水解成单糖分子,并迅速脱水生成糖醛衍生物,再
和苯酚生成有色化合物,用比色法测定含量 [15]。方法
简便、快速、准确、灵敏度高、重现性好等优点,为
评价鸡肉参药材的质量提供了依据。
参考文献
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表2 样品的含量测定
Tab.2 Content of samples
编 号
20080601
20080602
20080603
20080604
吸光度(A)
0.198
0.195
0.194
0.197
多糖含量(%)
14.07
14.03
14.02
13.87
RSD
0.63%
收稿日期:2011-03-17
作者简介:韦颖(1986-),女,在读硕士研究生,研究方向:道地药材的研究。
*通讯作者:冯学锋,女,Tel: (010)64014411-2983, E-mail:hfjj@mx.cei.gov.cn。
赶黄草药材性状显微鉴别
韦 颖,冯学锋 *,付桂芳,格小光,邵爱娟
(中国中医科学院中药研究所,北京 100700)
摘要:目的 探讨赶黄草的药材性状与显微鉴别特征。方法 药材性状与显微组织特征观察、测量,
不同产地样品、野生品与栽培品的比对。结果 赶黄草为全草类药材,茎长圆柱形,粗细不一,长 60~90
cm,直径 3~8 mm,螺状聚伞花序数枝茎顶总状排列。不同产地野生品植株高矮略有差异;栽培品高大整齐。
赶黄草显微组织表现特殊性:茎的皮层与髓中有气室结构;孔纹导管具有较原始类型的梯形穿孔板;薄壁
细胞内含草酸钙簇晶。结论 赶黄草的性状和显微特征可用于药材鉴别,也可作为药典标准制定的参考。
赶黄草导管的特殊结构可作为进一步讨论其分类归属的依据。
关键词 : 赶黄草;性状;显微;鉴别
中图分类号:R282.5 文献标识码:A 文章编号:1673-6427(2012)01-0023-04