全 文 ：中国药房 2007年第 18卷第 27期 China Pharm acy 2007 Vol.18 N o.27 · 2107·
·中药工艺与制剂 ·
复方土牛膝颗粒的水提工艺优选及质量控制方法研究 Δ
梅全喜 1 * ,曾聪彦 1 ,黄伟群 2(1.广州中医药大学附属中山中医院 ,中山市 528400;2.广州中医药大学中药学
院 ,广州市 510006)
中图分类号 R283.627 文献标识码 A 文章编号 1001-0408(2007)27-2107-03
摘 要 目的:优选复方土牛膝颗粒的最佳水提工艺 ,并建立其质量控制方法 。方法:采用 L 9(34)正交试验法对复方土牛膝颗粒水
提工艺的影响因素进行考察;以薄层色谱(TLC)法进行定性鉴别 。结果:最佳水提工艺为:加 8倍量的水 ,浸泡 1h ,每次 1.5h ,煎煮
2次 。 TLC定性鉴别斑点圆整、分离度好 、易于区别 。结论:优选的提取工艺稳定 、可行;鉴别方法简便 、灵敏 、准确 、专属性强 ,可作
为复方土牛膝颗粒的质量控制方法之一 。
关键词 复方土牛膝颗粒;正交试验;质量控制;水提工艺
Optimization of Process for Water Extraction of Compound Eupatorium Granule and Its Qual ity Control
MEI Quanxi ,ZENG Congyan(Zhong shan Municipal Hospi tal o f TCM Affi liated to Guang zhou University of
TCM , Zhong shan 528400 , China)
HUANG Weiqun(College of Science o f Chinese M ateria Medica , Guangzhou Univ ersity of TCM , Guangzhou
510006 , China)
ABSTRACT OBJECTIVE:To optimize the conditions for the w ate r ex t raction o f Compound eupato rium granule and to es-
tablish the quality control o f its preparation.METHODS:The optimum w ate r ex traction process was selected by the L 9(34)
or thogona l design.Thin_layer chromatog raphy(TLC)w as used fo r qualitative identifica tion.RESULTS:The optimum ex-
tr action process w as as fo llow s:add 8 times w ate r , soak for 1 hour , decoct 2 tim es and 1.5h each time.T he qualit ative iden-
lifiable spo t on TLC w as round w ith good separability and w as easy to be distinguished.CONCLUSION :The ex traction pro-
cess w as stable and feasible.The identification method w as proved to be simple , sensitive , accura te and specific , and can be as
one o f the mehtods for the quality control of Com pound eupato rium granule.
KEY WORDS Com pound eupato rium granule ;Orthogonal design;Quality control;Water ex t racion process
Δ广东省中医药局科技基金资助项目(1040188)
*教授 , 主任中药师 , 硕士研究生导师。研究方向:中药研究与开
发。电话:0760-8815106。E-mail:meiquanxi@163.com
复方土牛膝颗粒处方由广东土牛膝 、水杨梅根 、岗梅根 、野
菊花等 7味药组成 ,具有清热解毒 、利咽润喉的功效 ,用于治疗
咽喉炎 、扁桃腺炎 、急性支气管炎 、上呼吸道感染等症 。初步药
效学实验表明该方有解热 、镇痛 、抗炎作用 [1 ,2 ] 。为完善该制剂
的基础研究 ,提高其制剂水平 ,笔者优化其提取工艺 ,并用薄层
色谱(TLC)法对方中主要药物广东土牛膝 、水杨梅根进行定性
鉴别 ,方法简便 、灵敏 、准确、专属性强 ,可用于控制产品质量。
1 材料
1.1 仪器
JA1203型电子天平 (上海天平仪器厂);Q3200E型医用
超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司);Good see-Ⅰ型薄
层色谱摄影仪 (上海科哲生化科技有限公司);硅胶 G 薄层板
(青岛海洋化工分厂)。
1.2 试药
岗梅根、山芝麻 、一点红 、野菊花 、淡竹叶 、水杨梅根均购自
亳州市亳广中药饮片有限公司 , 经广州中医药大学附属中山医
院中药房鉴定;广东土牛膝由广州中医药大学附属中山医院中
药房提供 , 经广州中医药大学附属中山医院药检室鉴定 , 符合
《广东省中药材标准》(第 1册)规定;复方土牛膝颗粒(广州中
医药大学附属中山医院制剂室提供 , 批号:20070103);水杨梅
对照药材(中国药品生物制品检定所 ,批号:121447-200401);
广东土牛膝 (市售品 , 经广东省中山市药品检验所黄冬副主任
药师鉴定为真品);醋酸乙酯 、乙醚、冰醋酸 、苯、甲酸 、甲苯均为
分析纯 ,水为重蒸馏水 。
2 制备工艺优化
2.1 正交设计
根据水提预试验结果 , 确定以浸膏得率为指标 , 以煎煮时
间(A)、煎煮次数(B)、加水量(C)及浸泡时间(D)为因素进行
水提正交试验 ,选择 L 9(34)正交表 ,对各参数进行考察 。因素水
平详见表 1。
表 1 因素水平
Tab 1 Levels of factors
水平 因素
A/ h B/次 C/倍 D/h
1 1 1 8 0
2 1.5 2 10 1
3 2 3 12 2
2.2 正交试验
2.2.1 试验样品制备:按处方比例准确称取 18份药材(每次
试验平行 2次),分别按正交设计表进行试验 。煎煮液过滤 ,滤
· 2108· Ch ina Pharmacy 2007 Vo l.18 No.27 中国药房 2007年第 18卷第 27期
液定容至 250mL ,备用 。
2.2.2 浸出物测定:精密量取上述滤液 20mL ,置已经干燥至
恒重的蒸发皿中 ,水浴蒸干后 ,于 105℃干燥 3h ,移至干燥器中 ,
冷却 30min ,迅速精密称定重量 , 计算供试品中浸膏得率(%)。
平行试验 2次 ,取平均值 。
2.3 试验结果与分析
2.3.1 试验结果:正交试验结果详见表 2;方差分析结果详见
表 3。
表 2 正交试验结果
Tab 2 Results of orthogonal exper iment
试验号 因素 浸膏得率/ %
A B C D
1 1 1 1 1 5.63
2 1 2 2 2 14.20
3 1 3 3 3 14.50
4 2 1 2 3 9.08
5 2 2 3 1 11.67
6 2 3 1 2 13.39
7 3 1 3 2 8.95
8 3 2 1 3 15.46
9 3 3 2 1 12.41
K 1 11.43 7.89 11.49 9.90
K 2 11.38 13.78 11.90 12.18
K 3 12.27 14.43 11.49 13.01
R 0.89 6.41 0.41 3.11
表 3 方差分析结果
Tab 3 Results of variance analysis
方差来源 离差平方和 自由度 方差 F P
A 2.990 2 1.495 9.456 >0.05
B 130.839 2 65.420 413.816 <0.01
C 0.473 2 0.237 1.497 >0.05
D 31.097 2 15.549 98.353 <0.05
注:F0.0 1(2, 2)=99;F0.05(2 , 2)=19
note:F 0.0 1(2 , 2)=99;F0.0 5(2, 2)=19
2.3.2 分析:由表 3可以看出 , B 、D 因素对浸膏得率的影响
有显著性意义 ,A 、C因素没有显著性意义 。表 2中显示了各因
素不同水平的平均值 , 因此 , 可选取其适当水平为 A 1B3C1D 3 ,
结合实际生产 , 确定本方的水提工艺条件为 A 2B2C1D 3 , 即原方
药材浸泡 1h ,加 8倍量的水 ,煎煮 1.5h ,煎煮 2次。
2.4 验证试验
为进一步确定此工艺的合理性 , 按照正交试验优选的工艺
条件 A 2B 2C1D 2进行验证试验 。取上述正交试验同批次的复方
土牛膝颗粒处方药材 92g , 共 2份 , 按照 A 2B2C 1D 2的方案和前
面所述的方法测定浸膏含量 , 其结果分别为 15.55%、
15.65%,与上述正交试验其他工艺结果比较得率较高 ,表明本
方水溶性有效成分基本提取完全 ,该工艺条件是可行的 。
2.5 颗粒剂制备
将处方药物加 8倍量的水浸泡 1h , 煎煮 1.5h , 煎煮 2次 ,
合并煎液 , 滤过 , 滤液浓缩至适量 , 加等量乙醇静置 24h , 取上
清液 , 加入尼泊金 、苯甲酸钠 , 浓缩至 80℃时相对密度为 1.15
的清膏 ,加蔗糖 ,制成颗粒 ,干燥 ,即得 。
3 质量控制
3.1 性状
本品为黄棕色颗粒 ,味甜 、微苦 。
3.2 TLC鉴别
3.2.1 广东土牛膝的鉴别:取本品 20g , 加水 20mL , 搅拌使
溶解 ,加乙酸乙酯振摇提取 2次 ,每次 10mL ,合并乙酸乙酯液 ,
蒸至 0.5mL ,作为供试品溶液 。另取广东土牛膝对照药材 5g ,
加水煎煮 30m in , 滤过 , 滤液浓缩至约 5mL , 加水 20mL , 同法
制成对照药材溶液 。再取不含土牛膝的阴性样品 , 采用处方制
备工艺制备 ,余同供试品溶液制备 ,作为阴性对照溶液 。照薄层
色谱法(2005年版《中国药典》(一部)附录 Ⅵ B)试验 ,吸取上述
2种溶液各 5μL , 分别点于同一硅胶 G 薄层板上 , 以苯-乙酸
乙酯-甲酸(6∶4∶0.5)为展开剂 ,展开 ,取出 ,晾干 ,置紫外光
灯(365nm)下检视 。供试品色谱中 , 在与对照药材色谱相应的
位置上 ,显相同颜色的荧光斑点;阴性样品无干扰 ,详见图 1。
3.2.2 水杨梅的鉴别:取本品 20g , 加乙醚振摇提取 2次 , 每
次 20mL , 合并乙醚液 , 水浴蒸干 , 残渣加乙醚 0.5mL 使溶解 ,
作为供试品溶液 。另取水杨梅对照药材粉末 5g ,加水 500mL 煎
煮 2h , 滤过 ,滤液浓缩至 20ml ,立即冷却 , 乙醚振摇提取 2次 ,
每次 15mL , 合并乙醚液 , 水浴蒸干 ,残渣加乙醚 1mL 使溶解 ,
作为对照药材溶液 。再取不含水杨梅的阴性样品 , 采用处方制
备工艺制备 ,余同供试品溶液制备 ,作为阴性对照溶液 。照薄层
色谱法(2005年版《中国药典》(一部)附录 Ⅵ B)试验 ,吸取上述
供试品溶液 、对照药材溶液 、阴性对照溶液各 5μL ,分别点于同
一硅胶 G 薄层板上 , 以甲苯-乙酸乙酯-冰醋酸 (15∶1∶1)
为展开剂 ,展开 ,取出 ,晾干 ,在紫外光灯(365nm)下检视 。供试
品色谱中 , 在与对照药材色谱相对应的位置上 , 显相同颜色的
荧光斑点;阴性对照色谱无此荧光斑点 ,详见图 2。
3.3 检查
3.3.1 粒度:取本品 3袋 ,称定重量 ,置药筛内过筛 ,共测定 3
个批号(20060718 、20061016 、20070103)的样品 ,结果不能通过
1号筛与能通过 5号筛的总和分别为 8.5%、10.2%、9.3%。
3.3.2 水分:取本品 3g ,按 2005年版《中国药典》(一部)附录
ⅪH 第一法(烘干法)测定水分 。共测定 3个批号(20060718 、
中国药房 2007年第 18卷第 27期 China Pharm acy 2007 Vol.18 N o.27 · 2109·
*副研究员,硕士。研究方向:中药新药开发与中药质量标准。电
话:0571-88849088。 E-mail:shoudan@hz.cn
正交试验优选红藤凝胶的提取工艺
寿 旦 1 * ,胡光涛 2 ,章建民 1 ,俞忠明 1(1.浙江省中医药研究院 ,杭州市 310007;2.解放军 324医院歇台子分
院 ,重庆市 400041)
中图分类号 R284.2;R283.615 文献标识码 A 文章编号 1001-0408(2007)27-2109-03
摘 要 目的:优选红藤凝胶的提取工艺 。方法:以芍药苷和盐酸小檗碱的含量作为考察指标 ,采用 L 9(34)正交试验考察乙醇浓度 、
提取次数 、乙醇用量 、提取时间 4个因素 ,以确定最佳提取工艺 。结果:最佳提取工艺为红藤 、赤芍 、黄柏 、忍冬藤 、败酱草等中药 ,加
80%乙醇 ,加 6倍量溶剂回流提取 3次 ,每次 1.5h 。结论:该优化工艺操作简单 ,结果稳定 ,适用于工业生产 。
关键词 提取工艺;正交试验;红藤凝胶;芍药苷;小檗碱
Optimization of Extraction Technology for Hongteng Liquid Suppository by Orthogonal Test
SHOU Dan ,ZHANG Jianmin , YU Zhongming(Zhejiang Academy of Chinese T radit ional Medicine ,Hangzhou
310007 ,China)
HU Guang tao(Xietaizi Branch of No.324 Hospi tal of PLA , Chongqing , 400041)
ABSTRACT OBJECT IVE:T o optim ize the ex traction technology of Hong teng liquid supposito ry.M ETHODS:T he con-
tent s of Paeoniflo rin and Berberine hydrochlor ide were taken as the indexes to optimize the ex t rac tion technology. 4 influ-
ential facto r s including concentration of alcohol , frequency of ex traction , the dosage of solvent and time o f ex traction w ere
investigated w ith orthogona l test L 9(34).RESU LTS:The optimal ex traction technique w as to ex trac t herbal medicines w hich
consisted of Sargentglo ryvine S tem , Paeoniae Radix , Cor tex Phellodendri , Caulis Lonicerae and Dahurian Pat rinia Herb et c w ith
80%alcoho l at 6 times the weight of herba l mate rial fo r 3 times , 1.5h every time.CONCLUSION :This technology is simple ,
stable and suitable fo r industrialized production.
KEY WORDS Ext rac tion technology ;O rthogonal test;Hongteng liquid supposito ry ;Paeoniflorin;Berberine
20061016 、 20070103)的样品 , 含水量均小于 5%(4.15%～
4.96%),均符合 2005年版《中国药典》(一部)中颗粒剂含水量
小于 6.0%的规定 。
3.3.3 溶化性:取本品 1袋 , 加热水 200mL , 搅拌 。共测定 3
个批号 (20060718 、 20061016 、 20070103)的样品 , 结果均在
4min内全部溶化 。
3.3.4 其他:装量差异等项均符合 2005年版《中国药典》(一
部)中颗粒剂有关规定 [3 ]。
4 讨论
复方土牛膝颗粒是在合剂基础上改进而成的 , 水提工艺直
接影响临床效果 , 通过以上试验及结合实际生产可得出最后水
提工艺为 A 2B2C 1D 2 , 即原方药材加 8倍量的水 , 浸泡 1h , 煎煮
1.5h ,煎煮 2次 。因处方中主要药物广东土牛膝 、水杨梅 、岗梅
根 、山芝麻等均为广东地方习用药材 , 对该类药物研究非常有
限 ,尚未制定准确 、客观的含量测定方法 ,故采用浸膏得率为控
制质量的定量指标;又因为复方土牛膝颗粒主要提取方法为水
提法 ,所以采用浸膏得率为评价指标是可行的 。
本制剂是由 7味中药组成的复方制剂 , 成分较为复杂 ,
T LC 鉴别过程中对提取方法及展开剂的选择有较高要求 。笔
者经多次试验 , 发现结果稳定 , 且方法简便易行 , 斑点分离清
晰 ,阴性对照无干扰 。
广东土牛膝的 TLC定性方法 , 曾采用 《广东省中药材标
准》 [4 ]中的广东土牛膝 T LC 鉴别方法 ,但以此法所得的色谱图
斑点分离不理想 , 背景干扰大 。后经对其提取方法及展开剂展
开多次试验 , 结果采用与复方土牛膝糖浆中广东土牛膝的
T LC条件 [ 5 ] , 即用醋酸乙酯萃取的方法来提取 , 并以苯-醋酸
乙酯-甲酸(6∶4∶0.5)为展开剂 ,即可得斑点分离清晰 、阴性
对照无干扰的效果 。
水杨梅的 TLC条件原本也参照《广东省中药材标准》 [4 ]中
的水杨梅 TLC鉴别方法 , 但以该方法试验发现水杨梅图谱中
有一个亮蓝色特征斑点的比移值(R f)极低 ,另一个黄色特征斑
点在供试品溶液中无对应斑点 。后采取过调整展开剂的比例来
调高亮蓝色特征斑点的 Rf值 ,但也收效甚微 。最后经改用与复
方土牛膝糖浆中水杨梅的 T LC 条件 [ 6 ] , 结果色谱图斑点清晰 ,
分离效果好 , 亮蓝色特征斑点 R f值适中 , 阴性对照无干扰 , 能
成功鉴别出水杨梅 。
参考文献
[ 1] 梅全喜 ,田素英 ,钟希文 ,等.复方土牛膝糖浆解热 、镇痛
作用研究[ J] .中国药房 , 2006 ,17(22):1 695.
[ 2] 梅全喜 ,田素英 ,钟希文 ,等.复方土牛膝糖浆剂抗炎作
用的实验研究[ J] .中药材 , 2007 ,30(5):586.
[ 3] 国家药典委员会编 .中华人民共和国药典(一部)[ S] .
2005年版 .北京:化学工业出版社 , 2005:附录 6.
[ 4] 广东省食品药品监督管理局 .广东省中药材标准(第 1
册)[ S] .广州:广东科技出版社 , 2004:22 、111.
[ 5] 梅全喜 ,曾聪彦 ,高玉桥 ,等.复方土牛膝糖浆的薄层鉴
别[ J] .中国药业 ,2007 , 16(3):8.
[ 6] 曾聪彦 ,梅全喜 ,孙一帆 ,等.复方土牛膝糖浆中水杨梅
的薄层鉴别[ J] .中华中医药学刊 , 2007 , 25(3):508.
(收稿日期:2007-01-05 修回日期:2007-05-15)