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［收稿日期］２０１１－１０－２８
［基金项目］国家自然科学基金资助项目（编号：３０４７２０３４）；湖北省自然科学基金（编号：２０１０ＣＤＢ０７５０１）　［作者简介］孙文晓，男，硕士，副主
任医师，电话：１３８８６０５４８３１，Ｅ－ｍａｉｌ：ｓｕｎｗｅｎｘｉａｏ０００＠ｓｏｈｕ．ｃｏｍ　［通讯作者］张海港，男，博士，教授，研究生导师，电话：０２３－６８７７１０１９，Ｅ－
ｍａｉｌ：ｈｇ２ｓｔｅｒ＠ｇｍａｉｌ．ｃｏｍ
狼紫草水提物对小鼠急性腹膜炎模型血清炎性细胞因子的影响
孙文晓１，２，杨华１，卢小岚１，韦卓２，张海港１　（１．第三军医大学药物研究所与药剂学教研室，重庆４０００３８；２．华中科技大
学同济医学院附属梨园医院骨科，湖北 武汉４３００７７）
［摘要］　目的：观察狼紫草水提物（ＡＥＬＯ）对急性腹膜炎小鼠血清中炎性细胞因子浓度的影响。方法：采用煎煮法制备狼紫
草水提物，０．６％醋酸腹腔注射建立小鼠急性腹膜炎模型。用双抗夹心ＥＬＩＳＡ法测量给药后小鼠血清中ＩＬ－１β、ＩＬ－６以及
ＴＮＦ－α等细胞因子水平。结果：给药６　ｈ后，提示各ＡＥＬＯ（１０～４０　ｇ·ｋｇ－１）处理组血清中ＩＬ－１β、ＩＬ－６和ＴＮＦ－α浓度较腹膜炎
模型组均显著降低（Ｐ＜０．０５），且降低程度与 ＡＥＬＯ剂量呈显著正相关。结论：狼紫草水提物能有效减少ＩＬ－１β，ＩＬ－６以及
ＴＮＦ－α等炎性细胞因子的生成。
［关键词］　狼紫草水提物；炎症因子；腹膜炎
［中图分类号］Ｒ９６３　　［文献标识码］Ａ　　［文章编号］１００１－５２１３（２０１２）０９－０６５８－０３
Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ａｑｕｅｏｕｓ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｆｒｏｍ　Ｌｙｃｏｐｓｉｓ　ｏｒｉｅｎｔａｌｉｓ　Ｌｉｎｎ　ｏｎ　ｓｅｒｕｍ　ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ　ｃｙｔｏｋｉｎｅ　ｉｎ
ａｃｅｔｉｃ　ａｃｉｄ－ｉｎｄｕｃｅｄ　ｐｅｒｉｔｏｎｉｔｉｓ　ｍｉｃｅ
ＳＵＮ　Ｗｅｎ－ｘｉａｏ１，２，ＹＡＮＧ　Ｈｕａ１，ＬＵ　Ｘｉａｏ－ｌａｎ１，ＷＥＩ　Ｚｈｕｏ２，ＺＨＡＮＧ　Ｈａｉ－ｇａｎｇ１（１．Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆ　Ｍａｔｅｒｉａ　Ｍｅｄｉｃａ
ａｎｄ　Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ，Ｃｏｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｔｈｉｒｄ　Ｍｉｌｉｔａｒｙ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ　４０００３８，Ｃｈｉｎａ；２．Ｌｉｙｕａｎ
Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｔｏｎｇｊｉ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｃｏｌｅｇｅ，Ｈｕａｚｈｏｎｇ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｈｕｂｅｉ　Ｗｕｈａｎ　４３００７７，Ｃｈｉｎａ）
ＡＢＳＴＲＡＣＴ：ＯＢＪＥＣＴＩＶＥ　Ｔｏ　ｅｘｐｌｏｒｅ　ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ａｑｕｅｏｕｓ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｆｒｏｍＬｙｃｏｐｓｉｓ　ｏｒｉｅｎｔａｌｉｓ　Ｌｉｎｎ（ＡＥＬＯ）ｏｎ　ｔｈｅ　ｓｅｒｕｍ　ｌｅｖ－
ｅｌｓ　ｏｆ　ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ　ｃｙｔｏｋｉｎｅ　ｉｎ　ａｃｕｔｅ　ｐｅｒｉｔｏｎｉｔｉｓ　ｍｉｃｅ．ＭＥＴＨＯＤＳ　ＡＥＬＯ　ｗａｓ　ｐｒｅｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ｄｅｃｏｃｔｉｎｇ　ｍｅｔｈｏｄ．Ａｃｕｔｅ　ｐｅｒｉｔｏｎｉ－
ｔｉｓ　ｍｏｄｅｌ　ｗａｓ　ｄｕｐｌｉｃａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　０．６％ａｃｅｔｉｃ　ａｃｉｄ　ｃｈｅｍｉｃａｌ　ｓｔｉｍｕｌｕｓ　ｉｎ　ｍｉｃｅ．Ｓｅｒｕｍ　ｌｅｖｅｌｓ　ｏｆ　ＩＬ－１β，ＩＬ－６　ａｎｄ　ＴＮＦ－αｗｅｒｅ　ｄｅｔｅｃｔｅｄ
ｗｉｔｈ　ＥＬＩＳＡ　ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ．ＲＥＳＵＬＴＳ　Ｓｉｘ　ｈｏｕｒｓ　ａｆｔｅｒ　ａｃｅｔｉｃ　ａｃｉｄ　ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ，ｔｈｅ　ｓｅｒｕｍ　ｌｅｖｅｌｓ　ｏｆ　ＩＬ－１β，ＩＬ－６　ａｎｄ　ＴＮＦ－αｉｎ　ＡＥＬＯ
ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｇｒｏｕｐｓ（１０－４０　ｇ·ｋｇ－１）ｗｅｒｅ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ｌｏｗｅｒ　ｔｈａｎ　ｔｈａｔ　ｉｎ　ｐｅｒｉｔｏｎｉｔｉｓ　ｇｒｏｕｐ（Ｐ＜０．０５）．Ｔｈｅ　ｄｅｃｒｅａｓｉｎｇ　ｄｅｇｒｅｅ　ｗａｓ
ｍａｒｋｅｄｌｙ　ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｄｏｓｅ　ｏｆ　ＡＥＬＯ．ＣＯＮＣＬＵＳＩＯＮ　Ｔｈｅ　ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＡＥＬＯ　ｃｏｕｌｄ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ｄｅｃｒｅａｓｅ
ｔｈｅ　ｓｅｒｕｍ　ｌｅｖｅｌ　ｏｆ　ＩＬ－１β，ＩＬ－６　ａｎｄ　ＴＮＦ－αｉｎ　ａｃｕｔｅ　ｐｅｒｉｔｏｎｉｔｉｓ　ｍｉｃｅ．
ＫＥＹ　ＷＯＲＤＳ：Ｌｙｃｏｐｓｉｓ　ｏｒｉｅｎｔａｌｉｓ　Ｌｉｎｎ；ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ　ｃｙｔｏｋｉｎｅ；ｐｅｒｉｔｏｎｉｔｉｓ
·８５６· 中国医院药学杂志２０１２年第３２卷第９期Ｃｈｉｎ　Ｈｏｓｐ　Ｐｈａｒｍ　Ｊ，２０１２　Ｍａｙ，Ｖｏｌ　３２，Ｎｏ．０９
DOI:10.13286/j.cnki.chinhosppharmacyj.2012.09.003
　　狼紫草（Ｌｙｃｏｐｓｉｓ　ｏｒｉｅｎｔａｌｉｓ　Ｌｉｎｎ．）是一种紫草
科狼紫草属一年生或越年生草本植物，分布于我国
西藏、西北、华北、河南以及中亚、欧洲等地。在我国
民间有悠久的药用历史，其味辛，温，归肝经，具有解
毒止痛之功效［１］。但长久以来，狼紫草仅仅以验方
形式用于民间，对其药理作用国内外尚少见系统报
道［２］。细胞因子（ｃｙｔｏｋｉｎｅ，ＣＫ）在机体炎症反应过
程中起着十分重要的作用。尤其是白介素－１（ｉｎｔｅｒ－
ｌｅｕｋｉｎ－１，ＩＬ－１），白介素－６（ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－１，ＩＬ－６），肿瘤
坏死因子－α（ｔｕｍｅｒ　ｎｅｃｏｓｉｓ　ｆａｃｔｏｒ－α）等与炎症反应
关系较为密切［３］。本实验采用小鼠急性腹膜炎模
型，较系统地评价狼紫草的抗炎作用，并从炎性细胞
因子角度初步探讨狼紫草抗炎作用机制，为寻找新
型抗炎镇痛中草药提供实验资料和理论依据。
１　材料
狼紫草全草采集于河南西南部野外，阴凉处自
然晒干（第三军医大学药物研究所新药研究中心制
备）。小鼠ＩＬ－１βＥＬＩＳＡ 试剂盒（批号ＥＭＣ００１ｂ），
ＩＬ－６　ＥＬＩＳＡ 试剂盒（批号 ＥＭＣ００４）以及 ＴＮＦ－α
ＥＬＩＳＡ试剂盒（批号ＥＭＣ１０２ａ）均购自北京晶美生
物技术有限公司；ＵＶ－９１００分光光度计（北京瑞利
科学仪器厂）；ＳＷ２ＣＪ２１Ｆ型洁净工作台是江苏苏净
集团苏州安泰空气技术有限公司产品；ＧｒａｐｈＰａｄ
Ｐｒｉｓｍ统计软件（Ｓａｎ　Ｄｉｅｇｏ　Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ，ＵＳＡ）。
昆明小鼠，雌雄各半，ＳＰＦ级，体质量（２０±２）
ｇ，购自第三军医大学实验动物中心（许可证号：医动
字第ＳＣＸＫ（渝）２００７－０００３）。
２　方法
２．１　狼紫草水提物的制备　取生药３００　ｇ，粉碎至
细粉状后加１　０００　ｍＬ纯化水浸泡２　ｈ，文火煮沸
１．５　ｈ，过滤。药渣再加水５００　ｍＬ继续煎煮，煮沸
３０　ｍｉｎ，过滤并加水重复煎煮１次。合并３次煎液，
４层纱布过滤后浓缩至２　ｇ·ｍＬ－１，即为狼紫草水提
物（ａｑｕｅｏｕｓｅｘｔｒａｃｔ　ｆｒｏｍ　ｌｙｃｏｐｓｉｓ　ｏｒｉｅｎｔａｌｉｓ　ｌｉｎｎ，
ＡＥＬＯ）。高压蒸汽灭菌后，保存于４℃备用［４］。
２．２　小鼠急性腹膜炎模型的建立［５］　昆明小鼠购
回后，常规饲养３　ｄ，随机分为５组，每组１０只，♀♂
各半：（１）正常对照组：０．９％生理盐水０．５　ｍＬ·ｋｇ－１
灌胃；（２）腹膜炎模型组：０．６％醋酸溶液０．１　ｍＬ／１０
ｇ腹腔注射；（３）腹膜炎模型加狼紫草低剂量治疗
组、中剂量治疗组、高剂量治疗组。致炎前分别用狼
紫草１０，２０，４０　ｇ·ｋｇ－１（以生药计）灌胃给药，ｂｉｄ，共
３　ｄ。末次给药后１　ｈ，腹腔注射０．６％醋酸溶液，６　ｈ
后断头采血，分离血清，４℃保存备用。
２．３　标准曲线的制备
２．３．１　ＩＬ－１β、ＩＬ－６标准曲线　分别加入ＩＬ－１β、ＩＬ－
６标准品稀释液（１ｂ）１　ｍＬ至冻干标准品（１ａ）中，待
彻底溶解后，静置１５　ｍｉｎ混匀，浓度为１　０００　ｐｇ·
ｍＬ－１，然后进行稀释，浓度分别为１　０００，５００，２５０，
１２５，６２．５，３１．２５，１５．６２５，７．８，０ｐｇ·ｍＬ－１，按试剂
盒说明书测定各浓度 ＯＤ４５０值，每个标准品和标本
的光密度值应减去零孔的光密度值。以标准品浓度
作横坐标，光密度值作纵坐标，绘制标准曲线。
２．３．２　ＴＮＦ－α标准曲线　２　０００　ｐｇ·ｍＬ－１的标准
品溶液依次成倍稀释为１　０００，５００，２５０，１２５，６２．５，
３１．２５　ｐｇ·ｍＬ－１，按试剂盒说明书测定各浓度ＯＤ４５０
值。用标准品稀释液作为空白（０ｐｇ·ｍＬ－１），以标
准品浓度作横坐标，光密度值作纵坐标，绘制标准曲
线。
２．４　血清ＩＬ－１β、ＩＬ－６以及ＴＮＦ－α含量检测
２．４．１　ＩＬ－１β、ＩＬ－６含量测定　除空白孔外，分别将
不同浓度标本（１００μＬ／孔）加入相应孔中，用封板胶
纸封住反应孔，３７℃孵箱孵育９０　ｍｉｎ。空白孔中仅
加入底物和终止液。洗板４次，按说明书操作显色，
酶标仪测量 ＯＤ４５０值，通过标准曲线方程求出标本
中ＩＬ－１β、ＩＬ－６浓度。
２．４．２　ＥＬＩＳＡ法测定ＴＮＦ－α　将５０μＬ生物素标
记的抗体加入包被抗体的微孔板的微孔内。另外将
２００μＬ标准或样品，分别加入包被抗体的微孔板合
适位置的微孔内，轻敲板架，混匀，加盖，３７℃下孵
育１２０　ｍｉｎ。按说明书操作显色，酶标仪测量ＯＤ４５０
值，通过标准曲线方程求出标本中ＴＮＦ－α浓度。
２．５　统计分析　采用ＧｒａｐｈＰａｄ　Ｐｒｉｓｍ统计软件对
数据进行统计学分析。数据以珚ｘ±ｓ表示，组间显著
性检验采用单因素方差分析，各水平组均数间的多
重比较用ＳＮＫ法，以Ｐ＜０．０５为差异有统计学意
义。
３　结果
３．１　ＩＬ－１β，ＩＬ－６以及ＴＮＦ－α标准曲线建立　经直线
回归，得标准曲线方程式：ＩＬ－１β浓度（ｐｇ·ｍＬ
－１）＝
５５２．９８９　ＯＤ－１．１３２，ｒ＝０．９９９　８；ＩＬ－６ 浓 度（ｐｇ·
ｍＬ－１）＝６６７．３０４ＯＤ－０．６４５，ｒ＝０．９９９　９；ＴＮＦ－α浓
度（ｐｇ·ｍＬ－１）＝１　１１２．１７３ＯＤ－１．１４２，ｒ＝０．９９９　９。
３．２　狼紫草水提物（ＡＥＬＯ）对小鼠血清中细胞因
子的影响　小鼠腹腔注射０．６％醋酸溶液后６　ｈ，血
清中ＩＬ－１β、ＩＬ－６以及 ＴＮＦ－α浓度显著升高（Ｐ＜
０．０１）。与对照组相比，各狼紫草处理组ＩＬ－１β，ＩＬ－６
以及 ＴＮＦ－α浓度均明显降低（Ｐ＜０．０５或 Ｐ＜
０．０１）。用药后血清中３种细胞因子浓度均与 ＡＥ－
ＬＯ剂量呈正相关（ｒ分别为０．９１，０．８８，０．８５，Ｐ＜
·９５６·中国医院药学杂志２０１２年第３２卷第９期Ｃｈｉｎ　Ｈｏｓｐ　Ｐｈａｒｍ　Ｊ，２０１２　Ｍａｙ，Ｖｏｌ　３２，Ｎｏ．０９
０．０１，见表１）。
表１　狼紫草水提物对腹膜炎小鼠血清炎性细胞因子的影
响（珚ｘ±ｓ，ｎ＝１０）
Ｔａｂ　１　Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　Ｌｙｃｏｐｓｉｓ　ｏｒｉｅｎｔａｌｉｓ　Ｌｉｎｎ　ｏｎ　ｓｅｒｕｍ　ｉｎｆｌａｍ－
ｍａｔｏｒｙ　ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ　ｉｎ　ｐｅｒｉｔｏｎｉｔｉｓ　ｍｉｃｅ（珚ｘ±ｓ，ｎ＝１０）
组　别
剂量
／ｇ·ｋｇ－１
ＩＬ－１β ＩＬ－６　 ＴＮＦ－α
正常对照组 － ２６．０±１１．１　１４９．４±１８．７　１８．１±６．９
腹膜炎模型组 － ７９．９±１２．５ａ３８２．８±２４．７ａ ５９．９±４．６ａ
狼紫草高剂量治疗组 ４０　 ２７．８±１２．２ｃ　１５９．７±２２．６ｃ　２０．１±７．０ｃ
狼紫草中剂量治疗组 ２０　 ４０．５±１１．８ｃ　２０３．５±４１．８ｃ　３４．６±６．４ｃ
狼紫草低剂量治疗组 １０　 ５７．２±１２．７ｃ　３１２．５±３８．８ｂ　３５．７±７．３ｃ
注：与正常对照组比较，ａＰ＜０．０１；与腹膜炎模型组比较，ｂ　Ｐ＜０．０５，ｃ　Ｐ＜
０．０１
４　讨论
紫草类植物中的多种成份都具有抗炎、镇痛、抗
菌止血等作用。狼紫草资源丰富，在我国民间经常
用于治疗疮肿，效果良好［６－７］。但长久以来，国内外
尚缺乏有关药效及其机制方面的系统研究。本实验
观察了狼紫草水提物（ＡＥＬＯ）对急性腹膜炎小鼠体
内ＩＬ－１β、ＩＬ－６以及ＴＮＦα炎性因子水平的影响，结
果显示，狼紫草可调节大鼠血清中异常的ＩＬ－１β、ＩＬ－
６和 ＴＮＦα含量，与对照组相比，狼紫草给药各组
ＩＬ－１β、ＩＬ－６以及ＴＮＦα水平含量均明显下降，且呈
一定的剂量依赖性。
炎症反应过程与多种细胞因子有关。细胞因子
（ｃｙｔｏｋｉｎｅ，ＣＫ）在机体炎症反应过程中起着十分重
要的作用，是当前关于炎症发病机制以及疾病治疗
的研究热点之一［８－１０］。现代药理研究证明紫草类具
有抗炎镇痛，抗菌抗病毒等多方面的药理作用，乙酰
紫草素为紫草抗炎有效成分之一，已得到众多学者
的研究且证实。如夏玲红等［１１］对紫草素的现代药
理作用研究显示：紫草素的抗炎机制可能与抑制花
生四烯酸脂氧酶代谢有关。滕宝霞等［１２］对紫草烧
伤露的镇痛、抗炎和体外抑菌作用研究显示：紫草烧
伤露中的紫草油局部用药抑制小鼠毛细血管通透
性，抑制大鼠肉芽肿增生，具有抗菌消炎的作用。但
关于狼紫草属类国内外尚并未见类似文献报道。本
研究运用小鼠急性腹膜炎动物模型检测血清部分炎
性细胞因子，揭示了炎症反应伴随致炎细胞因子持续
性高表达，如ＴＮＦα、ＩＬ－１、ＩＬ－６、ＩＬ－８等，这些细胞因
子继而刺激机体产生其他炎症介质，如ＮＯ、活性氧
自由基、花生四烯酸代谢产物等，并活化内皮细胞和
中性粒细胞产生微循环损伤和组织损害。较系统地
研究狼紫草的抗炎作用机制，为进一步探讨其抗炎作
用机制及单体药物成分开发提供试验理论依据。
炎症和免疫反应是一种最常见的病理过程，大
多数的人类疾病均与此有关［１３－１５］。除人们所熟知的
感染性疾病外，风湿性关节炎、类风湿疾病、系统性
红斑狼疮、以及恶性肿瘤等多种疾病也与炎症密切
相关，炎症免疫因素参与了这些疾病的发生、发展及
转归整个过程。目前，医学上治疗此类疾病的主要
药物有非甾体类抗炎药、类固醇、慢作用抗风湿药及
细胞毒免疫抑制剂等［１６］。虽然这些药物均有一定
疗效，但由于毒副反应较大，病人难以长期使用。用
中药复方制剂疗效好，副作用小，但受处方医师水平
限制，难以科学地评价与研究。因此，从传统中草药
中筛选疗效佳、不良反应少的单体药物成分对于治
疗具有重要意义。而狼紫草水提物的抗炎作用机制
可能是通过降低体内的ＩＬ－１β，ＩＬ－６以及ＴＮＦ－α水
平，抑制其它炎性因子的产生，从而发挥抗炎、免疫
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［收稿日期］２０１１－０９－２８
·０６６· 中国医院药学杂志２０１２年第３２卷第９期Ｃｈｉｎ　Ｈｏｓｐ　Ｐｈａｒｍ　Ｊ，２０１２　Ｍａｙ，Ｖｏｌ　３２，Ｎｏ．０９