全 文 ：·250· 中国现代药物应用2014年7月第8卷第14期　Chin J Mod Drug Appl, Jul 2014, Vol. 8, No. 14
近年来的研究发现 , 动脉粥样硬化斑块中不仅有脂质沉
积 , 还有大量的炎症细胞浸润 , 这说明炎症在动脉粥样硬化
的发生、发展过程中起着重要作用。泡沫细胞的形成是动
脉硬化早期主要的病理特征 , 氧化型低密度脂蛋白 (oxidized
LDL, ox-LDL) 对泡沫细胞的形成发挥着举足轻重的作用。血
液中的单核细胞在内膜下转化为巨噬细胞 , 继而通过 A型清
道受体不断吞噬大量 ox-LDL, 导致细胞内脂质堆积 , 最终形
成泡沫细胞。鬼箭羽是一种主产于我国北部的中药材 , 它是
卫矛科植物卫矛的具有翅状物的枝条或翅状附属物 , 其功效
在《本经》的载述主要是破血、止痛、通经、泻下、杀虫等；
最近的研究表明 , 鬼箭羽具有降低血糖、调节血脂、以及抗
动脉粥样硬化等作用。
1 材料与方法
1. 1 药物与试剂 鬼箭羽药材购自衡阳市药材公司 , 经专
家鉴定为卫矛科植物的嫩枝和翅状附属物。取鬼箭羽药材
500 g 加 6 倍水 , 2 h/ 次 , 煎煮 2次 , 浓缩至 3.0 g/ml 生药 , 浸
膏待用；THP-1 细胞购自中国科学院上海生物化学与细胞
生物学研究所细胞中心；RPMI-1640 培养基购自 Gibco 公
司；佛波酯购自 sigma 公司；TNF-α酶联免疫吸附试剂盒、
IL-6 酶联免疫吸附试剂盒均购自美国 R&D公司。
1. 2 脂蛋白的分离、氧化修饰及鉴定 健康人血浆购自衡
阳市中心血站 , 采用超速离心法制备低密度脂蛋 (LDL), 然后
用含 10 μmol/L CuSO4 的 PBS 溶液将 LDL 氧化修饰成 ox-
LDL, 4℃ 保存。
1. 3 细胞培养及分组 THP-1 细胞用含有 10％ 小牛血清
RPMI 1640 培养液 , 在 37℃、5％ CO2 培养箱中静置培养。
培养基中加 HEPES 10 mmol/L, 在每次实验前用 160 nmol/L
佛波酯处理 24 h, 使其诱导分化成巨噬细胞。实验共分五组：
①对照组 , 不加 ox-LDL 处理；② ox-LDL 组 50 mg/L ox-LDL
科杂志 , 2004,25(3):213-215.
［2］ 邓春化 . 男科典型病例分析 . 北京 : 科学技术文献出版社 ,
2003:274-300.
［3］ 杨嘉鑫 . 小便白浊方治疗慢性前列腺炎 56 例 . 江苏中医 ,
1997, 18(9):17.
［收稿日期：2014-04-08］
作者单位：421001 湖南衡阳 , 南华大学心血管病研究所 ( 黄
靓 唐志晗 ) ；外科学总论教研室 ( 黄靓 熊文昊 王汉群 邹飞
燕 唐志晗 ) ；机能学实验中心 ( 张弛 )
鬼箭羽水溶成分抑制氧化型低密度蛋白诱导的
THP-1 源性巨噬细胞炎症因子表达
黄靓 熊文昊 王汉群 邹飞燕 唐志晗 张弛
【摘要】　目的　探讨鬼箭羽水溶成分对氧化型低密度脂蛋白 (ox-LDL) 诱导的 THP-1 源性巨噬细胞
炎症因子表达的影响。方法　将 THP-1 源性巨噬细胞分为五个组 , 即对照组、ox-LDL 组、鬼箭羽 1组、
鬼箭羽 2组、鬼箭羽 3组。MTT ( 噻唑蓝 ) 比色法检测 THP-1 细胞活力 , 酶联免疫吸附法 (ELISA) 检测
细胞上清液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素 6(IL-6) 的含量。结果　鬼箭羽能明显改善 ox-
LDL 作用下 THP-1 源性巨噬细胞的细胞活力 , 抑制 ox-LDL 诱导的细胞炎症因子分泌 , 并且呈现浓度依
赖性 , 差异有统计学意义 (P<0.05)。结论　鬼箭羽水溶成分抑制氧化型低密度脂蛋白诱导的 THP-1 源
性巨噬细胞炎症因子表达有关。
【关键词】　鬼箭羽；氧化型低密度脂蛋白；THP-1 源性巨噬细胞； 细胞活力；炎症因子
处理 24 h 组；③鬼箭羽 1组：3 μg/ml 鬼箭羽和 50 mg/L ox-
LDL共处理24 h组；④鬼箭羽2组：10 μg/ml 鬼箭羽和50 mg/L
ox-LDL 共处理 24 h 组；⑤鬼箭羽 3组：30 μg/ml 鬼箭羽和
50 mg/L ox-LDL 共处理 24 h 组。
1. 4 统计学方法 采用 SPSS15.0 统计软件对该研究的数据
进行统计学的分析 , 计量资料以均数±标准差 ( x-±s) 表示 ,
组间比较采用方差分析和 t检验 , P<0.05 表示差异具有统计
学意义。
2 结果
2 .1 不同浓度鬼箭羽对 ox-LDL 作用下 THP-1 巨噬细胞活
力的影响 , 见表 1。
表 1 各组 THP-1 巨噬细胞活力比较 ( x-±s)
组别 吸光度值
对照组 2.3±0.4
50 mg/Lox-LDL 组 0.8±0.1a
鬼箭羽 1组 1.5±0.2b
鬼箭羽 2组 1.6±0.1b
鬼箭羽 2组 1.8±0.3b
注：与对照组比较 , aP<0.01 ；与 ox-LDL 组比较 , bP<0.01
与对照组比较 , ox-LDL 组细胞活力明显受损 (P<0.01),
不同浓度鬼箭羽组细胞活力较 ox-LDL组有不同程度的增强 ,
且呈现浓度依赖性。
2. 2　鬼箭羽对 ox-LDL 作用下 THP-1 巨噬细胞炎症因子分
泌的影响
图 1　鬼箭羽减少 ox-LDL 所致的 THP-1 细胞 TNF-α的释放
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连花清瘟胶囊由金银花、连翘、石膏等 13 味药组成［1］。
清瘟解毒 , 宣肺泄热。本品种收载于《中国药典》(2010 年
版第二增补本 ), 连翘酯苷 A为处方中连翘的主要成分之一 ,
因此采用高效液相色谱法对本品连翘酯苷A的含量测定进行
了研究［2］。
1 仪器与试药
1. 1 仪器 高效液相色谱仪 (Waters 2695)。
1. 2 试药 连翘酯苷 A对照品 ( 购自中国药品生物制品检
定所 ), 乙腈为色谱纯 , 其它试验所用试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件 色谱柱：用十八烷基硅烷键合硅胶为填料；
图 2　鬼箭羽减少 ox-LDL 所致的 THP-1 细胞 IL-6 的释放
注：1为对照组；2为 ox-LDL 组；3为 ox-LDL+3 μg/ml 鬼箭羽
组；4为ox-LDL+10 μg/ml鬼箭羽组；5为ox-LDL+30 μg/ml鬼箭羽组。
与对照组比较 , aP<0.05 ；与 ox-LDL 组比较 , bP<0.05
THP-1 细胞经 50 mg/L ox-LDL 处理 2 h 后 , 细胞培养上
清液中的 TNF-α、IL-6 浓度增加 , 与对照组比较差异有统
计学意义 (P<0.05), 而 ox-LDL+ 不同浓度 (3、10、30 μg/ml)
的鬼箭羽处理 2 h 后 , TNF-α、IL-6 浓度显著降低 , 与 ox-
LDL 组比较差异均有统计学意义 (P<0.05), 且呈现出浓度依
赖性。
3 讨论
动脉硬化是一种炎症性疾病 , 炎症反应贯穿了动脉硬化
发生发展的全过程 , 大量的炎症因子参与到这个过程中 , 对
动脉硬化的形成与发展发挥了重要的作用。TNF-α是一种
由单核细胞分泌的炎症与免疫调节因子 , 在 AS 病变中的表
达明显增高 , 提示其与 AS 及 CHD 的发生、发展密切相关。
IL-6 是一种多功能的前炎症因子 , 能加速肝脏合成 C- 反应
蛋白 , 促使血管内皮细胞的活化和血管平滑肌细胞的增生。
IL-6 可促进血管内皮细胞粘附分子的表达与释放 , 促使巨噬
细胞对 LDL 的摄取 , 促进动脉硬化的形成［1］。
鬼箭羽以卫矛之名始载于《神农本草经》, 现有的研
究证明 , 鬼箭羽提取物主要通过降低急性缺血模型大鼠血
清 CK、CK-MB、AST、LDH 和 MDA 水平 , 提高大鼠血清
SOD、NO含量来改善心肌细胞耐缺氧的能力 , 从而发挥防治
心肌缺血的作用；另外鬼箭羽的提取物能够显著降低糖尿病
小鼠的空腹血糖 , 从而改善糖尿病小鼠由于血糖增高所引起
的糖代谢紊乱。韩国学者研究报道 , 鬼箭羽通过抑制 IKKβ
来减弱 LPS 诱导的 RAW264.7 细胞 NF-κB 的活化 , 从而抑
制 iNOS 的表达和 NO的产生 , 发挥抗炎的作用。鬼箭羽的提
取物还具有清除活性氧自由基的作用 , 可防止生物膜的脂质
过氧化。在本研究中 , 首次发现鬼箭羽能够显著降低 50 mg/L
ox-LDL 诱发的 THP-1 源性巨噬细胞 TNF-α、IL-6 的释放 ,
并提高 ox-LDL 诱导的 THP-1 源性巨噬细胞细胞活力 , 呈现
浓度依赖性 , 结果提示鬼箭羽可能通过抑制炎症因子的释放
来发挥抗动脉粥样硬化的作用。至于鬼箭羽究竟通过何种信
号通路发挥其抗炎作用 , 以及鬼箭羽对于巨噬细胞胆固醇转
运的影响 , 作者将在后续的试验中继续研究。
参 考 文 献
［1］ 黄德斌,余昭芬.鬼箭羽三种提取物对氧自由基作用的影响.湖
北民族学院学报 , 2006,23(2):4-6.
［收稿日期：2014-04-08］
作者单位：050035 河北石家庄 , 石家庄以岭药业股份有限公司
高效液相色谱法测定连花清瘟胶囊中
连翘酯苷 A的含量
苏平菊 陈红燕 安青松 王娟敏
【摘要】　目的　建立采用高效液相色谱法测定连花清瘟胶囊中连翘酯苷A含量的方法。方法　采用
C18 色谱柱 , 乙腈 -0.1% 磷酸溶液为流动相梯度洗脱 , 检测波长 228 nm。结果　连翘酯苷 A在 18.6~186
ng 浓度范围内呈良好的线性关系。连翘酯苷A平均回收率为 99.16%(n=6), RSD=1.58%。结论　该法操作
简便准确、专属性强 , 可作为连花清瘟胶囊的质量控制方法。
【关键词】　高效液相色谱法；连花清瘟胶囊醇提浸膏；连翘酯苷 A；含量测定
流动相乙腈 -0.1% 磷酸梯度洗脱；流速 0.4 ml/min ；检测波
长 228 nm ；理论塔板数按连翘酯苷 A峰计算应不低于 3000。
2. 2 供试品溶液制备 取供试品 ( 批号 120406), 约 0.5 g, 精
密称定 , 置具塞锥形瓶中 , 精密加入甲醇 25 ml, 密塞 , 称重 ,
超声外理 30 min, 取出 , 放冷 , 再称定重量 , 用甲醇补足减失
的重量 , 摇匀 , 滤过 , 即得。
2. 3 对照品溶液的制备 精密称取连翘酯苷 A 对照品
23.25 mg, 置25 ml量瓶中, 加甲醇溶解, 并定容至刻度, 摇匀,
即得。再精密吸取上述对照品溶液 2 ml, 置 25 ml 量瓶中 , 加
甲醇稀释至刻度 , 摇匀 , 即得。浓度：74.4 μg/ml。
2. 4 阴性试验 按处方比例称取除连翘外的其它方中药材 ,
按制备工艺制得阴性样品 , 按供试品溶液的方法进行处理 ,
得阴性供试品溶液。分别吸取阴性供试品溶液、对照品溶液