全 文 ：收稿日期:2011 － 11 － 12
基金项目:浙江省重点创新团队科研基金资助项目(2009R50042)
作者简介:李伟平(1988 －) ，男，硕士研究生，研究方向:中药学。
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第 30 卷 第 4 期
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中 华 中 医 药 学 刊
CHINESE ARCHIVES OF TRADITIONAL CHINESE MEDICINE
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土牛膝多糖抗炎镇痛作用的研究
李伟平，何良艳，马哲龙，蒋福升，丁志山，范永升
(浙江中医药大学，浙江 杭州 310053)
摘 要:目的:研究土牛膝多糖的抗炎镇痛作用。方法:采用热板法、醋酸扭体法研究土牛膝多糖的镇痛作
用，采用小鼠耳廓肿胀法、腹腔毛细血管通透性试验研究土牛膝多糖的抗炎作用。结果:土牛膝多糖对热刺激和
醋酸所导致的小鼠疼痛具有显著的抑制作用，对二甲苯引起的小鼠耳廓肿胀法和醋酸引起的小鼠腹腔毛细血管
通透性增加也具有显著的抑制作用，与空白对照组相比均有显著性差异。结论:土牛膝多糖具有显著的抗炎镇痛
作用。
关键词:土牛膝;多糖;抗炎;镇痛
中图分类号:R285． 6 文献标识码:A 文章编号:1673 － 7717(2012)04 － 0747 － 03
Anti － inflammatory And Analgesic Effects of Polysaccharides From
Radix Achyranthis Sylvestris
LI Wei-ping，HE Liang-yan，MA Zhe-long，JIANG Fu-sheng，DING Zhi-shan，FAN Yong-sheng
(Zhejiang Chinese Medical University，Hangzhou 310053，Zhejiang，China)
Abstract:Objective:To study the anti － inflammatory and analgesic effects of polysaccharides from Radix Achyranthis
Sylvestris． Method:To study the anti － inflammatory effects of polysaccharides from Radix Achyranthis Sylvestris by acid －
induced writhing and hot － plate test，to study the anti － inflammatory effects of polysaccharides from Radix Achyranthis
Sylvestris by mice ear － swollen induced by xylene and abdominal cavity capillary permeability text． Results:polysaccha-
rides from Radix Achyranthis Sylvestris can restrain thermostimulation and acid － induced mice pain as well as mice ear －
swollen induced by xylene and mice abdominal cavity capillary permeability increase induced by acetic acid． Conclusion:
Polysaccharides from Radix Achyranthis Sylvestris have anti － inflammatory and analgesic effects．
Key words:Radix Achyranthis Sylvestris;polysaccharides;anti － inflammatory;analgesic
土牛膝(Radix Achyranthis Sylvestris)为苋科植物牛膝的
野生种及柳叶牛膝、粗毛牛膝的根和根茎，具有活血散瘀，
祛湿利尿，清热解毒、抗炎等功效［1］。浙江土牛膝资源丰
富，分布较广，为山坡路边习见杂草，在民间沿用历史悠久，
常用于治疗白喉等炎症性疾病。我们在研究中发现，浙江
产土牛膝具有较好的抗炎镇痛作用，可以显著抑制家兔急
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DOI：10.13193/j.archtcm.2012.04.77.liwp.044
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性咽喉炎的症状［2］。多糖是土牛膝中重要的组成成分，越
来越多的研究证明多糖具有复杂的多方面的生物活性和功
能，多糖的研究虽然较生命中其他 3 大类物质蛋白质、核酸
和脂类起步为晚，但由于其在生命过程中重要的生理功能
及其广泛的应用被不断挖掘，引起了人们越来越大的兴趣。
现在多糖已成为天然药物及保健品研发中的重要组成部分。
目前，检索国内外文献，尚未发现有关浙江产土牛膝多糖抗
炎镇痛的报道，因此我们采用热板法、醋酸扭体法对土牛膝
多糖的镇痛作用进行了研究，采用小鼠耳廓肿胀法、腹腔毛
细血管通透性试验对土牛膝多糖的抗炎作用进行了评价。
1 实验材料和仪器
1． 1 实验动物
ICR小鼠(清洁级) ，体重 18 ～ 22g，由浙江中医药大学
动物实验中心提供。
1． 2 实验药物与试剂
土牛膝:本课题组采自浙江杭州虎跑，经浙江中医药大
学丁志山教授鉴定为苋科牛膝属植物柳叶牛膝和粗毛牛
膝。正丁醇(分析纯，杭州高精细化工有限公司，批号
20060405) ;氯仿(分析纯，浙江迪尔药业有限公司，批号
070106) ;无水乙醇(分析纯，安徽安特生物化学有限公
司) ;伊文斯蓝(分析纯，国药集团化学试剂有限公司，批号
Lot． No． wc． 20060626)。
1． 3 实验相关仪器设备
SHZ － D(Ⅲ)循环水式真空泵:巩义市英谷予华仪器
厂;SENCO R － 201 旋转蒸发仪:上海申顺生物科技有限公
司;AR2130电子精密天平:Ohaus Corp． Pine Brook，Nj，USA;
DGG －9070A电热恒温鼓风干燥箱:上海森信实验仪器有限
公司;UV8500紫外分光光度计:上海天美科学仪器有限公
司;LDZ5 －2低速自动平衡离心机:北京医用离心机厂;电热
恒温水浴锅:DK － S24上海森信实验仪器有限公司。
2 实验方法步骤
2． 1 土牛膝多糖的制备
精确称取土牛膝新鲜根 1000g，分别加入 3 倍量的水
100℃煎煮 4 次，每次煎煮 1h。过滤，合并滤液，浓缩至
200mL左右。然后加入 sevag 试剂(氯仿 ∶ 正丁醇 = 3 ∶ 1)
70mL左右，充分振摇 30min，3000r /min 离心 5min，吸取上
清液，中间蛋白层用水量蒸馏水洗涤后与上清液混合。水
液再次加入 sevag试剂(氯仿∶正丁醇 = 3 ∶ 1)70mL左右，充
分振摇 30min，3000r /min离心 5min，吸取上清液，中间蛋白
层用少量蒸馏水洗涤后与上清液混合，浓缩至 50mL 左右，
然后加入适量的 95%乙醇，使水液中的醇浓度达到 75%，
室温下静置 30min，然后 3000r /min 离心 5min，沉淀经硫酸
苯酚法显色后在 419nm有最大吸收峰，结合硫酸 －苯酚试
剂可与游离的寡糖，多糖中的己糖，糖醛酸(或甲苯衍生
物)起显色反应，在 490nm处有最大吸收这一原理，初步确
定沉淀为土牛膝多糖。将土牛膝多糖真空干燥，密封保存
备用。
2． 2 土牛膝多糖对小鼠镇痛作用的研究
2． 2． 1 热板法研究土牛膝多糖的镇痛作用 取 ICR 雌性
小鼠，在(55 ± 5)℃的热板上测定每鼠的痛阈(自小鼠放于
热板上至出现舔后足的时间) ，挑选痛阈在 5 ～ 30 s的小鼠
50 只，随机分为 5 组，每组 10 只，分别为土牛膝多糖低、
中、高剂量组，空白对照组，阳性对照组。灌胃给药，空白对
照组给以生理盐水 0． 2mL每只，阳性对照组给以阿司匹林
4mg每只，低剂量组给以土牛膝多糖 1． 5mg每只，中剂量组
给以土牛膝多糖 2． 5mg 每只，高剂量组给以土牛膝多糖
4mg每只。连续给药 5 天，与末次给药后测定各组小鼠 15
min、30 min和 60 min的痛阈值，若 60s仍无反应者，将其取
出以免烫伤，该鼠痛阈以 60 s计。
2． 2． 2 醋酸扭体法研究土牛膝多糖的镇痛作用 取 ICR
雌性小鼠 50 只，随机分为 5 组，每组 10 只，分别为土牛膝
多糖低、中、高剂量组，空白组，阳性对照组。灌胃给药，空
白对照组给以生理盐水 0． 2mL每只，阳性对照组给以阿司
匹林 4mg每只，低剂量组给以土牛膝多糖 1． 5mg 每只，中
剂量组给以土牛膝多糖 2． 5mg 每只，高剂量组给以土牛膝
多糖 4mg每只。连续给药 5 天，与末次给药后 50min 时每
只小鼠按体重每 10g 腹腔注射 0． 6%醋酸生理盐水溶液
0. 15mL，将后肢伸展、腹部收缩、臀部抬高、躯干扭曲(扭
体) ，作为疼痛指标。观察 15min小鼠的扭体次数。然后计
算镇痛百分率。
镇痛百分率% =
空白对照组平均扭体数 －给药组平均扭体数
空白对照组平均扭体数
× 100%
2． 3 土牛膝多糖抗炎作用的研究
2． 3． 1 土牛膝多糖对二甲苯致小鼠耳壳炎症的影响 取
ICR雌性小鼠 50 只，随机分为 5 组，每组 10 只，分别为土
牛膝多糖低、中、高剂量组，空白组，阳性对照组。灌胃给
药，空白对照组给以生理盐水 0． 2mL 每只，阳性对照组给
以阿司匹林 4mg每只，低剂量组给以土牛膝多糖 1． 5mg 每
只，中剂量组给以土牛膝多糖 2． 5mg 每只，高剂量组给以
土牛膝多糖 4mg 每只。连续给药 5 天，与末次给药后
50min时每只小鼠右耳涂二甲苯 20μL，1h 后处死小鼠，剪
下双耳。用直径 8mm的不锈钢打孔器在双耳对称处冲下
耳片，在电子分析天平上称重。以左右耳片重量差为肿胀
度，计算各组肿胀度平均值，计算耳肿胀抑制率。
耳肿胀抑制率% =
空白对照组平均肿胀率 －给药组平均肿胀率
空白对照组平均肿胀数
× 100%
2． 3． 2 土牛膝多糖对醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性
增高的影响 取 ICR雌性小鼠 50 只，随机分为 5 组，每组
10 只，分别为土牛膝多糖低、中、高剂量组，空白组，阳性对
照组。灌胃给药，空白对照组给以生理盐水 0． 2mL 每只，
阳性对照组给以阿司匹林 4mg 每只，低剂量组给以土牛膝
多糖 1． 5mg每只，中剂量组给以土牛膝多糖 2． 5mg 每只，
高剂量组给以土牛膝多糖 4mg 每只。连续给药 5 天，与末
次给药后 0． 5h，尾静脉注射 0． 5%伊文思蓝生理盐水溶液
0． 1 mL /10g体重，10 min后腹腔注射 0． 7%冰醋酸生理盐
水 0． 3mL /10 g，20min 将小鼠脱颈椎处死，腹腔注射生理
盐水 5 mL /只，轻揉腹部，使腹腔内液体充分混匀后，用镊
子镊住并提高后腹部腹壁，剪一小孔，吸取腹腔液，1000r /m
离心 5 min，取上清液，以生理盐水为空白，做全波长扫描，
发现在 610nm有最大的吸收峰见图 1，故在 610nm 测定吸
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光度。计算给药组与正常对照组的差异显著性。按以下公
式计算土牛膝多糖对醋酸引起的毛细血管通透性增加的抑
制率。
抑制率% =
空白对照组平均吸光度 －给药组平均吸光度
空白对照组平均吸光度
× 100%
图 1 伊文思蓝上清液紫外全波长扫描图
2． 4 数据处理
实验数据采用均数 ±标准差(珋x ± s)表示，组间比较采
用 t检验。
3 实验结果
3． 1 土牛膝多糖对小鼠疼痛的影响(热板法)
实验结果见表 1，土牛膝多糖在在给药后 30min 和
60min能提高小鼠热刺激的痛阈值，但没有呈现一定的量
效关系。而阿司匹林在给药后 15min与 30min都能显著提
高小鼠热刺激的痛阈值，但阳性对照药在给药后 15min 时
效果最佳，而土牛膝多糖在给药 30min效果最佳。
表 1 土牛膝多糖对小鼠疼痛的影响(热板法，n = 10)
15min 30min 60min
空白组 24． 29 ± 4． 65 22． 19 ± 3． 72 29． 45 ± 6． 61
低剂量组 27． 67 ± 3． 50 30． 70 ± 2． 74# 34． 50 ± 5． 15*
中剂量组 25． 88 ± 4． 61 31． 01 ± 8． 28* 37． 78 ± 8． 01*
高剂量组 26． 16 ± 2． 71 28． 56 ± 6． 13* 41． 57 ± 8． 40#
阳性对照组 33． 49 ± 4． 57# 32． 40 ± 2． 10# 29． 34 ± 3． 40
注:α = 0． 05，与空白对照组比较，* P ＜ 0． 05，#P ＜ 0． 01。
3． 2 土牛膝多糖对小鼠疼痛的影响(扭体法)
如表 2 所示，土牛膝多糖不同剂量组均有一定的镇痛
作用，且土牛膝多糖高剂量组的作用效果与阳性对照药阿
司匹林相当。
表 2 土牛膝多糖对小鼠疼痛的影响(扭体法，n = 10)
扭体次数 镇痛率(%)
空白组 26． 83 ± 6． 46
低剂量组 12． 25 ± 8． 28* 40． 37%
中剂量组 16． 00 ± 5． 39* 54． 34%
高剂量组 8． 50 ± 6． 50# 68． 32%
阳性对照组 8． 25 ± 4． 93# 69． 25%
注:α = 0． 05，与空白对照组比较，* P ＜ 0． 05，#P ＜ 0． 01。
3． 3 土牛膝多糖对小鼠耳廓肿胀的影响
由表 3 可见，土牛膝多糖高、中、低剂量组对二甲苯所
致的小鼠耳廓肿胀有明显的抑制作用，而且呈现一定的量
效关系。而且，从表中的数据可以发现，土牛膝多糖高、中
剂量组的效果均优于阳性对照药阿司匹林的抑制效果。
表 3 土牛膝多糖对小鼠耳廓肿胀的影响(n = 10)
肿胀度(mg) 抑制率(%)
空白组 15． 5 ± 2． 6
低剂量组 14． 0 ± 1． 4* 9． 67%
中剂量组 10． 7 ± 3． 1# 30． 65%
高剂量组 7． 3 ± 2． 5# 52． 90%
阳性对照组 11． 5 ± 3． 8# 25． 80%
注:α = 0． 05，与空白对照组比较，* P ＜ 0． 05，#P ＜ 0． 01。
3． 4 土牛膝多糖对鼠腹腔毛细血管通透性的影响
从表 4 的结果来看，土牛膝多糖高、中、低剂量组对醋
酸引起的小鼠毛细血管通透性增加均具有一定的抑制作
用，但高剂量组的效果不如低剂量组。
表 4 土牛膝多糖对鼠腹腔毛细血管通透性的影响(n =10)
吸光度值 抑制率(%)
空白组 1． 053 ± 0． 232
低剂量组 0． 783 ± 0． 161* 25． 56%
中剂量组 0． 583 ± 0． 171# 44． 60%
高剂量组 0． 697 ± 0． 206# 33． 75%
阳性对照组 0． 417 ± 0． 277# 60． 34%
注:α = 0． 05，与空白对照组比较，* P ＜ 0． 05，#P ＜ 0． 01。
4 讨 论
本研究采用热板法、醋酸扭体法对土牛膝多糖的镇痛
作用进行了研究，采用小鼠耳廓肿胀法、腹腔毛细血管通透
性试验对土牛膝多糖的抗炎作用进行了研究。热板法和醋
酸扭体法是两种用于研究镇痛药外周镇痛活性和中枢镇痛
活性常用的方法［3］，本实验的研究结果表明土牛膝多糖具
有一定的外周镇痛活性和中枢镇痛活性。但在热板法中，
给药 15min 后效果不显著，而给药 30min 后才显示出显著
的镇痛作用，这可能是由于中药口服给药后，起效较慢的缘
故，但这还需进一步研究来证实。
炎症是机体中具有血管系统的活体组织对局部损伤所
发生的一种以防御为主的组织反应［4］。其基本病理变化为
局部组织、细胞的变质、渗出和增生三种变化，二甲苯是非特
异性致炎因子，可引起以血管通透性、白细胞游走为主要变
化的急性炎症［5］。土牛膝多糖能显著抑制二甲苯引起的小
鼠耳廓肿胀，对醋酸引起的小鼠腹腔毛细血管通透性增加也
具有较好的抑制作用，表明其具有抗急性炎症的作用。本实
验研究结果表明，土牛膝多糖抗炎镇痛作用效果好，可以为
浙江土牛膝的进一步开发利用奠定实验基础。土牛膝资源
丰富，民间已广泛应用。该药的开发利用，将造福于人类。
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